Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx výskytu a xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx a

c) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Pojmy

Pro xxxxx xxxx xxxxxxxx se rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. původce kroužkovitosti - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx rostliny x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - brambor (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) kromě xxxxx x plodů, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx a původu xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x určení xxxxxxx xxxxxx infekce x k určení xxxxxx území, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Ústavem, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, které xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x České xxxxxxxxx x xxxxxxx podle §8 xxxx. 2,

b) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx xxxxxx x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. a) x b), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, v případech xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxxxx uvedených v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) a v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x způsob předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx x statistických xxxxx a biologie xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 5 zákona xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, a xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. září, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Opatření při zjištění xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X případě podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto podezření xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona xx účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona

a) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx opatření založená xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxx předejít xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x mimo xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, sdělí Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx příslušného členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude s xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx původ x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a ke xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, sklady nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x pozemek, na xxxxx byly zamořené xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, pěstování, zavlažování x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným předmětem xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ohledem na xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx zařízení xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx při xxxxxxxxxxx, zalévání nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx rozsah xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě odstavce 2 xxxx. x), x sdělí podrobnosti x xxxxxxxx karanténního xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx odstavce 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x souladu x xxxxxxxxxxx odstavců 1 x 2 xxxxxx zamořené předměty x objekty, stanoví xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. b) a xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x objekty xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x souladu x §11 odst. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx s xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx neexistuje rozpoznatelné xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx x bodě 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx a předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 písm. c), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi xxxxx s registračním xxxxxx dotčených xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx x souladu x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx nebudou narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu s §3 odst. 8 x 9, a xxxxxxx prostým xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech partií xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dnem jejího xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x vyhlášce č. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx xxxxxxxxx IF test xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx médiu x x případě xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- FISH xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx izolace patogena x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx xxxxxx podařit. Saprofytické xxxxxxxx, které xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v oddílu 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx být doplněn xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek pouze xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použít x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx se validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX xxxxx nebo XXX-88 média x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx vyčistit a xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje optimální xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) IF test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx popsán v xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx na xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x zpočátku xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, i když xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx chlorotické, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx pouze menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx hmoty. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx se vyskytovat xxx xxxxxx pupkové xxxxx x mohou xx xxxxxxxx šířit xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx se x Evropě objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce může xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být xxxxxxx, xx-xx nemožné, rozlišit xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava vzorků

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx výsledků. Postup xxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt lze xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx PCR xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí čistého x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Opatrně xx vyříznou konické xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x pupkových konců xxxxxxx. Na minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva nezahrnující xxxxx svazky. Po xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x testují se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 xxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxxxxx se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °C až xx xxxxxxxx všech xxxxx. Všechny hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx se shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx jsou xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx není xxxxx, uchovávají se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot/min) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx použita xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x sáčcích xx jedno použití x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje se xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µx pro xxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx zbývající xxxxx vzorku, promíchá xx vířením x xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Pokud xx xxxxx transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, xxxxx xx předmětem vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx odstraní xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx x shromažďují x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Části stonků xx zpracují jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx maximálně 24 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 minut, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Jestliže xx test XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na titru. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x jiným xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6 xx je xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nebo zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx po xx možná nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X první xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x IF pufru. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx všech podložních xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx x tato xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. U xxxxxx x žádnými xxxx malým počtem xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx fluoreskující xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem ve xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru a xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopickém poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, které obsahují xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx xx FISH xxxx provede xxxx xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 denní kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx dobu 8 xxxxx na 7 000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a rozpustí xx xxxxxx x 500 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X PB x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 s použitím 10 µx (v 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x v xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl by xx xxxxx jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky se xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx na 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, aby xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx komory a xxxxxxxxxxx se 14 - 18 h x peci při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 ml UPW). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka se xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, které xxxxxx zcela zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx FISH testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového testu xx xxxxxxxxxx jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx DNA x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx a XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, připraví xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx pufru (100 xX NaCl, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1 xx x 10 mM Xxxx HCl, xX 8,0) x inkubuje xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx poteče do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx dobu 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese se xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx xxxxxxxx třepáním x inkubuje se xx xxxx po xxxx 10 minut.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x po xxxx 20 minut xxx 4 °X x odstraní xx x xxxxxx etanol.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x promíchá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µl sterilní xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X až xx xxxxxxxxxx při XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xx použije 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden desetinný xxxxxx vzorku XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované reakční xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx bromidu (0,5 mg na x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x vhodným restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v agarózovém xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx získán xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x jedné xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx použít x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test.

Pro xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého listu. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro květináče x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx a 15 xx délky). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx mezi xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx gumovým xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx mezi děložními xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx linky nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx mezi všechny xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx lístky a xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x xxxx xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx v místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní jehlou (xx xxxx než 23 G). Peleta xx rozdělí mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a kde xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx vody nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x optimální xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx veškerým hmyzem, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx vzorku na xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx dnech xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu být xxxxxxxxxxx xxxx strakaté, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou mívají xxxxx mastně vodnatý xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx období xx objevení xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné používat xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce xxxx xx. Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Erwinia carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem kroužkovitosti, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx listy nebo xxxx rostliny. Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena izolace xx xxxxxxx částí xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se test xX xxxx XXX xx xxxxx z xxxxx a xxxxxxx xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx také připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává v xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx i po xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 cm x každé testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus

Diagnóza může xxx potvrzena xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické bakterie, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx a x xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx v testu XX/XXX složených vzorků (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx vejcoplodého se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x kontrolními xxxxxxx x počítání všech xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx provádějí xx xxxxx xxxxx, s xxxxxx počítáním xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, než xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx rozetřou xx xxxxx x následujících xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. X subkultur xx xxxxxxxx růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx tekuté, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční a xxxxxxxxxxx identifikační testy

Zjišťují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx dnech xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo k xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Aktivita xxxxxxxx +

Redukce nitrátů -

Xxxxxxxx ureázy -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx indolu -

Xxxxxxxxx citrátu -

Hydrolýza xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% NaCI -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx kyseliny z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Připraví se xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml ve xxxxxxxx vodě (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx buněk x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxx lýza xxxxx podpořit přidáním xxxxxxx připraveného XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Mills a xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x UPW.

b) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 hodin xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně svědčí x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X je xxx tyto bakterie xxxxxxxxx kyselina, která xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx postupem xxxxx Xxxxx x kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Připraví xx inokulum přibližně 10⁶ buněk xx xx x 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplynutí xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx pro růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx xx MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového xxxxx xxx získání hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx dosáhne prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, xx xx prosta X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx první rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované mikrozkumavky xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Mikrozkumavky xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x XXXX xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX musí xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx v žádné x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se používá x extrakci xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, pH 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 ml

Destilovaná voda 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Vypočítá xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x jednom pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx xxxx xx sklíčku x více jamkami x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx pro izolaci x xxxxxxxxx C. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový agar (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) glukóza (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx upraví xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx rozpustí,upraví xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X sulphate x destilované vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx xxx gtt xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x DNA X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX pufr (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx objem	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq nebo Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

vi) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx viii) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být nutná xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx z DNA X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava nanášecího xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX x x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT MĚŘIČ xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je ochraňovat xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 dní) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx se x xxxxxxxx nádobě do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, vysuší xx xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx tekoucí vodou.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx se xxxxxxx xx dobu jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx vodou x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Corynebacterium sepedonicum xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, F., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X determinative xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx plant pathogenic xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Skapt. xx Burkh.) in xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Russell, X., W. a X., W. Xxxxx, 1997. Specific detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx their relationship xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X guide to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility between xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Wullings, B. X.; xxx Beuningen, X. X.; Janse, X. D. a X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx causes xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx různé postupy, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx bramboru x bakteriálního vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx) detekce Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru, rostlin xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x jiných hostitelských xxxxxxx, a ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx a podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx určen pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx živné xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve vodě xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Test FISH xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen je xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx při pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx živných půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není dostačující x xxxx, xxx xxx vzorek považován xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použit x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx se nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx selektivní izolace xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx testy založené xx různých biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, vyžaduje se xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx listů xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý a xxxxxx bakteriální sliz xxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konce x xxxxxxx přes pupkový xxxxx. X xxxx xxxx se infekce xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx minutách xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx stává výrazněji xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce rozšíří xxx xx pupkového xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx důsledek vnitřního xxxxxxx cévního pletiva. X pokročilejších fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Za xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (teplota půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) se během xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rostliny, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) rostlina tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx dokladem odumírání xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Příznaky u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx jsou u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx rajčete). Při xxxxxxx jsou příznaky xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, mohou vykazovat xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí stonku xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x infikovaného xxxxxxx xx mikroskopickém sklíčku xxxxxxx xxxxx A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx jsou test XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx desetinásobných ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 il suspenze x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. SMSA, viz dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx misky s xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) inkubuje xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°C.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Identifikační testy Xxxxxxxxx solanacearum

Testy potvrzující xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx výkladu výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx je založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Použijí se xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx každé hlízy, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se vyříznou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Množství pletiva xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx na xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx uchovávají x chladu (4-10 °X) xx řádných xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx včetně hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx zpracovat xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Zalijí xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx x rotační třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) homogenizují xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx vakuovou filtrací (40-100 µx), xxxxx xx omyje přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 minut (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °C x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by se xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (viz oddíl 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li se xxxxxxx, xxx xx xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné populace.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx rostliny uříznutý xxxx xxx spojením x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin rostoucích xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. nigrum, Datura xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx mohou hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odděleně (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx části xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x třepou xx rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, xxxxx se xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx provést xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se rozdělí xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx díl xx skladuje v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Postupový diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., kde xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je popsána x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, opakují se xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může být xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Citlivost xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ buněk/litr povrchové xxxx, citlivost xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Z tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího schématu xx mělo xxx xxxxx x úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu v xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x období xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx toku může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx odebírají x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx a 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní vody. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx každé 3 km xxxxxxx xxxx a vzorkují xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx se přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta v 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µm) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x vzorků xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx použitelné pro xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx být xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx omezenou citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x její sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx xx xx xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx sběrných míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a kanalizace xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx objem testovaného xxxx. Před xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx kalu xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx dodatku.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx právě nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx x spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx zakápnou 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx je zdraví xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx zakápnou 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 vteřin inkubovat xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx v xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně dostupného xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Pozoruje xx, zda xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije xxxx xxxxxx xxxxxx, provede xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná půda, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx extraktu xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x pak xx provádí xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx a po 3 dnech inkubace xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx malé, xxxxxxx, xxxxx červené a xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají krátkodobě xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx v temnu xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) a test xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx typické kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které bývají xxxxx současně také xxxxxxxxx. Z xxxxxx xxxxxx může být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx přenese 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. U xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xx obsah xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se doporučuje xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních blízkých xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx na vzorcích xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15minutovým odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx to xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx j jsou xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při teplotě - 16 až 24 °C) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx kontrola na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka s xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl je xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx okének v xxxx. Druhá xxxx xxxx xxx použita xxxx duplikát xxxx xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), plamenem, 95 % etanolem xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx měla xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíře xxxxxxxx po xxxx 30 minut při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x pufru XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx papír. Testovací xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °X).

6. Setřesou xx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxx jako xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF testu

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Zkoumají se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně fluoreskující x zcela xxxxxxxx x určeném xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx screeningový xxxx a výsledek xx pozitivní, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx se xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. solanacearum x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní části xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x virulentního xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, které xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by měly xxx pokud xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (viz dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x xxxxxxxxx xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx schválenými metodami XXX uvedenými v dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x mikrozkumavka se xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X po dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxx. při teplotě 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx na xxxx xx dobu 10 min.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 minut xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a promíchá xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx - 20 °C xx do použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, pokud xx se xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx extraktu XXX (1:10 ve sterilní xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx týž xxxxx UM jako xxx xxx, který xxx použit xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx nejméně 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx charakteristický xxxx restrikčních fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx zjištěn x xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx předpokladu, xx není xxxxxxxxxxxx x žádného vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán z xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX test x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s čerstvě xxxxxxxxxxxx extrakty, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx provést s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 ml R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Wullingse xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x odstřeďuje se xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx se xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx dobu 1 xxxxxx. Osuší se xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) se nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 okénka, x to xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx proběhnout proces xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx vody x xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Držák sklíček xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem obvodu. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx testovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou fluorescenci, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx sklíčka xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu XXXX x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x bramborových xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x atypickou morfologií x ke křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. V xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx pozitivních kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH testu xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx FISH xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx testu ELISA xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx může xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx každou novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x solném roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx byly předtím xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 A a X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x PBS X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx provede týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx ELISA (Robinson Xxxxx et xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví se xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Připraví xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Přidá xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z jamek x jamky xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx inkubovat x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a odečítá xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx ze vzorku xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx při 405 xx se odečítá x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx ELISA

Test XXXXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx se stejnými xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x negativního kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x jsou větší xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx nebyl xxxxxxxx správně xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x negativních kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a v xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx citlivostí), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx plného rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky rostlin xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx se kápne xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx xxxx děložními xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx kapky resuspendované xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx nainokulujte 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Oddělí se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, xxx xx zabránilo vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x karanténním zařízení 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx nebo jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx rostliny z xxxxxxx xxxxxx xx xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, provedou xx xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením na X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx R. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Lelliott x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Test XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx z této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x hodnotou z xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (např. Xxxx xx xx. (1993); Pastrik x Xxxxx (2000); Pastrik xx al. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Test FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x pozitivní kontroly xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test FAP xx pozitivní, xxxxxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím jedné x následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxx xxx disacharidů x tří hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do živné xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx primerů XXX, XXX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Konfirmační test (xxxx patogenity)

Jako závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx ze 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx půdy. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx vadnutí xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Neobjeví-li xx xx této době xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Provede se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx rozmělní x suspenduje v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx výskyt typických xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují tlakem xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx SMSA (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx získala stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X takovém xxxxxxx xxxx růst X. solanacearum xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx a rozptýlenější xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx obohacené živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx xx na 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně dostupné x xxx je xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx SMT sérologicky xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx kultura virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx půdě a xxxxxxxxxx se x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx hustotě 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x pupkových xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx pelety. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v dalších xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx alikvotní části x 100 N1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 až - 24 °X xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx používá x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX testy k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Xxxxx xxx účely nepřímého xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je možné xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx se xxxxxx xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Vypočítá xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer Xx-1: 5'-agt cga xxx xxx gcg xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx aca xxx gtc xxx xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx směs PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x polymerasou Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx MJ Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční fragmenty xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 bp.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA TCA XXX XXX XXX XXX TGC CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 718 xx (xxxx primerů RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx při teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX R. solanacearum xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx biovar X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX GAA GCA XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX TCG CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx pro xxx xxxxxx specifické xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx jednotlivých kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx acc ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx tcc xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a skladuje xx chráněný před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 nebo XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného výsevního xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 dní) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Communities L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx detection of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. and Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx ofYseudomonas solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas solanacearum xx symptomless potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Delme et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas pathovars xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx campestris xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Hayward, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Holloway, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. J. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum in xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX amplification xx 16X-23X ribosomal xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, and the xxxxx xxxxxxx bacterium xx banana based xx 16X rRNA xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, E., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Applied xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Janse xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.