EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/56/ES

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 93/85/XXX xx dne 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx organismů xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx., původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata v členských xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx organismu, aby xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx výskytu x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx jeho eradikace.

(4)	Xx xx doby xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx praktické zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx vývoje xx xxxx jako nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx o postupy xxxxxxxxxx a identifikace, jsou xxxxxxxxxxx xxx v poslední xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx vypracovány xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxxxx xxxxxxxx potvrzené xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, xxxxx xxxx xxx provedena x xxxxxxx produkce, která xxxx prohlášena za xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou v souladu xx stanoviskem Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx nahrazují xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx tuto směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx státům.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx a kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení kvality, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, jak xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (IF xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na infekci Xxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx xxxx považován xx infikovaný Cms.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy a rostliny xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogenu, a následně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2. VIZUÁLNÍ VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx se příznaky xx poli xxxxxx xxx zřídkakdy x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx jsou příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné od xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje listů. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní části xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx sklovitost xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx sloupky sýrové xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx v tomto xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx hnije x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky maskovat x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1&xxxx;xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx lze použít xxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx vyžadován) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx a jestliže xx xx xxxxxxxx XXX test xxxx xxxxx izolace.

3.1.1 Pomocí čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky podezření x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx být uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx hlíz s podezřelými xxxxxxxx) xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx možné, uchovávejte xx x&xxxx;xxxxxx bez xxxxxxx pufru, v chladu xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Schnutí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) nebo rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx existuje vysoké xxxxxxxxx křížové kontaminace xxxxxx. Xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby pro xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx čerstvě sterilizované xxxxx (nože) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx přenosu DNA xx nádoby nebo xxxxx zařízení. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx pomalým odstředěním (xxx maximálně 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx xxxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním xxx 7 000 g po dobu 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila peleta.

3.1.6 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx pro xxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je nutný xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxxxx xxxxxxxx v chladícím boxu xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, aby xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx XX xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 xx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx sterilní xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx části xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx částí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstředěním podle xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Jednu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx použít XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx vyšetřovací test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou může xxx další xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální protilátkou xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx monoklonální protilátky xx měly xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Během testu xx se měly xxxxxxxxxx používat x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx proveden na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xx xxxxx není xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx při teplotě –16 až –24 °C) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 okénky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx materiálu stejným xxxxxxxx jako test xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx vhodné 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2 Vysušte kapky xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx plamenem xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů protilátek.

V případě xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx roztoků protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxx být xxxx 1/2 (T/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Pracovní xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 písm. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx vlhký papír. Xxxxxxxxx okénka pokryjte xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7 Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx s žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24 xxxx –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly připravte xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 nebo XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve vzorku.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx a inkubujte xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μl 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (viz xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) může xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx stejné množství 0,01 M PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6 Nechte xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx postup přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx být skladována xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg xxxxxxxx (Sigma L-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx lyzozymu x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μg.ml–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, pH 7,4) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka uschnout xx vzduchu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační peci xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx alespoň 10 minut.

5.2.4 Připravte hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx na 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhké komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UPW), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x hybmix x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Předinkubujte každou x&xxxx;xxxx ve xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx v kádince s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx UPW x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1 Prohlížejte xxxxxxx ihned x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Použitím xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx lepší xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, neberte v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxxx. Xx se xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx okénka sklíček) xx povrchu sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru a částí xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Nutné xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány s negativním xxxxxxxxx. Pro dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. PCR xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a PCR) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by měl xxxxxxxxx následující negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x&xxxx;xxxx byl xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	pokud možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx než xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx být pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx cílové XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [xX 8,0]) do mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxxxx extrakt ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx mikrozkumavku xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1 ml v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl Easy XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut při 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx upotřebení při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Xxxxx Kit) xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, že xxxx při xxxxxxxxxx XXX z kontrolních vzorků xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi DNA x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) agarózového xxxx v Tris-acetát-EDTA (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 V na xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX barvením x&xxxx;xxxxxxxx bromidu (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx restrikčním xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx amplikon typický xxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Spolehlivého potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou XXX primerů (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx z pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX k inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx získán xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx l ml xxxxxxx k extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx použít x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst C. x. subsp. sepedonicus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx negativních výsledků xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx níže popsané xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx nezalévejte, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rostlinu xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx pravým xxxxxx xxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku inokulujte xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23 X). Vzorek xxxxxxxx mezi rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx vodní xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx sterilním xxxxxxxxx pufrem xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx vody nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a negativní xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx komoře xx jasně oddělených xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx být rostliny xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko sebe, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx před xxxxxxxx xxxxxx, protože xx mohl přenášet xxxxxxxx z jednoho xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Počítejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx působí u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx vyvinutí xxxxxxxx, xxx xxxxx xx naděje na xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx k nízkým xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx listů a nebo xxxxxx před ní.

Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Phoma xxxxxx var. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Erwinia xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx infekcí Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Jiné xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus, jelikož xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Můžete xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx k izolaci za xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxxx xxxx IF xxxx XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx (xxx oddíl 8). Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx optimální, xx xxxx stát, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla by xxx provedena izolace xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže testované xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, následně xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx organizmus, xx možno ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx izolace X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx použití selektivního xxxxx a vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx hlízy xxxx xx stonků rostliny.

Izolace xx provádí ze xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní výsledek x&xxxx;xxxxx IF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla by xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx připravte xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx na xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly naprosto xxxxxxxx od vzorků, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx by xx xxxx před xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho vhodnost xxx růst patogenu.

Testujte xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx na médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné bramborové xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx podmínkám Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx bakterie xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích, lze xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX médium xxxx NCP-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Petriho misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné velikosti xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxx s agarem xxxxxxx nástrojem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx postup xx xxxxx zopakujte x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx a počítání xxxxx xxxxxxx podobných X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo následnou xxxxxxxxxxxx by xx xxxx pěstovat xx XXX médiu; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx by se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx jsou média xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx po 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

8.2.2 Znovu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx mají v průměru 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury pravděpodobné xxxxxxxxx kultury X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomné xxxx xxxxxxxxxx v C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxx metod Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Xxxxxx (1987).

Veškerá xxxxx by se xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Pokud xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Testy	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx slabá
Tolerance 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– nebo xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxx, jestliže XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx dobu 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx čerstvě připraveného XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24 °C xx do použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx specific xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

d)	Identifikace X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX stejné xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °C (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx pozitivní, xxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Iso, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx pro xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx se hodnota xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx (Smith x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX PATOGENITY)

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx izolované látky x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus.

10.2 Naočkujte 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném světle x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx se po 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus.

10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx místem xxxxxxxxx. Rozdrťte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx dobu 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] na xxxxxxxxx xxxxx MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx v 10 xX xxxxxxxxxxx pufru, abyste xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 až 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx obvykle xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx slupkou, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, že xxxx napadena C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 10 ml.

Připravte 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx teplotě –16 až –24 °C xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx proveďte xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v nejméně 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol a nesmí xxx zjištěn x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx skladovat xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx protřepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, zkontrolujte xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx IF.

2.3 Fostátový xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx IF x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx na sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 5

Xxxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 min.

Živný dextrózový xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO4.H₂O	0,015 g
NaCl	0,05 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Baktoagar (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte 0,5 litru média x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
NaCl	0,05 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO₄. H₂O	0,015 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Agar (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx v zásobě xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 mg/ml) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média je 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Cycloheximide (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 M NaOH, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx v destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo vykazovat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx PSA-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx aa-3′
Primer XXX -X	5′- xxx xxx gat xxx xxx xxx ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx aca xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx NS-8-R	5′- xxx xxx ggt xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX = 377 xx (xxxx NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (frakce V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µM) (2)	0,1 µl	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx pro PCR

Postupujte xxxxx následujícího programu:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (denaturace XXX matrice)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (prodlužování xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 sekund xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (prodlužování kopie)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX amplifikované x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Fragmenty získané x&xxxx;xxxxxxxxx specifického pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	50 ml

2.2 Nakládací xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx voda (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Gold) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;6.1 písm. x) x&xxxx;6.2). Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX bude xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01:	5’- xxx xxx xxx gca cat xxx tgc xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx molekulárně xxxxx vody (xxxx. Xxxxx pure water = (XXX)) na xxxxxxx přibližně 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 přidáním 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxxx pH indikačním xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pomocí HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE MĚŘIČ XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X do xxxxxxx použití.

iv)	Poznámka: Alternativní fixační xxxxxx: 96&xxxx;% etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tris-HCl	60 mM (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl sulfát (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Pozn.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx lehké xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx chraňte před xxxxxx slunečním zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx sterilního xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24 °C,
	noc:	15 °C.

Vhodné xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpusťte 2 g krystalové xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx draselný	2 g
Destilovaná xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx a uložte.

Ředění: 1:10 xxx přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte na xxxxxxx a fixujte zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Lugolovým xxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte pomocí xx kapkách přidávaného 95&xxxx;% etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx a vysušte savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxx působit 10 s.

9.	Opláchněte xxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx plants. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx potato tubers. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1–10.

8.	Jansing, X. a K. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx oxidase xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10.	Klement Z.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Hayward, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Bact., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx region xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host DNA. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx xxxxx relationship xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx agric. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx BIO-PCR and xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Antonie xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx vyšetřovacím xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx potvrzeno nebo xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx a vhodným způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxx možno xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající výluh x&xxxx;xxxxxxxxx připravený materiál xxx vyšetřovací xxxx/x, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady,

dokud xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx ukončen.

Zadržení xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx v odstavci 1, a

—	vzorek xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) je xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

hlízy xxxx xxxxxxxx pěstované v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx v předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v takovém/vých xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx se xxxxx xxxx xxxxxxxx označené xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v první xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených v odrážkách xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, vozidlo, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, a jakékoli xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxx xxxxx xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx xxxxxxxx vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, které xxxx sesterský nebo xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx rostlinám, které xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx organismus mohl xxx negativní, xxxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobné xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx xxxx xxxxxxx xxx provést xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx pododstavci xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu xxxxxxxxxxxxx testy, xx xxxxxxx xxxxx stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx nebo do xxxxxx členského státu/jiných xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx oznámit xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx informace xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu xxxx xxxxxxx číslo rostlinolékařského xxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby, xxxx popřípadě xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele nebo xxxxxxxxxx a kopie dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx provedeného k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rozšíření xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx brambor xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která nebyla xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx nacházejí se x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx informace xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx vyžádá.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx kontrolovaná xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx s úředně xxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx opatření, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx zlikvidovat úředně xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx označených za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) a uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů dotyčných xxxxxxxxx států při xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx zpracovávat, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx jako konzumních xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, balených pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. S brambory určenými x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx použití xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a že xxxxxxx xxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx metody, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, která xxxx členské státy xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech produkce xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) buď

i)

—

během xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx plodiny, pro xxxxx hrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx dvou xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxxxx xxxxxxx a sklizené xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx označení zamoření

—	se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx a udržuje xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxx v průběhu alespoň xxxx po xxxx xxxxxxxx pěstitelských let xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx a sklizené xxxxx xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx odstraněno:

—

v pěstitelském xxxx xx xxxx označeném xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx planě rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xx smí xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx xxxx, xxxxx xxxx uvedena v bodu 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx dobu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx případně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx produkci xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx úplně xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx hlízy, xxxxxxxx ani xxxxx, xxxxx xxxxxx produkce xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx přinejmenším xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx brambor,

—	se xxxxxxxx xxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx nebo z minihlíz xx mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx po označení xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací prostory x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, xxxxx xxxx používány x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx bodu 3;

b)

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu nejméně xxx pěstitelských xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx kontrolu xxxxxxxx, xx kterých xx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy nebo xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx používanou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx porostů xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx xxxx použita xxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou, x&xxxx;xxx xx po xxxxxxx xxxxxxxxx brambory xx xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxx uvnitř xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx systému xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí xxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx náhradu všech xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX odstavce 1 musí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné riziko xxxxxx organismu:

i)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxx x xxxxxx xxx izolován xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Tekutý xxxxx: xxxx likvidací musí xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx na povrchu xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx xxxxxx likvidace xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. x).

Xxxxx xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X v jádře xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx před likvidací, xxxx

—	odstraněn xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx schválení x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx půdou. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxxxx členským státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.