EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. června 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 93/85/XXX xx dne 4. října 1993 (1) o ochraně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx důvodům:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al., původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru (xxxx jen „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx v členských xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, předešlo xx xxxx výskytu a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Xx xx doby xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx praktické xxxxxxxxxx xxxxxxx při ochraně xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx několika technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx jako nezbytné xxxxxxxxxx a aktualizovat opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, jsou xxxxxxxxxxx xxx v poslední xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx xx fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX), xxx i zlepšení xxxxxxx xxxxxxxxxxx prvků současných xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx xx vypracovány xxxxxxxx předpisy pro: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx potvrzené přítomnosti xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, xxxxx xxxx xxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx přijmou x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a srovnávací xxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx směrnici xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx státy neprodleně xxxxx Komisi znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx vstupuje x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx unie.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx je xxxxxx členským xxxxxx.

X Bruselu dne 12. xxxxxx 2006.

Xx Komisi

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Smith) Xxxxx et al. xxxxx. SEPEDONICUS (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru;

ii)	zjištění Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx a budou zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných povolení xxxxxxxx úředními orgány xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx není považován xx xxxxxxxxxx Cms.

Z xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx identifikaci kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx založen na xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx být doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, a následně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx a často xxx xx xx xxxxx sezóny. Kromě xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx s příznaky jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje listů. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost pletiva xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx mít nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx se vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx oddělit od xxxxxxx korové xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx k druhotnému poškození x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3. PŘÍPRAVA VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx 1&xxxx;xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx o velikosti 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx xxx použít xxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx přípravou vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x&xxxx;xxxx prostředky xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx naříznutí xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx ve vzorku (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx II.

3.1.2 Shromážděte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části do nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávejte xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, v chladu xx xxxx maximálně 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16–24 hodin chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (např. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250 mm; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové kontaminace xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx pro xxxxx xxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (nože) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx být xxxxxx XXX test, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby nebo xxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxx xxxxxx XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavky na xxxxx použití.

3.1.4 Dekantujte supernatant. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500 µl xxx xxxx xx C. x. subsp. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx a 500 µl pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx extraktu, zajistěte xxxxxxxx v chladícím boxu xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx všemi pozitivními xxxxxxxxxx a vzorky X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i pro xxxxxxx xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx zahradnických xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx v uzavření xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má trvat 15 minut, dekantujte xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Jednu xxxxxxxx udržujte během xxxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s 10–25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX TEST

Princip

Doporučuje xx xxxxxx XX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je XX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kmeni C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xx často xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx sklíčka se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem nebo x&xxxx;xxxxx srovnávacím xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, a nepovinně v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24 °C) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx použít xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Používejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx o průměru xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx do řady xxxxxx. Druhou řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) nad xxxxxxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V případě xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx co xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) a dvojnásobný xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle oddílu 4.1 písm. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka zakrytá xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 3) nebo komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx okénka a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx zkoumejte nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx být xxxx XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx test xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku IF testu:

i)

Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx s typickou xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx potenciálně infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 × 103 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx screeningový test xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx extraktů xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx NCPPB 4053 nebo XX 406) v 0,01 M fosfátového xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx sklíčka s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx ve vzorku.

Proveďte xxxx kontrolního materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky a odstřeďujte xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96 % xxxxxxx. Promíchejte protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X po dobu 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu v 75 µl 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx množství 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 M PB (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	okénko 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX EDTA, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Potom xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo xxxxxxxx 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 mM Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, pH 7,4) xx xxxxx xxxxx a inkubujte xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x&xxxx;96&xxxx;% etanolu xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační peci xxx xxxxxxx 55 °C xx dobu alespoň 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte sklíčka xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx sklíčky (24 × 24 mm) xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx xxxxx = UPW), 1 l 1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml UPW) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Předinkubujte xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx XXX a položte xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx každé xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx FISH xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x nebo 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, pozorujte nejméně 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují slabou xxxxxxxxxxxx, neberte v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx mohou xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu.

Využití xxxx metody v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103&xxxx;xx 104 buněk X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a přesnosti xx všech laboratořích xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx metodě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, abyste xxxxxxxxx kontaminaci vzorku xxxxxxx XXX. XXX xxxx by měli xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx provádění XXX xxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontroly v odděleném xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx extrakt ze xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1 ml v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu a míchejte xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx fázi xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Plant Xxx) xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx PCR xxxxx validovaného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx reakční směs xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx byl použit xxx počátečním xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi XXX x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) po xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech nových xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte pravost xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx fragmenty elektroforézou xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními primery: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx C. m. xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Spolehlivého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX primerů (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx získán žádný x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx k extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx základní xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx pouze rostliny xx fázi 2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx úplné xxxxxxx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx popsané xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx inokulací 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na stonek xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx pravým listem xxxxx (přibližně 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2 Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, řez xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx známé kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin sterilním xxxxxxxxx pufrem xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) a zalévejte xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx C. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a negativní xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx počínaje 8. xxxx prověřujte xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Zvadlé xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx mezi xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx vzhled. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx déle xxxx xxxxxx xx vyvinutí xxxxxxxx, xxx větší xx naděje na xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx fázi xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx hub xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx hlízy. Xxxxx k nim Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx i populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Erwinia xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx podobné xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jediným xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Jiné xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx test xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, mělo xx xxxxx k izolaci za xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx a izolujte xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Můžete xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx okolností, zejména xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, proveďte xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, z těchto xxxxxxx xxx izolovat xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX C. X. XXXXX. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx je X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx xxxx stonku (oddíl 3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx izolace C. x. xxxxx. sepedonicus xxxx být možná xx xxxxxxx selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx rostliny.

Izolace xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx bramboru xxxx částí xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní výsledek x&xxxx;xxxxx IF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. NCPPB 4053 xxxx PD 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx by se xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx podmínkám Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx rozetřít 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Petriho xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90 mm – xxx xxxx velikosti xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx počátečních 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx nástrojem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nástroje xx xxxxxx misku x&xxxx;xxxxxx, tento xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, a tím xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx a počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx po 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx provést xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx jedno x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

agar z kvasničné xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21 °C–24 °C xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. m. subsp. xxxxxxxxxxx viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rozetřete xxx zaručení xxxxxxx.

X xxxxxxxxx se rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, s rovnými okraji x&xxxx;xxxxxxx mají v průměru 1–3 mm.

Jednoduché Gramovo xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx další testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx kultury (xxx xxxxx&xxxx;9) a proveďte zkoušku xxxxxxxxxx (viz oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xxxxxxx xxx každý xxxxxxxxx test známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně přítomné xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx metod Lelliotta x&xxxx;Xxxxxx (1987), Klementa x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Veškerá xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx růstu, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37 °C	–
Aktivita xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 buněk/ml x&xxxx;xxxxx xx XX (dodatek 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX postup (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx specific xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx pozitivní, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Anteiso X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Anteiso xxxxx svědčí o přítomnosti X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z těchto kyselin, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx pohybuje xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx test xxxxxxxx podle (Smith x&xxxx;xxx., 2001).

10. KONFIRMAČNÍ TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus.

10.2 Naočkujte 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 týdnů xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, které po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (viz oddíl 7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx po 3&xxxx;xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus.

10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] na xxxxxxxxx médiu XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx pufru, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx buněk xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx suspenze odpovídající xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx jako obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinná ředění x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx při teplotě –16 až –24 °C xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test proveďte xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx zjištěn x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15 min.

2.2 IF-pufr-Tween

Tento xxxx se používá x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx IF.

2.3 Fostátový pufr x&xxxx;xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx okénka sklíček xx XX testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx jamkami x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx živný agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx složky médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 mg/ml) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx acid (Sigma) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pro PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx se xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx PSA-1	5′- xxx xxx gtg xxx xxx gaa aa-3′
Primer XXX -X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx NS-7-F	5′- xxx xxx ata aca xxx xxx tga xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx gca xxx xxx cct xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx následujícího programu:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx při teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 minuta xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
	vi)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx primerů)
	vii)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx kopie)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 minut při xxxxxxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx možná xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx s enzymem Bgl XX po xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx voda (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Tris Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Gold) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx primerů XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X byla optimalizována xxx extrakci xxxxxxx xxxxx bramboru za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;6.1 písm. x) x&xxxx;6.2). Při použití xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx cat xxx xxx acg -3’
Xxxxxxxxxxxx eubakteriální sonda XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxx chráněný xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tris-HCl	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 ng/μl

Připravte xxxxxxxx hybridizačního roztoku xxxxx xxxxxxx v tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 μl hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx voda XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx lehké xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Během xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Vysejte semena xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx substrátu. Přepichujte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx sterilního pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24 °C,
	noc:	15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 ml 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx destilované xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx draselný	2 g
Destilovaná voda	300 ml

Pevné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte xx xxxxxxx a fixujte zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx minuty.

5.	Opláchněte xxx xxxxxxx vodou a vysušte xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx safraninovým xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. G., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of light xxxxxxxxxx. V: Manual xx methods xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx xxx xxx detection xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. XXXX Xxxx., č. 17, 1987, pp. 1–10.

8.	Jansing, X. x&xxxx;X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. A., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Billing x&xxxx;X. C. Hayward, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. appl. Bact., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, R. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. et Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx potato xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Li, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Mills, X., Xxxxxxx, B., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx chain reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, C. S., 1959. Xxxxxxxxxxx studies xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx tubers xx XXX-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. D., 1967. A guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx the XXX-X1 Ralstonia solanacearum xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, P. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Antonie xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. a A. X. X. Akkermans, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

PŘÍLOHA II

1.

Při xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx ve vyšetřovacím xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx metod xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, které xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx možno xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx není xxxx xxxxxxx postup xxxxx ukončen.

Zadržení xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kontaminace xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce xxxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, které/á xxxx x&xxxx;xxxxx produkčního systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx označeným za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), včetně těch, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx v takovém/vých xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx období, xxx se xxxxx xxxx xxxxxxxx označené xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx zařízení, xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx přijít xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx uvedených v článku 6 hlízy xxxx rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx rostlinám, xxxxx xxxx označeny za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx se, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx mohl xxx negativní, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx souvislosti. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonově xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx testování xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce.

2.

Pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zásob xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx xxxxx stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, alespoň:

—	název xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (konzumní, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx stát, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx oznámit dotčenému xxxxxxxxx státu/státům xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx číslo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx ukončení xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx popis xxxxxxxxx provedeného x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx partií x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx nebyla xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i ohniskem/y, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně kontrolovaná xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělskou půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dodávky na xxxxxxxxxxxxxx xxxxx s úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx, u kterého xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx xxxxxxxxxxx s výše xxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx států xxx xxxxxx vzájemném informování xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx souhlasem odpovědných xxxxxxxx subjektů členských xxxxx, v nichž se xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx jako konzumních xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, balených pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx s vhodným xxxxxxxxx na likvidaci xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx děje xxxxxxxx xxxx po xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému zpracování, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx dodání xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx odvozových xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx odpovědnými xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, u kterých xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx vymezené xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx v čl. 7 odst. 4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a):

a)

na xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx nejméně xxx pěstitelských let xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují žádné xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx hrozí zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, xx povolena xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

—

ve xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx brambory, se xxxxxxxx použijí xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx a udržuje xxxxx xxxx xxxx stálá xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx xxxx xxxxxxxx pěstitelských xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx a sklizené xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx subjekty xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xx žádné xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx smí xxxxx xxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx, která xxxx uvedena x&xxxx;xxxx 4.1, a to buď xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx dobu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a na každém xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx postupem xxxxx přílohy I;

c)	neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v místě produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

d)

v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxxxx xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx ani osivo, xxxxx xxxxxx produkce xxxxxxxxx úředně sledovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výměny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxx 4.1, členské xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx prostory x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx bodu 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx nejméně xxx pěstitelských xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými úředními xxxxxxxx kontrolu xxxxxxxx, xx kterých xx xxxxxxx nebo skladují xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jakož x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx používanou k produkci xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx této oblasti xxxx xxxxxxx jen xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx kontrolou, x&xxxx;xxx xx po xxxxxxx xxxxxxxxx brambory na xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byla xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxx uvnitř xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx potřeby program xx xxxxxxx všech xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx:

i)

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx vyřazených brambor x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x xxxxxx odpadového xxxxxxxxx) se zlikvidují xxxxx:

—	xxxxx likvidací na xxxxxx schváleném místě xxx likvidaci xxxxxx, x xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxx na xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx nehrozilo xxxxx riziko ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, pokud xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Tekutý xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx na povrchu xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. x).

Xxxxx xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx po xxxx alespoň 30 xxxxx před xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx schválení x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx odpad mohl xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxxxx členským státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx se použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.