Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Davis et xx., původci bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jejich šíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro účely xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen bramboru, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx původcem kroužkovitosti x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx L.) kromě xxxxx x plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx byla xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a původu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x určení xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx pozemku, x xxxxxxx anebo x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx §11 odst. 1 zákona,

i) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní partie; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x případě xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

b) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxx doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx odpady x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. a) x b), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx v odstavci 2 xxxx. c) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx, pěstebního xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, složení x xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx o odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Ústav xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx produkce brambor x dalších hostitelských xxxxxxx a x xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx ve výskytu xxxxx xx míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona a xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X průzkumu prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx na xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Opatření při xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx se v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 odst. 1 zákona

a) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx opatření založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího možného xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x mimo xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Při podezření xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx původem x jiného xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, sdělí Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti týkající xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Pokud xxxx x podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít xxxxx x České republice xxxx které xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxx pěstování, uvádění xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx, zásilku, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx jiné objekty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx možná úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx předmětem xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů nebo xxxxxxx xxxxx písmene x) a bezpečnostní xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle písmene x) x možného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vodu, odpadní xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x jeho xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. b), x sdělí podrobnosti x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx republiky v xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x partiím, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx míru rizika xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx dohledem Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) partie hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Ústav xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x pokud xxxx xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx části x veškeré xxxx xxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx pravděpodobně zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx buď xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, že xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, vymezených podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém roce x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha č. 1 x vyhlášce x. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx diagramy popisují xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, validovaná xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx testovaných x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek příslušných xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx stanovené prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první screeningový xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx xxx proveden xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx materiálu x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které rostou xx infikovaném pletivu, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické morfologie xxxxxxx je v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby byl xxxxxx považován za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, další xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se validovaná xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx za použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx médiu x které mohou xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx nepodaří, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x rostlin xxxxxxxxx xxx biotest (viz xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx k xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx MTNA nebo XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, že je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) IF test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, u xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(11) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na poli xxxxxx xxx zřídkakdy x xxxxx xxx xx xx konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky skryté xxxx xx zamění x příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx na okraje xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx často i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na spodní xxxxx stonku často xxxx chlorotické, žluté xx oranžové mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx jsou xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx hmoty. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx se vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx prstenec. X postupem xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část se xxxx xxxxxxx od xxxxxxx korové části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se objevují xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx době se x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx infekce může xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné jsou x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, xx je ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx provádět PCR xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx omezí xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxx xxxxxxx x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx skladování může xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot/min) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx každý xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná ostří (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx zamezit xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx se supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) nebo xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje se xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx pro xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx sterilní glycerol xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx vířením a xxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx populace, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části stonků xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx není možné, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx screeningový test, xxxxxxx byla prokázána xxxx schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx screeningový test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky proti xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly mít XX titr alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx přidáním 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx dobu 15 xxxxx xxx 7 000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx xxxx podle možnosti xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx části vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka s xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x průměru nejméně 6 mm.

Test kontrolního xxxxxxxxx se provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do zbývajících xxxxxx v xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx podle obrázku 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx je xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxx po xx možná nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením po xxxx 5 minut x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, kterým xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx pracovním ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou morfologií x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Berou xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test FISH

PRINCIP

Když xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x je pozitivní, xx k dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx ze xxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x 3-5 denní kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx do Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx přes xxx při xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % etanol. Pro xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním x xxxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx odstředěním, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx se xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) v 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl by xx xxxxx jednou xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá místo xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Sklíčka xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje v xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 55 °X xx dobu alespoň 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do předehřáté xxxxx komory x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx a 833 xx UPW). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx ve xxxxx lázni při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1x hybmixem při xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx krátce xx XXX x položí xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx zvětšením 630x xxxx 1 000x pod xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx internetová stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může stát, xxxx všechna sklíčka xx skupině vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X peletách z xxxxxxx části bramboru x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x XX testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx fluoreskující buňky x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR test xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by měl xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních substrátů xxxxxx jsou k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA v xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx vzorku a xxxxxx se do xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx x 10 mM Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X xxx oddělení xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx fáze xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x xxxxxxxx se x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X xx xx upotřebení xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX by xx xxxxx použít, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx vzorky x kontroly pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx se xxxxxx sterilní voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném a XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech nových xxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x pozoruje xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX prosvícením xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, pokud xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx xxxxxxx v xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: druhý produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (pokud xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx nebyl získán xxxxx z obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml přidaný x extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku jednou x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx ve xxxx 2-3 xxxxx xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx zajistilo xxxxx využití resuspendované xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky a 15 xx délky). Xxx každý testovaný xxxxxx se xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx bloku.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx mezi děložními xxxxxx x xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx úhlopříčný xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží otevřený xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx do něj xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx dvěma prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx zářez (x úhlu přibližně 5°), dlouhý 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x řezem xx xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx injekční stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v karanténě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx dobu xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xx skleníku nebo xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se zajistí xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx manipulaci xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx bakterie z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá období xx objevení se xxxxxxxx, tím xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve fázi xxx xxxxx a xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx přítomných v xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x X. carotovora subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx listy nebo xxxx xxxxxxxx. Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx se na xxxxx vejcoplodém objeví xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx listů a xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a izoluje xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx inkubační doby xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR xx xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx xxxx pozitivní, xxxx xx být xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (selektivních) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx kultury xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx izolován a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx provádět izolaci xxxxx x pelety xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx všech hlíz xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx a z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, ale u xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx odděleně xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx měla xxxx použitím k xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se testuje xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy z xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným růstovým xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx počítáním xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci by xx měly xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx a identifikace xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx z následujících xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- kvasničný xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx z kvasničného xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °C xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu a xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U subkultur xx xxxxxxxx růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově bílé xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx okraji x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (viz xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx identifikační testy

Zjišťují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - nebo slabá

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ buněk/ml v xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 minut. X případě xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx podpořit přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxx, pokud xxxx amplikony PCR xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX test

a) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x UPW.

b) Xxxxxxx se postup XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kultury x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Janse, 1991; Stead, 1992).

c) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter a Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Provede se xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx z 3-xxxxxxx xxxxxx testované izolované xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Pletiva xx rozdrtí x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro de Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX a FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx dosáhne prostřednictvím xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, xx xx prosta C. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se zpracují xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml.

Připraví xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx s 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX test xx xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x žádné x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX fosfátový xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx poté, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X po dobu 15 xxx.

2. Pufry xxx XX test

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. IF-pufr-Tween

Tento xxxx se xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Vypočítá xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx S = plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx média

Živný xxxx (Nutrient agar = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx se sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým extraktem x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx na 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx přípravu zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac tga xxx xxx xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx tgc -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx xxx acg ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost amplikonu x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx izolace DNA xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (prodlužování xxxxx)

25 xxxxx v) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx optimalizován xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky fragmentu x xxxxxxx Bgl XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po dobu 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (pH 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se až 1x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx xx ochraňovat xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, zkontroluje se xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení v Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného v 80 xx destilované xxxx.

Xxx roztoky se xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový roztok

Jód 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx krystalové violeti x xxxxx se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx působit xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx vodou x vysuší se xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx vodou x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx detection xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for general xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, R. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x J. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic coryneform xxxxxxxx. J. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx a X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. A. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, C. X., 1959. Comparative xxxxxxx on some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. H. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted probes. Xxxx. Environ. Microbiol. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx vody x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx a podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (test IF, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx cévních xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx kultivací na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx popsán x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových xxxxx (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x jednoho screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x tomu, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx extrakce a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx je xxxx pozitivní, je xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx nebo xxxx screeningových testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Další testy xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li ve xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx stejného vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků.

2) Metody xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X případě, xx xx test xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, považuje se xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx popsán x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx se xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx vysokých teplotách xxxxx dne, přičemž x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx stává nevratným x končí kolapsem x xxxxxxxx xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx z xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx minutách xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx stává výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx pupkového xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx bakteriální sliz, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx bakteriálního a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx na jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Je xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °C nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x kořeny xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném řezu xxxxxx xxxxx stonku xxxx částí stonku xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx xxxxx xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na výtok xxxxx ze stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xx mikroskopickém sklíčku xxxxxxx xxxxx A xxxx súdánskou černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými screeningovými xxxxx jsou test XX (xxx oddíl 6.1.5.), test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Odebere se xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence hlízy xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, YPGA nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. solanacearum biovar 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°C.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Aviruletní formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Validace xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže může xxx rovněž použit xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX test, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na pupkovém xxxxx. Množství xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) hlízy x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx na xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se uchovávají xx dobu xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °C) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx sterilované xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx omyje přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx a 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx se xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (měsíce). Xxxxxxxx se uchovávají xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx založen na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx uzavřené sterilní xxxxxx se xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahradnickými xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx dlouhý díl x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější v xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum dulcamara, X. nigrum, Datura xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x příznaky xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx zpracují části xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °C xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx zahušťování bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx provést xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Jeden xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhý xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx -68 až -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (viz oddíl 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Koncentrace zvětšuje xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen tehdy, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Citlivost testu xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx v xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx v povrchové xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, kdy teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x různé době xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx toku xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx upřednostňována menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx každý xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při intenzivním xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na každé 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí vzorky xxx 10 000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4-10 °C, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a resuspenduje xx peleta x 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový diagram x xxxxx xxxxx x příslušných xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx izolace, opakují xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx detekci x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx poznamenat, xx tyto metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x její xxxxxxxxx, xxx není xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx vzorek xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst xx ploše 0,3 xx z hloubky 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx nebo kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx dodatku.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x známém XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout x spodní povrch xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx modři x xxxxxxx se inkubovat 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Krátce xx opláchne jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm pod xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% roztokem xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok a xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx se přebytečná xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se ponoří xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx v digestoři.

e) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx přebytečná voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr mikroskopem x procházejícím světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x buňkách X. solanacearum x xxxxxx zbarvenými xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x příznaky je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx xxxxxxx komerčně dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Pozoruje xx, xxx xx x pozitivních vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxx použitelná x xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené xxxxx selektivní živné xxxx xx xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx zajistit, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx pro každé xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., xxx se xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x inhibici jinými xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

Test očkování xx xxxxxxxxxx média xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup lze xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx vzorků x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x ke zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx však xxxx být neúspěšné x důvodů xxxxxxxxxx xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx může xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem připraví xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 hodin při xxxxxxx 27 až 30 °C v xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx je test XX xxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx pro každou xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx je definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx na vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15minutovým odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j jsou xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °C) by xx mělo xxxxx xxxxxxxx použít jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x testování jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx je množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx pufru. Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx rezervní nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), plamenem, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx se sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), titr (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumají xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x kolem obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění kontaminace xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX x PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x virulentního xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by měly xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace DNA

Používají xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x teplotou 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx roztoku Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x směs xx xxxxx homogenní.

8. Xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 minut xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx resuspenduje x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při teplotě - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx extraktu DNA (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx možno, doporučuje xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx PCR, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxx xxxxx UM xxxx xxx ten, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx a UV (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x očekávané xxxxxxxxx a výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x čase shodným xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx není xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx kontrolami XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx extraktů xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx by xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (PB) ze 3-5 denní kultury. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x tomto xxxxx, xx uveden x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Wullingse et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, přičemž xx použijí 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx neředěný a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu opakovat, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x přidá xx stejné množství 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx nechají uschnout xx xxxxxxx (xxxx x sušičce sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx se xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při teplotě 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Použije xx 10 µl hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 a 8) se xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx ně xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx při xxxxxxx 45 °C v xxxxx.

5. Připraví xx 3 xxxxxxx obsahující 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Sejmou xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do držáku xxxxxxx.

7. Spláchne se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x položí na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx papírem. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při podezření xx jakoukoli kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx várce ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx sklíčka) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. X úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních kontrolách x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx počet typických xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx R. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx IF, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX ELISA xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek povinné. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx určení titru xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum a xxxxxxx vhodných druhotných xxxxxxxxx protilátek podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x suspenze bakterií xxx xxxxxxxxxx působeni x solném roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede týmž xxxxxxxx jako test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X xx 4 xxxxxx ve xxxxx lázni nebo xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx do každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Extrakty xx vylijí x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6) Xxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx při pokojové xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °X 4 až 5 xxxxx nebo 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µl xx každé xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek OH x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé odrůdy xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx testovací laboratoře) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx vzorku. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx citlivostí), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi testovací xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx se kápne xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 cm xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx se utěsní xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx relativní xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby nedošlo x vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx stonků dlouhých 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, provedou se xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny pro xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické identifikační xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% NaCl +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví se xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx IF metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx jiný sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx suspense x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 minuty. Vzorky xxxxx xxx uchovány xxx teplotě - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX k amplifikaci xxxxxxxxx specifických xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Pastrik a Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Weller xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx pozitivní, jestliže xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX a xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx komplexu R. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční PCR x xxxxxxxx primerů XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat až 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °C x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx půdy. U xxxxxxx kultur by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Provede se xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx půdy xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Difco) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí se xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou tvořit x 1-2 dny xxxx x červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 minut a xxxxxxx se na 50 °C. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny xxxx komerčně dostupné x xxx xx xxxxxx z těchto xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Ústřední vědecká xxxxxxxxx York, UK.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

b) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml k xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x negativních kontrol xxx screeningové testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se x 10 xX fosfátovém xxxxx, aby se xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx dosáhne jemně xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx xx prosta X. solanacearum.

Zpracují se xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx se desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx se při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx používá k xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, zkontroluje xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx podložních sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx používá xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx a koncentrovanou XXx xx xxxxxx xX na 9,8.

Doplní xx do 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu DASI XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx okénky x

x - plocha pole xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx kmenů bakterií (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 sekund xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx aca xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Xxxxx Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 bp x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX GAA G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly PCR 18X rRNA = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 xxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX ACG GCA XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Protokol XXX specifický pro xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX specifický pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací XXX R. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Bsm X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. solanacearum pomocí xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Xxxx xxxxxxxx se zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx tag caa xxx xxx ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx tcc xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx proužkem x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALEDHYDEM NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 mM (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX POUŽÍVAT XXXXXXXX X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx by xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for determinative, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx in microbiology. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx tuber extracts. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Characteristics of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. and Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., Y. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx analysis. Systematic xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx colony xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Lelliott, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx diseases xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Llop, P., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx genomic fingerprints xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Stephens, C.T. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, R. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Hayward, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. J. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Maiss, X. 2000. Detection xx X. solanacearum xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis and xxxxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx fatty-acid profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx based xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Prior, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt disease: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Ralstonia solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Detection of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.