Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx unie¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx a rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených podmínkách,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx rostliny z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx šíření infekce x k xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxx. 1 zákona z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx považují klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x rozsahu podle §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "členský xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx rostlin označené xxxx podezřelé z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin a xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 písm. x) x b), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) z porostů xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx laboratorním testováním xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx napadení původcem xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, složení x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx produkce xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona a xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx jednou xxxxx v rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx státy. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují xxxx x produkci xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx nebo xxx xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona xx účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx opatření založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxxxx a v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx i xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx státem vhodným xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem stanoveným xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx rostliny, zásilku, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa produkce xxxxxx těch, xxx xx xxxxx úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx základě klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx ze zařízení xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých z xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 ve vhodných xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx a bezpečnostní xxxx xxxxx odstavce 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem z Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx karanténní xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x každém xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx v xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx možného xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty za xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x pod xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx výsledku testování xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx zničí xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx v bodě 4 přílohy č. 4 a x případě xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx uvedená x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o těchto xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených povinných xxxx, registrovaných podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 odst. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx x souladu s §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx povoluje Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x vyhlášce x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, které xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF test xxxxx §4 xxxx. 1 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový test, xxxxxxx patogenu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx médiu x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v pokročilých xxxxxxxx infekce se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx patogena na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje používat xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx být izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx založené na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx vhodná metoda xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx vyčistit a xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx přerůst. Pokud xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx XXXX nebo XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační testy xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx testy ze xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x případě xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx čistých kultur xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test negativní, xx xxxxxx považován xx negativní. V xxxxxxx, že je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, ale izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx se izolační xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test dalších xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x často pak xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě toho xxxx xxxxxxxx skryté xxxx xx zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Mladé infikované xxxxx často x xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, x xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx oranžové mezižeberní xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, listy x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx nepatrně tmavší xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx identifikovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence cévních xxxxxx x stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx hlízách xxxx x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx postupně xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx povrchu hlízy xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx době xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx případů, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx zeminy x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx či xxxxxxxx xx brambory xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Opatrně xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx nadbytečná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X po dobu xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy po xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx jsou xxxxxx znovu používány, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx okamžitě, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v mixéru xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru existuje xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx každý xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx x xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x xxxxxxx zkumavky xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µm), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µl pro xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx při teplotě -16 až -24°C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx transport xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se odstraní xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx maceračním xxxxx x přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není možné, xxxxxxxx xx části xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla prokázána xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být další xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat xxxx xxx každou novou xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným odstředěním xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx z brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x průměru nejméně 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx test se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Pro xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do zbývajících xxxxxx v řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx okének. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx po xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x IF xxxxx. V xxxxx xxxxx by měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Každé xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 minut x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx okének musí xxx stejné xxxx xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx a xxxxx jako předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Testovací xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými pro xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx obarvené v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další testování.

b) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx přidané xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx se xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µl 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je možnost xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx pufru (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx místo xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 55 °X xx dobu alespoň 10 xxxxx.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx předehřáté xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx x nich xx přeinkubuje xx xxxxx lázni při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x hybmixem při xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx krycího roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx ihned x mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x pravých xxxxxx x kolem xxxxxx. U xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem méně xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Pokud xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx , je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx xx používá metoda x interní kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx by měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx PCR.

Měly xx xxx zahrnuty následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx použít při xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx optimalizována pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx pufru (100 mM NaCl, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx se vloží xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku lyzozymu (50 xx xxxxxxxx xx 1 ml x 10 mM Xxxx HCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx při teplotě 65 °X po xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje se xx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx fáze xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), krátce xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx se nechá xxxxxxxx na vzduchu xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx nejméně 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Skladuje xx při teplotě -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx do stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Trisacetát-EDTA (TAE) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium bromidu (0,5 mg na x) xx dobu 30-45 xxxxx, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro zacházení x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx naštěpené fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, pokud xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, ale xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx interními xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován x daným vzorkem).

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným z xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx negativní. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný amplikon xxxxxx x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx i xx xxxxxxxx, které xxxx uchovávány v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx se zajistilo xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené postupy xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx xxxxx gumovým xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx něj xxxxxxxx štětečkem xx xxxx linky nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek rostliny xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx lístky x xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx v místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního napětí xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx inokulují těsně xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23 G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxx kultury původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx nedošlo k xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °C x optimální teplota xx 21 °X. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní kontroly xx skleníku nebo xxxxxxx xxxxxx na xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx by mohl xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx odrůst. Mladé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx a xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. foveata, jakož x velké koncentrace xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém objeví xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx test xX nebo PCR xx xxxxx z xxxxx a xxxxxxx xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní infekce xxxxxxx x xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4 týdnech pozorovány xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 cm x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté kultury xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické bakterie, x proto se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx a x xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených vzorků (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx testovány.

Pro xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z xxxxx vejcoplodého se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x temnu xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x kontrolními xxxxxxx x počítání všech xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, s xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx x identifikace xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- kvasničný xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx žluté, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Zjišťují xx následující fenotypícké xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, jestliže xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze buněk x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 minut. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx konečné koncentrace 0,05 X. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů xx xxxxxxx vhodné postupy XXX (např. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Boer, 1995; Mills x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X je xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx postupem xxxxx Xxxxx a kol., 2001.

10. Test patogenity

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx teplotě 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx a vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při teplotách xxxxxxxxxx pro růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech příznaky xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Pletiva xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Pomme xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX x FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx s 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx se xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní kontrola. Xxxxx nekontaminované mikrozkumavky xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx probíhá při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x XXXX xxxxx xx provedou kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx extrakci

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx nebo protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Fosfátový pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a FISH xxxxxxxxxxx buněk

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx na sklíčku x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx C. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X po dobu 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °X po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx upraví xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x ochlazení xx 50 C xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X zásobě xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx na 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx přípravu zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx x 0,01 X XxXX, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x interní XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx tgg xx xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx xxx gtt xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x DNA C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx PCR kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx nebo Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody a xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

25 xxxxx v) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA matrice)

vi) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx xxx teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s tepelným xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii), iv), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µl hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití je xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 ml 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx látky xx společně rozetřou xxxxxx tloučku v xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx se v xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví se xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá se xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx barvivo, nebo xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx vodou x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx také použít xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx ring rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Publ XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light microscopy. X: Manual of xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic coryneform xxxxxxxx. J. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx a X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Kotth.) Skapt. xx Burkh.) xx xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx the Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx B1O-PCR xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogenic bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx to xxx identification xx xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. D. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, existuje podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx živné půdě x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx izolační xxxx xx negativní, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx provede xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx screeningových testů (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x tomu, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx k dispozici.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx pozitivní, xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, ale xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx izolační xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx pletiva z xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx provést xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx Ralstonia solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní izolační xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx je podezření, xx se xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx dne, přičemž x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x končí kolapsem x uhynutím xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx konce a xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. V xxxx xxxx xx infekce xxxxx podle láhvově xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X pokročilejších fázích xx infekce rozšíří xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx se xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx cévního pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x rajčete

Rostlina rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx dolů a xxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxx než 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx může xxxxxx větší počet xxxxxxxxxxx výhonů.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou u xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °X nebo xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. dulcamara, xxxxx má xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí stonku xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x to x při absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jsou zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (viz oddíl 6.1.6.).

2.3. Postup při xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x) inkubuje xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy potvrzující xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš zeminy xxxx xxxxxxxx xx xxx proveden test XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx hlízy, xxx xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxx podle přílohy XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky z xxxxxxxxx konců se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx polyethylenový sáček Xxxxxxxxx nebo Bioreba, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Pro každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx testu XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x xx dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx poměrné části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava v xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx rostliny uříznutý xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx zahradnickými xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx díl x paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Race 3 x kořenech a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Silene alba. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální sliz). Xxxxxxxx xxx stonku x příznaky xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx části dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním sáčku (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) pomocí gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uloží se xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx na 72 hodin nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozdělí xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx díl xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x identifikace původce xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího testu XXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx velká xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx popsané v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx může být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx však liší x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Citlivost testu xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx obecně xxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr xxxxxxxxx xxxx, citlivost xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx toto schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx si xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované vzorkování x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxxxx ke značnému xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx odebírají v xxxxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 cm pod xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx odeberou xxxxxx z xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx následujících xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 x xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x po xxxx 15 minut), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 ml pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µm) x xxxxxxxxx promytím filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx obvykle xxxxxxxxxxxx x vzorků vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx testů x příslušných xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx na vliv xxxxxxxxxxxx populace na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx schéma xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx xxxx kalu xx xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx testovacího schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x její xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx i při xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx nízký stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 míst xx ploše 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 cm. Je-li xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, zvýší se xxxxx sběrných xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °C. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Před testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx YPGA xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx nechají uschnout x spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným roztokem xxxxxx modři x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x až 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx světle, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zda xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx B x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Odstraní se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x digestoři.

d) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx v digestoři.

e) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx imersí x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo v xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx je xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) označených příslušnými xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx postupuje podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky použitím xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném míchání xx dobu 15 xxxxxx objeví aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx test x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ jednotek tvořících xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná i xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

U xxxxx nově připravené xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxx jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Nanese xx 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx médiu xxxxx atypické xxxxxxx X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx červené x xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx rozetřou xxxx xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx lyofilizované.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (viz xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx podíl xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx obsah xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx se vzorky xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx test izolace, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají všechna xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzorků. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx podložním sklíčku.

Jako xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní množství (15 µx xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx je množství xxxxx x příslušném xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Druhá xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje obr. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxx řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx při okolní xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka na xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx musí xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Tween (dodatek 4) x následně x xxxxx XX. Xx xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Sklíčko xx opláchne a xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x kolem obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x určeném xxxxx xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla analýza xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla x protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx bezpečnostní opatření x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx předtím xxxxxxxx xx R. solanacearum x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterií x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3 X);

- pokud možno, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by xxxx xxx pokud možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx použít pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx pro použití xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxx promíchá třepáním x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µl xxxxxxx Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx se xxxxxxxxx xxxxx x směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx směs odstřeďuje xxx 15 000 g xx dobu 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx nové Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, zachová se xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx resuspenduje v 100 µl xxxxxxxx XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx sraženina se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx PCR.

b) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR x xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxxxxx xx použít multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx extraktu DNA xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR a xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX obarvením x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx nových nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x čase shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV světlem xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x porovnává xx x neštěpenou x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn u xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx očekávaný amplikon xx xxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace nebo XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx schválené oligosondy xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ buněk R xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno v dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xx xxxxxxx x tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta ve 200 µx fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µ10,01M PB (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě - 20 °X po xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx x sušičce xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxx postup přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další den. Xxxxxxx xx měla xxx skladována xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 hodin x xxxxxx při xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x hybmix x 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx se inkubovat xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka a xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx a celé xxxxxxx xx zakryje xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení FISH xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx obvodu. X vzorků, xxx xxxxxx pozorovány žádné xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí mikroskopu.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx zbarveny nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx neberou v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. To může xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx sklíčka xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx buňky z xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx méně častěji xxx u testu XX.

5. V xxxxx xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud jsou xxx použití FITC xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx pozorovány x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx negativní, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx IF, XXX xxxx XXXX xxx xxxx relativně nízkou xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx testu ELISA xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspense obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °C xx 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx boxu může x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx každé jamky x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x odečítá xx xxxxxxxxxx při 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µl xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 až 5 xxxxx nebo 4 ° C po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx ze vzorku xx nejméně xxxx xxxxx. Přidají se xxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), xxxxx se 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx každé xxxxx x inkubuje xx x xxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (OH) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou větší xxx dvojnásobek OH xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx se xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo kultivaru x rovnocennou citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi třech xxxxxxx listů u xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx kultivary s xxxxxxxxxxx citlivostí), ale xxx rostliny ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx plného rozvinu xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx méně xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx proto použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx rostlin xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23X). Vzorek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi děložními xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací rostliny xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny ve xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx po xxxx inkubace drženy xxxxxx sebe, oddělí xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se provede xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 cm z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx testovací rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x těchto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx žádné příznaky.

Biotest xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx naopak xxxxx x X. solanacearum, xxxxxxxx Lelliott a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx při 40 °X -

Xxxx x 1% NaCl +

Růst x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx viz Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x pufru IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test ELISA xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx pozitivní, jestliže xxxxxxx jeho výsledku xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách v xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Pastrik a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Weller xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx pozitivní, jestliže xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx pozitivní, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx použitím xxxxx x následujících metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum tvoří xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. solanacearum x inkubací xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu R. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX a XXXX (Louws xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 a 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx patogenity)

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat až 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x vysoké relativní xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx půdy. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx forma R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx možno xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Po inkubaci 48 až 72 xxxxx při teplotě 28 °C se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky a xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Englebrecht 1994 ve znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci může xxxxxxxx růst R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Agar #1. V xxxxxxx xxxxxxx bude růst X. solanacearum xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx působení (tabulka 2). Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x xxx xx xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Národní sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX testů. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami na 1 xx x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx půdě x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x protřepe xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx x dalších xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test xx xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH testy xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx pH a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx pro XX xxxx

Xxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx sklíček xx XX xxxxx k xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, např. Vectashield® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podíl aromatických xxxxxxx, je možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx xx upraví xX na 9,8.

Doplní xx do 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = koeficient xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 10 minut xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx gca xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Polymerace. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou DNA)

iv) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx x 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX ACC XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací z XXX R. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX AGT XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX ACG XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F a Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 g

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx pomocí XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 ng/µl

Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx výpočtů v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: FORMAMID XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje pH x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Sazeničky s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x rajčete xx xx měly pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin nebo xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of whole xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx sensitive Detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx restriction fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx on its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx colony xxxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Stephens, C.T. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Maiss, E. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification of 16X-23X ribosomal xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Applied xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, M. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx using an xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.