Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 zákona x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x změně některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými rostlinami -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - brambor (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) kromě xxxxx x plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx byla xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx x k určení xxxxxx území, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x rozsahu podle §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje používané x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. a) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x porostech xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, pěstebního xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a v xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu odběru xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx o odebraných x testovaných vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a statistických xxxxx a biologie xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx produkce brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx zjištění a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x této xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx bude xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické osobě, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx na xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi, a xx v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx se x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního testování, x to způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x v souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx opatření založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx s cílem xxxxxx šíření předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx ostatních partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiného xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, sdělí Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx podezření x xxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx xxxxx x České republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování odebraných xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx přišly xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x místo xxxx místa produkce xxxxxx xxxx, kde xx xxxxx úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx byl vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx podle §6 x stanoví x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx xx zařízení xx zpracování x xxxxxx brambor x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v souladu x pozitivními výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx byly odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 písm. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx karanténního xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky v xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x vymezí karanténní xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), v každém xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx příbuzné partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x případě potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, rozšíří xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Opatření xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být sázena x xxx dohledem Xxxxxx xx x xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx v xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxx splněny xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Ústav xxxxxx ověří, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx není xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx buď zničí xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx metod uvedených x příloze č. 6 s xxx, že po xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx a předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx a bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 písm. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx zóně sděluje Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx a Komisi xxxxx x registračním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 xxxx. 4 písm. x) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená podle xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření při xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x výrobě předstupňů x reprezentativní xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech partií xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x množení x následujícím roce, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích hlíz xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, jak je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx IF test xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách bramboru xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogenu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx diagnostickém xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x typickými příznaky xxxxxxxxxx suspenzí na xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, které rostou xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx přerůst nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, další xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou izolaci Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx nepodaří, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx používá x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx selektivního obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx a x případě potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - viz oddíl 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx další test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 8.

(5) XX test xx xxxxxx v xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé identifikace xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx kontrole na xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx odlišné od xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx často xxxx chlorotické, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy a xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x mohou xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem svazků xxxxxxx, xxxx dochází x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx vnitřních xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx vede k xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Níže xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se omyjí. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xx provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nožem či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx odstraní slupka xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Na minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zpracovány do 24 hodin nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx dají stranou x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx pokojové teplotě x xxxxxxxxxx se x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno použití, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků a xxxx saprofytů v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µm), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µl xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Extrakty xx během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx sklíčka xx XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odstraní xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx přímo nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x uzavřené sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují jedním x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo po xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx podle popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx se udržuje xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá polovina xx xxxxxxxx s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x jeho xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě pozitivního xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kmenu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx ředěni (WD) x blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 až - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Pro xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do zbývajících xxxxxx v řadě. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro druhý xxxxxx podle obrázku 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx roztoku xx xxxx okének. Xxxxxx řadu lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x IF xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x IF pufru. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud nejsou x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x tato xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx v pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, kterým xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx a xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do každého xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX testu

4.4.1. Testovací xxxxxxx se prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC pod xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx při zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru protilátky xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx kmenem ve xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x pupkové xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx morfologií x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx na 1 xx resuspendované pelety x vzorek se xxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxx se FISH xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě připravenými xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďujte xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX a 50 µx 96 % etanolu. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx odstředěním, xxxxx xx stejné množství 0,01 X PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx skladovat, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx dobře pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx sklíčka xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx místo xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM CaCl₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx na 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do předehřáté xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx z nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx se krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x kádince s 1x hybmixem při xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující a xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo málo xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích sklíček (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. To xx xxxx stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx u XX testu.

5.3.5. X xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx typických xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení diagnózy xxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, aby xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx vzorku,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxx xx do xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx o xxxxxxx 95 °C na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a inkubuje xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx sníží x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xx ledu po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g po xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety etanol.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx vac.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl sterilní xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx použije 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx se xxxxx použít, pokud xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx směs PCR x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při počátečním xxxxxxxxx a provede xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx DNA x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V na xx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 minut, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX prosvícením po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx zjištěn v xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx být amplifikován x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je pozitivní, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx inhibici PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly negativní. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x jedné xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x pěstování xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx ve xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx a 15 xx délky). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx místě gumovým xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx úhlopříčný xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx lístky x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx skalpelu se xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x xxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního napětí xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx dobu xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x optimální teplota xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xx skleníku nebo xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xx zajistí xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx musí být xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé pletivo xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx jasně xxxxx okraj. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx fázi xxx xxxxx a xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx listy nebo xxxx rostliny. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxx částí xxxxxxx zvadlých listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx inkubační doby xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx kultury xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx potvrzena pouze xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx xx izolovat x pletiv projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx části hlízy xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx hlíz xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx a z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx v testu XX/XXX xxxxxxxxx vzorků (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 cfu xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx selektivního média xx se xxxx xxxx použitím k xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µl alikvotní xxxxx ze vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx šťávy x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µl x každého xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) a techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x xxxxxxxxxxx miskami x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx měly pěstovat xx YGM médiu; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx na xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- kvasničný xxxxxx glukosový agar,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X subkultur xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx se zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21 °X x po xxxxx dnech xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx růstu, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx provádět xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx provádět x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Provede xx xX postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze buněk x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím bloku xxxx xxxxx vodní xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 minut. X xxxxxxx potřeby xx může lýza xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx použití.

c) Xxx amplifikaci Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (např. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x de Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x kol., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx kontroly. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx tyto bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Provede xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x kol., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx z 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx po 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX x suspenduje xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx s bílou xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, že xx prosta X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml s 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx protřepat. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx nekontaminované mikrozkumavky xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx alikvotní xxxxx x 100 µx xx sterilních mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX testy xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných tkání xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Tento xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x výkrojků x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x provede xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxx sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx mikroskopického sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco bakto xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x autoklávu xxx 115 °C po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx xxxxxx médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 měsíce. Xx xxxxxxx antibiotik je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X sulphate (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný PCR xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx ctt xxx xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx tga xxx xxx xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx xxx ctg xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x DNA X. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů ii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx optimalizován xxx xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji charakteristickou xxxxxxxxxxxxx délky fragmentu x enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro C. x. xxxxx. sepedonicus xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx xxx tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pH a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx až 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µl hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx amonného v 80 ml destilované xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 x

Xxxxx draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx xx v xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx se Lugolovým xxxxxxx roztokem a xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

8. Zalije xx safraninovým xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také použít xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 EN, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. EPPO Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx of xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, F., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx XX xxxxxx xxx the xxxxxxxxx of latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K x X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. A., X. Billing x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic spacer xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx differentiation xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 pp.

19. Schaad, X., Berthier-Schaad, Y., Xxxxxxx, A. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Skerman, V. X. D., 1967. X guide xx xxx identification of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. H. X. and X. X. Collins, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, B. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Janse, X. X. a X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup testování xx určen xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, ale xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu xx svazků xxxxxxx xxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx extraktů z xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx izolační test xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx provede pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Pozitivní xxxxxxxx alespoň xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x tomu, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé sérii xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Pokud jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Je-li xxxxx xxxx další xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx popsány v xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx stejného vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx provedena xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx je popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF xx xxxxxx v oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx xx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x noci dochází x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx láhvově xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, ze kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx propadlá xxxxx xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx může xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C nebo xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx S. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části stonku xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx stonku xxxxxxx svisle xx xxxx, a xx x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx test XX (xxx oddíl 6.1.5.), test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Připraví xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 il xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx virulentní izoláty X. solanacearum perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- U Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství hlíz xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx může xxx rovněž použit xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X po xxxx až 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx má xxx proveden test XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nože na xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx každé xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx pří vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Všechny naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 dnů při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx včetně xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky z xxxxxxx části xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky s xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) homogenizují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx se použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx zabránit xxxxxxx DNA na xxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích na xxxxx použití a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.1.3. Supernatant xx dekantuje. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné části x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx xx smíšené xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx stonků podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením x hlavním stonkem. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx x každého xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx xxxx rok x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Race 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% etanolem x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx drcením v xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uloží xx xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozdělí xx dva xxxxxx xxxx. Jeden xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x identifikace původce xxxxx hniloby xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx velká xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy po xxxxxxx vzorku sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx však xxxx x závislosti xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx obecně mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobně podstatně xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx výsledků. Vzhledem x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx si uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x období pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxx teplota xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x xxxxx xxxx xxxxx výše uvedených xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí vzorky xxx 10&xxxx;000 g xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx kapalina xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx velké objemy xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx po dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx pevného xxxxxx xxx zpracování xxxxxxx xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx infikovaných vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx sledování, xxx není xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx vzorek xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx zpracování xxxxxxx x kanalizace xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx se ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, zda se xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle níže xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx modři x xxxxxxx se inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 minutu při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Přebytečná voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx x přiloží se xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx na PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx buněk typická xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx všechna xxxxxxx 0,3% roztokem súdánské xxxxx X v 70% etanolu a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku x xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xx xylolu x vysají xx xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx a pracovat x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet nezbytná xxxxxxxxxxxx opatření a xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx tekoucí vodou x kohoutku, odsaje xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx zbarvení PHB xxxxxxx x xxxxxxx X. solanacearum s xxxxxx zbarvenými xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx z xxxxxx x příznaky xx xxxxxxx pozorovatelná pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx postup následující:

a) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky použitím xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně validovaná xxxxxxxxxx živná půda, xxxx. SMSA (xx xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx podezření na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Metoda je xxxx xxxxxxxxxx x xxx extrakty, které xxxx uchovány v xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 do -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx vzorek (vzorky).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx x po 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx krvavě červené xxxxxxxx xx xxxxxx x vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx malé, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., aby xx xxxxxxx izolované kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že nedošlo x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, jestliže xxxx izolovány podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx způsobem xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může být xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x obohacené kultury xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx může xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx extraktu xx vzorku xx 10 ml xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx být xxxxxx xxxxx podíl extraktu xx vzorku do xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx obohacené živné xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx s uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx test izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se určit xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx proveden na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Často to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při teplotě - 16 až 24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x xxxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Pro jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx pufru. Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (XX) protilátek x pufru IF. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Obrázek 2. Příprava sklíčka xx test podle xxxx. 6.1.5.1.ii) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit vzájemnou xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx přebytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x úvahu pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx test XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx se doporučuje xxx tehdy, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. solanacearum na 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx schválená činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění kontaminace xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterií x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla přidána X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx pokud možno xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované materiály x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro použití xx schválenými metodami XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Tris-HCI (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X na 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 mM TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx teplotě 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X po dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxx. při teplotě 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx převede xx nové Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx po dobu 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x po dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, zachová xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx XX a xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx extraktu DNA xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx použit xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se vhodný XXX marker, např. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x UV (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované produkty XXX o očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx zbývajícím vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x čase xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, ale xx xxxxxxx x xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních kontrol, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test FISH

Princip

Když xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace nebo XX xxxx. Když xx FISH xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 až - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (PB) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a rozpustí xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01M XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx vzorky na xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx nad xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x pokračovat x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx v držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Použije se 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Přiloží xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 okénka, x xx xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechá xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 5 hodin v xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix x 958 xx vody x molekulární kvalitou). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Sejmou se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Držák sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x celé xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány žádné xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, které nejsou xxxxx zbarveny nebo xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou v xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx buňky x xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx okénka xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx na pozadí x atypickou xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx méně xxxxxxx xxx u testu XX.

5. V úvahu xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx červeně fluoreskující xxxxx s velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx IF, XXX xxxx XXXX xxx xxxx relativně nízkou xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určení titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum a xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx x suspenze bakterií xxx vzájemného působeni x solném roztoku xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx vzorkových extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx na každé xxxxxxxx se použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí být xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny od xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx jako test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx ELISA (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4 minuty xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx boxu xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx vznik nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx do každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp nebo xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xxxx 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °C.

4) Xxxxxxxx xx vylijí x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Připraví se xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Připraví se xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx ze vzorku xx nejméně dvou xxxxx. Přidají se xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx stát 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x PBS. Přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 hodiny xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnota optické xxxxxxx (XX) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x jamek se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx testovaného vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty ELISA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx se kápne xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx příčný řez xxx 1 xx xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx nainokulujte 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí se xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x karanténním zařízení 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx se zabránilo xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Aby xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx oddělených místech xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx by xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx vzorky.

Hledají se xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx testovací rostliny, xxxxxxxxxx nad místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní rostliny xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny pro xxxxx provedený test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx PHB +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Média x xxxxxx viz Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx pozitivní, jestliže xxxx IF kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx jiný sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test ELISA xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Pastrik x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Weller xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx stejnou velikost x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x pozitivní kontroly xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx pozitivní, jestliže xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx pozitivní kontroly. Xxxxxx charakteristických mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX a absence 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. solanacearum xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx využití a/nebo xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově zelené xx žlutou x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx patří:

1. Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx lilku xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx inkubovat xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, bez xxxxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vadnutí xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx této xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx považována xxxx xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx suspense xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po inkubaci 48 až 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X se xxxxxxxxx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí se xxxxxx x sterilují x autoklávu při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Ochladí se xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx bude růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení koncentrace xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx konkurenčních bakterií xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx by xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Elphinstone xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx SMSA, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut a xxxxxxx se xx 50 °C. Přidá xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál bud' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x lze xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Ústřední vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené pelety xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických x XXX testů. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx biovaru 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ buňkami xx 1 ml x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x negativních kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx x 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX xxxxx xx provede xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX musí xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx zjištěn v xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou být xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Peletový pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx se xxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný pufr (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx a

s - plocha pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 minuty při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 20 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx gca xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx gtc xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx být xxxxxx použity xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) a xx).

2.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X po inkubační xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx a 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC XXX XXX T-3'

Přímý primer XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX XXX TTG XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA TCA XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Oligonukleotidové primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT CAC XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Protokol XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

b) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 g

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx xxx ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx se pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo NaOH. [XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx před xxxxxxx při teplotě 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx a autoklávovaný) 15 mM

Zředí se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx výpočtů v xxxxxxx 1. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Solanum melongena) xx pasterizovaného výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x semi-selective medium xxx xxx isolation xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Tn: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, L. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Pseudomonas solanacearum xx symptomless potato xxxxxx xxx some xxxx on xxx xxxxxxxxxxx and specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial diseases xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Delme et xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx PCR. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Hong, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx fatty-acid profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and the xxxxx disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Wolf, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Europe xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt disease: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Springer (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx using xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.