EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/ES

xx xxx 12. června 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Jedním x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Smith) Xxxxx et al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx jen „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx stále xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX stanovila podrobná xxxxxxxx, která xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, předešlo xx xxxx výskytu x xxxxxxxxx x xxx zjištění výskytu xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx doby xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx praktické xxxxxxxxxx xxxxxxx při ochraně xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a aktualizovat opatření xxxxxxxx v přílohách xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, jsou xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxx xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx xx fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx i zlepšení xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro: xxxxxx xxxxxxxx testovaných xxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx potřebné pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx produkce, která xxxx prohlášena xx xxxxxxxx, a ve vymezených xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/EHS xx xxxxxxxxx odpovídajícími xxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx dosažení souladu x xxxxx směrnicí. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a srovnávací xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx a touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx unie.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Za Komisi

Markos XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, s. 2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx různé postupy, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru;

ii)	zjištění Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními orgány xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních kontrol xx testovaných vzorků. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první screeningový xxxx (IF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx druhý screeningový xxxx negativní, xxx xxxxxx není považován xx infikovaný Cms.

Z xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 směrnice 93/85/XXX vyžaduje izolaci x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je určen xxx hlízy a rostliny xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx testy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx sérii xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2. VIZUÁLNÍ XXXXXXXXX XX PŘÍTOMNOST XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné od xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku omezené xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy postižené xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx cévních xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx svazků x&xxxx;xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx sloupky sýrové xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx době xx x&xxxx;Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. Intenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx v případě, že xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx a jestliže xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo by xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (při v 4–10 °C) xx do ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx nádoby xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx vyčištěny x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx možné, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, v chladu xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Schnutí x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků a růst xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx výkrojky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizované xxxxx (nože) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4 Dekantujte xxxxxxxxxxx. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx přídavkem (10 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx pro xxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus, 500&xxxx;µx pro Ralstonia xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx koncentraci 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx testování xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx v chladícím boxu xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo kontaminaci. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx na XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus se xxxxxxxxxx kontrola kombinovaných xxxxxx. Postup je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly by xxx založeny xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx zahradnických xxxxx xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx nebo xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx části. Xxxxx xxxxxxxx udržujte během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx IF xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx test, protože xxxx prokázána jeho xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné další xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je XX xxxx používán xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další vyšetření xxxxxx s monoklonální protilátkou xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx kmene C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr alespoň 1:2000. Během xxxxx xx se měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo na xxxxx. Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. V případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných při –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx často xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 2.2).

Připravte oddělené xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx extraktů, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx o průměru xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (vzorků).

4.1 Připravte sklíčka xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx vhodné 15&xxxx;µx – xxx větší xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) resuspendované xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek podle xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60&xxxx;°X) nad plamenem xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v suchém xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx roztoků protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxx být xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxx xxxxx. Pokryjte xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx okénka pokryjte xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M fosfátového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

Vyhodnocení IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a kolem xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost odchylná, xxxx xxx test XX opakován (oddíl 4).

4.4.2 Pozorujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ve stejném xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx potenciálně infikovaný x&xxxx;xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24 nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na ml (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx vzorku.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází z Wullings x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxx peletu v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X po xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 M PB (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx množství 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	okénko 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6 Nechte xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Sigma X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Tris-HCl, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx skladovat, xxx xxx xx se xxxxx jednou zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx dobře xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx lyzozymu 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxx sklíčka uschnout xx xxxxxxx v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx alespoň 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx horkou xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx každého xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx každé xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx sklíčky (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l sterilní xxxx (Xxxxx pure water = XXX), 1 l 1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167&xxxx;xx 3x xxxxxx a 833 ml XXX). Předinkubujte xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák xxxxxxx xx promývacího roztoku 1/2 hybmix a nechte xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) do každé xxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx FISH xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. V peletách z pupkové xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx xxxxx xx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx v žádných negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX TEST

Principy

Použije-li xx XXX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v celém xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 buněk X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro dosažení xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx přednost metodě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx se xxxx xxxx zacházet jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PRC xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	pokud xxxxx xxxxxxxxxx xxx provádění XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx než xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace DNA

Používejte xxxx popsané pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx jsou k dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx a vzorek začne xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X pro oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1 ml 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx při 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx vody (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx nejméně 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním a pro XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Xxxxx Xxx) xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při purifikaci XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční směs xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25 µl PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx XXX elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 V na xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA, xxxx. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) xx xxxx 30–45 minut, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x&xxxx;xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s rostlinnými xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx s druhou sadou XXX primerů (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx podezření xx xxxxxxxx PCR, pokud xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z pozitivního kontrolního xxxxxx obsahujícího X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx PCR s interními xxxxxxxxxx XXX k inhibici xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx získán xxxxx x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z jedné xxxx více negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103 až 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx dodatek 8.

7.1 Rozdělte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx pouze xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 listů xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx zajistili úplné xxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2 Před inokulací 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx listem xxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx nad děložními xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Vzorek xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pokud xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx kontroly a negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx xxx rostliny xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx věnujte maximální xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny před xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx druhý.

7.8 Pravidelně xxxxxxxx 8. dnem prověřujte xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Počítejte xxxxxxxx vykazující příznaky. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx déle xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx naděje na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx hub xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx z pletiv hlízy. Xxxxx k nim Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx může způsobit xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx infekcí Xxxxxxx chrysanthemi. Jiné xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx nebo celé xxxxxxxx. Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx za xxxxxxx částí pletiva xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX xx šťávě x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx oddíl 8). Můžete xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx dokonce x&xxxx;xx uplynutí inkubační xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, proveďte xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx xxxxxxxx bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, že X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. SUBSP. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv je X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx organizmus, xx xxxxx ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou ji xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx je xxxxxxx xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u nichž xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx na xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx mají být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx bakterie xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx rozetřít 100 µl x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx NCP-88 médium (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Petriho misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx velikosti xxxxx objem xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx postupem xx xxxxxxxxx počátečních 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nástroje xx druhou xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, a tím xxxxxxxxx efektu xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx třech xxxxx, x&xxxx;xxxxxx počítáním xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx na XXX xxxxx; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx agar (pouze xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx z kvasničného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubujte xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx zaručení xxxxxxx.

X xxxxxxxxx se rychlost xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, někdy žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, s rovnými xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury (xxx xxxxx&xxxx;9) a proveďte zkoušku xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě potřeby xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx nepřítomné v C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X a po xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx srovnání se xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37 °C	–
Aktivita xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza škrobu	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– nebo xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2 IF xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx v pufru xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX postup (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxx, jestliže XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní lázni xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx teplotě –16 až –24&xxxx;°X xx xx xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 buněk xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (FAP)

a)	Pěstujte xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx ve všech Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX PATOGENITY)

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx nastat xxxxxxx vadnutí, avšak xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx žádné příznaky xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx se xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky infekce xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX fostátového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx ze suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X a sledujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Institute, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 nebo XX 406] na xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx v 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 × 108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx slupkou, o které xx jisté, xx xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 10 ml.

Připravte 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx do xxxxx mikrozkumavky. Nechte xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinná xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx proto xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX test proveďte xxxxxxxx DNA z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx proveďte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxxxx 106 a 104 buněk/ml xxxxxxxxxxx kontrol a nesmí xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx testovací postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový pufr (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Tento xxxx se používá xxx resuspenzi a ředění xxxxxxxx z výkrojků x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx XX test

2.1 Pufry xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 k pufru xxx IF.

2.3 Fostátový xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, pH 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací.

Dodatek 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v jednom xxxxxxxxxxx poli (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx jamkami x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a
	F	=	zřeďovací xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Xxxxxxxx Xxxx = NA)

Živný xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx živný agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx dobu 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
NaCl	0,05 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO₄. H₂O	0,015 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (při 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx NCP-88

Živný agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx acid (Sigma) 0,008&xxxx;x, Cycloheximide (Sigma) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx v destilované xxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- ctc xxx xxx ggg xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- tac xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx aca xxx xxx xxx xxx -3′
Primer XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx cct acg xx -3′

Předpokládaná velikost xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (sada XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx xxx PCR

Postupujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx při teplotě 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA matrice)
	vi)	30 xxxxxx při xxxxxxx 62&xxxx;°X (připojení primerů)
	vii)	1 xxxxxx při teplotě 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx bude možná xxxxx modifikace xxxxx xxxxx xx), xxx) xx), v), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR amplifikované x&xxxx;XXX C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx mají rozměry 282 bp a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (XXX) pufr, xX 8,0

Trojitý xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

(1) Metody xxxx validovány xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X byla optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;6.1 písm. x) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg cgg xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx gcc xxx cgt xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ! XXXXXXXXXX RUKAVICE X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpustí xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx jej xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx až 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx výpočtů v tabulce. Xxx každé xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx vejcoplodého

Vysejte semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přepichujte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Huckerově xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2 g krystalové xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx destilované xxxx.

Xxxxxxxxx xxx roztoky.

Lugolův jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx draselný	2 g
Destilovaná xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně xxxxxxxxx xxxxxx tloučku x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nádobě xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte na xxxxxxx a fixujte zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a nechejte xxxxxxx xx dobu xxxxx minuty.

5.	Opláchněte pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10 s.

9.	Opláchněte xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. G., 1984. The xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx for Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, R. x&xxxx;Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Van Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx infections (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Bull., x.&xxxx;17, 1987, pp. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx the oxidase xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10.	Klement X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Billing x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. A determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. x&xxxx;X. W., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx potato xxxxxx. EPPO Bull., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx to xxx Corynebacteria. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx BIO-PCR xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. X., 1967. A guide xx xxx identification xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, P. X. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx test xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, B. X.; xxx Beuningen, X. X.; Janse, X. X. a A. X. L. Akkermans, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, by xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se také xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích testech) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx rostliny, xxxxx jsou součástí xxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx vyšetřovací test/y, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné testování xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu

nejméně xx xxxxxxx měsíce od xxxxxxxxxxxx postupu podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx nebo rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a),

—	místo/a xxxxxxxx, které/á mají x&xxxx;xxxxx produkčního xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx v takovém/vých xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx se xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v první odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx s hlízami nebo xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x důsledku xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xx, xxxxxx výsledek xxxxx xx organismus mohl xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonově příbuzných xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) je xxxxx zohlednit tyto xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních míst xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx metod stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (konzumní, xxxxx xxx.) a v případě xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx xxxx, v němž xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx v případě xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx ukončení všech xxxxxxxxx, v každém případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rozšíření xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx míst produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx oblasti, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která nebyla xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x ohniskem/y, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně kontrolovaná xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx jako xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx do životního xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxx xx zemědělskou xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že x&xxxx;xxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx opatření, xxxxx bylo prokázáno, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; tato opatření x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx nebo vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx hlíz nebo xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx států xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx subjektů členských xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, balených xxx xxxxxx dodávku x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx nevyžaduje xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx zpracování, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx využití xxxx xxxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx schválení xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, která xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené v čl. 7 odst. 4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx označeném xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx či xxxx planě rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx hrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx pole xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx dvou xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je povolena xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, který xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx buď xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx označení xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx jako stálá xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx testují postupem xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx odstraněno:

—

v pěstitelském roce xx výše označeném xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx smí xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a které xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, x&xxxx;xx xxx xx sadbu xxxx xxxx konzumní brambory,

—	alespoň xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx následujícího xx xxxxxxxx zamoření xx sázejí pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a pomocí xxxxxxxxxxx metod podle xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx produkce, kde xx xxxxx úplně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx úředně sledovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a dezinfekce xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx nebo z minihlíz xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx vymezené xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx prostory x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx zařízení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy nebo xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jakož x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx používanou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx xxxx použita jen xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou, a aby xx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx vypěstované v místech xxxxxxxx, která byla xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx podle článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí úřední xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby program xx xxxxxxx všech xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slupek) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx půdy, xxxxxx a jiného odpadového xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx do prostředí, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx na místo x xxxxxx být xxxxxxxx xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření organismu; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

ii)

Xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý odpad xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx částice podroben xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx účelem xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx likvidovány xxxxx písm. x).

Xxxxx xxxxx musí být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx podléhajícím xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, že xx xxxxx xxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx musí oznámit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.