Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství stanoví xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči a x změně některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro účely xxxx xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. sepedonicus (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx xxxxx bramboru, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) kromě xxxxx x plodů, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny z xxxxxx lilkovitých (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxx x určité partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, skladu xxxx xxxxxx xxxxx x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx v xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx vymezené Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou partií - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, které xxxxxxxx ze stejné xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x rozsahu podle §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Evropské xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé hniloby xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx výskytu původce xxxxx hniloby navíc xxxxxxxxx v případě xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx potvrzení jeho xxxxxxx vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. a) x x), odstavci 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z porostů xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) prohlídkou xxxxxx rostlin bramboru x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také laboratorním xxxxxxxxxx vzorků hlíz xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto průzkumu x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx v souladu x §10 odst. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a statistických xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Věstníku Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx odebrané anebo xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx vzorky xxxxx odebírány a xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx na xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx v rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A ostatním xxxxxxxx státům x Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx státy. Výsledky xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou ročně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení o xxxxxxxxxxxxx a výsledcích xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti tohoto xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ zajistí provedení xxxxxxxx laboratorního testování, x to způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nad přesunem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x jiného členského xxxxx nebo x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx podrobnosti týkající xx tohoto podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx mít xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které může Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x něhož byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx do xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx místa produkce xxxxxx těch, kde xx možná xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování klonově xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, zavlažování x zalévání nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle písmene x) x možného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx xx zpracování a xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody za xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Pokud xxxx členský stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby v xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxx karanténní xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx zásady xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx předměty x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a) xxxxx xxx xxxxxx x pod xxxxxxxx Xxxxxx xx s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) partie hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Ústavu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x veškeré jiné xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, xx po xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 x x případě výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx opatření xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x registračním xxxxxx dotčených povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx splnění x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x vědeckým, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx na xxx, xxxx xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x výrobě xxxxxxxxxx x reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ v případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx všech partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška nabývá xxxxxxxxx dnem jejího xxxxxxxxx.

Příloha č. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx původcem kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 odst. 1 definován jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx kroužkovitosti. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX test (oddíl 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx suspenzí na xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx xxxxxx podařit. Saprofytické xxxxxxxx, které rostou xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx být izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze použít x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené na xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. V xxxxxxx, že je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy použije xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx PCR činidla x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx v xxxxx xxxxxxxxx vhodná metoda xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické kolonie xxx xxxxxx během 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx kultivační xxxxxx xxxxx nepodaří, xxxx xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test narušovat xxxxxxx (xxx oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne použitím xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx izolační xxxxx x v xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx pak xx na konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx odlišné od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x zpočátku xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, i když xxxx v infikovaných xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné snímky xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx x xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx objevují xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx se x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová nebo xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx maskovat x xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx stránce http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx výsledků. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Níže popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxxx či xxxxxxxx na brambory xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx vodivého pletiva x pupkových xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx xx xxxxx nadbytečná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx kroužkovitosti, provede xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx příznaky se xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx x uchovávají xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků a xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě nižší xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx homogenizují x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx použita xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v sáčcích xx jedno použití x použití xxxxxxxx xx jedno použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním při 7000 g xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx během testování xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x chladícím xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně nutné, xxx se se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, měly by xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x shromažďují x uzavřené sterilní xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má trvat 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxxx xxxx nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx hlavní screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test a xxxx výsledek je xxxxxxxxx, je pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx polyklonální protilátka. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX testu x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat titr xxx každou novou xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx stanoven xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx měly xxx XX titr alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx xxxxxxx připravených vzorkových xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx být xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx s jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným ve xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x řadě. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx podle obrázku 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx řady okének. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů protilátek.

V xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx dalším použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx boxu xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx jako množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a tato xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx stejné jako xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do každého xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo lepší. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx bramboru a xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Berou xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, kde je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx se XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx s extraktem, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx do Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x odstřeďujte xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx se přes xxx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X PB x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje se xx dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Kápne se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µx (v 0,01 X PB). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °C xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, že xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx odstředěním, přidá xx stejné množství 0,01 M XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a nechat xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním papírem.

Alternativně xx přidá místo xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 minuty. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx sklíček.

5.2.3. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) tak, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x xxxx při xxxxxxx 55 °C x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx a 833 xx XXX). Xxxxx z xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx krátce xx XXX a položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x mikroskopem vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx eubakteriální buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Test XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být zopakován, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx odpovídat nebo xxx lepší než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx FISH xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx než u XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx je negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , je-li xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Přednostně xx používá xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by se xxxx xxxx zacházet xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, jestli došlo x přenosu XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by xxxx xxx xxxxx možno xxx zeminy. V xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál stejným xxxxxxxx xxxx vzorky.

K xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, pH 8,0) x inkubuje xx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží a xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), krátce xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut xxx 4 °C x odstraní xx x pelety etanol.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx zachová x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X xx xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx se xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx byla xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do stejného xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx na x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (krátké vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti a xxxxxxxx xx zdokumentuje.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x době x xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX očekávané velikosti xxxx xxx amplifikován x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx kolonie na 1 ml přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx použít x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x pěstování xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx xx zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx pro xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se horizontálně xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky a 15 xx xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx xx mezi xxxxxx a xxxx xxxxxx proužek sterilní xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem bloku.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x nanese xx xx něj xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx mezi všechny xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou aplikovanou xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx xxxxx xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x řezem se xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx zakryje xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (turgoru) se xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx pozitivní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x kde xx to xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx dobu xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx se zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx pro pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx zajistí xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx dnech se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (ztráta xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx okraj. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx a X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma exigua xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle vadnou xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx rozliší Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx použití xxxxx xxxxxxx zvadlých listů xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx xx xxxx xX nebo XXX xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx identifikují a xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném vzorku xxxxx stonků o xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (selektivních) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx organismem, xx xxxxx xx xxxxxxxx x pletiv projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx a x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx v testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 cfu na xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx vyloučilo nebezpečí xxxxxxxxxxx, připraví se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx měla xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy z xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinásobné ředění x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) a techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx všech xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, s xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a identifikace xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, než xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- kvasničný xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx provede xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. U subkultur xx rychlost růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx bílé xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x rovnými okraji x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá média xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza eskulinu +

Xxxxxx kyseliny z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx vřící xxxxx xxxxx xxx teplotě 100 °X po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxx lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na xx x UPW.

b) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx reakce xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx rody jako Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx z těchto xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Připraví xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx doby nevykazují xxxxx xxxxxxxx infekce, xx se xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx považována xx patogenní formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx rozdrtí x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx v 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx dosáhne prostřednictvím xxxxx zakalené suspenze xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, že xx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 µx xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x FISH testy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx používá xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Pufry xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxx sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení koncentrace xX x XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací xxxxxx resuspendované pelety

Dodatek 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx C. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný agar (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx agar obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X xx dobu 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

Médium x kvasnicovým xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx sterilizace 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °X po xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx selektivní růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x BDH.

Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx upraví na 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) x ochlazení xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) x 96 % metanolu, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx se xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx antibiotika: polymyxin X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X XxXX, cykloheximid x 50% etanolu, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx nemělo xxxxxxxxx žádné falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx PSA-R 5'- tac xxx xxx gtt xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX kontroly 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx nebo jinými xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx při teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být nutná xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. subsp. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Bgl XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím se xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx gca xxx xxx tgc xxx -3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x sterilizuje xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml destilované xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin O 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx violeti x nechá xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Lugolovým xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztokem x xxxxx se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx ring xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Publ XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Bradbury, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Corynebacterium sepedonicum xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Determinative methods xx xxxxx microscopy. X: Manual xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Leifson, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x J. Van Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx development xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x D. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx a X. X. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. A. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx latent xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Spiek. xx Kotth.) Xxxxx. xx Burkh.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. a X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx B1O-PCR and xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx identification xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid profiles. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx různé postupy, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) detekce Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných hostitelských xxxxxxx, a ve xxxxxxxx xxxx a xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx životaschopných kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění úrovní X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí být xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci R. xxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx cévních xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vykazujícího příznaky xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x rostlinného materiálu xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Kultivace xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx izolační test xx negativní, xxxx xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx provede xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), x xxxxx každý je xxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, potvrzením, xx čistá xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx použit x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx popsány v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx testech získány xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je třeba xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx provést xxxx x dalšími xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, je xxxxxx považován za xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní izolační xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx ve screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx se izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx v polních xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx k xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx a xxxxxx bakteriální xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx z cévních xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. V rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx minutách xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se cévní xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx xxxx rozšířit xx parenchymatického pletiva. X pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx který se xxxxxxxxx částice xxxx. Xx slupce se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx bakteriálního a xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (teplota xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx příčném řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx stonku xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x to x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx rychlými screeningovými xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou suspenzí X. solanacearum xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média a xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. solanacearum tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. solanacearum x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx uvedených zjišťovacích xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X po xxxx až 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu množení xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx PCR test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx v případě, xxxx xx ve xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx proveden test XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí xxxxxxx x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé hlízy, xxx aby xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx pří vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx na xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Všechny naříznuté xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx dobu nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Všechny xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx části xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, uchovávají xx x nádobě xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 hodin.

Výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Thurax) nebo xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx sterilované nože (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 g xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 ml peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx a 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx poměrné části x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx boxu s xxxxxxxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a zpracovány xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x paty každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx zahradnickými nůžkami xx odebere 1 xx dlouhý díl x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Silene xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx možné provést xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odděleně (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx to xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx lze xx provést xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním popsaným x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se rozdělí xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx v oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a doporučuje xx xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx, xx velká saprofytická xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx být xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx citlivost detekce xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx v odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx a odpadní xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx xxxxx dojde xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x případě získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx schéma xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx vodě, je xxxxx si xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x období xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx výše uvedených xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x tím x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx a 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx pro každé xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx rovněž přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx se přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost pórů 0,45 µm) s xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx je vhodná xxx xxxxx objemy xxxx, které xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x vzorků xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx xxxx popsány x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx popsané x tomto oddíle xx použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx být xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx zaručovaly detekci xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx je vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z hloubky 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky při xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý vzorek xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx kalu xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních kamínků xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x známém XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda se xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Pozoruje xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule intracelulární x zda xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx X x 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xxxxxx x vysají se xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 vteřin xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx zbarvení PHB xxxxxxx x buňkách X. solanacearum x xxxxxx zbarvenými stěnami xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (viz dodatek 3) označených příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Jinak xx postup následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Pozoruje xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx R. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx k rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx středu x vnitřními pruhy xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx saprofytických bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (viz oddíl 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, jestliže po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x inhibici jinými xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x ke zředění xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx (1:100). Obohacení X. solanacearum xxxx xxxx xxx neúspěšné x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Z tohoto xxxxxx může xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X obohacovacího testu XXX se xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx sterilních zkumavek xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx podíl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 hodin xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx s uvolněnými xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX xx obsah xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx výše uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx výsledků obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx hlavní x xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX použit xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx při teplotě - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j jsou xxxxxx fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety v xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx při teplotě 60 °C), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Tween (dodatek 4) x následně x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx excitaci XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x kolem xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Buňky x xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části bramboru x xxxxx stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx screeningový test, x sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk X. solanacearum xx 1 xx přidaný xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti ve xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla x protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xx třeba použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx extrakce XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- reakční směs XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx PCR použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x prostředí odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly xxx pokud xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx použití PCR xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx k xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx schválenými metodami XXX xxxxxxxxx v dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx x mikrozkumavka xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x teplotou 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxx. xxx teplotě 4 °C.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx se na xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx x pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX a nechá xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °C xx do xxxxxxx xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx extraktu DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx UM jako xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx program PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx nejméně 12 µx xxxxx amplifikované XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx nanášecího pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx vhodný XXX marker, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x porovnává xx x neštěpenou x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn u xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolními primery xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu s xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Když xx FISH test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx x dokončení diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x glycerolu xxx teplotě - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk na 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x tomto xxxxx, je xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Wullingse xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x odstřeďuje se xx dobu 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx se a xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01M PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky na xxxxx xxxxxxx, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo x xxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) a xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx se xxxxx x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví se xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) se nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 kádinky obsahující 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 ml xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx vodní lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx a celé xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx v případě, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka sklíčka) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že u xxxxxx z bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx morfologií x ke xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx méně xxxxxxx xxx u xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx FISH

i) Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx použití rhodaminového xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x nezdarem kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx určení xxxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. solanacearum negativní x xxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x solném roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx použijí xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X a X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí být xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

7) Roztok xxxxxxxxxx se vylije x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx pufru. Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx absorbance xxx 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidají se xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx jamky x nechá xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Jamky se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek OH x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX v xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé odrůdy xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx plného xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky rostlin xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží mezi xxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx x xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk xx 1 xx, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x karanténním xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °C a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx rostliny ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx po xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx nebo vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace na xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x těchto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx provedený test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx se následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. solanacearum, xxxxxxxx Lelliott x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x pufru IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx pozitivní, jestliže xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx suspense x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě - 16 až - 24 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX k amplifikaci xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (např. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx al. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Test FISH xx pozitivní, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zahrnou případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx dílčích xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x diferenciaci kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx et xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x hustotě přibližně 10⁶ buněk na 1 ml ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx této xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Po inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (SPA)

Sacharóza 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a sterilují x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x přidá se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné půdy

Živná xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v autoklávu xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx získala stanovená xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa X-0125) 1&xxxx;250 U (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 dny xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x xxxx xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx podrobena kontrole xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Provede xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx na 50 °C. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Národní sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ buňkami xx 1 ml k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x negativních kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx SMSA xxxxx půdě x xxxxxxxxxx se v 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx optické hustotě 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, o xxxxx se xx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx první mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx se desetinásobné xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní negativní xxxxxx. Mikrozkumavky musí xxx xxxxx označeny.

Připraví xx alikvotní části x 100 N1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX testy xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR musí xxx X. solanacearum xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx po dobu xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro XX xxxx

Xxxx pro XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Pufry xxx účely nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx se xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CCT GCC-3'

Reverzní xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx gcg xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 bp x 96 bp.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX GAA G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX ACC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X rRNA = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °C (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx tag caa xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a skladuje xx chráněný xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný přes xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 nebo OLI2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx hybridizační směsi

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 dní) se xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny lilku x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx and D.A. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx of xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx microbiology. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx the control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Boudazin, G., X.X. Xx Roux, X. Josi, P. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx metabolism in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Detection of xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx solanacearum in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X detection xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X and X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Lelliott, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Llop, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx selective isolation, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, D.W., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx genomic xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx for identifying Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection of X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx positive control. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Forde, X.X.X. (1995) Production xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Agricultural Immunology 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, and xxx xxxxx disease xxxxxxxxx xx xxxxxx based xx 16X rRNA xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt disease: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Stead, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.