EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. června 2006,

kterou xx xxxx přílohy xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx o založení Evropského xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx dne 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. sepedonicus (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru (xxxx jen „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx ochranu xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx xx xxxxxxxxx jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx opatření xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	V xxxxxxxx xxxxxx vývoje se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx jak x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx je fluorescenční xxxxxxxxxxx (FISH) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx i zlepšení různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx o technické prvky xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx xx vypracovány xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a příslušné zamořené xxxxxxx, xxxxxxxx, která xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, a ve xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx odpovídajícími xxxxx v příloze této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx nejpozději xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxx xxxxxxxx a srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice vstupuje x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 12. xxxxxx 2006.

Za Komisi

Markos XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru;

ii)	zjištění Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (C. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, naznačuje pozitivní xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (IF nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx na xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 směrnice 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx z výskytu xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx test, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní výsledek x&xxxx;xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní kontroly x&xxxx;xxxxx sérii testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky xx poli zjistí xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx až xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx omezené xx okraje xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx v infikovaných místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle tvarované xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní části xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x&xxxx;xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx naleznete xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx systému, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx zbarvení než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a stav, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx vyskytovat xxx blízko pupkové xxxxx a mohou xx xxxxxxxx xxxxx na xxxx prstenec. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx oddělit xx xxxxxxx korové xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx hlízy praskliny, xxxxx s červenohnědými okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx k druhotnému poškození x&xxxx;xxxxxxx vnitřních dutin x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. Intenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx být proveden XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x&xxxx;xxxx prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy a jestliže xx xx provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx výkrojky vodivého xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx s podezřelými příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky podezření x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx této hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx teplotě a měly xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) by xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části do nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx výkrojky xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150 mm × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby xxx xxxxx vzorek bylo xxxxxxx xxxxxxx sterilizované xxxxx (nože) a nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx zařízení. Xxxxx xx být použit XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx pro xxxx xx X. x. subsp. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxxxxx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, aby xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx i pro xxxxxxx na XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx testy.

3.2 Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx založeny na xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx dezinfikovaného nože xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx ze xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx dezinfikujte xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx papírem.

Shromažďujte xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením částí x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher nebo Xxxxxxx) s přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx není možné, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxxxxxxxx 24 hodin při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx polovinu xxxxxxxxx s 10–25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx je nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx být prováděn xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Připravte oddělené xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxxxxxxx ve výluhu x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx paralelní kontrola xx stejném podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Používejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu stejným xxxxxxxx xxxx test xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředění (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) resuspendované xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) a dvojnásobný xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní sklíčka xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjte xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7 Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vhodnými xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx a částí xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

i)

Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx s typickou xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. kmen NCPPB 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (příprava viz xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx sklíčka s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází z Wullings x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx dobu 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx v 500 µl xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním fixačním xxxxxxxx je 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 M PB (viz xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x&xxxx;xx xxxxxxxx a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) může xxx uložen při xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. V případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	okénko 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, pH 8,0). Tento roztok xxx skladovat, ale xxx xx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo lyzozymu 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 v pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, pH 7,4) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;% etanolu xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx alespoň 10 minut.

5.2.4 Připravte xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xx xxxx 5 minut při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx vlhké komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix a 833 ml XXX). Xxxxxxxxxxxxx každou x&xxxx;xxxx xx vodní xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx sklíček.

5.2.9 Spláchněte xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince s 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx ihned s mikroskopem xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx mohou xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx, které byly xxxxxxx testovány s negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte validovaná XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (u průběhu xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PRC xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx přidán X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx na 1 ml X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx při provádění XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontroly v odděleném xxxxxxxxx než vzorky, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx být pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx mikrozkumavku xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7.	Přidejte 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží a směs xx xxxxx homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X pro oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1 ml 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C a odstraňte x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx při 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx) xx se mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx purifikaci XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované vzorky x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu DNA xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx použita xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Používejte xxxxxx xxxxxx DNA, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX barvením x&xxxx;xxxxxxxx bromidu (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s rostlinnými xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX test je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Spolehlivého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s interními xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištění 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na l ml xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (příprava viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx celý xxxxxx testované xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx pouze xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2 Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 dny xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx napětí xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rostlinu xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (přibližně 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2 Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, řez začněte xx xxxxxxxx kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

7.4 Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxx kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx možno x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně infikovaných xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx sterilním xxxxxxxxx xxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18–24 °C. Inkubujte xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx je xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Buňky X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx být rostliny xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx chráněny před xxxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx druhý.

7.8 Pravidelně počínaje 8. dnem prověřujte xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx vzhled. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx déle xxxx xxxxxx do vyvinutí xxxxxxxx, tím větší xx naděje na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x&xxxx;xxxx xxxxxx před ní.

Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx hlízy. Xxxxx x&xxxx;xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Jiné xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx celé xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se na xxxxx vejcoplodém objeví xxxxxxxx, mělo by xxxxx k izolaci za xxxxxxx xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (macerace xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx dezinfikujte xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) média (xxx xxxxx&xxxx;8). Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, že X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx dokonce x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx až 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny pozitivní xxxxxxxx vykazují typické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx nejsou xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže testované xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus, x&xxxx;xx předpokladu, xx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx ukončena pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx náročný organizmus, xx xxxxx xx xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx je xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx pletiva xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx být možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a vhodného ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxx xxxxx hlízy nebo xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx částí stonků x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, ale x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxxxxx vyloučili xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho vhodnost xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, že bakterie xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx rozetřít 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Petriho xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k roztěrům (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx rozetření xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a následné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx misku x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4 Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx miskami a počítání xxxxx kolonií xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx provést xxxxx, xxx jsou xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na jedno x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubujte xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

C. m. xxxxx. sepedonicus roste xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rozetřete xxx xxxxxxxx čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx vyklenuté, slizovitě xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx okraji x&xxxx;xxxxxxx mají x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx xxxxxx kolonie xxx další testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomné xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Klementa x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx by se xxxx inkubovat xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx růstu, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxx provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) testy	Inertní xxxx slabě oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37 °C	–
Aktivita xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx IF (dodatek 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX postup (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx XX xxxx kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx xx xxxxxxxx vodě (Ultra xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx suspenze xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku nebo xxxxx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx buněk xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx při teplotě –16 až –24 °C xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Boer, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4 FISH xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx pozitivní, jsou-li xxxxxxxx stejné reakce xxxxxxx a pozitivní kontroly.

9.5 Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °C (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx FAP xx pozitivní, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx neobvyklá xxxxxxxx, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx pohybuje kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte test xxxxxxxx xxxxx (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10. KONFIRMAČNÍ XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx diagnózy C. m. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx provedena zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx x&xxxx;3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3 Inkubujte xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx mělo xxxxx 2&xxxx;xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx se po 3&xxxx;xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx místem xxxxxxxxx. Rozdrťte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx nanesením xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx teplotě 21–23&xxxx;°X a sledujte xxxxx xxxxxxx typických xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus [XXXXX 4053 xxxx XX 406] na xxxxxxxxx xxxxx MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx pufru, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 × 108 xxx/xx. Xxxx obvykle xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx slupkou, o které xx xxxxx, že xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte pupkové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx proto xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní části x&xxxx;100&xxxx;µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX testy proveďte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (PVP-40)	Vázání xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx pufr xx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx pufr xx používá k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 min.

2.2 IF-pufr-Tween

Tento xxxx se používá x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1 % Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx používá xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

(1) Pro xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v okénku mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx jednoho xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x atd.)

3.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku a
	F	=	zřeďovací xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = YGM)

Kvasničný extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 litru xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx pH xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx v zásobě xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, amphotericin X&xxxx;(Xxxxx) (1 mg/ml) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v zásobních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx v destilované xxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx se xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- ctc xxx gtg xxx xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx NS-7-F	5′- gag xxx xxx xxx xxx ctg tga xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (sada NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µM) (2)	0,1 µl	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (připojení xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
	vi)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (připojení primerů)
	vii)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx modifikace xxxxx xxxxx xx), xxx) xx), v), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po inkubaci xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx specifického xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 bp x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	50 ml

2.2 Nakládací xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Acetát XXXX (XXX) pufr, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

(1) Metody xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx primerů NS-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metodami xxxxxxx XXX bude xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Validovaná činidla xxx FISH Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Cms XXX-XX3-01:	5’- xxx cgg xxx gca cat xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx použití.

iv)	Poznámka: Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx lehké sensitivní xxxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx –20 °C. Během xxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx substrátu. Přepichujte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx sterilního xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za následujících xxxxxxxx:

Xxxxx dne:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24 °C,
	noc:	15 °C.

Vhodné xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2 g krystalové xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 pro přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx a nechte xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Lugolovým xxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx vodou a vysušte xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx safraninovým xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Publ XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx of xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx xxxxxxxx potato tubers. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, J. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx detection xx xxxxxx ring xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. x&xxxx;X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx xx a semi-selective xxxxxx. Journal of Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx the oxidase xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, K a D. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, R. X., E. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Lelliott, R. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. et Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Bull., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from RNA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. x&xxxx;X.X. Rainey. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria and xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx BIO-PCR and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. B. X., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Pseudomonas xxx. xxxxx cellular fatty-acid xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx ve vyšetřovacím xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, xxxxx xxxx součástí vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx uvedený postup xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx hlíz xxxxxx případné testování xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu

nejméně xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx v místě xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, které/á xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx těch, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx hlízy xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx místě xxxxxxxx xxxxxxxx v první xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených v odrážkách xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, nebo xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxx xxxxx xxxxxx do xxxxx s hlízami xxxx xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, které se xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx sesterský nebo xxxxxxxx vztah x&xxxx;xxxxxx xxxx rostlinám, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx testů xx organismus xxxx xxx negativní, xxxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobné xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonově xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, kde xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské rostliny,

—	společná xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx pododstavci jsou xxxxxxxxx následovně:

—

Bezprostředně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx metod xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx atd.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx kategorie xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx stát, v němž xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx partie brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu nebo xxxxxxx číslo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx v případě xxxxxxx, xxxx popřípadě registrační xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, v každém případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx provedeného x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti o rozsahu xxxxxxxxxx zamoření, xxxxxx xxxxx xxxx produkce x&xxxx;xxxxx partií s uvedením xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx oblasti, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i xxxxxxxx/x, xxxxx si Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace na xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxx s úředně xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx odpadu, u kterého xxxx prokázáno, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedeného xx xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx metodami podle xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx souhlasem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. S brambory xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx zpracování, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx xxxxxx, u kterých xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx metody xx xxxxxxx xxx kontrolou xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx v čl. 7 odst. 4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx produkce xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

a)

na xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) buď

i)

—

během xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx přijmou xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx osivo xx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny organismu, xxxxxxxx plodiny, xxx xxxxx hrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném v předchozí xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx xxxx bylo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx před xxxxxxxx shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, xx povolena xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a sklizené hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

—

ve xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx pěstitelských xxx následujících po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx xxxx stálá xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx následujícím xx období xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě xxxxxxxx pěstitelských let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx organismu, xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx podmínkou, že xxxxxxxxx úřední subjekty xxxx přesvědčeny, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxx odstraněno:

—

v pěstitelském roce xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo nebo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nepěstují, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx úředně xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx produkce jiných, xxx těch, xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx sadbu xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx xxxx třetího xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx prvním následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stroje x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pěstební substrát,

—

se xxxxxxxx žádné xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx úředně sledovaným xxxxxxxxx xx odstranění xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx přinejmenším xxxxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a dezinfekce xxxxxxxxx jednotky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž jsou xxxxxxx opatření xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx používány x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx příslušných xxxxx xxxxx bodu 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xx s těmito xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx této oblasti xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxx brambory xx xxxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xxxxx byla xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nakládání se xxxxxxxxxx zásobami xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx náhradu xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx přiměřenou dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx IV xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Bramborový xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx odpad související x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx zlikvidují xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci odpadu, x xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím na xxxxxxxxxxx půdu. Odpad xxxx xxx přemístěn xxxxx na místo x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx opatření se xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx xxxxx částice xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. x).

Pevný xxxxx musí xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx po xxxx alespoň 30 xxxxx před xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, že xx odpad xxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených partií.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.