EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. června 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Rady 93/85/XXX x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) o ochraně proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Jedním x xxxxxxxxxx organismů škodlivých xxx brambory xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx et al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx stále xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX stanovila podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx výskytu a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx několika xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, jsou xxxxxxxxxxx xxx v poslední xxxx xxxxxxxx postupy, xxxx je fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX) a polymerázová xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx i zlepšení xxxxxxx xxxxxxxxxxx prvků xxxxxxxxxx xxxxxxx zjišťování a identifikace.

(7)

Xxxxx xxx o technické xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxxxxxx vysledování organismu, xxxxx potřebné pro xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x xx vymezených xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená touto xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx. Neprodleně xxxxx Komisi xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx a touto xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí být xxxxxx odkaz učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx vstupuje x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, s. 2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx et xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Davis xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, validovaná činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není považován xx infikovaný Cms.

Z xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je určen xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogenu, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx bramboru

V evropských klimatických xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx a zpočátku omezené xx xxxxxx listů. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx části xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní partie. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jsou listy x&xxxx;xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx slabá sklovitost xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx systému, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx mít nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx svazků a stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx a příznaky xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích infekce xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s červenohnědými xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx době xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x&xxxx;xxxxxxxx příznaky. Barevné xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx vzorcích xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX test, pro xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí je xxxxxxxx užitečný (není xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX test nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx konci každé xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové části x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo by xx provést xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx naříznutí xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a měly xx být uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx do ukončení xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II.

3.1.2 Shromážděte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx pufru, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx při teplotě xxxxx xxx 24 °C xxxx po xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx (např. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx PCR xxxx, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx zařízení. Pokud xx xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavky na xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5 Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 minut (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) při teplotě xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx C. x. xxxxx. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx a 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx koncentraci 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 až 48 hodin.

3.1.7 Je nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění latentních xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx dezinfikovaného nože xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx přímo nad xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx dezinfikujte xxxxxxxx 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx při teplotě xxxxx xxx 24 °C xxxx xx dobu 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Stomacher nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části stonků x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx nebo maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3 Po usazení, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx na 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (měsíce), xxxxx je xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX TEST

Princip

Doporučuje xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Během xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v pracovním xxxxxx (WD) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx vzorku odstranit xxxxxxxx 1&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx sklíčka xx xxxxxx fixována plamenem (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve výluhu x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při teplotě –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx mikroskopická xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx o průměru xxxxxxx 6 mm.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu stejným xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx okénka xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95 % etanolu xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V případě xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx co možná xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx roztoků protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx xxx být xxxx 1/2 (T/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx na test x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx resuspendované pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte se xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7 Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx. Buňky musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky nebo xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okéncích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx je považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 buněk na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx se XXXX xxxx provede xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx být xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24 nebo –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx PD 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxx peletu v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X po xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. V případě, xx xx třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx stejné množství 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx nad plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX EDTA, pH 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx skladovat, xxx xxx by se xxxxx xxxxxx zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx dobře pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo lyzozymu 50 μx proteinázy X&xxxx;40–400 μx.xx–1 v pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX CaCl2, xX 7,4) do xxxxx xxxxx a inkubujte při xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 minuty. Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;1x hybmixu (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl xx 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx do každého xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x xxxxxx a 833 ml XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx krycí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx podložní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx dobu 15 xxxxx v kádince s 1x xxxxxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX a položte xx na filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx a celé sklíčko xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx ihned x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro epifluorescenční xxxxxxxxxxx se zvětšením 630x nebo 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx buňky C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo málo xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost FISH xxxxx. V peletách z pupkové xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx mohou xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, ačkoli xxxxxx xxxx xxxxx xxx x&xxxx;XX testu.

5.3.5 V úvahu xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx testu XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx v žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx obsahují méně než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX test xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další testování xxxxx postupového diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx. Pro dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx validovaná XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PRC xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx resuspendovaných pelet, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (příprava viz xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx na 1 ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	pokud možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních substrátů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s validovanou metodou XXX, uvedenou x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1 ml x&xxxx;10 xX Tris XXx, xX 8,0) a inkubujte xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx Xxxx DNA® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx míchejte xxxxxxxx, až usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7.	Přidejte 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx a míchejte xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1 ml 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500 µl 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx při 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Kit) xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v prostředí, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného protokolu (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx UPW, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx XXX elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx vzorku smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího pufru (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Používejte xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30–45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx s vhodným restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx s C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx k extraktům ze xxxxxx, které xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx základní xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxx by xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx celý xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených metod (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx rostliny xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx úplné xxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2 Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx napětí xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx šikmý xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx pomocí injekční xxxxxxxxx s podkožní jehlou (xx méně xxx 23 G). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx vodní xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx známé kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx pufrem stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4 týdnů při xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny pro xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx oddělení mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx věnujte maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx před xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx z jednoho xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx počínaje 8. dnem xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx vzhled. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý okraj. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, tím xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx hub přítomných x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx hlízy. Xxxxx x&xxxx;xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx podobné xxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx infekcí Xxxxxxx chrysanthemi. Jiné xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx dezinfikujte xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx IF xxxx XXX na šťávě x&xxxx;xxxxx a izolujte na xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx okolností, zejména xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx inkubační xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testované xxxxxxxx xxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx předpokladu, že X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx infikovány C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx náročný xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx je izolace xxxxx x&xxxx;xxxxxx pletiva xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx xxxxx nebo xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx xxxxx stonků x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx na xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx před xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Testujte xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx koncentracích, lze xxxxxxxxx obvykle vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Xxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné velikosti xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx počátečních 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx misku x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a následné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx misku x&xxxx;xxxxxx, tento xxxxxx xx závěr xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx dnech, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx po 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx pěstovat xx XXX médiu; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx provést xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na jedno x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx z kvasničného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubujte xxx teplotě 21 °C–24 °C xx dobu maximálně 10 xxx.

X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, obvykle tvoří xxxxxxx xxxxxxxxx klenuté xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx okraji x&xxxx;xxxxxxx xxxx v průměru 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury (xxx xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití nejméně xxxx následujících testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx obecně přítomné xxxx nepřítomné x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxx metod Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Veškerá xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx provádět za xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) testy	Inertní xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx při 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza škrobu	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (dodatek 3).

x)	Xxxxxxxxx série dvojnásobného xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX postup (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx teplotě 100&xxxx;°X xx dobu 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx do použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (např. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX stejné velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (FAP)

a)	Pěstujte xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný postup XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Anteiso X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Curtobacterium, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také obsahují xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx pro tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx test xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10. KONFIRMAČNÍ XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx x&xxxx;3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24 °C xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). U čistých xxxxxx by mělo xxxxx 2 týdnů nastat xxxxxxx vadnutí, avšak xxxxxxxx, které po xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst lilku xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována za xxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky infekce xxxxxxxxxxx části stonku 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozdrťte a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fostátového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx nanesením xx XXXX a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X a sledujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Institute, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx vyšetření xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] na xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx obvykle xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100 µl xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx proto xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 ml, xxxx získáte 9 kopií xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24 °C xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být nejprve xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX xxxx být X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v nejméně 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pupkových xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Tento pufr xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx IF.

2.3 Fostátový xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx IF x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2.

Vypočítejte xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8–24 xxxxx xxxx okuláru)
		K	=	tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a
	F	=	zřeďovací xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus

a) Obecná xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Médium x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktem x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 litru média x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
NaCl	0,05 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO₄. H₂O	0,015 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Agar (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, amphotericin X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 mg/ml) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte v zásobních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx v destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 buněk C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx testování by xxxx nemělo vykazovat xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný PCR xxxxxxxx s interní PCR xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx gtg ggg xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx ctt xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx tga xxx -3′
Xxxxxx NS-8-R	5′- xxx xxx ggt xxx cct acg xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z DNA X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18S xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 µl
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty při xxxxxxx 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx možná xxxxx modifikace kroků xxxxx xx), iii) xx), x), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX amplifikované x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bgl XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Xxxx Acetát XXXX (XXX) pufr, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx primerů XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 písm. x) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- xxx xxx xxx xxx cat xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- gct gcc xxx cgt xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX RUKAVICE X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx použití.

iv)	Poznámka: Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 mM (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx lehké xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2 g krystalové xxxxxxx v 20 ml 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx roztoky.

Lugolův jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx barvení

1.	Připravte xxxxxxx, xxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx roztokem krystalové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte pod xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx a vysušte xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx pomocí xx kapkách xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx za jemného xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the detection xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. G., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx bacteriology, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, R. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. Van Vaerenbergh. Xxx interpretation xx xxx EC method xxx xxx detection xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Physiological capabilities xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. A., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, R. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. de Boer, 1995. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx xxxxxx region xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., W. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Identification and xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. J. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Pastrik, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Gram-positive xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX-XXX xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. B. X., 1967. X&xxxx;xxxxx to xxx identification of xxx genera xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, N. X.; Hennesy, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx laboratories: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. International Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Wullings, B. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, by xxxxxxxxxxx in situ xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx testech) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx potvrzeno nebo xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx rostliny, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx ukončen.

Zadržení hlíz xxxxxx případné testování xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx v odstavci 1, a

—	vzorek xxxxxxxxxx materiálu lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, a

—	izolované xxxxxxx organismu

nejméně xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx pěstované v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx v předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx období, xxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených v odrážkách xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, nebo xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, které xxxxx přijít do xxxxx s hlízami xxxx xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx, které se xxxxxxxx nebo jsou x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a staveb,

—

v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v článku 6 hlízy xxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž se, xxxxxx výsledek xxxxx xx organismus mohl xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x produkce xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx stanovení xxxxxxx rozšíření podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx následovně:

—

Bezprostředně xx xxxxxxxxx přítomnosti organismu xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx metod xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, alespoň:

—	název xxxxxx xxxxxx brambor,

—	druh/typ (konzumní, xxxxx xxx.) a v případě xxxxxxx kategorie sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx oznámit xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx a příjemce,

—	datum xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu nebo xxxxxxx číslo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx popřípadě xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx případě:

—	datum xxxxxxxxx zamoření,

—	stručný popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx míst produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx zamořená, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x ohniskem/y, xxxxx xx Komise xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx závod x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi a ostatním xxxxxxxx státům.

Jakýkoli zbývající xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx nebo vhodná xxxxxxxxx hlíz nebo xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem odpovědných xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů členských xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx k likvidaci xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxx, balených xxx xxxxxx xxxxxxx a použití, xxxxx xxxxxxxxxx změnu xxxxx, v místě s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. S brambory určenými x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx xxxx xxxxxxxx nebo xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dodání zpracovatelskému xxxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, že nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx výše xxxxxxxxx odpovědnými úředními xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx se xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, která xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx produkce xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) buď

i)

—

během xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod podmínkou, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň dvou xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, xx povolena xxxxx produkce konzumních xxxxxxx a sklizené xxxxx xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, který xxxx činit alespoň xxx xxxx, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xx xxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxx nebo xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx a udržuje ladem xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx intenzivní xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx výsadbou shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx I;

b)

na xxxxx ostatních xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx výše označeném xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, rostliny xxx xxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx certifikované sadbové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx konzumní,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx se xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx úředně xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx jiných, xxx těch, která xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, a to xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové brambory, xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli xx xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx produkce, xxx xx xxxxx úplně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a na xxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiálu hostitelských xxxxxxx xxxxxx přinejmenším xxxxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx udělen souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxx 4.1, členské xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

b)

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx nejméně xxx pěstitelských xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx kontrolu xxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx skladují xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx s těmito xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx oblasti xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxx brambory na xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx program xx náhradu všech xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Bramborový xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxxxx slupek) x xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x xxxxxx odpadového xxxxxxxxx) se xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx likvidací xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci odpadu, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx půdu. Xxxxx xxxx xxx přemístěn xxxxx xx xxxxx x xxxxxx být izolován xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

ii)

Xxxxxx odpad: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx písm. x).

Xxxxx xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X v jádře xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx před likvidací, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx způsobem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx schválení x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx opatření xx musí oznámit xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.