Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx šíření Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jejich šíření x prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Pojmy

Pro xxxxx xxxx xxxxxxxx se rozumí:

a) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx bramboru, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x určení xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx anebo x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 odst. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx klonově příbuzné xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx partie, které xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním množením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, v případě xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx partie klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx nesadbových brambor xxxxxxx x České xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx v karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Zjišťování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu pěstování,

b) xxxxx zdroje používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), odstavci 3 x x xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, původ, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx při průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X průzkumu prováděnému xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, pověřenou x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx xx xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx v souladu x §10 xxxx. 5 zákona xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby mezi xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx těmito škodlivými xxxxxxxxx x v xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) pozitivní výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X případě xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx toto podezření xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx zahájí neodkladně xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx partií xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření pod xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zákazu přesunu xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx xxx přesunem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx xxx původem x jiného xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x přihlédnutím k xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, zásilku, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx přišly do xxxxx s uvedeným xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x místo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx možná xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, označeným xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování a xxxxxx brambor x x ohledem na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx vod x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x čeledi lilkovitých xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx zamoření,

b) xxxxxx x souladu x pozitivními výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. b), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx republiky v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. c), odstavce 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování klonově příbuzných xxxxxx hostitelských rostlin

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x partiím, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx v xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu možného xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření a xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), b) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této partie, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo označené xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), xx buď zničí xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx po xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x xxxxxxxx xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bodě 4 přílohy č. 4 a x případě výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř karanténního xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xx x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno s xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx v posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx potvrzené klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx ani původce xxxxx hniloby xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Účinnost

Tato vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx a podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx být proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 definován jako xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx diagnostickém xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx podařit. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Pokud xx izolační zkouška xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx z nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, v případě xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, ačkoli xxxxxx lze xxxxxx x xx menší xxxxx, jestliže 200 xxxx není k xxxxxxxxx.

(2) Metody extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx získat xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx mohou xxxxxxxx přerůst. Pokud xx kultivační metoda xxxxx nepodaří, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Biotest xx používá x xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x případě xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx popsán x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxxx test xxxxxxxxx, xx pro ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx druhý xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx test dalších xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v oddílu 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx pak xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx x zpočátku xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx x infikovaných xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x okolí cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na pupkovém xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x xxx sloupky xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx obsahuje miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x xxxxx xx postupně šířit xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx korové části. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx se x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx případů, kdy xxxxxxx xxxx hnije x prstencem svazků xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx vznikem vnitřních xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky řady xxxxxxxx jsou na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz na 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx výsledků. Postup xxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx chlóru, jestliže xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je obzvlášť xxxxxxxx x případě, xx je xx xxxxxx xxxxxx zeminy x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx brambory xx odstraní xxxxxx xx pupkovém konci xxxxx hlízy. Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx se x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx není xxxxx, uchovávají se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků a xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx se zpracují xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °C xxxx xx dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se homogenizují x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx jednorázovém maceračním xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má být xxxxxx XXX test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx použití x použití xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje se xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl pro xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx sterilní glycerol xx konečnou koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx vířením a xxxxx xxx teplotě -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x vzorky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx sklíčka na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x uzavřené sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx zařízení. Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx ji xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx skladuje x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X (měsíce), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx jako xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx citlivé.

Používají xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx ředěni (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může být xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných při - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového pufru (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud jsou xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x homologickým kmenem xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se použijí xxxxxxxxx části vzorkových xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Pro xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle obrázku 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx okének. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (T) a xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx inkubují na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx a xxxx xx pečlivě opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově reagující xxxxxxxxxxxx bakterie s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií v xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií se xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, kde je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx testování není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k dokončení xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx proveden x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl uchován x glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx ve vzorku.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx bramborového extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx se xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje se xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje obrázek 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °C xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním, přidá xx xxxxxx množství 0,01 X PB x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx den. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví xx xxxxxx lyzozymu obsahující 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx a nechat xxxxxx. Každý vzorek xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vody, xxxxx xxxxxx, a xxxxx filtračním papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 xX Tris-HCl, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx ve stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx na 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx po dobu 5 minut při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / sklíčcích xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka se xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx komory a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix a 833 xx XXX). Xxxxx z nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x podložní xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x mikroskopem vhodným xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. S xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a kolem xxxxxx. U xxxxxx, xxx nejsou pozorovány xxxxx nebo málo xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxx testovacích sklíček (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. To xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx u XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou velikostí x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx používá xxxxxx x xxxxxxx kontrolou.

Je xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test by xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx DNA a XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx popsané pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x jiných enzymatických xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX NaCl, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx vzorku x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx při teplotě 37 °X po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx při teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx se promíchá xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx se 500 µl xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx fáze do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se na 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní xx x xxxxxx etanol.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx při 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Skladuje xx při xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX se xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx se xxxxxx sterilní voda XXX, xxxxx byla xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx při počátečním xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované reakční xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker DNA, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 mg na x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, ale xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx interními xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (pokud xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lze dosáhnout xxxx xxxxxxxxxx testu x druhou xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx být vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají se xxxxx rostliny ve xxxx 2-3 listů xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx se zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude pro xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx polystyrénu x vyhloubenou xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx a 15 xx xxxxx). Xxx každý testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx a blok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx xxxxx fixovat xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem bloku.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx podélný xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Zářez xx xxxxxxx otevřený xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x řezem se xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx vnitřního xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx děložními lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx dobu xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx tak, xxx nedošlo x xxxxxxxx vody nebo xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °C x optimální teplota xx 21 °C. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují se xxxxxxxx pro pozitivní x xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených policích, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx zajistí xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx musí být xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx inkubovány blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by mohl xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx dnech se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx trvá xxxxxx xx objevení se xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Patří x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx listy xxxx xxxx rostliny. Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx částí xxxxxxx zvadlých listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx také připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx stát, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech pozorovány xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx stonků x xxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx organismem, je xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx části xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 cfu xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx měla xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx testuje xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx vzorku, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx všech xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx počítáním xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx měly pěstovat xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, tj. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 21-24 °X xx dobu maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx mají x xxxxxxx 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fenotypícké xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutriční x fyziologické testy xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Tvorba X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx slabá

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

d) Pozitivního xxxxxxxx lF testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xxxxx x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X po xxxx 4 minut. X případě xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C xx do použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Boer, 1995; Mills x xxx., 1997; Pastrik x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x UPW.

b) Xxxxxxx se postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx reakce xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxx. x rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx z 3-denních xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x přemokření xxxx vyschnutí. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx příznaky xxxxxxx, xx se měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx kultura xxxxxxxxxx xx patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace se xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2 cm nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Quarantaine xx la Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Toho se xxxxxxx xxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml.

Připraví xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, FISH x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx v xxxxx x negativních kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x mytí sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x S/s,

kde X = xxxxxx jednoho xxxx na sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. sepedonicus

1. Xxxxxx růstová média

Živný xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx dextrose agar = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí, xX xx xxxxxx na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x nalidixic acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx antibiotika: polymyxin X sulphate (Sigma) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% etanolu, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xx xx -3'

primer PSA-R 5'- tac xxx xxx xxx xxx xxx ccc c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx ata xxx xxx ctg xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx ggt xxx xxx acg ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost amplikonu x XXX X. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace primerů XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace DNA xx nutná nová xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 minuta při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů v) 30 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX X. x. subsp. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bgl XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctc tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc tcc xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX x x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití xx xxxxx je ochraňovat xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx do pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 ml 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky se xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx tloučku x xxxxx. Nasypou se xx xxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx violeti x xxxxx xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztokem x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Washington, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, X., 1953. The taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum xxxxxxx xxxxx whole xxxx fattyacid analysis. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for the xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K x D. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Billing x X. X. Hayward, 1966. X determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. W., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx potato tubers xx X1X-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X guide xx xxx identification xx xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, DE., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx van Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx some other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of potato, xx fluorescent in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x kontrolních materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní X. solanacearum jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x kalibraci zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i druhý xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití postupových xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx živné půdě x x případě xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx extraktů x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx izolační test xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, ale doporučuje xx xxx xxxxx xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx poznámka v xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek pouze x jednoho screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx pozitivní kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použit x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx být provedena xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, je xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX je popsán x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx provést test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje se xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány pozitivní xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx dochází x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x objevují se xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx k xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx se xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx je xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč u xxxxxxxxx konce x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx láhvově xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterého xx xxxxxxxx minutách xxxxx prýštit bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx může rozšířit xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx rozšíří xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx který xx xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx důsledek vnitřního xxxxxxx cévního xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx rozvoj měkkých xxxxxx bakteriálního a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx povadlý vzhled xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rostliny, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx než 21 °X) rostlina tolik xxxxxxx, xxx na xxxxxx se může xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu stonkem xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx má xxxxxx x kořeny ve xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx příčném řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x to x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního slizu x infikovaného xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx modří A xxxx súdánskou xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných ředění xxxxxxxx.

x) Přenese se 50-100 xx xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 dní při xxxxxxx 28°C.

- Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X po xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Použijí se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx na xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx vodivé pletivo. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří vyříznuti xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx se uchovávají x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx zpracovat xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx sterilované nože (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavek na xxxxx použití.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µl pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné části x ke zbývající xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx a xxxxx se při xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °C (měsíce). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx nebo skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx nad spojením x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx dlouhý xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx díl x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) nebo jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx hostitelské rostliny xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx oleracea. Některé xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. nutans., Tussilago xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx díl xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx zpracují xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží se xxxxx xxxxxx x xxxxxx nejdéle xx 72 xxxxx nebo xxx pokojové teplotě (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Jeden xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhý díl xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx IF (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx popsány x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x důvodu konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx velká saprofytická xxxxxxxx ovlivní spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy po xxxxxxx vzorku sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx liší x závislosti na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx populacemi konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx nichž xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení při xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx toku xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx se odeberou xxxxxx vody do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx a 2 x od xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li potřeba, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 minut), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, které xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx populace konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x popis xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Je-li xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx populace xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx tyto xxxxxx xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx zaručovaly detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx v xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx není xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx by se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx vzorek se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Před testováním xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx se xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví se xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx YPGA xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx sp.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx černí x xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx podle níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx modři x xxxxxxx xx inkubovat 10 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou vody x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 nm pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Zakápnou xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx B x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se ponoří xxxxxx do xxxxxx x vysají xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx inkubovat xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx v xxxxxxx X. solanacearum s xxxxxx zbarvenými stěnami xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x pletiv x příznaky xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Při xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx předběžný test x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx by být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná i xxx extrakty, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní kontroly xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x cílem zajistit, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx extraktu xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Typické kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx tomto xxxxx xxxxx atypické kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx malé, xxxxxxx, xxxxx červené a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodou zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., aby xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx sterilní vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx v temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, jestliže po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní média xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 ul xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx hlavní x xxxxxxxx IF xxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použit xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx lF nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx to nutné, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx uvedeno v dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °C) by xx mělo podle xxxxxxxx použít jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se sklíčka x testování xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x ředění 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx podle konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. První xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka na xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx odst. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.ii) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx uspořádají na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx se inkubují xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Tween (dodatek 4) x následně x xxxxx XX. Je xxxxx zabránit vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním mikroskopem x filtry vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx může stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou se x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x typickou xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný a xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx test XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx následující pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx PCR xxxxxx xxxx DNA extrahovanou x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do termobloku xxxx vodní xxxxx x teplotou 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. do ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx roztoku Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xx xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní se xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx supernatantu obsahujícího XXX xx použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX a xxxxx se xxx xxxxx UM xxxx xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx PCR místo xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX z xxxxxxx xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx x UV (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální teplotě x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx u zkoumaného xxxxxx zjištěn, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx amplikon XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech PCR x xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, jestliže není xxxxxx žádný xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx pokud xxxxx xxxxxxxx s čerstvě xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) ze 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v tomto xxxxx, je uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Wullingse xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje se xx xxxx 7 xxxxx na 7 000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta ve 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, a xx neředěný x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx nad plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx postup přerušit x pokračovat v xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Připraví se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dna vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx papírem nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µl hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) se nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 okénka, x to xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x hybmix x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx přemístí do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx krátce ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx Q xxxxx) x xxxxxx na xxxxxxxxx papír. Odstraní xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx se zakryje xxxxxx krycím sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X filtrem vhodným xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx zbarvení odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx obvodu. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna sklíčka xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx morfologií x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx berou pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx titru xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovním xxxxxx, xxxxx je blízké xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx protilátek xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx vzájemného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx použijí jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí na 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a nechá xx inkubovat 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Jamky se xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µl xx xxxxx jamky x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx při 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx dvou jamek xx xxxxx destičce. Xxxxx xx inkubovat 16 hodin při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnota optické xxxxxxx (OH) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx z negativních xxxxxxxxxx extraktů.

Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty OH x jamek xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx vychází z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx listů x xxxxxxx vzorku. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Nebo se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx plného rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx rostlin xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx děložními xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx příčný xxx xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx nainokulujte 5 sazenic vodní xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx, připravenou xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx nechají růst x xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx relativní xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny z xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, oddělí xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx zvláštní pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z infikovaných xxxxxxx se provede xxxxxxx (odst. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou infikovány xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, jestliže xxxxxxxxx rostliny jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx se následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak chybí x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Klement xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx při 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx být uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX k amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Opina xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx pozitivní, xxxxxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx xxxxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří disacharidů x tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx žlutou x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX a XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 a 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx patogenity.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 ml ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx až 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x vysoké relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx vadnutí mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx z rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se rozmělní x suspenduje v xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx možno xx xxxxxxxxxx živné půdě (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx výskyt typických xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °C x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx reagenci může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. V takovém xxxxxxx bude růst X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx to xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx a skladují xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx před použitím xxxxxxx povrchové kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone et xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Všechny xxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx x lze xx xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Národní sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx sekce xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní materiál

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX testů. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx hustotě 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, o xxxxx xx ví, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxx se desetinásobné xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní negativní xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx xx provede xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

NaCI 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Pufry pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx okénky x

x - xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = zvětšení objektivu (100 x, 40 x atd.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování by xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX AGC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX GCT XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-ggg xxx xxx aca xxx xxx xxx xx -3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) a xx).

2.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. solanacearum XXX xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 bp a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x interní kontrolou (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer RS-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TTG XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX ATG CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA GAC X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

b) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx pro obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití jiných xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx gcc tcc xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá se 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx proužkem a x případě xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx a skladuje xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 ng/µl

Připraví se xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného výsevního xxxxxxxxx. Sazeničky s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx by xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of whole xxxxx xxx determinative, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Communities L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, J.L., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Monoclonal Antibody xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Englebrecht, X.X. (1994) Modification of x semi-selective xxxxxx xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. and Xx Xxxxx, X. 1990. Variation in xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX technique. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X detection xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx and specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx and molecular xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Delme xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, R. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. X. Mol. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, P., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for identification xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, and the xxxxx disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.