Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx rostliny x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x přirozených podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny z xxxxxx lilkovitých (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx území nebo x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x určení xxxxxx xxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou xxxxxx - partie hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné rodičovské xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby x rozsahu podle xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie bramboru xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ a xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx podléhají

a) porosty xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje používané x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx xxxx pěstební substrát x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 písm. a) x x), odstavci 3 x x xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. a) z xxxxxxxxxx partií,

b) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. c) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, složení x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx předávání xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx na míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, pověřenou x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, že vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx na trh xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v souladu x §10 odst. 5 xxxxxx jednou xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A ostatním xxxxxxxx státům x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi, x xx v xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxxx opatření pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx opatření založená xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x mimo xxxx xxxxxxx a xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod původem x jiného xxxxxxxxx xxxxx nebo v xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti týkající xx tohoto podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, a xxxxx přišly do xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx xxx vzorek xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x pozemek, xx xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx zamořeným xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů nebo xxxxxxx podle písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle písmene x) a xxxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx xx zařízení xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor a x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx písmene x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě odstavce 2 písm. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného zamoření x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) a xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), v každém xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x pod xxxxxxxx Xxxxxx xx s xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, že xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x pokud xxxx xxxx partie na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx jejich části x xxxxxxx jiné xxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, označené za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x), xx xxx zničí xxxx xxxxxxx xxxxxx x dezinfekci xxxxxx xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 s xxx, že po xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v karanténním xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx budou tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx a xx uplynutí doby xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx riziko jejich xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx x uváděný xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu s §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxx v posledním xxxxxxxxx sklizňovém roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx tuto souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx žádná klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech partií xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxxxxxx k množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx č. 1 x vyhlášce č. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela nezbytná xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx IF test xxxxx §4 odst. 1 definován xxxx xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti v xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx kroužkovitosti. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx rostou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška patogenity xx popsána v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x nejméně xxxx screeningových xxxxx, x nichž každý xx založen na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě jeden xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx vždy použije xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x protokoly (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx přímou izolaci Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx získat xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx mohou xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxx bramborových extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 médiu pravděpodobně xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx jsou výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 8.

(5) XX test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x důvodů konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínkách se xxxxxxxx xx poli xxxxxx jen zřídkakdy x často xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x xxxx infekci nadále xxxxxx, i když xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Často xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx bez měknutí x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než obvykle. Xxxxxx xxxxx identifikovaným xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx x xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx celý prstenec. X postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx část se xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X pokročilých stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, často s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx xxxx xx x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 hlíz na 1 test. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Ralstonia solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xx odstraní slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Opatrně xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx nadbytečná xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx xx shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx okamžitě, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků a xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot/min) xx xxxx 4 hodin xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit bezpečnostní xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx použita xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx maximálně 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µm), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µl xxx xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx nezbytně nutné, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo zahradnických xxxxx se xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx strany každého xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx skladuje x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx xx nutné další xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx screeningový xxxx x jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx se xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx být xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx každou novou xxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx měly xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat v xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx může být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7 000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 mm.

Test kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x průměru 6 mm xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx v řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x průměru 6 xx je xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup IF xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx by měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) protilátky x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx dobu 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx okének musí xxx stejné jako xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC pod xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx počtem xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, musí být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x atypickou morfologií x křížově reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx pozitivní u xxxxxx, kde je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx pozitivní, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl být xxxxx možno proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx xxxx 8 xxxxx na 7 000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx se přes xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx použití se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µl 96 % etanolu. Promíchá xx protřepáním a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a zředěný 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) může xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °C xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx stejné množství 0,01 X PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x fixují se xxx plamenem.

V xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml pufru (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx měl by xx pouze xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky se xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje v xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx sklíčku / sklíčcích xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 h x peci při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx xx filtrační papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x mikroskopem xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) ve vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se buňky Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x pozitivního kontrolního xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela zbarveny xxxx vykazují slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. To xx xxxx stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je negativní, xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx se xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x odděleném prostředí xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by xxxx xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. V xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x komplexních substrátů xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá se 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx x xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, pH 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, až usazenina xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx se 500 µl chloroformu x xxxxx se xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese se xxxxx fáze do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx resuspendujte v 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx stát xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx xxx teplotě -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly xxx XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Připraví se xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x přidá xx xxxxxx sterilní voda XXX, která xxxx xxxxxxx xx směsi XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při počátečním xxxxxxxxx a xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx na x) po dobu 30-45 xxxxx, za xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu PCR xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při optimální xxxxxxx a době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx v agarózovém xxxx x pozoruje xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být amplifikován x daným xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (pokud xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx testu x druhou sadou XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test na xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx přidaný x xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx zjištění lze xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené postupy xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro květináče x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx délky). Xxx každý testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fólie. Rostlinu xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx gumovým xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx listem podélný xxxx mírně úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx linky nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) se xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny se xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx se zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx nedostatku xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, aby xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx dnech xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx často jasně xxxxx okraj. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx období xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx nezbytné používat xxxxxxxx ve xxxx xxx listů x xxxx krátce xxxx xx. Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat populace xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. foveata, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx provedena izolace xx xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx z xxxxx a izoluje xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i po xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 týdnů. Xxxxx nejsou xx 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx podle oddílu 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx izolovat x xxxxxx projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se provádí xx xxxxx hlíz xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx u xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je třeba xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx odděleně xx xxxxxx, které xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx selektivního xxxxx xx xx měla xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µl alikvotní xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy x xxxxx vejcoplodého se xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x temnu xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxx xxxxx, x xxxxxx počítáním xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou na xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- kvasničný xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx okraji x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx pomoci vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx měla xxxxxxxxx při 21 °X x xx xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx po dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx provádět xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 minut. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx lýza xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx uložit xxx teplotě -16 xx -24 °C xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx velikosti a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk na xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody jako Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však vyskytuje xx xxxxx Clavibacter xxx. v rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml v XXX.

x) Provede xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx infekce, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při teplotách xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 týdnech příznaky xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozdrtí a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx virulentního xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx schopných tvorby xxxxxxx/xx. Toho se xxxxxxx dosáhne prostřednictvím xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx s bílou xxxxxxx, u které xx xxxxx, xx xx prosta X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml.

Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx C. x. subsp. sepedonicus xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx protřepat. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx se provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 až-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x FISH xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, FISH x PCR musí xxx X. m. xxxxx. sepedonicus zjištěn x nejméně v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x extrakci xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) pro použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá pro xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

2. Xxxxx xxx IF test

2.1. Xxxxx xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx pufr se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 ml

Krycí roztoky xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx jamkami x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °C po xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým extraktem x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu při 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, pH xx upraví xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 g.

V zásobě xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% etanolu, xxxxxxxxx B sulphate x destilované vodě. Xxxxxxx roztoky se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx ctt gtg xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx gtt tca xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx xxx ctg xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx xxx tca xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x DNA X. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx PCR kontroly 18X rRNA 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 mM MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x TP (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx byly xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx optimalizována pro xxxxxxxx pupkové části xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx viii) 5 minut při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. subsp. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Bgl XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx C. x. subsp. sepedonicus xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx proužkem se xxxxxxxxxxx pH a x xxxxxxx potřeby xx upraví xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx před prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se až 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud je xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx destilované xxxx.

Xxx roztoky se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší se xx xxxxxxx x xxxxxx se zahřátím.

2. Xxxxxxx se zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx roztokem a xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

6. Odbarvuje xx pomocí xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx plants. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. EPPO Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative methods xx light xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx for general xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx carbohydrates by xxxxxxx gram-negative bacteria. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x semi-selective medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas pyocyanea xx the oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Skapt. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx reaction-based techniques. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX and xx automated real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx identification xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx identification xx xxx genera of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Smith, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx V. X. Collins, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of potato, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x za podmínek xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx hniloby nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Popis xxxxxxxx xx nachází v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního slizu xxxx extraktů z xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli postup xxx xxxxxx x xx menší počet, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx screeningový test. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxx pozitivní, je xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Typická morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé identifikace xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých teplotách xxxxx xxx, přičemž x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x končí kolapsem x uhynutím xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx vymáčknout. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xx z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konce a xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. V rané xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika minutách xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se cévní xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx cévního pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x rajčete

Rostlina rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů a xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Při xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx hnědě zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx a S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx inokula (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x xxxxxx ve xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného pletiva xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx jsou xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (viz xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru (dodatek 4) x nechá xx 5-10 minut xxxx.

x) Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx suspenze x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou půdu (XX, XXXX nebo XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Rozetře se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx krvavě červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx uvedených zjišťovacích xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištěni původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx při teplotě 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx jestliže má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxx na xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx vodivé pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx stranou a xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx na xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx nepoužitých xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx vyčištěny a xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx použití (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx použití.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x po dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) při teplotě 4-10 °C x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx a 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx glycerol na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx zbývající xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx boxu s xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí pro xxxxxxx XX x xxxxxxx testy.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou v xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Testy XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, měl xx xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx rostlinné populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm dlouhé xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx nebo skleníku: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx odebere nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx zahradnickými xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x paty každého xxxxxx hned xxx xxxxxx země. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx tocích. Mezi xxxxx hostitelské rostliny xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Race 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx možné provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x příznaky se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx papírem. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx drcením v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uloží xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx nejdéle na 72 hodin xxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx díl xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) nebo -68 až -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Test XXXX (viz oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx a doporučuje xx xxx xxxxx, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx popsány x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li podezření, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx čistých kultur X. solarcacearum se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx citlivost detekce xx však xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Citlivost xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx snížení saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto schéma xxxxxxx úspěšně k xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx omezení xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx a x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x období pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxxxx xx značnému xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, pokud xxxxx 30 cm xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 xx vodního xxxx x xxxxxxxx xx rovněž přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4-10 °C, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx vody, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx pro detekci x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx schéma xxxxxxx x xxxxx oddíle xx použitelné pro xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx vody. Je xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx při sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x xxxx xxxx kalu xx xxxxx vzít v xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx testovacího schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x její xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vzorky při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý vzorek xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx ze stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx zkumavky s xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, zda xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx sklíčka se xxxxxx protáhne nad xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí x xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test nilskou xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx modři a xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se zakápne 8% vodním roztokem xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx odsaje savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm pod xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xx xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% roztokem xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx do xxxxxx x vysají se xxxxx papírem. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

d) Sklíčka xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx olejovou xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, zda xx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx jiných bakterií xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx přeplněny xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx ze xxxxxx xxx očekávat, že xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx bude velmi xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx při teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx odděleně od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx selektivní živné xxxx xx xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx vzorek (vzorky).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Nanese xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx krvavě červené xxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, kruhové, xxxxx červené x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., aby se xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, jestliže xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

Test očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx izolovány podezřelé xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. Z tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx může xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 ul xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 ml obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx baněk. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx v 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX se xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané spolehlivosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx screeningový test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx je test XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx diagramu, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx pro každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx lF nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx to xxxxx, xxxx být úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být ze xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x resuspenzí ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx potřeba, zvláště xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx je množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Druhá řada xxxx být použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje obr. 1.

xx) Pro jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. První xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

6. Setřesou xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené x určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx počet xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Vzorek xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x celém xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x přesnosti xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Použijí xx schválená xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx třeba použít xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx by xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx extrakci xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx XXX použít xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx substrátů vzorků xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx v dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx na 5 xxx. xx ledu.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx roztoku Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Easy DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 x xx dobu 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °C.

9. Horní xxxx se xxxxxxx xx nové Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx na xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15 000 x po dobu 20 minut při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a promíchá xx překlápěním mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, zachová se xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo v XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µl sterilní XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx se xxxxx použít, pokud xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze reakční xxxx XXX x xxxxx se xxx xxxxx XX xxxx xxx ten, který xxx použit ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) agarózového xxxx v Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX o očekávané xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x porovnává se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx xxxxxxx x xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx není xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx získat xxxxxxxxxx testu s xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku pozitivní xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx získán x xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX test x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (PB) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno v dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µl fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím zařízení.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µ10,01M XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu (nebo x sušičce xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) a fixují xx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx se xxxxx x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx tkaninou nebo xxxxxxxxxx papírem nasáklým xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx se xxxxxx xxx x hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx sklíčka (24 x 24 mm) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 okénka, x xx tak, xxx xxx ně xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxx x molekulární kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx a 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx vody x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx vodní xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx UPW (xxxx. Xxxxx Q water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x celé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x morfologií pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx. 6.1.7) musí xxx xxxxxxxxx, pokud xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x kolem obvodu. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx testovacích sklíček. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při podezření xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx v případě, xxx všechna sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx méně častěji xxx x xxxxx XX.

5. V xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx pozitivních kontrolách x nejsou xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Nutné je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA lze xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx zvýšit citlivost xxxxx, xxx xxxx xx rovněž xxxxxx x nezdarem kvůli xxxxxxxxxx jiných organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx určení xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Při xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx stejné jakou xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní x suspenze bakterií xxx vzájemného působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A a X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx musí xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) a xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x nechá xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx předtím (xxx 4.).

8) Připraví xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx každé jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx jamky. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx absorbance xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Nechá xx inkubovat při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek xx každé xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx stát 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx protimyšího imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x jsou větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx se xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx růstových podmínkách. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx citlivé odrůdy xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx listů u xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx citlivostí), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. listů xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx ze vzorku xxxx testovací rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky rostlin xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxx prsty x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx příčný xxx xxx 1 xx xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx rostlin, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx zabránilo xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx nebo jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorků xx xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx vhodnými zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kultury x podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx být x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx viz Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx pozitivní, jestliže xxxx XX kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx test XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx x této xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x hodnotou z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx teplotě - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx al. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Weller xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) s xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx pozitivní, xxxxxxxx xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test FAP xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx použitím xxxxx x následujících xxxxx.

X xxxxxxx provedeného xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově zelené xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím xxxxxxx XXX, XXX a XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x diferenciaci kmenů xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2T) R. xxxxxxxxxxxx, jak bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se inokulum x xxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx během 14 xxx. Neobjeví-li xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx místem inokulace. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx a sterilují x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí se xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxx stanovená xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. solanacearum pomalejší, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 dny xxxx x červené xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx při použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone et xx., 1996)

Provede se xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx je xxxxxx z těchto xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Ústřední vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše uvedených xxxxx může xxx xxxxxxxx pouze v xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

b) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx v testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx kontrole sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) na XXXX xxxxx půdě x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx slupkou, o xxxxx xx xx, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx postupem a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 xx sterilních xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx testem IF.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho roku.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx v glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX testy k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx jsou komerčně xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx ELISA

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx se upraví xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry pro xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Vypočítá xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho pole xx sklíčku s xxxx xxxxxx x

x - plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = koeficient xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 nebo 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx protokoly a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx nemělo vykazovat xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX CGT AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx při 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °C (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx gcg xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx gtc xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx mohou xxx xxxxxx použity xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X po inkubační xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 bp.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx optimalizován pro xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Bsm 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Před xxxxxxxx xx zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx proužkem a x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx roztok přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX VELMI JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x sterilizuje autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) nebo xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx whole xxxxx for determinative, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx application xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx virulence xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Interactions 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, A.C. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR technique. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas solanacearum xx symptomless xxxxxx xxxxxx and some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx colony xxxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K and X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Llop, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Delme xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. solanacearum in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, X., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX and rep-PCR. Xx: Prior, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt disease: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. and Boonham, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.