EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

ze xxx 12. června 2006,

xxxxxx xx mění xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) o ochraně proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx organismů xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx v členských xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx výskytu a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx došlo x xxxxxxxxxx xxxxxxx v poznatcích x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx praktické xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx několika xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxx opatření.

(5)	V xxxxxxxx xxxxxx vývoje se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx jak v poslední xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx je fluorescenční xxxxxxxxxxx (FISH) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR), xxx i zlepšení různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx o technické prvky xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a ve xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx nahrazují xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx přijmou x xxxxxxxx nejpozději xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx směrnicí. Neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx státům.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Markos XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx různé postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu rostlin.

Testovací xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx vzorku, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován jako xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru vykazujících xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, a následně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2. VIZUÁLNÍ XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku omezené xx okraje xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx postižené xxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx listy x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx sklovitost xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit od xxxxxxx xxxxxx části. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné jsou x&xxxx;xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx vede x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup však xxx vhodně použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx vyžadován) pro xxxxxx v případě, že xx ve vzorku xxxxxx xxxxxx a jestliže xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx svazky omezte xx minimum (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx ukončení xxxxx testů. Všechny xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II.

3.1.2 Shromážděte výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x případě, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového konce xxxxxxxx, pokud to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx bez xxxxxxx pufru, v chladu xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx výkrojky xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250 mm; sterilovaný xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx použití xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Učiňte bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxx bylo xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (nože) a nádoby. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby xxxx xxxxx zařízení. Xxxxx xx být použit XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v sáčcích xx jedno použití x&xxxx;xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx pomalým odstředěním (xxx maximálně 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo vakuovou xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx omyjte přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, aniž by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1,5 ml peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx pro xxxx na C. x. subsp. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx testování xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx na IF xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění latentních xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx papírem.

Shromažďujte části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Pokud xx není možné, xxxxxxxxx části stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt na 2&xxxx;xxxxxx části. Jednu xxxxxxxx xxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s 10–25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX TEST

Princip

Doporučuje xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx prokázána jeho xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx jako xxxxxx vyšetřovací test XX test a jeho xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx vždy polyklonální xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx XX testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky xxxxx xxxxxxxxxxxx kmeni C. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pro každou xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Používejte validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx by xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx vzorku odstranit xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), opětovným xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx často xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x&xxxx;xxxxxxx podle xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx test xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx stejné množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek podle xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředění (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µl – xxx větší xxxxxx xxxxx zvyšte) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx použít jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek podle xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Fixujte xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) nad xxxxxxxx xxxxxx 95 % etanolu xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX testu:

i)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) a dvojnásobný xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx pracovní ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 3) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly způsobit xxxxxxxxx kontaminaci. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx stejné xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M fosfátového xxxxx s glycerolem (dodatek 3) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vhodnými xxx excitaci FITC xxx olejovou xxxx xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx počtem xxxxx zkoumejte nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2 Pozorujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx v úvahu.

Při podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (mimo xxxxxx sklíček) na xxxxxxx sklíček.

4.4.3 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx reagující saprofytické xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x&xxxx;xx povinné další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5&xxxx;× 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do extraktů xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými extrakty, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, který byl xxxxxxx testován na X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx je 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx rozpusťte peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μl 96 % xxxxxxx. Promíchejte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X po xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx xxxxx sklíčko, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx třeba XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 M PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	okénko 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6 Nechte xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx sušičkou sklíček xxx teplotě 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg xxxxxxxx (Sigma X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Tris-HCl, 50 xX EDTA, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx skladovat, ale xxx xx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu a inkubujte xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx xx demineralizované xxxx, pouze xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, pH 7,4) xx každé xxxxx a inkubujte při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx vzduchu v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x&xxxx;1x hybmixu (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X xx dobu alespoň 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx na xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx každé xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx při teplotě 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure xxxxx = XXX), 1 l 1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx každou x&xxxx;xxxx xx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v kádince x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák xxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx UPW a položte xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx buňky X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx být test xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů podstatných xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. m. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx v žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX test jako xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103&xxxx;xx 104 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx by měli xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx se xxxx xxxx zacházet jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PRC xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx přidán X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly v odděleném xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. do xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lyzozymu xx 1 ml x&xxxx;10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po dobu 30 minut.

6.	Přidejte 100 µl Xxxx DNA® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a vzorek začne xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx fázi do xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20 °C), xxxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx na ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx na vzduchu xxxx v DNA speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu v 100 µl xxxxxxxx vody (UPW) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20 °C až xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Plant Kit) xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx roztok xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx DNA xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx stejného termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) agarózového xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bromidu (0,5 mg xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx je negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s rostlinnými xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také opakováním xxxxx s druhou xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx získán xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103 xx 104 xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxxxx xxxx testovány s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, které byly xxxxxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx testované xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx rostliny xx fázi 2–3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx zajistili xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 dny xxxxxxxxxxx, xxx se snížilo xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, řez xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx xxx děložními xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 G). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní kontrolu xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx sterilním xxxxxxxxx pufrem stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vlhkosti (70–80&xxxx;%) a zalévejte je xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx růstové xxxxxx xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx zajistěte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxx rostliny xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx ke kontaminaci. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx i růstové komory xxxx chráněny před xxxxxxxx xxxxxx, protože xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx z jednoho vzorku xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Zvadlé xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají často xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx fázi xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jiných xxxxxxxx xxxx hub přítomných x&xxxx;xxxxxx z pletiv hlízy. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx a E. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx i populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx chrysanthemi. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx celé xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx XX xxxx XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx (xxx oddíl 8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, že X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxx infekce dokonce x&xxxx;xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou po 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a potvrďte xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx výsledků xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují typické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx předpokladu, že X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX C. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že je X. x. subsp. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (viz oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx náročný xxxxxxxxxx, xx xxxxx ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx stonku (oddíl 3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx izolace C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být možná xx použití selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx rostliny.

Izolace xx provádí xx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx xxxxx stonků x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u nichž xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, připravujte xxxxxxxxx kontroly naprosto xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx na médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xx xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx desetinásobné ředění x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx bakterie xx obvykle v infikovaných xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx vzorku, v ředění 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 médium (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Xxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx téhož xxxxxxxx xx xxxxxx misku x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, a tím xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx a počítání xxxxx kolonií podobných X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx po 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx XXX médiu; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx jsou xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx z kvasničného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21 °C–24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx klenuté xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

8.2.2 Znovu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx jsou smetanově xxxx nebo barvy xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, s rovnými okraji x&xxxx;xxxxxxx xxxx v průměru 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx kultury C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx testy

Zjistěte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomné xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Lelliotta x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Anonym (1987).

Veškerá xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx růstu, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx se známým xxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) testy	Inertní xxxx xxxxx oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx škrobu	– xxxx slabá
Tolerance 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx v pufru xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série dvojnásobného xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx XX xxxx kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml ve xxxxxxxx vodě (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx specific xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (např. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX stejné xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °C (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný postup XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx identický s profilem xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Iso, 16:0 x&xxxx;17:0 Anteiso xxxxx svědčí x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx. Jiné rody xxxx Curtobacterium, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx v UPW.

b)	Proveďte test xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX PATOGENITY)

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus musí xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24 °C xxx xxxxxxxxxxx světle x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx vadnutí, avšak xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale nepřesahujících 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2&xxxx;xx nad místem xxxxxxxxx. Xxxxxxxx a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx MTNA x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx dobu 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx typických pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Institute, Plant Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx vyšetření xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 nebo XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx pufru, abyste xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které xx jisté, xx xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinná xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5&xxxx;xx, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx proveďte xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx proveďte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX musí xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol a nesmí xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx sterilizované pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx až jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx následující složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx pufr xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se používá x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx krycí roztok xx okénka sklíček xx IF testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních buněk

1.	Vypočítejte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha jednoho xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx jamkami a
	s	=	plocha xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a
	F	=	zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient dextrose xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115 °C xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktem x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002&xxxx;x, amphotericin X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) v 96 % xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx antibiotika: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003 g, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované protokoly x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 ml vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx se xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx gat gtt xxx ctt ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx gca ggt xxx cct xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (xxxx NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (denaturace XXX xxxxxxx)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 64&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx modifikace kroků xxxxx ii), iii) xx), v), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po inkubaci xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx primerů NS-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx homogenizační metody x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním nebo xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- xxx cgg xxx gca xxx xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx eubakteriální sonda XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx molekulárně xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpustí xx xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tris-HCl	60 xX (xX 7,4)
XXXX (sterilizovaný xxxx filtr x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Během xxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Přepichujte xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx by se xxx pěstovat ve xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení v Huckerově xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx destilované vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	300 ml

Pevné xxxxx xxxxxxxx rozetřete xxxxxx tloučku x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx do xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte pod xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx safraninovým roztokem x&xxxx;xxxxxx působit 10 s.

9.	Opláchněte xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx of light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, R. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Klement X.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. A., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the fluorescent xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. et Xxxxx.) xx potato xxxxxx. XXXX Bull., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Mills, X., Xxxxxxx, B., W. x&xxxx;X., X. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853–861.

16.	Pastrik, K. -X. x&xxxx;X.X. Rainey. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis ssp. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. S., 1959. Comparative studies xx some Gram-positive xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx xxxxx relationship to xxx Corynebacteria. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx BIO-PCR xxx xx automated real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; St. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. B. X., 1967. A guide to xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Baltimore.

22.	Smith, X. X.; Hennesy, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Wullings, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx brown rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

PŘÍLOHA II

1.

Při každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx testech) xxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx součástí xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vyšetřovací xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné testování xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx a vhodným způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu lilku xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupu xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě produkce xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx užívají xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zařízení a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx v předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v takovém/vých místě/ech xxxxxxxx během xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambory z míst xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx zařízení, vozidlo, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx xx xxxxx s hlízami nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx nebo jsou x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a staveb,

—

v xxxxxxxx xxxxx uvedených v článku 6 hlízy xxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x), a u nichž se, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx organismus mohl xxx xxxxxxxxx, zamoření xxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ke klonové xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x produkce hlíz xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití zásob xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu xxxxxxxxxxxxx testy, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, alespoň:

—	název xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (konzumní, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxxx brambor z jiného xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx oznámit dotčenému xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx informace xxxxxxxx xx splnění xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu xxxx xxxxxxx číslo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx popřípadě registrační xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx zamoření,

—	stručný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx stupně xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx zamoření, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o vymezené oblasti, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx informace xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x ohniskem/y, xxxxx xx Komise xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx bylo prokázáno, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx hlíz nebo xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx mají xxxxx xxxx zpracovávat, s ohledem xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx v případě, xx xx tak děje xxxxxxxx nebo xx xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx dodání xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xx xxxxxxx schválení xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx xxxxxx, u kterých xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod kontrolou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, která xxxx členské xxxxx xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření,

—	se přijmou xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx hrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu;

—

v xxxxxx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole bylo xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx prostým xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují postupem xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, pokud xx mají xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xx xxxxxxxx použijí xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, a

—	pozemek xx xxxxxxx a udržuje ladem xxxx xxxx stálá xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě xxxxxxxx pěstitelských xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx nebo konzumní xxxxxxxx a sklizené xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx označeném xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx xxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx se smí xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx úředně xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru a které xx pěstují pod xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx, xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx sadbu xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx následujícího xx označení zamoření xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx z certifikovaných sadbových xxxxxxx, xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

c)

neprodleně xx xxxxxxxx zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) x&xxxx;xx xxxxxx následujícím xxxxxxxxxxxx roce se xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a dezinfikují xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx úplně xxxxxxxx xxxxxxxx substrát,

—

se xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo, xxxxx nebyla produkce xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a na odstranění xxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a dezinfekce xxxxxxxxx jednotky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx udělen xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx z certifikovaných sadbových xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx se veškeré xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx brambor, vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx podle potřeby x&xxxx;xxxxxx příslušných xxxxx xxxxx bodu 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx pěstitelských xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxxxx zařízení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jakož i prostory, xxxxx pronajímají xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx k produkci xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx porostů xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx xxxxxxxxx, a aby xx po sklizni xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx podle článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí xxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor xx přiměřenou dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx IV odstavce 1 musí xxxxxxxx následující ustanovení, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slupek) x xxxx xxxxx xxxxx související x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx místo x xxxxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Xxxxxx odpad: xxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na povrchu xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pevných částic. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být likvidovány xxxxx xxxx. x).

Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, nebo

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx podléhajícím xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx nehrozilo xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx mohl xxxxxx do xxxxx xx zemědělskou xxxxx. Xxxxxxxxxxx těchto opatření xx musí xxxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xx odpad xxxxxxx x xxxxxxxxxx, likvidací x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.