EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/ES

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx dne 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx brambory xx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et al. xxxxx. sepedonicus (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Organismus xx stále xxxxxxxxx x xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx ochranu xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, předešlo xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx zjištění výskytu xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření xx xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku v poznatcích x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a kromě xxxx praktické zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxx opatření.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx v přílohách xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx i zlepšení xxxxxxx xxxxxxxxxxx prvků xxxxxxxxxx xxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx zamořené xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx produkce, která xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx přijmou x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx a touto xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx státům.

X Bruselu dne 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Markos XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, s. 2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx xx al. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx al.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx karanténu rostlin.

Testovací xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, např. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů provedených xx xxxxxx, jak xx znázorněno v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx Xxx a musí být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx se xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté kultury X. x. subsp. xxxxxxxxxxx s potvrzením patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z infikovaného vodivého xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogenu, a následně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx kultura je X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx jednoho screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx testy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx na xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i přes infekci xxxxxx rostou, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Listy postižené xxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx děložní lístky, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx listy x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx svazků x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a příznaky na xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx pupkové xxxxx a mohou se xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx dochází k destrukci xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx xxxx se xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx s červenohnědými okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, kdy střední xxxx hnije x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx příznaky. Barevné xxxxxx řady xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3. PŘÍPRAVA XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx 1&xxxx;xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx vhodně použít x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je k dispozici xxxxx množství hlíz.

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) a mycí prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxxxx xxxxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx v případě, že xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx svazky omezte xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx by xx provést vizuální xxxxxxxxx této xxxxx xx naříznutí xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx korkovatět po xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx do ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx uchovány podle xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) za použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx za použití xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx pro xxxxx xxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (nože) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx zařízení. Pokud xx být použit XXX test, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4 Dekantujte xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte jej xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx mezi 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g po dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx by xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx pro xxxx xx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx účely. Přidejte xxxxxxxx glycerol na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je nutný xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i pro xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx část x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx země.

Části stonků xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx osušte xxxxx papírem.

Shromažďujte xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxx následujících xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte části xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx části. Jednu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx je xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx použít XX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test XX xxxx a jeho xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Během xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx xxx prováděn xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx extraktech. V případě xxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx odstranit xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), opětovným xxxxxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Používejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx o průměru xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná ředění (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx (xxx okénka x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx okénka xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 2.

4.2 Vysušte xxxxx xxx pokojové teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při teplotě 60&xxxx;°X) xxx plamenem xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx co možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

ii)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx podle xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx stejné xxxx množství použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx osušením.

4.3.4 Umístěte sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka pokryjte xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7 Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1X fosfátového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx olejovou nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx s žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky nebo xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx při zjištění xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx a částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

i)

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx považován xx potenciálně infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx než 5 × 103 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx negativní. Další xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx vyšetřovací test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx testování touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na ml (xxxx. kmen NCPPB 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx sklíčka s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (viz dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx rozpusťte peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dobu 30–60 minut.

5.1.4 Odstřeďujte xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	okénko 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	okénko 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci další xxx. Xxxxxxx by xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Sigma L-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx se xxxxx jednou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztát. Xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX CaCl2, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx a inkubujte při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% etanolu pokaždé xx xxxx 1 minuty. Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte sklíčka xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx každé xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl vzduch. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l sterilní xxxx (Xxxxx pure water = XXX), 1 l 1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka krátce xx XXX a položte xx na filtrační xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, pozorujte nejméně 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x&xxxx;XX testu.

5.3.5 V xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou morfologií, xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx obsahují alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX TEST

Principy

Použije-li xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. PCR xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx extrakt ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx DNA® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po dobu 10 minut při 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v DNA speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte při xxxxxxx –20 °C xx xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Xxxxx Xxx) xx xx mohly xxxxxx, xxxxx by xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx také interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx UPW, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx vhodný xxxxxx DNA, xxxx. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) po xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx s druhou sadou XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx získán žádný x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x&xxxx;xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na l ml xxxxxxx k extraktům xx xxxxxx, xxxxx původně xxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx použít x&xxxx;xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx celý xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx lilku jednou x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx níže xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 dny xxxxxxxxxxx, xxx xx snížilo xxxxxxx xxxxxx buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx xxxxxx listem xxxxx (přibližně 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2 Pomocí sterilního xxxxxxxx proveďte šikmý xxxxx dlouhý asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx začněte xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

7.4 Inokulace injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně infikovaných xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pufrem xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po dobu xx 4 týdnů při xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) a zalévejte xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx místa zajistěte xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx komory xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx druhý.

7.8 Pravidelně xxxxxxxx 8. dnem xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Povadlá xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx déle xxxx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x&xxxx;xxxx xxxxxx před ní.

Vadnutí xxxxx také způsobovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx k nim Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx a E. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Phoma xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxx Erwinia xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx velmi podobné xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx celé xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Proveďte xxxx XX xxxx XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx oddíl 8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, že X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v rostlinách xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx vhodná (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx zjištěny.

Biotest je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx ukončena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, následně xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou patogenity (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ji xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx a vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx ze xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují příznaky xxxxxxxx, xxx u nichž xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx provedena podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. NCPPB 4053 xxxx XX 406). Xxxxxx vyloučili xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly naprosto xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx každou nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho vhodnost xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 1/100 až 1/10 000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx velikosti xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx nástrojem a následné xxxxxxx téhož nástroje xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, tento postup xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, a tím xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx miskami x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxxx na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx se xxxx provést xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie podobné X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

živný xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními solemi.

Inkubujte xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx maximálně 10 xxx.

X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx během 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, s rovnými xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx mají x&xxxx;xxxxxxx 1–3 mm.

Jednoduché Gramovo xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx vybrat kolonie xxx xxxxx testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx kultury (xxx xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx C. x. subsp. sepedonicus xx použití nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx přítomné xxxx xxxxxxxxxx v C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx šesti xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37 °C	–
Aktivita xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx škrobu	– xxxx slabá
Tolerance 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX postup (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml ve xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx suspenze xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxx lázni xxx teplotě 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx při teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx do použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx použijte vhodné xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Boer, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou amplikony XXX stejné xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 buněk na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly.

9.5 Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °C (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx pro xxxx xxxxxxxx neobvyklá xxxxxxxx, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx ve všech Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX PATOGENITY)

Pro konečné xxxxxxxxx diagnózy C. m. xxxxx. sepedonicus a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk na xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). U čistých xxxxxx xx mělo xxxxx 2 týdnů nastat xxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých xxx růst lilku xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx se xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx dobu 3–5 xxx xxx teplotě 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx vyšetření xxxxxxxx testy XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx médiu XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx hustotu buněk xxxxxxxxx 1 až 2 × 108 xxx/xx. Toho obvykle xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx mikrozkumavky. Nechte xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní části x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství C. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test proveďte xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v nejméně 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (PVP-40)	Vázání xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1.	Vypočítejte xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (c).

2.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v okénku mikroskopického xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx a
	s	=	plocha xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x atd.)

3.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx živný xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx na 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, amphotericin X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx v zásobě roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, amphotericin X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po přidání xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx NCP-88

Živný agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50 °C přidejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003 g, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008&xxxx;x, Cycloheximide (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v zásobních xxxxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx v 50 % ethanolu, xxxxxxxxx B sulfát x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 buněk C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- ctc xxx xxx xxx xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- tac xxx gat gtt xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- gag xxx xxx xxx xxx xxx tga xxx -3′
Primer XX-8-X	5′- xxx gca xxx xxx xxx acg xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (sada XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Primer XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/µl) (1)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx xxx PCR

Postupujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta xxx xxxxxxx 64 °C (připojení xxxxxxx)
	xx)	1 minuta xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 sekund xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx kopie)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití jiných xxxxxx bude xxxxx xxxxx modifikace kroků xxxxx xx), xxx) xx), v), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkují xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx voda (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx pufr	48,4 g
Ledová xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (AmpliTaq xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx primerů XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx extrakci pupkové xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx homogenizační metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Při použití xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01:	5’- xxx xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx roztok xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96&xxxx;% etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tris-HCl	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx až 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 μl hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx lehké xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20 °C. Xxxxx xxxxxxx chraňte před xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx elektrickým světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Vysejte semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx substrátu. Přepichujte xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, pokud je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx lilku vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2 g krystalové xxxxxxx v 20 ml 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu amonného x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx tloučku v misce. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a nechte xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Lugolovým xxxxxxx roztokem a nechejte xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, nebo xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx a vysušte savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Publ XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. G., 1984. The xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx bacteriology, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. Van Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx XX method xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Bull., x.&xxxx;17, 1987, pp. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. x&xxxx;X. Rudolph, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, R. X., E. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx scheme xxx the fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Bact., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, R. X. x&xxxx;X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Skapt. et Xxxxx.) xx potato xxxxxx. EPPO Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, K. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ssp. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative studies xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Berthier-Schaad, X., Sechler, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx XXX-XXX xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, B. X.; van Beuningen, X. R.; Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích xxxxxxx) xxxxx metod xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx mělo xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, které xxxx součástí xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady,

dokud není xxxx uvedený postup xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx hlíz xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx potvrzení xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu

nejméně do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx v místě produkce xxxxxxxxx za zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a),

—	místo/a xxxxxxxx, které/á mají x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx označeným xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), včetně těch, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx dodavatele,

—

hlízy xxxx xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx se xxxxx xxxx rostliny označené xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v první odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, které se xxxxxxxx xxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli stavbami xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce před xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx se, xxxxxx výsledek xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx jako pravděpodobné xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x produkce hlíz xxxx xxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny,

—	společná xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (konzumní, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx dotčenému xxxxxxxxx státu/státům xxxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx partie brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx v případě potřeby, xxxx popřípadě xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx neprodleně oznámí Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx provedeného k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rozšíření xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vzorků,

—	informace x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx xxxx produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a u sadbových xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx jako zamořená, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití jako xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné úpravě, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx závod x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx prokázáno, že x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná opatření, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedeného xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx V této směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx xxxx vhodná xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx zpracovávat, s ohledem xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. S brambory xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx xxxxxxx místě xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich použití xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx zpracování, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx zpracovatelskému xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx odvozových xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a že xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx stanoveno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod kontrolou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

a)

na xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx zamoření,

—	se přijmou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, pro xxxxx hrozí zjistitelné xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxx bylo xxx xxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx jdoucích xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx roky, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxxx použijí xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx a udržuje ladem xxxx jako xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxx v průběhu alespoň xxxx po sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, je xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxx odstraněno:

—

v pěstitelském xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se žádné xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pěstovat xxxxx xxxx konzumní,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx úředně xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx produkce jiných, xxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx sadbu xxxx xxxx konzumní brambory,

—	alespoň xx xxxx třetího xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx pod úřední xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx přítomných xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby a pomocí xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

x)

x jednotkách xxxxxxxx produkce, xxx xx možné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx přinejmenším xxxxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednotky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx a dokud xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx opatření podle xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

b)

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx období:

—	zajistí xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx zařízení, xx kterých xx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx i prostory, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx této oblasti xxxx použita xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx kontrolou, a aby xx xx sklizni xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx podle článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zásobami xxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor xx xxxxxxxxxx dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX odstavce 1 musí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu:

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx vyřazených xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx půdy, xxxxxx x xxxxxx odpadového xxxxxxxxx) xx zlikvidují xxxxx:

—	xxxxx likvidací na xxxxxx schváleném xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxx x xxxxxx xxx izolován xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx riziko ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Xxxxxx odpad: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx xx povrchu xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxx pevných částic. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxx likvidovány xxxxx písm. x).

Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně na 60 °X x xxxxx xx xxxx alespoň 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	odstraněn xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a pod xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx půdou. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, likvidací x xxxxxxxxxxx zamořených partií.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.