EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. června 2006,

kterou xx xxxx přílohy xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Rady 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Jedním x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, předešlo xx xxxx výskytu x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx výskytu xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx a prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx týkajících se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v přílohách xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx o postupy xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx jak x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx postupy, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx ně vypracovány xxxxxxxx předpisy xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, která xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx v příloze této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxx xxxxxxxx a srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, které xxxxxxx v oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx vyhlášení v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx unie.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, s. 2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a budou xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními orgány xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly a jejich xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx zamezení kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX vyžaduje izolaci x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční schéma xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením z výskytu xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx jednoho screeningového xxxxx není xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx

&xxxx;

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx nebo se xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx být příznaky xxx kontrole xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx x&xxxx;xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxx části xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní partie. Xxxxxxxxxx děložní lístky, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx systému, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx sýrové xxxxx. Xxxxx exsudát xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx a příznaky na xxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx době xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx střední xxxx hnije s prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poškození x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede k zpomalení xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx vhodně použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství hlíz.

—	Validace xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Použijte xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí prostředky xxxx každým vzorkem. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx této xxxxx xx naříznutí hlízy xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx xx být xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) by xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, pokud to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx a růst xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za použití xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby pro xxxxx vzorek bylo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR test, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx být použit XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5 Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.6 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx na X. x. xxxxx. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx xxxxxx, promíchejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx testování xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxxxx xxxxxxxx v chladícím boxu xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, aby xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx i pro xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx testy.

3.2 Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx zahradnických nůžek xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 xx ze xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxx následujících xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx při teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx nebo maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx trvat 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou polovinu xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx XX test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je IF xxxx používán jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky proti xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo na xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx být xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx může být xxxxxxx proveden na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx odstranit xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx srovnávacím xxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, a nepovinně v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C) xx se mělo xxxxx možnosti použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx o průměru xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu stejným xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx vhodné 15 µl – pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou xxxx xxx použít jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15 µl – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2 Vysušte kapky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Fixujte xxxxxxxxxxx xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx plamenem xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx v suchém boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

ii)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx pracovní ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka na xxxxxxxxx xxxxx. Pokryjte xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Umyjte ponořením xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (dodatek 3) nebo xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx počtem xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx v určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx ve stejném xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx a morfologií v titru xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x&xxxx;xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xx považuje xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx vyšetřovací test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx NCPPB 4053 xxxx PD 406) v 0,01 M fosfátového xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte supernatant x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx a inkubujte xxxx noc xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μl 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut na 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	okénko 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	okénko 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX EDTA, xX 8,0). Tento roztok xxx skladovat, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při pokojové xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx lyzozymu 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μg.ml–1 v pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) x&xxxx;45 μx na 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx horkou xxxxxx xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx každé xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl vzduch. Xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = UPW), 1 l 1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167&xxxx;xx 3x hybmix a 833 ml XXX). Předinkubujte každou x&xxxx;xxxx ve xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx sklíček.

5.2.9 Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx UPW x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) do každé xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru a částí xxxxxx xx xxxxx xx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx často než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže jsou xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx použití rhodaminového xxxxxx pozorovány v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103&xxxx;xx 104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla a protokoly. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx DNA. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx zkušení laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx cílovou DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx na 1 ml X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

—	pokud xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx popsané pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx metodou XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx extrakt xx xxxxxx a umístěte do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx mikrozkumavku xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1&xxxx;xx v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) a inkubujte xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl Xxxx XXX® xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20 xxxxx při 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx fázi xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v DNA xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx stát nejméně 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx xxxxxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Kit) xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx desetinný roztok xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx použita do xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího pufru (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) agarózového xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA barvením x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx x) po xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s tímto mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (krátké vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor restrikčního xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx typický xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, pokud byl xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx C. x. xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx a vzoru (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx s druhou sadou XXX primerů (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx s C. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné zjištění 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (příprava viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx z oddílu 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x&xxxx;xxxx uvedených xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx rostliny xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx inokulací 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rostlinu xxxx xxxxx prsty a pipetou xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx děložními lístky x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx možno x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Inkubujte xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vlhkosti (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C a optimální xxxxxxx xx 21 °C. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx i růstové komory xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx druhý.

7.8 Pravidelně xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale než xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Povadlá xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx déle trvá xxxxxx do vyvinutí xxxxxxxx, xxx větší xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx a nebo xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx jiných xxxxxxxx xxxx hub přítomných x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a E. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Erwinia xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx velmi xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jediným xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jelikož xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, mělo by xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (macerace xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX nebo XXX xx šťávě x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává v rostlinách xxxxx vejcoplodého jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je test xxxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují typické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol nejsou xxxxxxxx zjištěny.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX C. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx je X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx náročný xxxxxxxxxx, xx možno ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx hlízy xxxx xx stonků rostliny.

Izolace xx xxxxxxx ze xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 nebo XX 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx naprosto xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx na médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, že xxxxxxxx xx obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx použití pomůcek xxxxxxxx k roztěrům (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxx misku s agarem xxxxxxx xxxxxxxxx a následné xxxxxxx xxxxx nástroje xx druhou xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4 Počáteční kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx kolonií podobných X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx počítáním po 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se xxxx pěstovat na XXX médiu; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx provést xxxxx, xxx jsou média xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21 °C–24 °C xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx velikosti špendlíkové xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx viz internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

8.2.2 Znovu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Typické xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx vybrat kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxx (viz oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně přítomné xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx šesti xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx růstu, xxxxxxxxx po dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– nebo slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx dvojnásobného xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

Xxxxxxxxxx 100 µl suspenze xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx vodní lázni xxx xxxxxxx 100 °C xx dobu 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx XxXX do konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xx xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

d)	Identifikace X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4 FISH xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx stejné reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °C (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

Test XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx o přítomnosti X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxx xxxxxxxx xxxxx (Smith x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk na xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 pravých listů (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx příznaky infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována za xxxxxxxxx formu X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozdrťte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx dobu 3–5 xxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx typických xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx de Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-hodinovou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx hustotu xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx obvykle xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které xx xxxxx, že xxxx napadena X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx do xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinná xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx negativní kontroly. Xxxxxxxxxxxxx proto opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx proveďte xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v nejméně 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx resuspenzi a ředění xxxxxxxx z výkrojků x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX test

2.1 Pufry xxx IF (10 xX xxxxxxxxx pufr xx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), pH 7,2)

Tento xxxx xx používá k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 k pufru xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx použití xxx extrakci xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x atd.)

Vypočítejte počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Živný xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15 min.

Médium x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °C xx dobu 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx na 50&xxxx;°X xxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002&xxxx;x, amphotericin X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx v zásobě roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) v 96 % xxxxxxxxx, amphotericin X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Cycloheximide (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Zásobní roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po přidání xxxxxxxxxx je trvanlivost 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 buněk C. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 ml vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx se skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx ctt xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- gag xxx ata xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx gca xxx xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX = 377 xx (sada NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx NS-8-R (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx PCR

Postupujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 sekund xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro použití x&xxxx;xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití jiných xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) xx), v), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 bp x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx voda (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Tris Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx primerů XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. a) x&xxxx;6.2). Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx cat xxx tgc xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- gct xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXXXX RUKAVICE X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9 ml molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx jej chráněný xxxx prachem xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx až 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x&xxxx;xxxxxxx. Xxx každé sklíčko (xxxxxxxxxx dvojmo 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx voda XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx všechny roztoky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx sterilního xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpusťte 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx amonného x&xxxx;80&xxxx;xx destilované vody.

Smíchejte xxx roztoky.

Lugolův xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	300 ml

Pevné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx do xxxx x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx a nechte xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx minuty.

5.	Opláchněte pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx pomocí xx kapkách xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx pod tekoucí xxxxx a vysušte savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx safraninovým xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx modře, gramnegativní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis of xxx xxxx rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. G., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic significance xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- and intra-specific xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX method xxx xxx detection xx xxxxxx ring xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in potato. XXXX Bull., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Jansing, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10.	Klement Z.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. A., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx coryneform bacteria. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Lelliott, R. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. A determinative scheme xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, B., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Specific detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. sepedonicus by xxxxxxxxxxxxx of three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Rainey. 1999. Identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Pastrik, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx potato tubers xx BIO-PCR xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. X., 1967. A guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx xxx rapid xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between laboratories: xxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxx každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx který xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích testech) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxx test/y, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady,

dokud xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx je třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx postupu xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a),

—	místo/a xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), včetně xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo prostřednictvím xxxxxxxxxx dodavatele,

—

hlízy nebo xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx během xxxxxx, xxx xx hlízy xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx místě xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambory z míst xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx zařízení, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx přijít xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx označenými za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x důsledku xxxxx uvedených v článku 6 hlízy xxxx rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vztah x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx organismus mohl xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx souvislosti. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxx přítomnosti organismu xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (konzumní, xxxxx atd.) a v případě xxxxxxx kategorie xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx stát, v němž xxx výskyt potvrzen, xxxxxxxxxx oznámit dotčenému xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx odesílatele a příjemce,

—	datum xxxxxxx partie brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx míst xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx vylučuje riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko úniku xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělskou půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dodávky xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx, u kterého xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx xxxxxxxxxxx s výše xxxxxxxx nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů dotyčných xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx souhlasem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx změnu xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx likvidaci xxxxxx. S brambory určenými x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx tak děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx odvozových xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metodami xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, u kterých xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx kontrolou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

na xxxx označeném za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx

—

xxxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx přijmou xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují žádné xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx jdoucích xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx prostým xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx I;

—

ve xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx činit alespoň xxx roky, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxxx použijí xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx označení xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, a

—	pozemek xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx výsadbou shledáno xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxxxxx produkce xx xxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx a sklizené xxxxx xx xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx X;

xx xxxxx xxxxxxxxx polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx označeném xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx konzumní,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx se smí xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx úředně xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a které xx xxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx produkce jiných, xxx xxxx, která xxxx uvedena v bodu 4.1, x&xxxx;xx buď xx sadbu nebo xxxx xxxxxxxx brambory,

—	alespoň xx xxxx třetího xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx přítomných xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx postupem xxxxx přílohy X;

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx produkce, kde xx možné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty a dezinfekce xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx z minihlíz xx mikrorostlin získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx příslušných metod xxxxx xxxx 3;

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx období:

—	zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxxxx zařízení, xx kterých xx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx i prostory, xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx k produkci xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx použita xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxx brambory xx xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx podle xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx uvnitř oblasti xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby program xx xxxxxxx všech xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxxxx slupek) x xxxx xxxxx xxxxx související x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx a jiného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx likvidací na xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx být xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx x xxxxxx být izolován xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxx Komisi x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

ii)

Xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx písm. i).

Xxxxx xxxxx musí být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X v jádře xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx likvidací, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx podléhajícím xxxxxxxx xxxxxxxxx a pod xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx nehrozilo xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, že xx odpad xxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou půdou. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx oznámit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.