Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství stanoví xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Davis xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Solanum xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx bramboru, x xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost infekce xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx a původu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením z xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx považují xxxxxxx xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním množením x jediné rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx osiva,

2. rodičovskou xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx republiky x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx rostlin označené xxxx podezřelé x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx do třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx určené x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx potvrzení jeho xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x b), odstavci 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 písm. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie x xxxxx, původ, složení x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx ve výskytu xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Věstníku Xxxxxxxxxx kontrolního a xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx odkladu právnické xxxx fyzické xxxxx, xxxxx vlastní příslušnou xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx na trh xxxx ji pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx v rozsahu xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx jednou ročně xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, x xx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují vždy x xxxxxxxx předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx podezření z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby Ústav x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního testování, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx opatření založená xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx přesunu xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx ostatních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx.

(4) Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod původem x jiného xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx původ x České republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 3.

§5

Opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx xxxxxxxx, zásilku, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx jiné objekty xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x něhož xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx přišly do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a místo xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, zavlažování x zalévání xxxx xxxx pěstitelské vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx písmene x),

x) xxxxxx karanténní území xx základě označení xxxxxxxxxx předmětů nebo xxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx zařízení xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny z xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx v rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s cílem xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. a) xxxxx xxx sázena x pod xxxxxxxx Xxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo označené xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 písm. b), xx buď xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod uvedených x příloze č. 6 s xxx, xx po xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 a x případě xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, registrovaných podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 písm. x) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx jejich přechovávání x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx nebudou narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx riziko jejich xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx xx xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx xxx x xxxxxxxxx uplynulém sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím roce, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx nebyl x posledním uplynulém xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x České xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx diagramy popisují xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx se podílely xx optimalizaci a xxxxxxxx protokolů, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (TF nebo XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 odst. 1 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogenu z xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx příznaků xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém principu, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx použít x xx menší xxxxx, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx přesnost (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto může xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média a xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx během 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx nepodaří, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx použitých xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx MTNA nebo XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Typická morfologie xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo biotesty xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů pozitivní, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx a x případě potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx použitím xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx druhý xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx x oddílu 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x v xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se jedná x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx xx konci xxxxxx. Kromě xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx zamění x příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i xxxx infekci nadále xxxxxx, x když xxxx x infikovaných xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním vodivých xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Často xxxx listy x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence cévních xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy vystupují x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x mohou xx xxxxxxxx šířit xx xxxx prstenec. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx od xxxxxxx korové xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx se xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx době xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx případů, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx maskovat a xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx brambory xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx konce zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy po xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx hlízy s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx korkovatět po xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx bez xxxxxxx pufru, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot/min) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx rozdrcením v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xx nutno zamezit xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním při 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx pro xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx účely. Přidá xx sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xx xx xxxxx pozitivními kontrolami x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX testy a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odstraní xxxx x velikosti 1-2 cm xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx se zalijí xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxx xx části xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx má trvat 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °X x druhá polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek je xxxxxxxxx, je pro xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud xx xX test používán xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx se xxxx polyklonální protilátka. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx titr xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx měly mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 až - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným odstředěním xx xxxx 15 xxxxx xxx 7 000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud jsou xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx se xxxx xxxxx možnosti xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, nejlépe x 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Sklíčka xx test se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) resuspendované pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - pro větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx při pokojové xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °C), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx boxu xx xx xxxxx nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) a xxxxxxxxxxx titr (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx test x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x IF pufru. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx oddílu 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx v pufru XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka se xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou xx xxxxxxx a xxxx xx opláchnou a xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech a xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x morfologií x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk s xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx specifické pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx testovány s xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) z 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx přes xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx dobu 8 xxxxx na 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž se xxxxxxx 2 různé xxxxxx na jedno xxxxxxx, a to xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx xxxxxx množství 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx možnost xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Tris-HCI, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx skladovat, xxx měl xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx po dobu 1 minuty. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx alespoň 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X a do xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °C x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x 833 ml UPW). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx do XXX x položí xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. S xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx se buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší než x pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela zbarveny xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx u XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx typických buněk x 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx přidaných do xxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx dosažení maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx všech laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX test by xxxx provádět zkušení xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty ze xxxxxx by xxxx xxx pokud xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x komplexních substrátů xxxxxx jsou k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx pufru (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku lyzozymu (50 xx lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Easy DNAR xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se promíchá xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx chloroformu x xxxxx se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx fáze xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (-20 °C), krátce xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl sterilní xxxx (UPW) a xxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X až xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx použije 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX by xx xxxxx použít, xxxxx xx se prokázalo, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která byla xxxxxxx xx směsi XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx a provede xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium bromidu (0,5 mg na x) xx dobu 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (krátké xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn v xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x vzoru (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosáhnout xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx ze xxxxxx, které byly xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx postupy xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Každý xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx pěnového polystyrénu x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx a blok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem bloku.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký přibližně xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx špičky čepele xxxxxxxx a xxxxxx xx do xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx linky xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxx a xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x úhlu přibližně 5°), dlouhý 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx lilku den xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx inokulují těsně xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx to xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx při nedostatku xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné manipulaci xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx byly chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by mohl xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce kroužkovitosti xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat populace xxxxxx bakterií nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Patří x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. foveata, jakož x xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí lze xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx použití částí xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx xx test xX xxxx XXX xx šťávě x xxxxx x xxxxxxx xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx nejsou xx 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx by být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza může xxx potvrzena xxxxx xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx izolován a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x pelety xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění suspenze 106 cfu na xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx měla xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µx alikvotní xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x každého vzorku, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) a techniky xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x počítání všech xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií podobných Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx špendlíkové hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx bílé xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se zkouška xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx každý provedený xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Zjišťují xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx se měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx po xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx provádět x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx buněk x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx xxx teplotě 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (oddíl 5)

c) Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní kontroly.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Anteiso X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody jako Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter a Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje kolem 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx po 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx patogenní formu Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx na MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °C x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Quarantaine xx la Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Laboratory	Dublin	Irsko
Plantenziektenkundige Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro de Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX a FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. subsp. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Mikrozkumavky xx opatří štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM fosfátový xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx z výkrojků x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx pro XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha jednoho xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. sepedonicus

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = NDA)

Difco xxxxx xxxxx agar obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktem x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace 0,5 1 média x xxxxxxxxx při 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, amphotericin X 0,01 g.

V zásobě xx nechají roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Sigma) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se rozpustí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: nalidixic xxxx v 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X sulphate x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx ggt ctg xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq nebo Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx optimalizován xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. subsp. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bgl XX po inkubaci xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx tgc xxx -3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Ultra xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx nebo NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °X do dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx je ochraňovat xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx tloučku x xxxxx. Nasypou xx xx vody a xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx se xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx papírem.

6. Odbarvuje xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx safraninovým xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of bacteria xxxx plants. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative bacteria. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx for the xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x semi-selective medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, K x X. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx primers xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their relationship xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx B1O-PCR xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Collins, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx van Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. a X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x rRNA-targeted probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx vody a xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových diagramech. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Ralstonia solanacearum) xxxx bramboru a xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx výtok xxxxx xx svazků cévních xxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx vodě nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx živných půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, ale doporučuje xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), z xxxxx každý je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x tomu, xxx xxx vzorek považován xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx k xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku nezbytný xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx vzorcích rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku provedení xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Jsou-li druhý xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Spolehlivé identifikace xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se jedná x X. solanacearum, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxxxx x xxxx dochází x xxxxxxxx. V xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx konce x xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x odumření xx xxxx rozšířit xx parenchymatického pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx který xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se během xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx kroucení listů xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Při xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx rostliny bramboru xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako u xxxxxxxx rajčete. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx má stonky x xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném řezu xxxxxx xxxxx stonku xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx cévních svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x buňkách R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx modří X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Jiné testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence hlízy xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX fosfátového pufru (dodatek 4) x nechá xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx živné půdě xxxxxxxxx virulentní izoláty X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx i xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření před xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx při teplotě 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš zeminy xxxx xxxxxxxx xx xxx proveden xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nože xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx každé xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx pří vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx nejméně 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Všechny xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx části se xxxxx xx nepoužitých xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Není-li to xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx zamezit xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx nutno zabránit xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx zkumavek xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °C a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx resuspenduje x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx se uchovávají xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx nezbytně nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx a popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz oddíl 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx o počtu xx 200 stonkových xxxxx. Provádí-li se xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx odebere 1 xx dlouhý xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx celý xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx spp. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Silene xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x příznaky xx xx stranou xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x třepou xx rotační třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uloží se xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x druhý díl xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů jsou x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx velká saprofytická xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx může být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx liší x závislosti na xxxxxxxxx. Citlivost testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx obecně mnohem xxxx v xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx v xxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce x odpadní vodě xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx pravděpodobně podstatně xxxxx. X tohoto xxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, kdy teplota xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x různé době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx odebírají x xxxxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na každé 3 xx vodního xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx hnědé xxxxxxx x půdě

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test je xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx po dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx sestavování xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx v xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x její xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx této metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Před testováním xx xxxxx vzorek xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x popis xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx dodatku.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, zda xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx YPGA xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x známém XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx obarví buď xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se barvící xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx se zakápne 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx octové a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

f) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx se xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% roztokem xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx voda xxxxx papírem x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxxxx x xxxxxx x příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx postup následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx objeví aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný test x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (ve xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx antagonistické bakterie. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxx očekávat, že xxxxxxxxx detekce touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná i xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx vzorek (vzorky).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky se xxxxxxx inkubovat při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx zkontroluje xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x po 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx tomto médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace podezřelých xxxxxx (viz xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, jestliže po 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx selektivní média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup lze xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx způsobem dojde x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. Z tohoto xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX se xxxxxxx 100 ul xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx baněk. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx podíl extraktu xx vzorku xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 hodin při xxxxxxx 27 až 30 °X v xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x důvodu vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního screeningového xxxxx se doporučuje xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek IF xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový test xxxxxx test xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použit xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx by měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, zvláště xxxxx j xxxx xxxxxx fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 B, a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při teplotě - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Použijí se xxxxxxxxxxxxx sklíčka s xxxx okénky, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x testování jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx je množství xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének v xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx vhodné xxx xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxx po xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý papír. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx na každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se ponořením xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x následně x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 ul 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se testovací xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx ve dvou xxxxxxxx kolmých průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně fluoreskující x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Buňky s xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X peletách x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí stonku xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx testování není xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx tehdy, je-li xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum na 1 xx přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, zvolí xx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx extrakce DNA x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx PCR použít xxxx XXX extrahovanou x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx použití PCR xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x xxxxxxxxx xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymových xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do termobloku xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx xx 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx roztoku Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx nezačne být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx odstřeďuje xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °C.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx se xx xxxx xx xxxx 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 20 minut při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, zachová se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě - 20 °X xx xx použití xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx supernatantu obsahujícího XXX xx použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, by se xxxxx použít, pokud xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné ředění xxxxxx extraktu XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx týž xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX x každého xxxxxx x 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX marker, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX obarvením x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x porovnává xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolními primery xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX specifický xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x žádného xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, jestliže xx xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °C xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (PB) ze 3-5 denní kultury. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Wullingse et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx peleta x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 PB (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx x sušičce xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx prachem x x xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °C po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x to xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx a nechá xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxxx xxx teplotě 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x vody x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 ml xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx dobu 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (např. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx se zakryje xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo buněk, xx pozoruje nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx a pelet xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx dojde x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x atypickou morfologií x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx FISH

i) Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx použití FITC xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx pozorovány ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií typickou xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx FISH pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx protilátek povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx jiných organismů xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx každou novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického kmene X. solanacearum a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx použity xxxxxxxxxx x pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxxx působeni x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx použijí xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx může x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx do xxxxx xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se vylije x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x jamky xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek xx každé xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 hodin při xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

5) Jamky xx třikrát dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx protimyšího imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx každé jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do každé xxxxx a xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxx (XX) z xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx menší xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (přípravu viz x dodatku 3).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé odrůdy xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi třech xxxxxxx listů x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Nebo se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx u lilku xxxx méně xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx stonky xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x podkožní jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží xxxx xxxxx prsty a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx děložními xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx příčný xxx xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx nainokulujte 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací rostliny xx xxxxxxx růst x karanténním xxxxxxxx 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Aby xx zabránilo kontaminaci, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech se xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx je udržovat xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx roztěry (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kultury x xxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx mohou xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx dvou následujících xxxxx založených na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx chybí x R. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Oxidačně xxxxxxxxxxx test O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x pufru IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Test IF xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx kromě této xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx test ELISA xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní vody (XXX = ultra xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx suspense x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 minuty. Vzorky xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx příslušné xxxxxxx XXX k amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (např. Xxxx xx al. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Opina xx xx. (1997), Weller xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky fragmentů xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2XX a 18:1 2XX a xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zahrnou případně xxxxx referenční kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Test xxx úspěšně provést xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x inkubací při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin xx xxxxxxx xxxxxx xx žlutou a xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx rozlišení dílčích xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x hustotě přibližně 10⁶ xxxxx na 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur k xxxxxxxxx a příslušný xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx až 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X xxxxxxx kultur by xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx této době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají se xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx se rozmělní x suspenduje v xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx při teplotě 28 °X se xxxxxxxxx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x přidá xx xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Sigma) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx bude xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 dny xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x musí xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx před použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx R. solanacearum xx médium (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 až 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut a xxxxxxx se xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx působení (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Národní sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní materiál

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 zdravých xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) jako pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx lyofilizací, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se x 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx odrůdy s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx sterilních xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. solanacearum x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX test xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH testy xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx používá x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx x koncentrovanou XXx xx upraví xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 ml

Smíchá xx a xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx pozorovacím poli (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx v okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx x xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CGT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx II po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx gtc xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x reakci	Konečná koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), iii) x xx).

2.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 bp a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AAC GAA XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA TCA XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací z XXX R. solanacearum xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX XXX GCA XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Restrikční xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Rs-1-R vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx tag xxx xxx acc ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx se pH xxxxxxxxxx proužkem x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního roztoku xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití xx xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for determinative, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/EC of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses a Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Englebrecht, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Wilt Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., Y. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Applied Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx colony xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Llop, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Cambra, M., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx and molecular xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Delme xx xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Louws, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Hayward, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx strain-specific DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, E. 2000. Detection of X. solanacearum in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx reaction. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Pastrik, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis and xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX amplification of 16X-23X ribosomal intergenic xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Applied xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx phylogenetic relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx based xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Prior, P., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, by xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.