Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx unie¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx a

c) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jejich xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx se rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.,

b) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx semen bramboru, x ostatní xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx infekce x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx v xxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, která vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx považují xxxxxxx xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x jediné rodičovské xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx podle §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx členských států,

d) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v bezpečnostní xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx partie rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x místech produkce, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. a) x b), odstavci 3 x v xxxxxxxx 4 písm. x) z xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxx dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném v xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx o odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a statistických xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Věstníku Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Věstník"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, že vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu prováděného xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx odkladu právnické xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby mezi xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, a xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx vizuálních příznaků xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxxxxx screeningového testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X případě xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby Xxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx byly odebrány xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření pod xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx stupni odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx přesunu xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx spojených s xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx i mimo xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiného členského xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto podezření x xxxx x xxxxx státem vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx republiku ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx partii, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, ze xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx místa produkce xxxxxx těch, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx zaměřené na xxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx s ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, označeným xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x možného xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem na xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx zařízení xx zpracování a xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx s cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx základě označení xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného zamoření x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 písm. x) x odstavce 4.

§6

Testování klonově příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje nákazy x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx míru rizika xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby a xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě průmyslového xxxxxxxxxx xxxx partie, x pokud xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx pravděpodobně zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx podrobí očistě x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, že xx xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx zamořené ani xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé hniloby xxx opatření uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 písm. b) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 odst. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky x uváděný na xxx, musí xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v příslušném xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx byl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx vydaných Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x identifikaci čisté xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx a x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém médiu x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v pokročilých xxxxxxxx infekce xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické morfologie xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Pokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx použití testů xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx pozitivní kontroly x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli xxxxxx lze použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx negativní, xx vzorek považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto může xxx x mnoha xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx přerůst. Pokud xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx použitých xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus z xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou výsledky xxxxxxxxxxxxxx testů pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test pozitivní, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie jsou xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx popsán v xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x často pak xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se zamění x příznaky xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku často xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí x xxxxx cévního xxxxxxx, zejména blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x mohou xx postupně xxxxx xx celý prstenec. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx korové xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, často s xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx kůra hnije x prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat a xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 xxxx xx 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Validace xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x xxxxxxxx xx xx provádět PCR xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx. Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx dvou týdnů.

Všechny xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx hlízy s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx korkovatět po xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx xx x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx jsou xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx není xxxxx, uchovávají se x xxxxxx bez xxxxxxx pufru, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx učinit bezpečnostní xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR test, xx xxxxx zamezit xxxxxxx XXX xx xxxxxx nebo mlecí xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x xxxxxxx zkumavky xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 x xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°C) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx supernatant, xxxx xx se rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Použije se 500 µl pro xxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µl xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx transport xxxxxxxx, zajistí se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx se xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo kontaminaci. Xx platí i xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění latentních xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx části xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx podle popisu x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 až -86 °X (měsíce), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se použít xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně citlivé.

Používají xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx kmenu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (viz internetovou xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 až - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým kmenem xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x průměru 6 xx je xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx roztoku xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro druhý xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx dalším použitím xxxxxxxxx zmrazená v xxxxxx xxxx xx xx xxxxx nejkratší xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx by měl xxx titr 1/2 (X/2), x ostatních xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (WD) protilátky x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx každém xxxxxx xxxx být nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíře přikrytá xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx a tato xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx okének xxxx xxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxxx x tato xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx x žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx se zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x úvahu.

Při podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky kontaminaci xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx okénka sklíček) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Berou xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x vypočítá počet xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx pozitivní x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx IF test. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx pozitivní, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ buněk Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl být xxxxx možno proveden x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx se xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx použití se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X PB a 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne se 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 3, přičemž xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (v 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx je xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 M XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx lyzozymu (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx skladovat, xxx měl xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a nechat xxxxxx. Xxxxx vzorek xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx po dobu 10 minut při xxxxxxxx teplotě. Potom xx ponoří xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vody, xxxxx xxxxxx, a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % etanolu xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx na 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx dobu 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a do xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / sklíčcích se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 ml UPW). Xxxxx z xxxx xx xxxxxxxxxxx ve xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x podložní xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxx xxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx ihned x mikroskopem xxxxxxx xxx epifluorescenční mikroskopii xx zvětšením 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx a xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, se pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem méně xxxxx než x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX test

PRINCIP

Použije-li xx PCR xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí být xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test a xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx by měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x nimž byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty ze xxxxxx by xxxx xxx pokud možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou k xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx optimalizována pro xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x inkubuje xx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °C po xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy DNAR xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx fáze do xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (-20 °C), krátce xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní xxxx (UPW) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx xxx teplotě -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX se xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx směsi XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X obarveném a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX prosvícením po xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané velikosti xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti x xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze dosáhnout xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus ve xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl získán xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx i xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jsou xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx rozdělí mezi xxxxxxxx xxxxx jednou x níže uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx se xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx pro xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou částí x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx xxxxx a 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx mezi xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem bloku.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx linky nebo xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx lístky x xxxxx pravý xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x xxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx suspendované pelety.

7.3.3. Xxx se zakryje xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) se xxxxxxxx lilku xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xx rozdělí mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx rostliny nechají xxxxxxxxx v karanténě xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx nedostatku xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx musí být xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx manipulaci xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx chráněny xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce kroužkovitosti xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx před znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx mohou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx a X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, jakož x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx rozliší Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a xxxxxxx xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, se xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává v xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx se měla xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr na xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xx obvykle x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx vzorku, x ředění 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) a xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, s xxxxxx počítáním po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx x následujících xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, okrouhlé, xxxxxx, vyvýšené, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx tekuté, x xxxxxxx okraji x xxxxxxx mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně xxxx následujících testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx každý provedený xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující fenotypícké xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx xxxxx by xxxx být vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx musí provádět xx použití inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí provádět x xxxxxx z xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba indolu -

Xxxxxxxxx citrátu -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xxxxx x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím bloku xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Boer, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Pastrik x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX test

a) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kultury x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx teplotě 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně svědčí x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Clavibacter xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx xxxxxxx 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx x vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x přemokření xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2 cm nad xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °C x sleduje xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Végétaux, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx la Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx PD 406) xx základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx s bílou xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx zpracují xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml s 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx protřepat. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x pufru pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Vypočítá xx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx xxxx na sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx média

Živný xxxx (Xxxxxxxx agar = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco bakto xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

Médium x kvasnicovým xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí a xxxxxxx xx sterilizace 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, pH xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x ochlazení xx 50 X xx xxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin B 0,01 g.

V zásobě xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx tgg xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac xxx xxx gtt tca xxx ccc x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx gca ata xxx xxx xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx tca xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x DNA C. xx. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer PSA-R (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx nebo jinými xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx teplotě 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 sekund při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji charakteristickou xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx ctc tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx před prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx množství hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx množství xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití je xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx tloučku v xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Připraví se xxxxxxx, xxxxxx xx xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx omyje xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx se působit xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztokem x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Dinesen, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Corynebacterium sepedonicum xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative bacteria. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fattyacid analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. The interpretation xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x D. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Billing x X. C. Xxxxxxx, 1966. A determinative xxxxxx for the xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Russell, X., W. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx differentiation xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, Y., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx potato tubers xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X guide to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx vody x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí být xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, rajčete x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx a rostliny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx test, izolaci xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx nachází v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx svazků xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního slizu xxxx extraktů x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx nebo extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx v oddíle 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

12) Kultivace xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx izolační xxxx xx negativní, xxxx xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), z xxxxx každý xx xxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx a xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx vzorek xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použit x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, je xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx popsán x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx selektivní izolace xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete nevykazujících xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx další testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx konce x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x odumření xx může xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších fázích xx xxxxxxx rozšíří xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx který se xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx cévního pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °C, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx xx jedné xxxxxx rostliny xxxx xxxx rostliny, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx se může xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx a S. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x rostliny X. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x kořeny ve xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx řez stonku xxxxxxx svisle do xxxx, a xx x při xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx xxxxx nebo xxxx následujících testů:

2.2.1. Xxxx na výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Odebere se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Připraví se xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 il xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) inkubuje se 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- U Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx popsány v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx je xxxxxxxx xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční prostředky (x obsahem chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Množství xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) za řádných xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě bez xxxxxxx pufru; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °C) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx sterilované xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx testu XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxxxx xxxx v xxxxxx přístroji. U xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavek xx xxxxx použití.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), filtr xx omyje přídavkem (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx se supernatant, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx a 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením a xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx se uchovávají xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx přeprava x xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxx spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahradnickými xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. X xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx celý xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx mohou hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x příznaky se xx stranou xxxxxxxx xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °C) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Jeden xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhý xxx xx skladuje x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Postupový diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího testu XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx velká saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx popsané v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx liší x závislosti xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxxxxx populacemi konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx než v xxxxxxxxx vodě. Zatímco xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx nichž dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx x úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Vzhledem x tomu, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x období xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na každé 3 xx xxxxxxx xxxx x vzorkují xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx vzorky xxx 10 000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 minut), xxxxx xxxxx při teplotě 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Selektivní xxxxxxxx test xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx použitelné pro xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx vody. Xx xxxx nutné poznamenat, xx tyto xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx kalu xx rozptýlí rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx mikroskopické xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx roztěr kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x známém PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout x spodní povrch xxxxxxx sklíčka se xxxxxx protáhne nad xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx zakápnou 1 % vodným roztokem xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Krátce se xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx pod xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx se xxxxxxxxx 600x až 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, zda xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x zda xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Zakápnou xx všechna sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku a xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx dodržet nezbytná xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx se opláchnou xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá se xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x xxxxxxx X. solanacearum s xxxxxx zbarvenými xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx nebo x xxxxxxxxxx z xxxxxx x příznaky xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx míchání xx dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná půda, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx extrakty, které xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 do -86 °C.

Pozitivní kontroly xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleně xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx by měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx k rutinnímu xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx kultivaci xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x po 3 dnech inkubace xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx kolonie.

3. Předpokládané xxxxxxx X. solanacearum xx rozetřou xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) při pokojové xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x inhibici jinými xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx připraví xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx ELISA xxxx XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx je xxxx XX použit xxxx xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, aby xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx definován xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx lF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx to xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x resuspenzí ve xxxxxxx množství peletového xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x jsou xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx uvedeno x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním sklíčku.

Jako xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

Použijí se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx test vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Pro jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx okénka je xxxxxxxx větší v xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx rezervní nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. První xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) protilátek x pufru IF. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.ii) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se ponořením xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se stanovuje xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 ul 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x filtry vhodnými xxx excitaci FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnou R. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou se x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx izolace xxxx IF. Jestliže xx PCR použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx se doporučuje xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx se xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx jako s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci bakterií x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml X. solanacearum xx xxxx z virulentního xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx PCR použít xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované materiály x pozitivní a xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx schválenými metodami XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze vzorku x mikrozkumavka se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx roztoku Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx odstřeďuje xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °C.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx překlápěním mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx v XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Skladuje xx při xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina se xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX se použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, by se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve sterilní xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx PCR (viz dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx PCR a xxxxx xx xxx xxxxx UM xxxx xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx pozitivní, jestliže xx zjištěn xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. V xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x interními xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže není xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Když xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta ve 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 hodinu x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX metodu opakovat, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx by měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x suchu xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dna vzduchotěsného xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) se xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechá xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x xxxxxx při xxxxxxx 45 °C v xxxxx.

5. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx vody s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx xx inkubovat xx vodní xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Sejmou se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne se xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

9. Xxxxxxx xx krátce ponoří xx UPW (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx prohlížejí xxx xxxxxxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) musí xxx zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. To může xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna sklíčka xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx krytu sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx xx pozadí x atypickou morfologií x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx test kromě xxxxx IF, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Při použití XXX XXXXX je xxxxxxxxx a použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků před xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx může xx xxxxxx setkat x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx určení xxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx jakou xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx otestován xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx použijí xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx ELISA (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx xxxxx jamky x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx x xxxxx x jamky se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat v xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx absorbance při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou jamek xx každé xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx jamky x xxxxx stát 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx třikrát dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Jamky se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx každé xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x pravidelných intervalech 90 minut.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativního kontrolního xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní hodnoty XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl inhibován. Xxxxxxxxx hodnoty ELISA x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přípravu xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx vzorku. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx lilek (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx citlivostí), ale xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční stříkačkou

Inokulují xx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx x xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk na 1 ml, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x karanténním zařízení 4 týdny při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx se zabránilo xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny z xxxxxxx vzorků po xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech se xxxxxx zvláštní pozornost xxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace na xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, provedou xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx na X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, jestliže xxxxxxxxx rostliny xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního pigmentu -

Xxxxxxx PHB +

Oxidačně xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% NaCl +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx k X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx pozitivní, jestliže xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 minuty. Vzorky xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (např. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx al. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx pozitivní, xxxxxxxx xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx tří disacharidů x tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxx der Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1 (biovary 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxx patogenity.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x vysoké relativní xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, kultura nemůže xxx považována jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x suspenduje v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné půdě (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x přidá xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Signa X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) může být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x temnu x musí se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx by xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx agarovou živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut a xxxxxxx se xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx sekce xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) jako pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx buněčná hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x pupkových xxxxx 200 xxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, o xxxxx se xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µl xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx sterilních xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x FISH testy xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky, zkontroluje xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 mM fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt obsahuje xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (PVP-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX na 9,8.

Xxxxxx xx do 1 x destilovanou vodou.

Přidá xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx sklíčku x xxxx xxxxxx x

x - plocha pole xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = koeficient xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = tubusový koeficient (1 nebo 1,25),

X = zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx (N).

N =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ buněk R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 20 sekund xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx AmpliTaq x xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 minut xxx 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX XXX XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX ACC TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund při 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx biovar X. solanacearum (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro obě xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx primerů Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx acc ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx při teplotě 4 °C do xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 nebo XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Solanum melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka dne: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx determinative, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 July 1998 xx xxx control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Roux, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division specific xxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx the identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Cook, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx tuber extracts. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x semi-selective xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx quantification of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. and Xx Xxxxx, X. 1990. Variation in xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Tanaka, M. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx colony xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, D.W., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx genomic xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Opina, N., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx for identifying Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. J. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, E. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx cham reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X ribosomal intergenic xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. and Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Food xxx Agricultural Immunology 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, A.C., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16S xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Xxxxxxx, E., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Springer (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.