Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 zákona x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči a x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, která xx uplatňují xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální hnědé xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro účely této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x přirozených podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx potměchuť (Solanum xxxxxxxxx L.) a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx infekce x k xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx se vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, skladu xxxx jejich části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx partie; xxxxxx se xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx ze stejné xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx x České xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx a všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném podle §5 odst. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx určených x dalšímu pěstování,

b) xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx včetně doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby navíc xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx vodní xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební substrát x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. a) x b), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx skládek, x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v porostech xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx rostlin s xxxxxxxx napadení původcem xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu odběru xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx zavlečení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx odebrané anebo xxxxxxxxx xxxxxx, pověřenou x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 zákona xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x produkci předchozího xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Opatření při xxxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx se v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního testování, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx x cílem xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx a v xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx i xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx o podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, které xxxx xxx původ x České republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření xxx potvrzení xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx pěstování, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx jiné objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx xxx vzorek xxxxxxx, a xxxxx xxxx místa produkce xxxxxx xxxx, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a prvotního xxxxxx nákazy v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, zavlažování x zalévání nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene a),

c) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě označení xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v souladu x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx ze xxxxxxxx xx zpracování a xxxxxx xxxxxxx x x ohledem na xxxxxxxxxxx rostliny z xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by při xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx rozsah xxxxxxxx,

x) xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx vodu, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a jeho xxxxxxx rozšíření podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi v xxxxxxx s ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx původem z Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx odstavců 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x vymezí karanténní xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x) a xxx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx v xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x případě potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx zamoření x xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) x x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona nařídí xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x pokud není xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty xx zamořené ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených podle §5 odst. 1 xxxx. c), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x případě výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx zóně sděluje Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby je x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx povoluje Ústav xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx s §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx prostým xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x výrobě předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx žádná klonová xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, které xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeningových xxxxx provedených na xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx xxx proveden xxxxx screeningový test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx bramboru a x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx komplikovaná, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační zkouška xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx být izolace xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé sérii xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použít x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx xxxxx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná metoda xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx získat během 3-10 dní po xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx patogena lze xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního obohacení x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne použitím xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxxx xxxx pozitivní, xx pro ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddílu 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Kultivace nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky skryté xxxx xx xxxxxx x příznaky xxxxxx xxxxxx, stáří nebo xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Mladé infikované xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, i xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, žluté xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, listy a xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx pouze menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X postupem infekce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část se xxxx oddělit xx xxxxxxx korové části. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx době xx x Evropě objevilo xxxxxxx případů, kdy xxxxxxx xxxx hnije x prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx se vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je xx xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Na minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x uchovávají xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °C až xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, xx jsou xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx okamžitě, xxxxx xx není xxxxx, uchovávají se x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě nižší xxx 24 °X xxxx xx dobu 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx zamezit xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx x xxxxxxx xx jedno použití x použití xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx supernatant, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µx xxx xxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -16 až -24°C (xxxxx) nebo při xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí i xxx sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus se xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx o velikosti 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx zpracují jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, se xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx při teplotě -68 až -86 °X (měsíce), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx používán xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně citlivé.

Používají xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx použití vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během testu xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx ředěni (XX) x blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového pufru (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7 000 x a xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx části vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Sklíčka xx xxxx xx xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Pro xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x řadě. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx okének. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx při teplotě 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), x ostatních xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx titr (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx všech podložních xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Umyjí xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxxx a tato xx opláchnou a xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X fosfátového pufru x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně fluoreskující xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku se xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících buněk x atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x typickou velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní u xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na potenciálně xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve vzorku.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx se fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx použití xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním a xxxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx dobu 8 xxxxx xx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µx 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají uschnout xx vzduchu (nebo xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví xx xxxxxx lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx lyzozymu (Xxxxx L-6876) x 10 ml pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx měl xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx dobře pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) s 45 µx na 1 xxxxxxx a předinkubuje xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx water = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a podložní xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží se xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx části bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem méně xxxxx než x XX testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx velikostí x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které obsahují xxxx než 5 x 10³ typických xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test proveden XX test. Pokud xx XXX xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, je xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další testování xxxxx postupového diagramu.

Využití xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového testu xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR činidla x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx extraktu xx xxxxxx a xxxxxx xx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °C na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x inkubuje xx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx při teplotě 65 °C xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy DNAR xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx chloroformu x xxxxx se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 minut.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx stát nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx při teplotě -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx použije 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx extraktu XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxxxxx sterilní voda XXX, která xxxx xxxxxxx xx směsi XXX namísto vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který byl xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx nejméně 12 µx amplifikované reakční xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Použije se xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg na x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se zdokumentuje.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, pokud xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxx, xxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 ml xxxxxxx x extraktům xx xxxxxx, které byly xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku a xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx použít i xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 až -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx lilku jednou x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se horizontálně xxxxxxx (pro xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx x vyhloubenou částí x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx xxxx tři čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží otevřený xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx něj xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý list xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (xxxxxxx) se xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku vejcoplodého xx inokulují těsně xxx děložními lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a kde xx xx xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx v karanténě xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx zajistí xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx manipulaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, aby xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx veškerým hmyzem, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Povadlá místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; čím xxxx xxxx období xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve fázi xxx listů x xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x pletiv xxxxx. Patří x xxx Xxxxxxx carotovora xxxxx. carotovora x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se test xX xxxx XXX xx šťávě x xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní infekce xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx nejsou po 4 týdnech pozorovány xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných nad xxxxxx inokulace. Pokud xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se identifikují x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx ho xxxxxxxx x pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx části hlízy xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx se provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo částí xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx vyloučilo nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx měla xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x peletovém pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- kvasničný xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx okraji x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se zkouška xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Identifikace

Čisté kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx použití nejméně xxxx následujících testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx se měla xxxxxxxxx xxx 21 °X a po xxxxx xxxxx xx xxxx být vyhodnocena. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x fyziologické xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x kultur z xxxxxxx dextrózového agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Tvorba indolu -

Xxxxxxxxx citrátu -

Hydrolýza xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x ohřívacím xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx xxx teplotě 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného NaOH xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °C xx xx použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, pokud xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se postup XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx reakce xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

c) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, pokud je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně svědčí x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Clavibacter xxx. x rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Xxxx patogenity

Pro xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx teplotě 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se měly xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx patogenní formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx rozdrtí a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx po dobu. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Protection Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX x FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX x suspenduje xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx s bílou xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx se zpracují xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx protřepat. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené sterilizované xxxxx xxx skladovat xx dobu až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx používá pro xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x pupkových částí xxxxxxxxxxxx hlíz poté, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se používá x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (c).

2. Vypočítá xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických fluoreskujících xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = C x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový agar (Xxxxxxxx dextrose agar = NDA)

Difco bakto xxxxx xxxx obsahující 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, pH xx upraví xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 g.

V xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví se xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx ctt xxx xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx tga xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx ggt ctg xxx tgc -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx ggt tca xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x XXX C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (sada NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx nebo Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx použiti extrakce xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 cyklus: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (prodlužování xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx optimalizován xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii), iv), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx upraví pomocí XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx podle xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená množství xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx nebo elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 x

Xxxxx draselný 2 g

Destilovaná voda 300 xx

Xxxxx látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší se xx xxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx omyje xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší se xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxxxx za jemného xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx také xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2. Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx diseased potato xxxxxx. EPPO Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Leifson, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx oxidative metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx oxidase xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, X x D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x X. X. Hayward, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant pathogenic xxxxxxxxxxxx J. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Selection xx Polymerase Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX intergenic spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with coamplification xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, C. X., 1959. Comparative xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 pp.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, DE., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; van Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. D. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx různé postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx se podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění úrovní X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup testování xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy usnadňují xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx ve vodě xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx negativní, xxxx xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx provede pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx screeningových testů (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x tomu, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní kontroly x každé sérii xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx použit x xx menší počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx nebo xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní izolace xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx izolační xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx podezřelých na X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Provede xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx v oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem x vrcholu rostliny xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x xxxx dochází x zotavení. X xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx listy zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx do xxxx xx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč u xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx infekce xxxxx podle láhvově xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx minutách xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx hlízy a x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx který se xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx cévního pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx je obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx viditelným příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení listů xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx rostliny xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx a S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx půdy nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxx rajčete. Nevadnoucí xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle do xxxx, a xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx dostačující. Použije xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx modří X xxxx súdánskou xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx suspenze x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA nebo XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx selektivní médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx virulentní izoláty X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx SMSA jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx zcela temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx solanacearum

Testy potvrzující xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány v xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx je xxxxxxxx xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X po xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xx uchovávají xx dobu xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě, aby xxxxx dojít ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxx do nepoužitých xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x vzorky X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx detekci a xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze vhodně xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx rostliny uříznutý xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx díl x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx vodou nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx pro každou xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx díl xxxxxx x příznaky xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx drcením x xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx to xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx rozdělí xx xxx stejné xxxx. Xxxxx díl xx testuje při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (měsíce) pro xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Postupový xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx nebrání izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx velká xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx vody x xxxxxx může být xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, kterých xx obecně xxxxxx xxxx v odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxx xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, citlivost xxxxxxx x xxxxxxx vodě xx zpracování brambor x xxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx hodnocení spolehlivosti x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, že xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx si xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x období xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx toku může xxxxx xx značnému xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx odebírají x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se odeberou xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní vody. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx místo, x xxxxx každý xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po dobu 15 minut), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, xxxxx xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový diagram x popis xxxxx x příslušných xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x tomto xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, ale xxxx být xxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx pevného odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx vody. Je xxxx nutné poznamenat, xx tyto xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx infikovaných vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx v xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x její sledování, xxx xxxx infikována, xxx x při xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx xx se xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °C. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx rozptýlí rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx dodatku.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury na xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Roztěry xx nechají uschnout x spodní xxxxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx modří nebo xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx zakápnou 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx inkubovat 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou vody x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx se xxxxxxxxx 600x až 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také se xxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx světle, xxx xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% roztokem súdánské xxxxx B x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx roztok a xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx a xxxxxx se přebytečná xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx x vysají se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Pozoruje xx, xxx se x pozitivních vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx antagonistické bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 do -86 °C.

Pozitivní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µl extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx zkontroluje xxxxxx xxxx a xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x po 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x vnitřními xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx nebo jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx krátkodobě xx sterilní xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, jestliže po 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou nalezeny xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx R. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum však xxxx být neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může xxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx do 10 ml xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx podíl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxx (xxxx. 100 xx v 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx s uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před zahájením xxxxx XXXXX nebo XXX xx obsah xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použit jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx lF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x resuspenzí ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x xxxx xxxxxx fixovány na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x homologickým xxxxxx nebo jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx kontrola na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, které lze xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Druhá xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx duplikát nebo xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje obr. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu v xxxxxx boxu po xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx by měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx uspořádají xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx testovací okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx xxxxxx osušením.

4. Sklíčka xx umístí xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx opláchne x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF testu

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x kolem obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně fluoreskující x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace výsledků xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Výsledek IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x celém xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx maximální citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx pufru používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx PCR xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx brambor.

Standardizované materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx použít xxx xxxxx test, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se provede xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X na 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení xxxx x vytvoření mezifáze xx xxxx odstřeďuje xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. při teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx se xx xxxx xx dobu 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx se xxxxxx x pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x nechá xx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě - 20 °X xx do xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR v xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx PCR (viz dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx XXX x xxxxx se týž xxxxx XX jako xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza produktu XXX

1. Amplikony se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx s 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (w/v) agarózového xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX obarvením v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální teplotě x čase xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn u xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, jestliže je xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX test. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu.

Poznámka:

Používají xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx pokud možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °C nebo - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) ze 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx extraktu, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, je xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x Wullingse xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx dobu 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx neředěný a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být uložen xxx teplotě - 20 °X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 PB (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx přerušit x pokračovat v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx prachem a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx se buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx při teplotě 45 °C po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x to xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxx x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix a 958 ml vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx se inkubovat xx xxxxx lázni x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx v kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx Q xxxxx) x xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná vlhkost xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx olejovou imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které nejsou xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Při podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx v xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka sklíčka) xx krytu sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke křížové xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. X úvahu xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x morfologií typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx zvýšit citlivost xxxxx, ale xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx vzorku.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. solanacearum a xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx použity protilátky x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. solanacearum negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx pufru (PBS) xx xxxxxxx jako xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X a X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x PBS X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx lázni nebo xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx vylijí x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx nechá v xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx a xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x xxxxx se xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Xxxxx xx inkubovat x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v uhličitanovém xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Přidají xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek xx každé xxxxxxxx. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx jamky a xxxxx xxxx 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µl xx xxxxx jamky x xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx xx xxxxxxx x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se substrátem) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx růstových podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx extrakty, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23X). Vzorek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi děložními xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se nainokulujte 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx relativní xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx se xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny z xxxxxxx vzorků po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, protože by xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede se xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, provedou xx xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu jsou xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx rostlin xxxxx izolovány x xxxxxxxxx kontrolní rostliny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxxxxxx testovacích rostlin.

Biotest xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs přítomny xxxx naopak chybí x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx pozitivní, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx jiný xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Pastrik x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, jestliže xx profil podezřelé xxxxxxx stejný jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum tvoří xxxxxxx lišící se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Živná xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx se mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx žlutou x xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx dílčích xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím primerů XXX, XXX a XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz dodatek 6) lze použít x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 a 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S rDNA (Xxxxxxx et al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx patogenity)

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test patogenity.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x příslušný xxxx pozitivní kontroly X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx vadnutí xxxx xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx této xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx živné půdě (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx výskyt typických xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné půdy

Živná xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Agar #1. V takovém xxxxxxx bude xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx může xx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X. solanacearum xx mohou tvořit x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x skladují xxx teplotě 4 °X v xxxxx x musí xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Misky x xxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x xxx je xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných bakteriálních xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může být xxxxxxxx pouze x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené pelety xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami xx 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx dosáhne jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx konců 200 xxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx slupkou, x xxxxx xx xx, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x dalších xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, co byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx xxx IF (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček na XX testy x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, je možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 ml xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx s xxxx okénky x

x - xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = koeficient xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 minuty při 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 sekund xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx BRL. Poznámka: Původně optimalizovaná xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx AmpliTaq x xxxx mohou být xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X. Restrikční fragmenty xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC AGA XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX GAA TTG XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx syntéza)

vi) nechá xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací z XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro biovar X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX specifický pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl optimalizován xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-ggc xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx proužkem x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 nebo OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI JEDOVATÝ, XXXXX POUŽÍVAT XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Pěstování xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx semena xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) se xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx skleníku za xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 hodin nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx the xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Journal ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Characteristics of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. and Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x PCR technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X detection xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx colony appearance xx x tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Klement Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Stephens, C.T. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, N., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx species xxx strain-specific XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, J.G. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, A., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas sy xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Analysiss xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx based xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, R. 1998. Genetic diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.