EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Rady 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,

x ohledem na xxxxxxxx Rady 93/85/XXX xx dne 4. xxxxx 1993 (1) o ochraně proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx brambory je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx et xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx jen „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx v členských xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx zjistilo místo xxxxxxx a stanovil xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx jeho xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a kromě xxxx xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx ochraně xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx týkajících se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx o postupy xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx xxx v poslední xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX), xxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx prvky xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx a příslušné xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx prohlášena za xxxxxxxx, a ve vymezených xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená touto xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx v příloze této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí. Neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx státy neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx státům.

X Bruselu xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Komisi

Markos XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx et xx. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx al.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené schéma xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových diagramech.

Pokud xx první screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Pokud xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Cms.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx s potvrzením patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX PŘÍTOMNOST XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se příznaky xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx a často xxx až xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx infikované listy xxxxx i přes xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx místech xx omezený. Xxx xxxxxxxx neobvykle tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx sklovitost xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx cévních xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx zbarvení xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx svazků a stav, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx sloupky sýrové xxxxx. Xxxxx exsudát xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné příznakům xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být tyto xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se vyskytovat xxx xxxxxx pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit xx xxxxxxx korové části. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích infekce xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx k druhotnému xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx lze použít xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí prostředky xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxxx xxxxx oschnout xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx v případě, že xx ve xxxxxx xxxxxx zeminy a jestliže xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx výkrojky vodivého xxxxxxx z pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx by xx provést xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx naříznutí hlízy xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) by xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx II.

3.1.2 Shromážděte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x případě, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx je zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Schnutí x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků a růst xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx bránit zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje vysoké xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx čerstvě sterilizované xxxxx (nože) a nádoby. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedno použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 g po xxxx 10 minut xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1,5 ml peletového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx a 500 µl xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční poměrné xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je nutný xxxxxxxxx extraktu, zajistěte xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i pro xxxxxxx xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx část o velikosti 1–2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3 Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx odstředěním podle xxxxxx v oddílu 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě –68 xx –86 °C (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx jako xxxxxx vyšetřovací test XX xxxx a jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze obsahující 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx mít XX titr xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx (vzorků).

4.1 Připravte xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx vhodné 15&xxxx;µx – pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx stejné množství xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou řadu xxx použít jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx do řady xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx měl být xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

ii)	Podle přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním protilátek. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx osušením.

4.3.4 Umístěte xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být stejné xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou vlhkost.

4.3.7 Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

Vyhodnocení IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx průměrech a kolem xxxxxx. U vzorků s žádnými xxxx xxxxx počtem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx test XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx být xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se může xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle oddílu 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, kde je xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;× 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx negativní. Další xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx možno proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx extraktu ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) v 0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (příprava viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte a inkubujte xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Pro jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X po xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx po xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx xxxxxxxxx, xxx xxx by se xxxxx xxxxxx zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom ponořte xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo lyzozymu 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 v pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX CaCl2, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx vzduchu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x hybmixu (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55 °C xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte po xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte xxxxxxx xx horkou xxxxxx xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx sklíčky (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167&xxxx;xx 3x xxxxxx a 833 ml XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx UPW a položte xx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx FISH xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x nebo 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních buněk) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v okénkách testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx být lepší xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, když xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx mohou xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x&xxxx;XX testu.

5.3.5 V úvahu xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx v žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF test. Xxxxx xx XXX xxxx používá xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx validovaná XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx metodě x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a PCR) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx xxx přidán X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	pokud xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontroly v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx cílové XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lýzového xxxxx (100 mM XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100 µl xxxxxxxxxx extrakt xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. do xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1&xxxx;xx v 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx míchejte xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po dobu 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx fázi do xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500 µl 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx při 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte xxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Xxxxx Xxx) xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních vzorků xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx PCR elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bromidu (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx s vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor restrikčního xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon typický xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Spolehlivého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx s druhou sadou XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný amplikon xxxxxx z pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxx, ale x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu byly xxxxxxxxx. Ve vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX k inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103 xx 104 xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx l ml xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx pouze rostliny xx fázi 2–3 listů xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx inokulací 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx děložními xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx listem xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx začněte xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

7.4 Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx děložními xxxxxx pomocí injekční xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Vzorek xxxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx známé xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx možno x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24 °C. Inkubujte xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx jasně oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx zajistěte xxxxxx oddělení mezi xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx před xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx vzhled. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx déle trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve fázi xxx listů a nebo xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx hub přítomných x&xxxx;xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx k nim Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Xxxxx xxxxxx var. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx chrysanthemi. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx nebo celé xxxxxxxx. Xxxxxx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx test xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx k izolaci xx xxxxxxx xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX nebo XXX na šťávě x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx okolností, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, proveďte test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx místem inokulace. Xxxxx je test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx vhodná (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx výsledků xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx izolovat bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxx xxxxxxxx zjištěny.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx nejsou infikovány X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx ukončena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, následně xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. m.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx organizmus, xx xxxxx ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx je xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xx stonků rostliny.

Izolace xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx xx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx naprosto xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx by se xxxx před xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx rozetřít 100 µl x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 až 1/10 000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné xxxxxxxxx xxxxx objem xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx postupem xx rozetření xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx pelety na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx závěr zopakujte x&xxxx;xxxxx miskou, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4 Počáteční kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx třech xxxxx, x&xxxx;xxxxxx počítáním xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se xxxx pěstovat na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (složení xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

agar z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx teplotě 21 °C–24 °C xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

8.2.2 Znovu xxxxxxxxx xxx zaručení čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, s rovnými xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx vybrat kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx kultury pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně přítomné xxxx xxxxxxxxxx v C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Klementa x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx šesti xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx k žádnému růstu, xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx provádět za xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx slabě oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk/ml v pufru xx XX (dodatek 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX titr kultury xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx dobu 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX stejné xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4 FISH xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (oddíl 5).

c)	Test FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly.

9.5 Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx pozitivní, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Iso, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o přítomnosti X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také obsahují xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx pohybuje kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx na xx v UPW.

b)	Proveďte xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk na xx z 3-denních kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního kontrolního xxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24 °C xxx dostatečném světle x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). U čistých xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx se xxxx xxxxxxxxx až 3 týdny xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx místem xxxxxxxxx. Rozdrťte a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx MTNA a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře podílející xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] na xxxxxxxxx médiu XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx hustotu xxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 × 108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z produkce odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx jisté, xx xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx proveďte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx zjištěn x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx testovací postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx skladovat po xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx protřepáním.

Na2HPO4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP-40)	Vázání xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků z pupkových xxxxx bramborových xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx IF.

2.3 Fostátový pufr x&xxxx;xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx jsou komerčně xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha jednoho xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx jamkami x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x atd.)

3.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku a
	F	=	zřeďovací xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx živný xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, nalidixic xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx následovně: nalidixic xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx B sulfát v destilované xxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pro PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné zjištění xxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx ggg xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx gat xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx NS-7-F	5′- gag xxx xxx xxx xxx xxx tga xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3′

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (xxxx NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Primer XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xx)	1 minuta xxx xxxxxxx 72 °C (prodlužování xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 sekund xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (prodlužování kopie)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx cyklerem MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. sepedonicus produkují xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bgl XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Fragmenty získané x&xxxx;xxxxxxxxx specifického xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná voda	50 ml

2.2 Nakládací xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před použitím xxxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 písm. a) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metodami xxxxxxx XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx gca xxx xxx xxx acg -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (UPW)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpustí xx xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH na 7,0 xxxxxxxx 1ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx roztok přes xxxxxxxxxx filtr 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 mM (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 ng/μl

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx –20 °C. Během xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Huckerově xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte pod xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Lugolovým xxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxx xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx of bacteria xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. G., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, R. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative versus xxxxxxxxx metabolism of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Janse, X. X., 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, J. D. x&xxxx;X. Van Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC method xxx xxx detection xx xxxxxx ring xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, pp. 1–10.

8.	Jansing, X. x&xxxx;X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10.	Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. A., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Lelliott, R. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in potato xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. J. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative studies xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship to xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx XXX-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. B. X., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx identification xx xxx genera of xxxxxxxx. 2nd ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22.	Smith, N. X.; Hennesy, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between laboratories: xxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Antonie xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. X. Akkermans, 1998. Detection of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx xxxx xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

PŘÍLOHA II

1.

Při každém podezření x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích testech) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx součástí vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou součástí xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx vyšetřovací test/y, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx ukončen.

Zadržení xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx měsíce xx xxxxxxxxxxxx postupu xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx v místě produkce xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx společné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx v předchozí xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx hlízy xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, vozidlo, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, a jakékoli xxxx xxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxx a dezinfekcí těchto xxxxxxxx a staveb,

—

v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx testů xx organismus mohl xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobné xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx testování xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské rostliny,

—	společná xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx pododstavci xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu xxxxxxxxxxxxx testy, za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx odrůdy xxxxxx brambor,

—	druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx riziko xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx stát, v němž xxx xxxxxx potvrzen, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx státu/státům xxxxxxxxx xxxxxxxx ke splnění xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx v případě xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx ukončení xxxxx xxxxxxxxx, v každém případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rozšíření xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx s uvedením xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx brambor xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x ohniskem/y, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné xxxxxx, xxxxx vylučuje xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko úniku xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx, u kterého xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, a se xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx opatření, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx zlikvidovat úředně xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx nebo vhodná xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, balených xxx xxxxxx dodávku x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, v místě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx na likvidaci xxxxxx. S brambory xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx v případě, xx xx tak děje xxxxxxxx xxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx zpracovatelskému xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a že xxxxxxx schválení xxxx xxxxxxxxx odpovědnými úředními xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx metodami xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx metody, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, xxxxx xxxx xxxxxxx státy xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx v čl. 7 odst. 4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx produkce xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

a)

na xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx nejméně xxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx přijmou xxxxxxxx xx odstranění xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, rostliny xxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxxxxxx plodiny, pro xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx následujícím po xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx xxxx, pokud xx xxxx pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx označení zamoření

—	se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx jako xxxxx xxxxxxxx s častým nízkým xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx produkce xx xxxxx nebo konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx postupem xxxxx přílohy X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx místě produkce, x&xxxx;xxx podmínkou, že xxxxxxxxx úřední subjekty xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx označeném xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pěstovat xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx se xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx úředně xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx jiných, xxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx označení zamoření xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, buď xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx případně přítomných xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stroje x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při produkci xxxxxxx vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, kde xx možné úplně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a na xxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiálu hostitelských xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a dezinfekce xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx a dokud xxxxxxxx xxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx udělen xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx vymezené xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací prostory x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx pěstitelských xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxxxx zařízení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx pronajímají pro xxxxxxxxxxx používanou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx této oblasti xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx sklizni xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, která byla xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxx podle článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx uvnitř xxxxxxx xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx xx nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx nakládáním xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí úřední xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu:

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx vyřazených xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx půdy, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném místě xxx likvidaci xxxxxx, x xxxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx místo x xxxxxx xxx izolován xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxx Komisi a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx likvidovány xxxxx xxxx. i).

Xxxxx xxxxx musí xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx po xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	odstraněn xxxxx způsobem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou půdou. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx členským státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx odpad xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.