XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX
ze xxx 12. června 2006,
xxxxxx xx mění xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) |
Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx brambory je Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“). |
(2) |
Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx. |
(3) |
Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo místo xxxxxxx a stanovil xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx eradikace. |
(4) |
Xx xx doby xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku v poznatcích x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a kromě xxxx praktické xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx týkajících se xxxxxxxxxx opatření. |
(5) |
V důsledku xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx nezbytné xxxxxxxxxx a aktualizovat opatření xxxxxxxx v přílohách směrnice 93/85/XXX. |
(6) |
Xxxxx jde x xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, jsou xxxxxxxxxxx jak x xxxxxxxx xxxx vyvinuté postupy, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR), xxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. |
(7) |
Xxxxx xxx o technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx xx vypracovány xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx testovaných xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx potvrzené xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a příslušné xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a ve xxxxxxxxxx xxxxxx. |
(8) |
Xxxxxxxx stanovená touto xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, |
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx směrnice 93/85/EHS xx nahrazují odpovídajícími xxxxx v příloze této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx a touto xxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.
Xxxx předpisy xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.
Xx Komisi
Xxxxxx XXXXXXXXX
xxxx Xxxxxx
(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.
PŘÍLOHA I
SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX
Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:
x) |
xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx; |
xx) |
xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx; |
xxx) |
xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx). |
XXXXXX ZÁSADY
Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a budou zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných povolení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení kvality, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.
Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí se xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.
X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx IF test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU
1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti
Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx
Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx testy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.
&xxxx;
&xxxx;
1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx
&xxxx;
2. VIZUÁLNÍ VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx
X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky xx xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy a často xxx až na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx i přes xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx místech xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy postižené xxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxx části xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx listy x&xxxx;xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.
2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx systému, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx cévních na xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx mít nepatrně xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx době xx x&xxxx;Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx k druhotnému poškození x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx dutin x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.
3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX
3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx:
— |
Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx. |
— |
Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx o velikosti 200 xxxx. |
— |
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. |
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:
Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx xx vzduchu. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx má xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.
3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky omezte xx minimum (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Poznámka:
Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky podezření x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx naříznutí hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx korkovatět xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx ukončení xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx hlíz s podezřelými xxxxxxxx) by xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XX.
3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, v chladu xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie způsobující xxxxxxxxxxxxx.
3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:
x) |
xxxxx xxxxxxx výkrojky xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx |
x) |
xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250 mm; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) za použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex). |
Poznámka:
Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxxxxxxxx, aby pro xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.
3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx xxxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).
3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g po xxxx 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu xx 24 až 48 xxxxx.
3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a vzorky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx XX xxxxx a všechny testy.
3.2 Rostliny xxxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)
3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx část x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx v uzavření sterilní xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x) |
xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °C xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx |
x) |
xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 hodin při xxxxxxxx xxxxxxx. |
3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx trvat 15 minut, dekantujte xxxxxxxxxxx.
3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.
3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx během xxxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou xxxxxxxx xxxxxxxxx s 10–25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX TEST
Princip
Doporučuje xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, protože xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx dosáhnout požadovaných xxxxx.
Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx XX test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxx:
Xxxxx je XX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx vždy polyklonální xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pro každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx v pracovním xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).
Xxxx xx xxx být prováděn xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx extraktech. V případě xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku odstranit xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).
Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx podle dodatku 2, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě –16 až –24&xxxx;°X) xx xx mělo xxxxx možnosti použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.
Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx (xxxxxx).
4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x) |
Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro xxxxx xxxxxx objem xxxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek podle xxxxxxx 1. |
ii) |
Pro jiné xxxxxx: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředění (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx (xxx okénka x&xxxx;xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µl – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2. |
4.2 Vysušte xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) nad plamenem xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.
V případě xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx sklíčka před xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).
Xxxxxx XX xxxxx:
x) |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v oddílu 4.1 xxxx. i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X). |
xx) |
Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx. |
Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)
Xxxxxx resuspendované xxxxxx |
|||||||
1/100 |
1/1 |
1/1 |
1/1 |
1/1 |
◻ |
Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety |
|
(T = xxxx) |
X/2 |
X/4 |
X/2 |
X |
2X |
◻ |
Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx |
Xxxxxx 1 |
|
|
|
|
|
||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|||
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2 |
|
|
|
|
|
||
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
Obrázek 2. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx |
|||||||
1/1 |
1/10 |
1/100 |
xxxxxxx |
xxxxxxx |
◻ |
Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx |
|
Xxxxxx 1 |
|
|
|
|
|
||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|||
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2 |
|
|
|
|
|
||
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx okénku musí xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).
4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx papíru xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).
4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).
Opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost.
4.3.7 Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) nebo xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:
4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx okénka xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx počtem xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (oddíl 4).
4.4.2 Pozorujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.
Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.
4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.
4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.
4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:
i) |
Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx povinné xxxxx xxxxxxxxx. |
xx) |
Xxxxxxxx XX testu xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx není xxxxx. |
5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX
Xxxxxxx
Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx IF test. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.
Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. kmen NCPPB 4053 xxxx PD 406) x&xxxx;0,01 M fosfátového xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.
Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx vzorku.
Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.
5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Wullings x&xxxx;xxx. (1998):
5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).
5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.
5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte a inkubujte xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.
Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.
5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx po xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 M PB (viz xxxxxxx 3).
5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. V případě, xx je xxxxx XXXX metodu opakovat, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné množství 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).
Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx FISH
Vzorek 1 |
Xxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxx 2 |
|
|
|
|
|
xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
okénko 3 |
xxxxxx 4 |
xxxxxx 5 |
Xxxxxx 1 |
Xxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxx 2 |
|
|
|
|
|
xxxxxx 6 |
xxxxxx 7 |
xxxxxx 8 |
xxxxxx 9 |
xxxxxx 10 |
Xxxxx xxxxxxx 1 |
Xxxxx xxxxxxx 2 |
5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx plamenem.
V xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace
5.2.1 Připravte xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Tris-HCl, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx skladovat, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx papírem.
Alternativně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μx proteinázy X&xxxx;40–400 μx.xx–1 v pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.
5.2.2 Sušte xxxxx ve stupňovaných xxxxxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;% etanolu xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.
5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x hybmixu (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.
5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °C.
5.2.5 Umístěte sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.
5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UPW), 1 l 1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167 ml 3x xxxxxx a 833 ml XXX). Předinkubujte každou x&xxxx;xxxx ve vodní xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.
5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.
5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.
5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák xxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.
5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každé xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).
5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu
5.3.1 Prohlížejte xxxxxxx ihned x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x nebo 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx buňky C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.
5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v okénkách testovacích xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.
5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, když xxxxxxx sklíčka ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.
5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx xxxxx xx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx často xxx x&xxxx;XX testu.
5.3.5 V úvahu xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.
5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:
x) |
Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx v žádných negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. |
xx) |
Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx. |
6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX
Xxxxxxxx
Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxx metody v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.
X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.
XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx následující negativní xxxxxxxx:
— |
xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, |
— |
xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx, |
— |
xxxxxxx xxxx XXX. |
Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
— |
xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných pelet, x&xxxx;xxxx byl přidán X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2), |
— |
xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053), |
— |
xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. |
Abyste zabránili xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.
6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace XXX
Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky.
Připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).
X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx s validovanou metodou XXX, uvedenou v dodatku 6.
6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
1. |
Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx. |
2. |
Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx. |
3. |
Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. do ledu. |
4. |
Přidejte 80&xxxx;µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. |
5. |
Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® roztok A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. |
6. |
Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. |
7. |
Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. |
8. |
Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20 minut xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx. |
9. |
Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxxx mikrozkumavky. |
10. |
Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. |
11. |
Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx etanol. |
12. |
Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx. |
13. |
Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx zachovejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx. |
14. |
Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX speed xxx. |
15. |
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut při xxxxxxxx xxxxxxx. |
16. |
Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx upotřebení xxx XXX. |
17. |
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX. |
6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx) xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.
6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX
6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).
6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX v prostředí, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx PCR.
6.2.3 Přidejte xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx.
6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx UPW, která xxxx použita do xxxxx PCR namísto xxxxxx.
6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).
6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) agarózového xxxx v Tris-acetát-EDTA (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 V na xx. Používejte xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx ladder.
6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) po xxxx 30–45 xxxxx, xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.
6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (viz xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:
XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).
XXX test je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních kontrolních xxxxxx. Spolehlivého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx&xxxx;9.3).
Xxxxxxxx:
Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx amplikonů.
Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx&xxxx;2).
Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxxx a poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.
Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx měly xxx vytvořeny optimální xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx dodatek 8.
7.1 Rozdělte celý xxxxxx testované xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z oddílu 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx pouze xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 listů xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, xxxx xxx níže popsané xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.
7.2 Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx nezalévejte, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx napětí xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx
7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx pravým listem xxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx dlouhý asi 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, řez začněte xx xxxxxxxx xxxxx.
7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sterilní vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.
7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx vodní xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx známé xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).
7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní kontrolu xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pufrem xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).
7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 18–24 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) a zalévejte xx xxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Buňky X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °C a optimální xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, protože xx mohl přenášet xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx xxxxx.
7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Zvadlé xxxxxxx může zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx často mastně xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx déle xxxx xxxxxx do vyvinutí xxxxxxxx, xxx xxxxx xx naděje na xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx fázi xxx listů x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jiných bakterií xxxx xxx přítomných x&xxxx;xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx k nim Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxx xxxxxxxx je zčernání xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxx xxxxxx vadnou celé xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx test xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Erwinia xxx.
7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX nebo XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx a izolujte xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) média (xxx oddíl 8). Můžete xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).
7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx nejsou xx 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, proveďte test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxx (selektivní) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxxx výsledků xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, z těchto xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testované xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, x&xxxx;xx předpokladu, xx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.
8. IZOLACE X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxx xx ukončena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv je X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vykazujících xxxxxxxx napadení.
Mohou ji xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx izolace C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být možná xx použití selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xx xxxxxx rostliny.
Izolace xx provádí xx xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx u nichž xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.
Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 nebo PD 406). Abyste vyloučili xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx kontroly naprosto xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.
Xxx každou nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx by se xxxx xxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.
8.1 Selektivní xxxxxx xx xxxxxx
8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).
8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx rozetřít 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90 mm – xxx jiné xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx rozetření počátečních 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx zopakujte x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.
8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx a počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx třech dnech, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.
8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx a/nebo následnou xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxxx na XXX médiu; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx by xx xxxx provést xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.
8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (složení xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):
živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),
agar x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,
xxxx z kvasničného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.
X. x. xxxxx. sepedonicus roste xxxxxx, xxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
8.2.2 Znovu xxxxxxxxx xxx zaručení čistoty.
U xxxxxxxxx se rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.
Xxxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx testování.
8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx kultury (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;10).
9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx obecně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx metod Lelliotta x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Anonym (1987).
Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.
Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxx provádět xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.
Testy |
Očekávaný xxxxxxxx |
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) testy |
Inertní xxxx xxxxx oxidační |
Aktivita xxxxxxx |
– |
Xxxx xxx 37&xxxx;°X |
– |
Xxxxxxxx xxxxxx |
– |
Xxxxxxxxx eskulinu |
+ |
Hydrolýza xxxxxx |
– xxxx xxxxx |
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx |
– |
Xxxxxx xxxxxx |
– |
Xxxxxxxx xxxxxxxx |
+ |
Xxxxxx H2S |
– |
Využití xxxxxxx |
– |
Xxxxxxxxxx želatiny |
– |
Kyselý xxxxxxxx |
– |
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx |
– xxxx xxxxx |
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx |
– |
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx |
– |
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9) |
+ |
9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx
x) |
Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx v pufru xx XX (xxxxxxx 3). |
x) |
Xxxxxxxxx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. |
x) |
Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4). |
x) |
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. |
9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test
a) |
Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx ml xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX). |
x) |
Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx potom xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxxxxx. |
x) |
Xxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx specific xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999). |
x) |
Xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx. |
9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx
x) |
Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk na xx x&xxxx;XXX. |
x) |
Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5). |
x) |
Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx. |
9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)
x) |
Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °C (+/–&xxxx;1°). |
x) |
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992). |
c) |
Test XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Curtobacterium, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx z těchto kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx pro tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx pohybuje kolem 5&xxxx;%. |
9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX
x) |
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW. |
b) |
Proveďte xxxx xxxxxxxx xxxxx (Smith x&xxxx;xxx., 2001). |
10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX PATOGENITY)
Pro konečné xxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx provedena zkouška xxxxxxxxxx.
10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.
10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).
10.3 Inkubujte xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k přemokření nebo xxxxxxxxx (oddíl 7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by mělo xxxxx 2&xxxx;xxxxx nastat xxxxxxx vadnutí, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých xxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx se po 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.
10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx s příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx typických xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx&xxxx;(1) |
Xxxxx |
Xxxx |
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx und Ernährungssicherheit |
Vídeň x&xxxx;Xxxxx |
Xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx |
Xxxx |
Xxxxxx |
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx |
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Terre |
Le Xxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx |
Xxxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxx Xxxxxxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx |
Xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx |
Xxx |
Xxxxxx |
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx |
Xxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxx |
Xxxxxx xx Diagnóstico xx Xxxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxx |
(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main
Dodatek 2
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX
Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx hustotu xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 × 108 xxx/xx. Xxxx obvykle xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.
Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx jisté, že xxxx napadena X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.
Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.
Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve sterilních xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.
Xxx XXX xxxx proveďte xxxxxxxx DNA z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxx XX x&xxxx;XXXX testy xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.
Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol a nesmí xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol.
Dodatek 3
Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx skladovat po xxxx až xxxxxxx xxxx.
1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx
1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)
Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.
Na2HPO4 (xxxxxxx) |
4,26&xxxx;x |
XX2XX4 |
2,72&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 min.
Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxx |
Xxxxxxxx (xx litr) |
|
Lubrolové vločky |
Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1) |
0,5&xxxx;x |
XX silikonový odpěňovač |
Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1) |
1,0&xxxx;xx |
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxx činidlo |
1,0 g |
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (XXX-40) |
Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR |
50 g |
1.2 Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)
Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bramborových hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
Xx2XXX4.12X2X |
2,7&xxxx;x |
XxX2XX4.2X2X |
0,4&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121 °C xx dobu 15 min.
2. Pufry xxx IF xxxx
2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém roztoku (XXX), xX&xxxx;7,2)
Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.
Xx2XXX4.12X2X |
2,7&xxxx;x |
XxX2XX4.2X2X |
0,4&xxxx;x |
XxXx |
8,0&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.
2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx
Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 k pufru xxx XX.
2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6
Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xx2XXX4.12X2X |
3,2&xxxx;x |
XxX2XX4.2X2X |
0,15&xxxx;x |
Xxxxxxxx |
50&xxxx;xx |
Xxxxxxxxxxx voda |
100 ml |
Krycí xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).
(1)&xxxx;&xxxx;Xxx použití xxx extrakci xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx 4
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx
1. |
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x). |
2. |
Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C). C = x&xxxx;× X/x
|
3. |
Xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X). X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X
|
Xxxxxxx 5
Xxxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx
x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx růstová xxxxx
Xxxxx agar (Nutrient Xxxx = XX)
Xxxxx xxxx (Xxxxx) |
23,0&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx voda |
1,00 l |
Rozpusťte xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.
Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)
Xxxxx xxxxx živný agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20&xxxx;xxxxx.
Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) |
5,0&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx) |
5,0&xxxx;x |
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx) |
10,0&xxxx;x |
Xxxxxxxxx (Xxxxx) |
15,0&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.
Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = YGM)
Kvasničný xxxxxxx (Xxxxx) |
2,0&xxxx;x |
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx) |
2,5&xxxx;x |
X2XXX4 |
0,25&xxxx;x |
XX2XX4 |
0,25&xxxx;x |
XxXX4.7X2X |
0,1&xxxx;x |
XxXX4.X2X |
0,015&xxxx;x |
XxXx |
0,05&xxxx;x |
XxXX4.7X2X |
0,005&xxxx;x |
Xxxxxxxxx (Xxxxx) |
18&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx složky a sterilizujte 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx dobu 20 xxxxx.
x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx
Xxxxxx XXXX
Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x&xxxx;XXX.
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) |
2,0&xxxx;x |
Xxxxx |
2,5&xxxx;x |
X2XXX4 |
0,25&xxxx;x |
XX2XX4 |
0,25&xxxx;x |
XxXx |
0,05&xxxx;x |
XxXX4.7X2X |
0,1&xxxx;x |
XxXX4.&xxxx;X2X |
0,015&xxxx;x |
XxXX4.7X2X |
0,005&xxxx;x |
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1) |
16,0&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, amphotericin X&xxxx;0,01&xxxx;x.
Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (xxx 5&xxxx;xx/xx) v 96 % xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované filtrací.
Poznámka:
Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.
Xxxxxx XXX-88
Xxxxx xxxx (Xxxxx) |
23&xxxx;x |
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) |
2&xxxx;x |
X-xxxxx |
5&xxxx;x |
X2XXX4 |
2&xxxx;x |
XX2XX4 |
0,5&xxxx;x |
XxXX4.7X2X |
0,25&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx složky, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v zásobních xxxxxxxxx následovně: nalidixic xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% ethanolu, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média je 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.
Xxxxxxx 6
Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx pro PCR
Poznámka:
Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx testování by xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bakterií.
1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)
1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx XXX-1 |
5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx-3′ |
Xxxxxx XXX -R |
5′- xxx xxx xxx gtt xxx xxx xxx x&xxxx;-3′ |
Xxxxxx XX-7-X |
5′- gag xxx xxx xxx xxx ctg tga xxx -3′ |
Primer XX-8-X |
5′- xxx gca ggt xxx xxx xxx xx -3′ |
Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).
1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX
Xxxxxxx |
Xxxxxxxx xx reakci |
Konečná xxxxxxxxxxx |
Xxxxxxxx xxxx (XXX) |
15,725&xxxx;µx |
|
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2) |
2,5&xxxx;µx |
1x (1,5 xX XxXx2) |
XXX (frakce X) (10&xxxx;%) |
0,25&xxxx;µx |
0,1&xxxx;% |
Xxxx x-xXX (20 xX) |
0,125&xxxx;µx |
0,1 mM |
Primer XXX-1 (10 µX) |
0,5&xxxx;µx |
0,2 µX |
Xxxxxx XXX-X (10 µX) |
0,5&xxxx;µx |
0,2 µX |
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2) |
0,1&xxxx;µx |
0,04 µM |
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2) |
0,1&xxxx;µx |
0,04 µX |
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/µl) (1) |
0,2 µl |
1,0 X |
Xxxxxxxx xxxxxxxx |
5,0&xxxx;µx |
|
Xxxxxxx xxxxx |
25,0&xxxx;µx |
1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX
Xxxxxxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxxx:
1 xxxxxx: |
x) |
3 minuty xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice) |
10 xxxxx: |
xx) |
1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx) |
xxx) |
1 minuta při xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx) |
|
xx) |
1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx) |
|
25 xxxxx: |
x) |
30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx) |
xx) |
30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx) |
|
xxx) |
1 xxxxxx při teplotě 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx) |
|
1 xxxxxx: |
xxxx) |
5 xxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxxxxxxx) |
xx) |
xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X. |
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx možná xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).
1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx PCR amplifikované x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bgl XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.
2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)
Xxxxxxxxxxxx modř |
5 g |
Destilovaná xxxx |
50&xxxx;xx |
2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx (86&xxxx;%) |
3,5&xxxx;xx |
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1) |
300&xxxx;µx |
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát) |
6,2 ml |
3. Pufr 10x Tris Acetát XXXX (TAE) xxxx, xX 8,0
Xxxxxxx xxxx |
48,4&xxxx;x |
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
11,42&xxxx;xx |
XXXX (xxxxx xxx) |
3,72&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx voda |
1,00 l |
Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).
(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Gold) x&xxxx;Xxxxx XXX.
(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx optimalizována xxx extrakci xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. a) x&xxxx;6.2). Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metodami xxxxxxx XXX bude xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 7
Xxxxxxxxxx činidla xxx FISH Test
1. Oligosondy
Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: |
5’- xxx cgg xxx xxx cat xxx xxx xxx -3’ |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: |
5’- gct gcc xxx cgt xxx xxx-3’ |
2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx
[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]
x) |
Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpustí po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. |
xx) |
Xxxxxxx pH na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx HCl xxxx NaOH. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE MĚŘIČ XX!] |
xxx) |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx jej xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx. |
xx) |
Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% etanol. |
3. 3x Xxxxxx
XxXx |
2,7 X |
Xxxx-XXx |
60 xX (xX 7,4) |
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx) |
15 xX |
Xxxxxx až 1x, xxxxx xxxxxxx.
4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx
1x Xxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) |
0,01&xxxx;% |
xxxxxx XXX 338 |
5 xx/μx |
xxxxxx XXXXX301 |
5 ng/μl |
Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je třeba 90 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx
2 xxxxxxx |
8 xxxxxxx |
|
Xxxxxxxx voda XXX |
50,1 |
200,4 |
3x xxxxxx |
30,0 |
120,0 |
1&xxxx;% XXX |
0,9 |
3,6 |
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx) |
4,5 |
18,0 |
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx) |
4,5 |
18,0 |
Xxxxxxx xxxxx (μx) |
90,0 |
360,0 |
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0
Xx2XXX4 |
8,52&xxxx;x |
XX2XX4 |
5,44&xxxx;x |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
1,00&xxxx;x |
Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxxxx 8
Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxx xx se xxx pěstovat ve xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxx xxx: |
14 xxxxx xxxx přirozená délka xxx, xxxxx xx xxxxx; |
|
Xxxxxxx: |
xxx: |
21 až 24 °C, |
noc: |
15 °C. |
Vhodné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: |
„Xxxxx Xxxxxx“, |
„Xxxx Tom“, |
|
„Rima“, |
|
„Balsas“. |
Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx
Xxxxxxx 9
Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)
Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti
Rozpusťte 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.
Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx amonného x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx
Xxx |
1&xxxx;x |
Xxxxx draselný |
2 g |
Destilovaná xxxx |
300&xxxx;xx |
Xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené xxxxxx xx rozpuštění.
Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx X |
2,5&xxxx;x |
95&xxxx;% xxxxxx |
100&xxxx;xx |
Xxxxxxxxxx a uložte.
Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx
1. |
Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte xx xxxxxxx a fixujte zahřátím. |
2. |
Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx. |
3. |
Xxxxxx xxxxxx pod xxxxxxx xxxxx. |
4. |
Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. |
5. |
Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. |
6. |
Xxxxxxxxxx xxxxxx xx kapkách xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx. |
7. |
Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx a vysušte xxxxx xxxxxxx. |
8. |
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10 s. |
9. |
Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým papírem. |
Grampozitivní xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
XXXXXXXXXX
1. |
Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx diagnosis of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 XX, 21 xx. |
2. |
Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of bacteria xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213–218. |
3. |
Xxxxxxx, X. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152. |
4. |
Doetsch, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of light xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx methods xxx xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23. |
5. |
Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24–26. |
6. |
Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345. |
7. |
Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx EC method xxx xxx xxxxxxxxx xx latent ring xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx potato. XXXX Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1–10. |
8. |
Jansing, X. x&xxxx;X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601. |
9. |
Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703. |
10. |
Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx. |
11. |
Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114–118. |
12. |
Lelliott, X. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489. |
13. |
Lelliott, R. X. a P. W., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106. |
14. |
Xx, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837–842. |
15. |
Mills, D., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861. |
16. |
Xxxxxxx, K. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693. |
17. |
Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX with coamplification xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165. |
18. |
Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx studies xx some Gram-positive xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx. |
19. |
Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Sechler, X. x&xxxx;Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX-XXX xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100. |
20. |
Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide for xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx. |
21. |
Xxxxxxx, X. X. D., 1967. A guide to xxx identification xx xxx genera of xxxxxxxx. 2nd ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx. |
22. |
Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx for rapid xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748. |
23. |
Xxxxxx, X. H. X. xxx V. X. Collins, 1974. X&xxxx;xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx laboratories: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527. |
24. |
Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx cellular fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281–295. |
25. |
Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546–4554. |
(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXXXX&xxxx;XX
1. |
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx vyšetřovacím xxxxx (vyšetřovacích testech) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx potvrzeno xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:
xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx postup xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx. |
2. |
X případě potvrzení xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx a vhodným způsobem xxxxxxxxxxx:
xxxxxxx xx xxxxxxx měsíce xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2. |
XXXXXXX&xxxx;XXX
1. |
Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:
|
2. |
Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:
|
3. |
Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx pododstavci jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.
|
XXXXXXX&xxxx;XX
1. |
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:
Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx zlikvidovat úředně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx. |
2. |
Xxxxxx xxxxxxx nebo vhodná xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx informování xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx mají xxxxx xxxx zpracovávat, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx k likvidaci xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:
|
3. |
Xxxxxxxxxxx metodami xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx stanoveno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. |
4. |
Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx: |
4.1 |
X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):
|
4.2 |
Xxxx jsou xxxxxxx opatření podle xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:
|
XXXXXXX X
Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:
x) |
Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx vyřazených xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slupek) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:
|
ii) |
Tekutý xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx odpad xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. i). Pevný xxxxx musí xxx xxxxx:
|
Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxx xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.