Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato vyhláška xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx výskytu a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen bramboru, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx potvrzena možnost xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx hniloby x přirozených podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území nebo x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x určení xxxxxxx xxxxxx infekce x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx z xxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - partie hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx xxxxxxxxxxxx množením x jediné rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x ní bezprostředně xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Ústav xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx vymezeném xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dovážených ze xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx do třetích xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu pěstování,

b) xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx odpady z xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx substrát x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. a) x x), odstavci 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, v porostech xxxx ve skládkách, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v odstavci 2 xxxx. c) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx dobu s xxxxxxxxx laboratorním testováním xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx napadení původcem xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 písm. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x statistických xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X průzkumu prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx xx trh xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A ostatním xxxxxxxx státům x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx jednou ročně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi, a xx x xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx se v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx těmito škodlivými xxxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem zjištění xxxxxx podezřelého xxxxxxx x v xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx opatření založená xx stupni odhadovaného xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zákazu přesunu xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx ostatních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx a v xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, sdělí Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx mít xxxxx x Xxxxx republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 3.

§5

Opatření při potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx části x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx xxx vzorek xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, na xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x souladu x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor a x ohledem na xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx vod a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx písmene x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx původcem hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě odstavce 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx zásady xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x) x xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx zóny, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), odstavce 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x případě potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se s xx naloží způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx předem ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b) smí xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x pokud xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich části x veškeré xxxx xxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx buď zničí xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod uvedených x příloze č. 6 x xxx, že po xxxxxxxxx očisty a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx být provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x případě výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx budou tato xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s registračním xxxxxx dotčených xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 písm. x) xxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno s xxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx x vědeckým, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx povoluje Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, musí xxx xxxxxxxx laboratornímu testování, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen výskyt xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 definován jako xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx screeningový test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x v případě xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX test (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx materiálu x typickými příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce se xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových testů, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více screeningových xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je xxxxx xxxx další test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření IF xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx vhodná metoda xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo biotesty xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x případě potřeby xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne použitím xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest je xxxxxx v oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx xx poli xxxxxx jen zřídkakdy x xxxxx pak xx xx konci xxxxxx. Kromě xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx se zamění x příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole na xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx v infikovaných xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx ucpáním vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, listy a xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx xx pupkovém xxxxx hlízy xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny na xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx celý xxxxxxxx. X postupem infekce xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx xxxx xx x Evropě objevilo xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx kůra hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx poškození xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx stránce http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Tento postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx PCR xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 hodin nebo xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx x podezřelými xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx po xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx shromáždí x nepoužitých xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx není xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx bez xxxxxxx pufru, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xxxx být použita xxxxxxx sterilizovaná ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný transport xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx se xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x vzorky Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, která xx předmětem vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a shromažďují x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx má trvat 15 minut, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx lze xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Jedna xxxxxxxx se udržuje xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx skladuje s 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné další xxxxxxxxx.

4. lF test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx test a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX xxxx používán xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx ředění, při xxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 až - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7 000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým kmenem xxxx s jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Pro jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx x IF xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x IF pufru. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 minut x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx by mohly xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxxx a xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx FITC pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx x žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx fluoreskující a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX test a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx x dokončení xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx extraktů ze xxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) z 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx oligosond značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x.

5.1.3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx se a xxxxxxxx xx přes xxx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx xxxx použití xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X PB x 50 µx 96 % xxxxxxx. Promíchá xx protřepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µx 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx fixované xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx odstředěním, xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 M XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx být xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx a v xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 ml pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx lze skladovat, xxx měl xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX CaCl₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) x 45 µx na 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx dobu 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) tak, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x xxxx při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x 833 ml UPW). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xx XXX a položí xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxx se xxxxxxx velkým krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx eubakteriální buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Prohlíží se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH testu. X peletách z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x velikostí x xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx se berou xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Pokud xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu jako xxxxxxxx screeningového testu xx xxxxxxxxxx jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX test xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x přenosu XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly by xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk xx 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

6.1 Metody xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x jiných enzymatických xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx optimalizována pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCl, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do mikrozkumavky x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx o xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx při teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní xx x pelety etanol.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx zachová x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní xxxx (XXX) x xxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °C xx xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Připraví xx testované vzorky x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx byla xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx dobu 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace výsledku XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, že nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním testu x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx z obou xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x jedné xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx ze xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, které xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx se zajistilo xxxxx využití resuspendované xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Inokulace xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se horizontálně xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx a 15 xx délky). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx mezi xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx úhlopříčný xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx tři čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Zářez xx přidrží otevřený xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx lístky x xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x řezem se xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx injekční xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Jako negativní xxxxxxxx xx inokuluje 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx při nedostatku xxxxx se zajistí xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx x růstové xxxxxx xxxx chráněny xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie z xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Pravidelně po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx xxxxxx xx objevení se xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů a xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií nebo xxx přítomných x xxxxxx z pletiv xxxxx. Patří x xxx Erwinia carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Phoma exigua xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx rozliší Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx listů x xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se test xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a izoluje xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx stát, že Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní infekce xxxxxxx i po xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Pokud xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Ačkoliv xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x x xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx na xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µl alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným růstovým xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x infikovaných pletivech xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 na XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití pomůcek xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxx xxxxx, x xxxxxx počítáním xx 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM médiu; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový agar,

- xxxx z kvasničného xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) a xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx provádět xx použití xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx musí provádět x xxxxxx x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx kyseliny z:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx slabá

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Připraví xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu xx dosaženo, xxxxxxxx xX titr kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx může lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Vzorky xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Boer, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx xxxxxx kultury x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se vhodný xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X je xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxx. v xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede se xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum přibližně 10⁶ xxxxx na xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °C x sleduje xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Linec	Rakousko
Departement Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Pomme xx Xxxxx	Xx Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového pufru xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml.

Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx protřepat. X následujících pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx pozitivní kontrola. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Mikrozkumavky xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR musí xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X po dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x pupkových částí xxxxxxxxxxxx hlíz poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x provede xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x mytí sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná voda 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX x FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, pH xx xxxxxx na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X zásobě xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) v 96 % metanolu, amphotericin X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X se přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X NaOH, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost základního xxxxx je 3 xxxxxx. Po přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac tga xxx xxx xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx gca xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx objem	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) a 6.2). Xxx použiti extrakce xxxxxxxx nebo jinými xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx podmínky pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx xxxxx cyklů xx), xxx), iv), x), vi) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx ggc gca xxx ctc tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx tcc xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pH a x xxxxxxx xxxxxxx xx upraví xxxxxx XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X ROZTOCÍCH S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx destilované xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový roztok

Jód 1 g

Jodid draselný 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx zahřátím.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx krystalové violeti x xxxxx se xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem a xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztokem x nechá se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis of xxx ring rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Washington, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative metabolism xx carbohydrates by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x J. Xxx Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx of latent xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K x D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. J. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx x X. X. Hayward, 1966. X determinative xxxxxx for the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., X. a X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx differentiation xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx reaction-based techniques. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx identification xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Skerman, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. C.; Xxxxxxx, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. H. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx working party. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx plant xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci a xxxxxxxx protokolů, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry musí xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Test FISH xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx další xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx izolační xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x dalšími vzorky.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx jsou popsány x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, považuje se xxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx se xxxxx x X. solanacearum, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx fázích vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konce a xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X rané xxxx xx infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od pupkového xxxxx xxxxx a x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx který se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx je obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx na jedné xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx rostliny, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx se může xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Za normálních xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C xxxx xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x kořeny xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném řezu xxxxxx části stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x to x xxx absenci xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx na výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx modří A xxxx súdánskou černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx živnou půdu (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx misky s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. solanacearum x podezřelých izolátech xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxx xxxxxx použit xxx zjištěni původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx před testováním xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx příliš zeminy xxxx jestliže má xxx proveden test XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nože xx xxxxxxxx se odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx vyšetření takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) a xxxxx se uchovávají x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx včetně xxxx x podezřelými příznaky xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °C) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) homogenizují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během extrakčního xxxxxxx. Pro každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx zkumavek na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) při teplotě 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a zpracovány xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx rostlinné populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze stonku xxx vodou nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské rostliny xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Silene alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx se xx xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Potom xx zpracují části xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx drcením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx to xxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx na 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen tehdy, xxxxxxxx nebrání izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je popsán x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx velká xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx liší x závislosti xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, kterých xx obecně xxxxxx xxxx v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xxx v xxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, citlivost detekce x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx nichž dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx omezení xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografie xxxxxxx xxxx může xxxxx xx značnému xxxxxxx x xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx vzorkování odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z místa xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx každé 3 km vodního xxxx a xxxxxxxx xx rovněž přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10 000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 1 ml pufru (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) s xxxxxxxxx promytím filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx zpracování brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x popis xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x půdě

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solanacearum xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx z xxxxxxx vody. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx kalu xx xxxxx vzít v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx zpracování xxxxxxx x kanalizace xx navzorkuje shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Před xxxxxxxxxx xx xxxxx vzorek xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x detekční testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze stonku

Přítomnost X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx právě xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx obarví xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Krátce se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda se xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx zakápne 8% vodním roztokem xxxxxxxx octové x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Přebytečná voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm pod xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x až 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx olejovou nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Také xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x zda je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x vysají se xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx voda xxxxx papírem x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx olejovou imersí x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Při xxxxxxx komerčně dostupného xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx označené protilátky x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx použije tato xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx test x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná x xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx při teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x testování.

U xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxxx zajistit, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx inkubovat při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a xxx xx provádí kontrola xxxxx po 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x vnitřními pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx tomto médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx červené x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně rozeznatelné xx saprofytických bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném médiu xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 dnech nejsou xxxxxxxxxxx žádné bakterie xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxxxxx typické kolonie X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx zředění xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, které bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X obohacovacího testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 až 30 °X v xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu IF xxxx hlavního screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx je pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx lF nejméně 1:2&xxxx;000. Během testování xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx být úspěšně xxxxxxxx na vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, zvláště xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx uvedeno v dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při teplotě - 16 xx 24 °C) by xx mělo xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx sklíčka s xxxx okénky, pokud xxxxx s 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx týmž způsobem xxxx test vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx duplikát xxxx xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Druhá řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při teplotě 60 °C), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx podle konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. První xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx sklíčka xx test podle xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní sklíčka xx uspořádají xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryje kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx ze všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Je xxxxx zabránit vzniku xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx osušením.

4. Xxxxxxx xx umístí na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx kolmých průměrech x xxxxx obvodu. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnou R. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou se x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx test PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx PCR použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx vzorků extraktů, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí se xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx PCR by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx laboranty v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím testován xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX uvedenými v dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxx oddělení fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx směs odstřeďuje xxx 15 000 g xx dobu 20 xxx. při teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx nové Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, zachová xx xxxxxx a odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx stát při xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX se xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné metody xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx testované vzorky x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce podle xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx PCR a xxxxx xx xxx xxxxx XX jako xxx ten, který xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx x 3 µx nanášecího pufru (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx se vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové délky xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x porovnává xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX je negativní, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, ale xx zjištěn x xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, jestliže xx xxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx sadou primerů XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze mít xxxxxxxxx na inhibici XXX, xxxxxxxx je xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx izolace xxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené oligosondy xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu xxx teplotě - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx kontrolu procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01M XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx teplotě - 20 °X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (nebo x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxx postup přerušit x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx další den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx se xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx v držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx obr. 7.1) xx každém sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx tak, xxx pod ně xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx umístí do xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx vodní lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

9. Sklíčka xx krátce ponoří xx XXX (např. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka se xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx R. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány žádné xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum x xxxxxxxx testovacích sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx být xxxxx než u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Při podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx okénka xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x xxxxxx x bramborových xxxx x pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx použití XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx FISH testu xx xxxxxxxxx, pokud xxx použití rhodaminového xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX ELISA xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xx rovněž setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx určení titru xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x suspenze xxxxxxxx xxx vzájemného působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx použijí xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Xxx srovnání xxxxxxxx na každé xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x PBS R. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní kontrolní xxxxxx musí být xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx odděleny xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx et al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx z jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx absorbance xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx v uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx třikrát dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx každé xxxxx x xxxxxxxx xx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx ELISA

Test ELISA xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnota optické xxxxxxx (OH) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx OH xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx rostliny ve xxxx 2. xx 3. listů xx xx plného rozvinu xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx méně výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx rostlin xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23X). Vzorek se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží xxxx xxxxx prsty x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx příčný řez xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx relativní vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx nebo jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx rostliny z xxxxxxx vzorků po xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx sebe, oddělí xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech se xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, provede se xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx vzorku ze xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx xxxxx kultury x xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. solanacearum použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx provedený test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak chybí x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Kovacse +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví se xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Použije xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho výsledku xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Pastrik a Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) s xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx pozitivní, jestliže xx u kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx stejný jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward et xx., 1990). Živná xxxx pro test xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx živné xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární identifikace xxxxx komplexu R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční PCR x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 a 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X. xxxxxxxxxxxx a k xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx sazenic rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx vadnutí mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztěrem xxxxx možno na xxxxxxxxxx živné půdě (dodatek 2). Po inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx x autoklávu xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (viz pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí se xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx růst R. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx bude růst X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx to xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx mohou tvořit x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut a xxxxxxx se xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx jako pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x pozitivní xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Ústřední vědecká xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx kultur sekce xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x FISH

Kultivuje xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx se v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx dosáhne jemně xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se xx, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce výše xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx pelety. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek se xxxxxxx jako kontrolní xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní části x 100 X1 xx sterilních zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx testem IF.

Pro XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx resuspenzi x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx roztok na xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho xxxx xx sklíčku x xxxx okénky x

x - plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx protokoly a xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX CGT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx při teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: v) 5 minut xxx 72 °C (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 bp a 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX TA-3'

Reverzní primer XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) nechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Bsm 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití jiných xxxxxxxxx může vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-ggc xxx tag caa xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx chráněný před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního roztoku xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Pro xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx před přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx semena xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Detection of xxxxxx cells of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement X.; Xxxxxxx, X and X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Lelliott, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx the diagnosis xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Llop, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Tavner, G. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Hayward, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx strain-specific DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx for identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X ribosomal xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Pseudomonas pickettii xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (synonym Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Feuillade, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Europe xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown rot xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.