EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/56/XX

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx dne 4. října 1993 (1) o ochraně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus xx stále xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Společenství.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata v členských xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, předešlo se xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx jeho xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx několika xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx se xxxx jako nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx v přílohách xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx o postupy xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx postupy, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (PCR), xxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx x xxxxxxxxx zamořené xxxxxxx, opatření, která xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx prohlášena xx xxxxxxxx, a ve xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx stanoviskem Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx odpovídajícími xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxx předpisů a srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Bruselu xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Komisi

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx xx al. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx úředními orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na infekci Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Pokud xx xxxxx screeningový xxxx negativní, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný Xxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční schéma xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a rostliny xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní výsledek x&xxxx;xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, z nichž každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky xx xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy a často xxx xx na xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx s příznaky jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx infekci xxxxxx rostou, i když xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle tvarované xxxxx. Xxxxx postižené xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jsou listy x&xxxx;xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx svazků a stav, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx korové xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s červenohnědými xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx maskovat x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3. PŘÍPRAVA XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx 1&xxxx;xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx vede x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou vzorku:

Omyjte xxxxx. Použijte vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx být xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx každým vzorkem. Xxxxxx xxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx vyžadován) pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx vzorku xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx má provádět XXX test nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx svazky omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx kroužkovitosti dejte xxxxxxx a testujte xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx provést xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx do ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx to xxxx možné, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, v chladu xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx za použití xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakce. Xxxxxxxxx, aby pro xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizované xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxx přenosu XXX xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx použit XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx xxxxxxx odstředěním (xxx maximálně 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500 µl xxx xxxx xx X. x. subsp. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx i pro xxxxxxx na XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v uzavření xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx obvykle není xxxxx, ale xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Jednu xxxxxxxx udržujte během xxxxxxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X a druhou xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx), xxxxx je xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx použít XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx vyšetřovací test XX test a jeho xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx test XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu protilátek. Xxxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly mít XX titr xxxxxxx 1:2000. Během testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx často není xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx sklíčka se xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve výluhu x&xxxx;xxxxxxx podle dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx se mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx negativní kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Používejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx o průměru xxxxxxx 6 mm.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako test xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xx test xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx vhodné 15 µl – pro xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) resuspendované xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek podle xxxxxxx 2.

4.2 Vysušte xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95 % etanolu xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v suchém xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první jamce xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) a dvojnásobný xxxx (2T).

ii)	Podle přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx pracovní xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx oddílu 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx resuspendované pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních sklíček x&xxxx;xxxxxxx opláchněte pufrem XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx osušením.

4.3.4 Umístěte xxxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx jako předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) nebo xxxxxxxx xxxxx tekutiny do xxxxxxx xxxxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků s žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2 Pozorujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okéncích sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx lepší. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace musí xxx test zopakován. Xx se xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku IF testu:

i)

Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx je považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5&xxxx;× 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se považuje xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. m. subsp. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24 nebo –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl každého xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Protřepejte a inkubujte xxxx noc xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Promíchejte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx po xxxx 8&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 M PB (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx množství 96&xxxx;% etanolu. V případě, xx je xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx další xxx. Sklíčka by xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Tris-HCl, 50 xX EDTA, pH 8,0). Tento roztok xxx skladovat, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztát. Xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo lyzozymu 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μg.ml–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% etanolu pokaždé xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx vzduchu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;1x hybmixu (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X xx xxxx alespoň 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte xxxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 krycími sklíčky (24 × 24 mm) xxx, aby xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167&xxxx;xx 3x hybmix a 833 ml XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx ve xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx každé xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) musí být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx vykazují slabou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx být test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx se xxxxx xx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, ačkoli mnohem xxxx často xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx používá xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do vzorku xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. PCR xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx následující negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx byl přidán X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx kontroly v odděleném xxxxxxxxx než xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx cílové XXX z komplexních substrátů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx extrakt xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. do xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1&xxxx;xx v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně viskózní.

7.	Přidejte 500&xxxx;µx chloroformu a míchejte xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx stane homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500 µl 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, peletu zachovejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v DNA speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx vody (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx) xx se mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx purifikaci XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx použita do xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx PCR mikrozkumavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Používejte xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx s vhodným restrikčním xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod UV xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, ale xxx zjištěn xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s rostlinnými xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx očekávaný amplikon xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx obsahujícího X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě, ale x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly s C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze xxx xxxxxxxxx na kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx více negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103 až 104 xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx na l ml xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxxxx xxxx testovány s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i na xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě nepřítomnosti xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxx by xxxx xxx vytvořeny optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx dodatek 8.

7.1 Rozdělte celý xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx níže xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2 Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx nezalévejte, xxx se xxxxxxx xxxxxxx napětí xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rostlinu mezi xxxxx prsty a pipetou xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 průměru xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx méně než 23 X). Vzorek xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx pufrem stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18–24 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx je xxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx růstové xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny před xxxxxxxx hmyzem, protože xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z jednoho vzorku xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující příznaky. X. x. subsp. xxxxxxxxxxx působí u lilku xxxxxxxxxxxx vadnutí listů, xxxxx může xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx tmavozelené nebo xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx mezi xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx vzhled. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá xxxxxx xx vyvinutí xxxxxxxx, xxx xxxxx xx naděje na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx vnímavější k nízkým xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx jiných bakterií xxxx xxx přítomných x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx a E. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Xxxxx xxxxxx var. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx velmi podobné xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx v případě infekcí Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Jiné xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Můžete xxxx xxxxxxxxx Gramovo barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxxx xxxx XX nebo XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx a izolujte xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx oddíl 8). Xxxxxx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Identifikujte xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx optimální, se xxxx xxxx, že X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou po 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace xx vhodná (selektivní) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují typické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testované xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE X. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou patogenity (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx možno ji xxxxxxxx z pletiv vykazujících xxxxxxxx napadení.

Mohou ji xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx izolace X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety z pupkové xxxxx hlízy xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx připravte desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx ml X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4053 xxxx XX 406). Xxxxxx vyloučili xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx xx xxxx před xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné bramborové xxxxxx se obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, že xxxxxxxx xx xxxxxxx v infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx vzorku, v ředění 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx velikosti xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx rozetření xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx misku s agarem xxxxxxx nástrojem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (složení xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx z kvasničného xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx během 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx typických xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rozetřete xxx zaručení xxxxxxx.

X xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx vybrat kolonie xxx xxxxx testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx kultury (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury C. x. subsp. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v C. x. subsp. sepedonicus xxxxx metod Lelliotta x&xxxx;Xxxxxx (1987), Klementa x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx by měla xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k žádnému růstu, xxxxxxxxx po dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx se známým xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Testy	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx při 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– nebo slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (Ultra xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx suspenze xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxx lázni xxx teplotě 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

d)	Identifikace X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx pozitivní, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx a pozitivní kontroly.

9.5 Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Anteiso A, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx pro xxxx xxxxxxxx neobvyklá kyselina, xxxxx xx však xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx musí xxx provedena zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx izolované látky x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního kontrolního xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3 Inkubujte xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx světle x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). U čistých xxxxxx xx mělo xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx vadnutí, avšak xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3 týdny xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx se xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx formu X. x. subsp. sepedonicus.

10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozdrťte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx nanesením xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx xxxx 3–5 xxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X a sledujte vznik xxxxxxx xxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] na xxxxxxxxx xxxxx MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx buněk xxxxxxxxx 1 až 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx slupkou, x&xxxx;xxxxx xx jisté, xx xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx negativní kontroly. Xxxxxxxxxxxxx proto opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx získáte 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxx při teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx C. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX testy xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v nejméně 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx skladovat xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci bakterie x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx protřepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 k pufru xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací.

Dodatek 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx IF x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx a
	s	=	plocha xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx od 8–24 xxxxx xxxx okuláru)
		K	=	tubusový xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Nutrient Xxxx = NA)

Živný xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 min.

Živný xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx živný agar xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx dobu 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = YGM)

Kvasničný extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO4.H₂O	0,015 g
NaCl	0,05 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Baktoagar (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx média x&xxxx;xxxxxxxxx při 115 °C xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) v 96 % xxxxxxxxx, amphotericin B (Sigma) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003 g, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte v zásobních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx v destilované xxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx gaa aa-3′
Primer XXX -R	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- gag xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x&xxxx;xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/µl) (1)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty při xxxxxxx 95 °C (denaturace XXX xxxxxxx)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta při xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 sekund xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx primerů)
	vii)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) xx), v), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkují xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 bp x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Tris Xxxxxx XXXX (TAE) pufr, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

(1) Metody xxxx validovány xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx optimalizována xxx extrakci xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 písm. a) x&xxxx;6.2). Při xxxxxxx xxxxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX bude nutná xxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- xxx xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpustí xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxxx pH indikačním xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační směsi

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Pozn.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20 °C. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při teplotě 121&xxxx;°X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne:		14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24 °C,
	noc:	15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení v Huckerově xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2 g krystalové xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu amonného x&xxxx;80&xxxx;xx destilované vody.

Smíchejte xxx roztoky.

Lugolův xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx tloučku v misce. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte a uložte.

Ředění: 1:10 pro přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx roztokem krystalové xxxxxxx a nechte působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx vodou a vysušte xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte xxxxxx xx kapkách xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxx za jemného xxxxxxxxxx do etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx a vysušte xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx safraninovým xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, R. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Janse, X. X., 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx XX method xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx ring xxx infections (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Jansing, X. x&xxxx;X. Rudolph, 1998. Physiological capabilities xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of a semi-selective xxxxxx. Journal xx Xxxxx Diseases and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas pyocyanea xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. A., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bacteria. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Lelliott, X. X., X. Billing x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. A determinative xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Bact., 29, 470–489.

13.	Lelliott, X. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from RNA xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Mills, D., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., W. Xxxxx, 1997. Specific detection xx Clavibacter michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. S., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Sechler, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx potato xxxxxx xx BIO-PCR xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Bacteriology 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx in situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx komerčně dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx každém podezření x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx testech) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto metod xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vyšetřovací xxxx/x, xxxx. imunofluorescenční sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx není xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx postupu podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě xxxxxxxx xxxxxxxxx za zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a),

—	místo/a xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx produkčního xxxxxxx xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx označeným xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx těch, xxxxx užívají společné xxxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx místě/ech xxxxxxxx xxxxx období, xxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx xxxxxxxx z míst xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx zařízení, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx jednotky, a jakékoli xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx s hlízami xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx xxxxxxxx vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx a staveb,

—

v důsledku xxxxx xxxxxxxxx v článku 6 hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), a u nichž se, xxxxxx výsledek xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobné xxxxxxxx ke klonové souvislosti. Xxx potvrzení identity xxxxxxxxxx a klonově příbuzných xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xx xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních míst xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské rostliny,

—	společná xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx metod xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, alespoň:

—	název xxxxxx xxxxxx brambor,

—	druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, musí xxxxxxx xxxx, v němž xxx xxxxxx potvrzen, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx v případě xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx ukončení xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k zjištění xxxxxx a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx zamoření, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx partií x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o vymezené xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx informace xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x ohniskem/y, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx vyžádá.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělskou půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx s úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx se xxxx zlikvidovat xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx vhodná xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dotyčných xxxxxxxxx států xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení k likvidaci xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx pro xxxxxx dodávku x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx tak xxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich použití xxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx k průmyslovému xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx dodání zpracovatelskému xxxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx využití xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxxx, že nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a že xxxxxxx schválení xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx xxxxxx, u kterých xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx kontrolou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx v čl. 7 odst. 4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

a)

na xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) buď

i)

—

během nejméně xxx pěstitelských let xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx hrozí zjistitelné xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx období xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují postupem xxxxx přílohy I;

—

ve xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po příslušném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx činit xxxxxxx xxx roky, pokud xx xxxx pěstovat xxxxxxx brambory, se xxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxx nebo xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx označení xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, a

—	pozemek xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx jako xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx intenzivní xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, že xxxx xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx žádné xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx xxxxx nebo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pěstovat xxxxx xxxx konzumní,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx se xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx dobu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xx sázejí pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx brambory,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí a dezinfikují xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx produkce, xxx xx xxxxx úplně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx nebyla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstranění xxxxxxxxx a na xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednotky a veškerého xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx udělen xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx z minihlíz xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxx 4.1, členské xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx se veškeré xxxxxx a skladovací prostory x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, které xxxx používány v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx příslušných metod xxxxx xxxx 3;

b)

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx kontrolu xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx k produkci xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx jen xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou, a aby xx po xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx vypěstované v místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx všech xxxxx sadbových xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slupek) a jiný xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (včetně půdy, xxxxxx a jiného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx likvidací na xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx xxxxxxxxx odpadu, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx prostředí, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx místo x xxxxxx být izolován xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

xx)

Tekutý odpad: xxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na povrchu xxxxx částice podroben xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx likvidace xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. i).

Pevný xxxxx musí být xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně na 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx před xxxxxxxxx, nebo

—	odstraněn xxxxx způsobem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx nehrozilo žádné xxxxxxxxxxx riziko, že xx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx popsané x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx odpad xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.