Plné znění - 32006L0056

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru;

ii)	zjištění Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx a budou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx zamezení kontaminace xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx vzorku, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) pozitivní, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 směrnice 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx s potvrzením patogenity.

1.   PREZENTACE XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogenu, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii xxxxx.

&xxxx;

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

&xxxx;

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx se příznaky xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx až xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx rostou, i když xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx jsou listy x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx systému, xxxxxxx xxxxxx pupku. Prstenec xxxxxx cévních xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx zbarvení než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx pletiva mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou v tomto xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx a mohou xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část se xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky maskovat x&xxxx;xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. Intenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx na vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx použít xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné ošetření xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx oschnout xx vzduchu. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx vyžadován) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx má provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx výkrojky vodivého xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx minimum (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx do xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx) by měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx nádoby znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávejte xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx po xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3), xxx v mixéru (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150 mm × 250 mm; sterilovaný xxxxxxx) za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové kontaminace xxxxxx. Učiňte bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby pro xxxxx xxxxxx bylo xxxxxxx čerstvě sterilizované xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx použit XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakci odstřeďováním xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Ralstonia xxxxxxxxxxxx a 500 µl xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Extrakty xxxxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx IF xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx pro kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, která xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1   Pomocí xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx část o velikosti 1–2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx následujících xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx nebo maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx v oddílu 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx části. Xxxxx xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4.   IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx a jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx být jako xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pro každou xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx stanoven xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Používejte validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx lze xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx paralelní xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx vhodné 15&xxxx;µx – pro xxxxx xxxxxx objem zvyšte) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

ii)

Pro jiné xxxxxx: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém pufru. Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx dobu (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX testu:

i)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) a dvojnásobný xxxx (2T).

ii)	Podle přípravy xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 písm. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx antiséra/protilátky
Vzorek 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2
	6	7	8	9	10

4.3.1   Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx papír. Pokryjte xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx okénku musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte se xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2   Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Umyjte xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Tween (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7   Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1   Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a kolem xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být při xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

i)

Při xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx je považován xx potenciálně xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 až –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx testován xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontroly připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx NCPPB 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

Následující xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx dobu 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte a inkubujte xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16 µl xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x&xxxx;xx neředěný a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. V případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	okénko 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, pH 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx skladovat, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Potom ponořte xxxxxxx do demineralizované xxxx, pouze xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo xxxxxxxx 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx každé xxxxx a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

5.2.2   Sušte xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% etanolu pokaždé xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx vzduchu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx horkou plotnu xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4 okének na xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx každé xxxxxxx 2 krycími sklíčky (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx pod xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7   Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx water = UPW), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx podložní xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák sklíček xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1   Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2   Hledejte xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3   Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx xx 1 ml X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních substrátů xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA x&xxxx;xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx a umístěte do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95 °C xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx v 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl Easy XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx DNA® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20 xxxxx při 4&xxxx;°X pro oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1 ml 100&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx stát xxxxxxx 20 minut při xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Xxxxx Kit) xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, že xxxx při xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční směs xxx XXX v prostředí, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx UPW, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Používejte xxxxxx xxxxxx DNA, např. 100 bp xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bromidu (0,5&xxxx;xx xx l) po xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3   V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty elektroforézou xxxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx také opakováním xxxxx s druhou sadou XXX primerů (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx na x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx negativních xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx celý xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, xxxx xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2   Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 dny xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx pravým xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, xxx xxxxxxx xx peletové xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23 G). Vzorek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxx kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pufrem xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) a zalévejte xx xxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx C. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx kontroly a negativní xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při hnojení, xxxxxxxx, kontrole a jiné xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx druhý.

7.8   Pravidelně xxxxxxxx 8. dnem prověřujte xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Počítejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx do vyvinutí xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx a nebo xxxxxx xxxx xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx hub xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a E. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx i populace saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jediným xxxxxxxx xx zčernání xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx pletiva xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) média (xxx xxxxx&xxxx;8). Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10   Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx dokonce x&xxxx;xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx vhodná (xxxxxxxxxx) xxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a potvrďte xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, z těchto rostlin xxx izolovat bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx předpokladu, xx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx ukončena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx izolována, následně xxxxxxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx hlízy xxxx xx xxxxxx rostliny.

Izolace xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx stonků x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale u nichž xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx xx ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Testujte xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.

8.1   Selektivní xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle v infikovaných xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx rozetřít 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a následné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx postup xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu zředění.

8.1.3   Inkubujte xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4   Počáteční kontrola xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx a počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx počítáním po 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx provést dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx jedno x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (složení xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx z kvasničného xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx během 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rozetřete xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, s rovnými xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další testování.

8.2.3   Identifikujte xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury pravděpodobné xxxxxxxxx kultury C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx metod Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx po dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx dextrózového agaru.

Testy	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37 °C	–
Aktivita xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx škrobu	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx H2S	–
Využití xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2   IF xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk/ml x&xxxx;xxxxx xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku nebo xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx čerstvě připraveného XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24 °C xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus specific xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (FAP)

a)	Pěstujte xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx teplotě 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx FAP xx pozitivní, pokud xx profil podezřelé xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx pro xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx se však xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxx (Smith x&xxxx;xxx., 2001).

10.   KONFIRMAČNÍ XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx inokulum xxxxxxxxx 106 buněk xx xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus.

10.2   Naočkujte 5–10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 týdnů xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx žádné příznaky xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.8), xx se měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale nepřesahujících 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx MTNA a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx dobu 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

---

---

---

PŘÍLOHA II

1.

Při každém podezření x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx: — xxxxxxx hlízy, xxxxx xxxx součástí vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, — xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx test/y, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x — xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx není xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxx v odstavci 1, a — vzorek xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxxx nebo rostliny, a — izolované xxxxxxx organismu nejméně do xxxxxxx měsíce xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx: — xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x), — xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx těch, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zařízení a vybavení xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx dodavatele, — hlízy nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx nebo nacházející xx v takovém/vých xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx se xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, — xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, — xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx označenými za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), — xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx předměty xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, — x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v článku 6 hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vztah k hlízám xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx označeny za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx se, xxxxxx výsledek xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx souvislosti. Xxx potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonově příbuzných xxxx xxxx xxxxxxx xxx provést xxxxxxxxx xxxxx, x — xxxxx/x produkce xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx: — xxxxxxxx ostatních xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx brambory xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny, — společná xxxxxxxx a použití zásob xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: — Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx přítomnosti organismu xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, alespoň: — název xxxxxx xxxxxx xxxxxxx, — xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx kategorie xxxxxxxxx xxxxxxx. — Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných členských xxxxx xxxx do xxxxxx členského xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx informace xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.: — xxxxx xxxxxx partie brambor, — název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, — xxxxx xxxxxxx partie brambor, — objem/velikost xxxxxxx xxxxxx brambor, — kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx číslo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx v případě xxxxxxx, xxxx popřípadě xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx dodacího xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx. — Xx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx: — xxxxx xxxxxxxxx zamoření, — stručný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx, — xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx, — xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a u sadbových brambor xxxxxxxxx, — xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx nebyla xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxx, — xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx: — xxxxxxx jako xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné úpravě, xxxxx xxxxxxxx riziko xxxxxxx organismu, nebo — likvidace xx xxxxxx schváleném xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxx do životního xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx — xxxxxxx, xxxx — xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx, u kterého xxxx prokázáno, že x&xxxx;xxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo — jiná opatření, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům. Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedeného se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dotyčných xxxxxxxxx států xxx xxxxxx xxxxxxxxx informování xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx k likvidaci xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje: — jejich xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx dodávku x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx změnu xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx likvidaci xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxx — xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx pro přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx zpracovatelskému xxxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx — xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx schválení výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření organismu, x&xxxx;xxxx metody se xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, xxxxx xxxx členské státy xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a): a) na xxxx označeném za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) buď i) — během nejméně xxx pěstitelských let xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxx xxxxxxxx, — xx přijmou xxxxxxxx na odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x — xx nepěstují žádné xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; — x xxxxxx sklizňovém období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod podmínkou, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx dvou xx sobě jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx prostým xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je povolena xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx a sklizené hlízy xx testují postupem xxxxx xxxxxxx I; — ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po příslušném xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx činit xxxxxxx xxx xxxx, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxx xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1; xxxx xx) — xxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření — se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x — xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx xxxx stálá xxxxxxxx s častým nízkým xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx; — x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx brambor následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxxxxx produkce xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a sklizené hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X; x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx místě xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přesvědčeny, že xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx: — x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo nebo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nepěstují, xxxx — xx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx pěstovat xxxxx xxxx konzumní, — v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx se smí xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx úředně testovány xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xx pěstují xxx xxxxxx kontrolou na xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx xxxx, xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx, — xxxxxxx xx dobu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx následujícího xx xxxxxxxx zamoření xx sázejí pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx pod úřední xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, — x každém xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, a na každém xxxxxxxxxxx poli se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I; c) neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxx stroje a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3; d) v xxxxxxxxxx xxxxxxxx produkce, xxx xx možné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, — xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a na xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výměny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty a dezinfekce xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, — xx xxxxxxxx xxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxx xx mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž xxxx xxxxxxx opatření xxxxx xxxx 4.1, členské xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: x) xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx prostory x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx používány x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx příslušných metod xxxxx xxxx 3; b) neprodleně xx označení xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx: — xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx skladují xxxxxxxxxx xxxxx nebo xx s těmito hlízami xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx pronajímají xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx k produkci xxxxxxx, — xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vypěstovaná pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx sklizni xxxxxxxxx brambory na xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byla xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle článku 5 odst. 1 písm. x), — xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx od xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, — xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; x) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx program xx náhradu všech xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx IV xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx organismu:

x)

Bramborový xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx půdy, xxxxxx x xxxxxx odpadového xxxxxxxxx) xx zlikvidují xxxxx: — xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx — xxxxxxxx, xxxx — xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx prokázáno, že xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Tekutý xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx likvidace xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx být likvidovány xxxxx xxxx. x). Xxxxx xxxxx xxxx být xxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X v jádře po xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx — odstraněn xxxxx způsobem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx kontrolou, tak xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, že xx xxxxx mohl xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou půdou. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx musí oznámit xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx na xxxxx xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.