Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx opatření, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx výskytu a xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx a

c) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely této xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených podmínkách,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen bramboru, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx nebo x určité partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx x původu xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k určení xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškerých jiných xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx anebo x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - partie hostitelské xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx považují klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x ní bezprostředně xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx rajčete určených x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx vodní zdroje xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) x porostů xxxx xx xxxxxxx, x případě uvedeném x odstavci 4 xxxx. a) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu dužninou xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx v odstavci 2 xxxx. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x),

x) laboratorním testováním xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, původ, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x souladu x §10 odst. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx ve výskytu xxxxx xx xxxx xxxxxx zavlečení původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx kontrolního a xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x této činnosti Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx odkladu právnické xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x provádění xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx jednou xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x případě xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. září, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x výsledcích xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti tohoto xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx se x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx těmito škodlivými xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x souladu x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx předejít xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x mimo xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x jiného xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x bude s xxxxx státem vhodným xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Pokud xxxx x podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx původ x Xxxxx republice xxxx xxxxx může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx testování odebraných xxxxxx způsobem stanoveným xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx trh x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx možná úplná xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx s ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx zamořeným předmětem xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování a xxxxxx brambor x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by při xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx zamoření,

b) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx podle písmene x) x bezpečnostní xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě odstavce 2 písm. x), x sdělí podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx zásady xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x partiím, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx v rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Podle xxxxxxxx testování podle xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx potřeby xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) x x).

§7

Opatření proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené v příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx použita pod xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x že xxxx splněny požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x xxxxx není xxxx partie xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 označena jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx buď zničí xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, že po xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx a předměty xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx x vědeckým, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu s §3 odst. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Testování xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx uplynulém sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx xxxx souvislost, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ v případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x posledním uplynulém xxxxxxxxxx roce potvrzen x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) pozitivní, existuje xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které rostou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx médiu. Proto xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x selektivní xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx je v xxxxxx 8.

(5) Pokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx být doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že čistá xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx není k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek považován xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx vždy použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, další xxxxxxxxxxxx protilátky umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx vhodná metoda xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX xxxxx nebo XXX-88 xxxxx a xxxxxx resuspendované pelety 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx provedena x rostlin xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo biotesty xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx odebráním vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx test pozitivní, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x oddílu 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx screeningových testů xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx kultur, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx jen zřídkakdy x xxxxx pak xx xx konci xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se zamění x příznaky jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku často xxxx chlorotické, žluté xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx listy x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx hmoty. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx a mohou xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx korové části. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx době xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x druhotnému poškození xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce může xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx na 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx vhodně xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených zjišťovacích xxxxx xx založená xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Ralstonia solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před přípravou xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je xx xxxxxx xxxxxx zeminy x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx PCR xxxx xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx omezí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x testují se xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx po xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X až xx ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých nádobách xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to není xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx způsobující kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx každý vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití x použití xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 1,5 xx peletového pufru (dodatek 3). Použije xx 500 µl pro xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xxx teplotě -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx platí x xxx xxxxxxx na XX testy x xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly by xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx předmětem vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx zpracují xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx při teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx zařízení. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx má trvat 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx polovina xx skladuje s 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X (měsíce), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Titr xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dochází k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx kroužkovitosti a xxx použití vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx xxxx 15 xxxxx při 7 000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud jsou xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx z brambor xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) by se xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx test xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx je xxxxxx 15 µx - pro větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx okének. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx nebo pomocí 95 % etanolu xxxx podle zvláštních xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx boxu po xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na test x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v IF xxxxx. X první xxxxx by měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx každém okénku xxxx být nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nejsou x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x tato xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Umyjí xx xxxxxxxxx po xxxx 5 minut x pufru IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x pečlivě odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka se xxxxxx na vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Kapky konjugátu xx setřesou ze xxxxxxx x xxxx xx opláchnou a xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx a přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx být při xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní u xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx bramborového extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µl fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx při teplotě 4 °C.

Alternativním fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx použití se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Promíchá xx protřepáním x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx roztok vzorku (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, odstraní se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 M XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají uschnout xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možnost xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx lyzozymu obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx dobře pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM CaCl₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Připraví xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx na 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx dobu 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x podložní xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx do XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx podobný) do xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí ihned x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx filtru pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je zbarvení xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx lepší xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Existuje několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx než x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR test xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX xxxx. Pokud xx XXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (u průběhu xxxxxxxx XXX x XXX) by se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx by xxx zahrnuty následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx prostředí xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx se promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx být stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx chloroformu x míchá se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °X), xxxxxx xx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx se nechá xxxxxxxx xx vzduchu xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Peleta xx resuspendujte x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xx použije 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx XXX barvením x ethidium xxxxxxx (0,5 mg na x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti x xxxxx (pokud xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním testu x xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxx s negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí falešně xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx jsou xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude pro xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je vhodný xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky a 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx mezi xxxxxx x blok xxxxxx proužek sterilní xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx mírně xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx špičky čepele xxxxxxxx a nanese xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx překryje xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxx a xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x úhlu xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem se xxxxx v místě xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x kde xx to xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) po dobu xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx vody nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx nedostatku xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx dnech xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx zprvu být xxxxxxxxxxx xxxx strakaté, xxx před znekrotizováním xxxxxxxx. Povadlá místa xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx období xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx přítomných v xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Patří k xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx listů a xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx se test xX xxxx XXX xx xxxxx z xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx identifikují x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx nejsou xx 4 týdnech pozorovány xxxxx příznaky, provede xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx vzorku xxxxx stonků o xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické bakterie, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx části xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx a x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx odděleně xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního média xx xx xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx testuje xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µl xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx vejcoplodého se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém pufru (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx je obvykle x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx XXX médiu; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx z následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- živný xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X subkultur xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx dnech xx xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x fyziologické xxxxx xx musí xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx musí xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx ureázy -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk/ml x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Provede xx xX postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx teplotě 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx xx může xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C xx do xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Pastrik x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx amplikony PCR xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx FAP (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

c) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx z 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx teplotě 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat typické xxxxxxx, avšak rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx infekce, xx se měly xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx po 3 týdnech příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných tvorby xxxxxxx/xx. Toho se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx x 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až xx xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH testy xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx použití xxx extrakci homogenizací

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Tento xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x mytí sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako krycí xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha jednoho xxxx na sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx resuspendované pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci X. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x provede xx xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco bakto xxxxx xxxx obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 X po dobu 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °X po xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx složky médií x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, pH xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx antibiotik je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X se přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontrolou (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg pa xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx tga xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx ggt xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx části xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx se podle xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento program xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků cyklů xx), iii), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky fragmentu x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx ctc tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX x x případě xxxxxxx xx upraví xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx přes membránový xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx před prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle výpočtů x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a sterilizuje xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve skleníku xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx destilované xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid draselný 2 g

Destilovaná voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx tloučku x xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody a xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, xxxxxx se xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx krystalové violeti x xxxxx se xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx tekoucí vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztokem x nechá se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx xxxxx a xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the detection xxx xxxxxxxxx xx xxx ring xxx xxxxxxxxx Corynebacterium sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. EPPO Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx light microscopy. X: Manual of xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific classification xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx whole xxxx fattyacid analysis. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. The interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, K x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, R. X., 1966. The xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. J. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Billing a X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. A. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. a X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. a X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on some Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic bacteria xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx potato xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Janse, X. X. x X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx vody x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx pracovat za xxxxxxxx karanténních podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování odpadů x za podmínek xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, existuje podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x musí xx pokračovat v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx určen xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu nebo xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Test FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx snadno izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx izolační xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx je popsán x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x případě izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není dostačující x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použit i xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku nezbytný xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx negativní, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx FISH je xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx stejného xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů založených xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li druhý xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x R. solanacearum, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, přičemž x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x objevují se xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx stává xxxxxxxxx x končí xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X rané xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xx infekce rozšíří xxx od pupkového xxxxx hlízy x x oček může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx který xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx propadlá místa xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx dolů x xxxxxxx xx jedné xxxxxx rostliny xxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx může xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, které xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Použije xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách X. xxxxxxxxxxxx jsou zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx súdánskou černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx nebo vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 il xxxxxxxx x roztoku na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami ve xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx krvavě červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx hniloby ve xxxxxxxx hlíz bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxx rovněž použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx až 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden xxxx XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx zjištěny příznaky xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx dojít ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx části xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx anebo utěsnitelné (x případě, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Není-li to xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců se xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a xxxxxx. Xxx testu XXX xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx v xxxxxx přístroji. U xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx vířením a xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx extraktu, zajistí xx přeprava x xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx stonků podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny z xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx země. X xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin rostoucích xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější v xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné zjistit xx celý xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Datura xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx díl stonku x xxxxxxxx xx xx stranou xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx se krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx části xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Není-li to xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx nejdéle na 72 hodin xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, které xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx rozdělí xx dva stejné xxxx. Xxxxx xxx xx testuje při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (v/v) sterilním xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Postupový xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Viz xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx patogenu jsou xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího testu XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vody. Xxxxxxxxx citlivost detekce xx však xxxx x závislosti xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx obecně xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, citlivost xxxxxxx x odpadní vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Omezení xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v úvahu xxx hodnocení spolehlivosti x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx vodě.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Opakované vzorkování x různé xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx toku xxxx xxxxx ke značnému xxxxxxx x tím x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odeberou xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx a 2 x xx břehu. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 g xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 minut), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µm) s xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx vody, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, ale xxxx být rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx tyto xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které se xxxxx vyskytovat v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx je xxxxx vzít x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx i při xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx řídit standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx sběrných xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx dodatku.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx ponoří xx zkumavky s xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx fixovaly.

4. Preparáty xx obarví buď xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se mikroskopické xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx se inkubovat 10 minut při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx teplotě.

d) Krátce xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 nm xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x až 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda xx xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx B v 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx v digestoři.

e) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx olejovou xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx zbarvení PHB xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do extraktů xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx by xxx xxxxxx otestován znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, že xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx bakterií byly xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx pro každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x pak xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě SMSA xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx x xx 3 xxxxx inkubace xx rozvine růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x vnitřními pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx tomto médiu xxxxx atypické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx v temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx R. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 ul xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °C x xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx ELISA nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx se vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx jakýmkoli odstřeďováním xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx R. solanacearum. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx pro každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx protilátky v xxxxxxxxxx ředěních blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx kmenem R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx xxxx xxxx být použita xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx odměřené standardní xxxxxxxx (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro každé xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx být použita xxxx rezervní xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx boxu xx xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx sklíčka na xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx na test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Obrázek 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx sklíček a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx ponořením xx dobu 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx IF. Xx xxxxx zabránit vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

4. Xxxxxxx xx umístí na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx být stejné xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka se xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1X fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x kolem obvodu. X vzorků x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině vykazují xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx test PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx tehdy, je-li xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX x XXX) xx xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, jestli xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (přípravu xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx z virulentního xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx enzymových reakcí x koncentrující cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx v dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze vzorku x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x teplotou 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Easy XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Easy DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x směs xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxx po xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 minut při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx překlápěním mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx resuspenduje v 100 µx sterilní XX x nechá xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě - 20 °X xx xx použití xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx supernatantu obsahujícího XXX xx použije xxx test XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX podle schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx extraktu XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR a xxxxx xx xxx xxxxx UM xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx a výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx získán x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX test. Xxxx xx FISH test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx by xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s čerstvě xxxxxxxxxxxx extrakty, ale xx možné xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno v dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační roztok (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx vzorkového extraktu xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a přidá xx xxxxxx množství 0,01 PB (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx nad plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx postup přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 okénka, x xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx vodní xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Sejmou se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne se xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx při teplotě 45°X.

8. Držák sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 minut.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x celé xxxxxxx se zakryje xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx prohlížejí xxx xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx buněčná morfologie x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx testovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx podezření xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx várce ukazují xxxxxxxxx buňky z xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx okénka sklíčka) xx xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x sebou nese xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, že u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx se saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X úvahu xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx pozorovány xx xxxxx pozitivních kontrolách x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx test kromě xxxxx IF, PCR xxxx FISH xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Při použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx zvýšit citlivost xxxxx, xxx může xx rovněž xxxxxx x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx vzorku.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx každou novou xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx protilátek podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity protilátky x pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. solanacearum negativní x suspenze xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X a X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx mikrotitrové destičce xxxxx odděleny od xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °X na 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx. Jamky xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx každé jamky x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx z xxxxx x xxxxx se xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx absorbance xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 hodin při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µx do xxxxx jamky a xxxxx stát 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx každé jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx z negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx se xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (např. kultivaru Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. listů až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx výrazné x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží mezi xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi děložními xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx nainokulujte 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml, připravenou xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx zabránilo vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx vody. Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorků po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, oddělí xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují se xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací rostliny xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou být x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx pozitivní, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Kovacse +

Redukce xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx při 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Média x xxxxxx viz Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx x této xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µl xxxxxxx suspense x xxxxxxxxxx zkumavkách v xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx vodní lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X do xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Weller xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx profil podezřelé xxxxxxx stejný jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje charakteristika xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je popsána x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací při xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů AFLP (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Cook xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S rDNA (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx patogenity.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x hustotě přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx až 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, bez xxxxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx půdy. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx během 14 xxx. Neobjeví-li xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx stonku xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx možno na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Živné xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x sterilují tlakem xxx teplotě 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 minut.

Ochladí se xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxx stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 U (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X takovém xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 dny xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x temnu x musí se xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Misky x xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx by měla xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx obohacené živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Elphinstone et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx dostupné x xxx xx xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx geneticky příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

b) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx na 1 xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) na SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se v 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx. Obvykle xx xx dosáhne xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, o xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce výše xxxxxxxx postupem a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx části x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Tento pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x pupkových xxxxx bramborových xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a sterilizuje x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx pro XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx používá k xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX xx 9,8.

Xxxxxx xx do 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx a xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (v rozmezí 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml resuspendované xxxxxx (N).

N =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX CGT AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx s enzymem Xxx II xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx ttc xxx xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace. Perkin Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 sekund xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Taq X po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 bp x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC AGT XXX XXX XXX XXX T-3'

Přímý primer XX-5-X: 5'-AAC TTA XXX GAA XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 30 sekund při 58 °C (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

3.4. Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX ACG GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

b) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X nemají žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Před xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx tag caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě potřeby xx xxxxxx pomocí XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný přes xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX POUŽÍVAT XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x sterilizuje autoklávováním xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Journal ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Cambra, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx restriction fragment xxxxxx polymorphisms with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx virulence and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx some xxxx on its xxxxxxxxxxx and specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of pathogenicity xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Klement Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx diseases xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Llop, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, N., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. J. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, E. 2000. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Blood Disease Xxxxxxxxx xx partial 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, A.C., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16S rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and quantitative xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.