Plné znění - 32006L0056

PŘÍLOHA I

SCHÉMA TESTU PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (C. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx podílely na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx a budou zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Cms.

Z xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, z nichž každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii testů.

 

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx xx příznaky xx xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx na xxxxx sezóny. Kromě xxxx xxxx příznaky xxxxxx nebo xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx a zpočátku omezené xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx i přes xxxxxxx xxxxxx rostou, i když xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, žluté až xxxxxxxx mezižeberní partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx pouze menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků naleznete xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx sklovitost xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx svazků x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a příznaky xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum. Zpočátku xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. S postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích infekce xx objevují na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s červenohnědými xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx objevilo několik xxxxxxx, kdy střední xxxx hnije x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných hnilob xxxxxxxx. Možné jsou x&xxxx;xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3.   PŘÍPRAVA VZORKŮ

3.1   Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný bramborový xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xx provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx provést xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx teplotě a měly xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx ukončení xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávejte xx v nádobě xxx xxxxxxx pufru, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx maximálně 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Schnutí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx výkrojky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250 mm; sterilovaný xxxxxxx) xx použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx vzorek xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx přenosu DNA xx xxxxxx nebo xxxxx zařízení. Xxxxx xx být použit XXX test, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx jedno použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte jej xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 g po xxxx 10 minut xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5   Zahustěte xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě xxxx 4–10 °C a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx na X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx během testování xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup je xxxxxx pro kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx populace, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% a okamžitě osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v uzavření sterilní xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

3.2.2   Zpracujte xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po dobu 4&xxxx;xxxxx při teplotě xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx po xxxx 16–24 xxxxx chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3   Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx části. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou xxxxxxxx xxxxxxxxx s 10–25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx), xxxxx je nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx použít XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx prokázána jeho xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx pro dokončení xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx vždy polyklonální xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxx každou xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx mít XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo na xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 15 minut xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména pokud xxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při teplotě –16 až –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx možnosti použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Používejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky, xxxxxxx s 10 okénky o průměru xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu stejným xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (vzorků).

4.1   Připravte xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sedimentu: Napipetujte měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µl – xxx větší xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx: Xxxxxxxxx desetinná ředění (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro okénka x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15 µl – xxx větší xxxxxx xxxxx zvyšte) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx plamenem xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx měl xxx xxxx 1/2 (T/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx antiséra/protilátky
Vzorek 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Obrázek 2.   Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

4.3.1   Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx ředěním protilátek. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2   Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Umyjte xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 3) a následně x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

4.3.4   Umístěte xxxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx okénka pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka zakrytá xx vlhkém papíru xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1   Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vhodnými xxx excitaci XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Výsledek XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 × 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx negativní. Další xxxxxxxxx není nutné.

5.   TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24 nebo –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. m. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo PD 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96&xxxx;% xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx dobu 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (viz xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 M PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.   Rozmístění na xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2
xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	okénko 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Tris-HCl, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx xxxxxxxxx, ale xxx xx se xxxxx jednou zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μx proteinázy X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx každé xxxxx a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 minut.

5.2.2   Sušte xxxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou inkubační xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;1x hybmixu (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X xx xxxx alespoň 10 minut.

5.2.4   Připravte hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5   Umístěte xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6   Přikryjte xxxxx xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhké komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx vody (Xxxxx pure water = UPW), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx sklíček.

5.2.9   Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx promývacího roztoku 1/2 hybmix a nechte xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx UPW x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA nebo xxxxxxx) do xxxxx xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx imerzí. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (FITC) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx u pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3   Při xxxxxxxxx z jakékoli kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4   Existuje xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, ačkoli xxxxxx xxxx často než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6   Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopovém xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx typické jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx validovaná XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx metodě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx měli xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx biologii, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx k přenosu DNA.

PRC xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx byl xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	pokud možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx budou testovány.

Extrakty xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky.

Připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx metodou XXX, uvedenou v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lyzozymu xx 1 ml x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl Easy XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně míchejte xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15 000 g po xxxx 10 minut xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx vody (XXX) x&xxxx;xxxxxx stát nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte při xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx) xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 až 104 patogenních buněk xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx roztok xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2   Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v prostředí, xxx xxxxxxx kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3   Přidejte xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx UPW, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1   Rozdělte xxxxxxxxx XXX elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX, např. 100 bp xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s rostlinnými xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován s daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud byl xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx požaduje), za xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx s C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR k inhibici xxxxxx xxxxx, pokud xxxxx xxxxxx žádný x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které původně xxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a poskytují také xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx testované xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx xxxxx jednou x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx pouze rostliny xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx zajistili úplné xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx xxxx popsané xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx pravým xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx šikmý xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, řez xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

7.4   Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx xxx děložními xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 G). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx bramboru (xxx xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx sterilním xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7   Inkubujte rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké vlhkosti (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Buňky C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, anebo při xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx xxxx přenášet xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků. Počítejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. m. subsp. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxx xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx déle xxxx xxxxxx xx vyvinutí xxxxxxxx, xxx větší xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx k nízkým xxxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus než xxxxxx rostliny, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx přítomných x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx velmi xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jediným xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx infekcí Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx také xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém objeví xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx k izolaci za xxxxxxx xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin (xxxxxxxx xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx dezinfikujte xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) média (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, proveďte test XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, z těchto rostlin xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxx xxxxxxxx zjištěny.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx předpokladu, xx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, následně xxxxxxxxxxxxxx (viz oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx náročný xxxxxxxxxx, xx možno xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx pletiva xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx být xxxxx xx použití selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety z pupkové xxxxx hlízy nebo xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (viz oddíl 7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, připravujte xxxxxxxxx kontroly naprosto xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx mají být xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx před použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx alikvotní části xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx v infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx obvykle vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx NCP-88 médium (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Petriho xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nástroje xx druhou xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, a tím xxxxxxxxx xxxxxx zředění.

8.1.3   Inkubujte xxxxx v temnu při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx a počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx počítáním po 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se xxxx pěstovat xx XXX médiu; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx po 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (složení xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx z kvasničného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx klenuté xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx během 10 dní. (Xxxxxxxxxx typických xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

8.2.2   Znovu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, s rovnými xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx obecně přítomné xxxx nepřítomné v C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx metod Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X a po xxxxx xxxxx by měla xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx k žádnému xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Testy	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) testy	Inertní xxxx slabě oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2   IF xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx/xx v pufru xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného antiséra.

c)	Proveďte XX xxxxxx (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx XX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx čerstvě připraveného XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx specific xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX stejné velikosti x&xxxx;xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx profil podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. v rozmezí 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx test xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.   KONFIRMAČNÍ XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). U čistých xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx se po 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx MTNA a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

---

---

---

PŘÍLOHA II

1.

Při xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích xxxxxxx) xxxxx metod xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx potvrzeno nebo xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx: — xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, — xxxxxxxx zbývající výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x — xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx ukončen. Zadržení xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x — xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu lilku xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxx, x — xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kontaminace podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx: — xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a), — místo/a xxxxxxxx, které/á xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, — xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx během xxxxxx, xxx xx hlízy xxxx xxxxxxxx označené xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, — xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených v odrážkách xxxx, — xxxxxxxx zařízení, xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx, xxxx xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, které xxxxx xxxxxx xx xxxxx s hlízami nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x), — xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxx x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, — x xxxxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx se, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx organismus xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx souvislosti. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx nebo rostlin xxx xxxxxxx testování xxxxx, x — xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxx stanovení xxxxxxx rozšíření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, kde se xxxxxxx brambory nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, — xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: — Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx: — xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx, — xxxx/xxx (konzumní, xxxxx atd.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. — Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx, musí xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx výskyt potvrzen, xxxxxxxxxx xxxxxxx dotčenému xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako xxxx.: — xxxxx xxxxxx partie xxxxxxx, — xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele a příjemce, — datum xxxxxxx xxxxxx brambor, — objem/velikost xxxxxxx xxxxxx brambor, — kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx v případě xxxxxxx, xxxx popřípadě xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx dodacího xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx. — Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx: — xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, — xxxxxxx popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně stupně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, — xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx, — xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx zamoření, včetně xxxxx míst produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx s uvedením xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, — xxxxxxxxxxx o vymezené xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx, — xxxxx informace xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i xxxxxxxx/x, xxxxx si Xxxxxx xxxxxxxx vyžádá.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou: — použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné úpravě, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx — xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx — xxxxxxx, xxxx — xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx závod s úředně xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx, u kterého xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx — xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx nebo vhodná xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxxxxxx států xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx: — xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx dodávku x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx likvidaci xxxxxx. S brambory xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx místě xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx xxxx xxxxxxxx nebo po xxxxxx a dezinfekci, nebo — jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx zpracovatelskému xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx — xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx a dezinfekci předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, xxxxx xxxx členské xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech produkce xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x): x) xx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx x) — xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, — xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x — xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx planě rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxxxxxx plodiny, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; — x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, je xxxxxxxx xxxxx produkce konzumních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X; — xx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx xxxx, xxxxx xx xxxx pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx xx) — xxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx označení xxxxxxxx — xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, a — pozemek xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo intenzivní xxxxxxx; — x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X; x) xx xxxxx xxxxxxxxx polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx subjekty xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx: — x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx osivo xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx — xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx konzumní, — v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx těch, xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, a to xxx xx xxxxx nebo xxxx konzumní xxxxxxxx, — xxxxxxx xx dobu třetího xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, — x každém xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X; x) xxxxxxxxxx xx označení zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxx stroje x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3; d) v jednotkách xxxxxxxx produkce, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx, — xx xxxxxxxx žádné xxxxx, xxxxxxxx ani xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a na xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx a dokud následně xxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, — xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx z minihlíz xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx: x) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx prostory x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx používány v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx příslušných xxxxx xxxxx bodu 3; x) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxxxxx: — xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx s těmito xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx i prostory, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx k produkci xxxxxxx, — xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxxxxx xxxxx porostů xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx jen xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, a aby xx xx sklizni xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), — xxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx od xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx zásobami xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, — xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; x) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx program xx xxxxxxx xxxxx xxxxx sadbových xxxxxxx xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné riziko xxxxxx organismu:

x)

Bramborový xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx půdy, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxxxxxx xxxxx: — xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx místo x xxxxxx být izolován xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx — xxxxxxxx, xxxx — xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření organismu; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Xxxxxx odpad: xxxx likvidací xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx likvidovány xxxxx písm. x). Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X v jádře po xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx likvidací, xxxx — odstraněn xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx mohl xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx půdou. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx popsané x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.