EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Evropského xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) o ochraně proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx důvodům:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx et xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx., původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx na ochranu xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, předešlo xx xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření xx xxxxxx jeho eradikace.

(4)	Od xx doby xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx ochraně xxxxx organismu vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx opatření.

(5)	V xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxx jako nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx xxx v poslední xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx i zlepšení xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx zjišťování a identifikace.

(7)

Xxxxx xxx o technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx vysledování organismu, xxxxx potřebné pro xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx oznamování xxxxxxxx potvrzené xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx provedena x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a ve xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropské unie.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI BRAMBORU, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a validaci protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx Cms.

Z xxxx důvodu xx xxxxxxxxx IF test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční schéma xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy a rostliny xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx kultura xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx není dostačující x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2. VIZUÁLNÍ XXXXXXXXX XX PŘÍTOMNOST PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx a často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx nebo se xxxxxx s příznaky jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, i když xxxx v infikovaných místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxx části xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí v okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx zbarvení xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a stav, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx a příznaky xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx se vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy praskliny, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx době se x&xxxx;Xxxxxx objevilo několik xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poškození x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. Intenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx použít xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx vzorku xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX test xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci každé xxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a testujte xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při vyříznutí xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xxxx korkovatět xx xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx ve vzorku (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, pokud to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx dobu maximálně 72 hodin nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) nebo rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250 mm; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (nože) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx přenosu DNA xx xxxxxx xxxx xxxxx zařízení. Xxxxx xx být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4 Dekantujte xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, aniž by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx glycerol na xxxxxxxx koncentraci 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchejte xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7 Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo kontaminaci. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx na IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx testy.

3.2 Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx část x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx ze xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v uzavření sterilní xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte části xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx částí x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) s přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex). Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx trvat 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx lze xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Jednu xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx je xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je IF xxxx používán xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxxxxx vždy polyklonální xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx řadu protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx monoklonální protilátky xx měly xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Během testu xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx odstranit xxxxxxxx 1 ml peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx není xxxxx, zejména xxxxx xxxx sklíčka se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx srovnávacím xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxxxx s 10 okénky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou řadu xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro okénka x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xx možná xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx pracovní xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx v IF pufru. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 písm. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství použitého xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka zakrytá xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka a přiložte xxxxx sklíčko.

Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx průměrech a kolem xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx zkoumejte nejméně 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx ve stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx v úvahu.

Při podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku IF testu:

i)

Při xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopovém xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx screeningový test xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx IF test. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x&xxxx;0,01 M fosfátového xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond značených XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx hybridizace, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Wullings x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx noc při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 minut.

5.1.4 Odstřeďujte xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16 µl xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xxxxxxxxx 2 různé vzorky xx jedno sklíčko, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3. Rozmístění na xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx plamenem.

V xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx před prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Sigma X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Tris-HCl, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx skladovat, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xxxxxxxx xxxxx lyzozymu 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 v pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX CaCl2, pH 7,4) xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte po xxxx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx na xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UPW), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x xxxxxx a 833 ml XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx držáku sklíček.

5.2.9 Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx ihned x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx imerzí. S filtrem xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx C. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, neberte v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx přesnost XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, ačkoli xxxxxx xxxx xxxxx xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek FISH xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX test jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte xxxxxxxxxx XXX činidla x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx se mělo xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx C. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx být zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx přidán X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [pH 8,0]) do mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx DNA® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx a míchejte xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1 ml 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx při 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Plant Kit) xx se mohly xxxxxx, xxxxx by xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx PCR xxxxx validovaného protokolu (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx desetinný roztok xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v prostředí, xxx xxxxxxx kontaminace, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx použita xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx byl xxxxxx xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx vzorku smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) agarózového xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké vlnové xxxxx, např. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx s vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx X. m. xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx vodě, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx došlo, pokud xxxxx xxxxxx žádný x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ze xxxxxx, které xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx použít x&xxxx;xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by měly xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx pouze xxxxxxxx xx fázi 2–3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx xxxx popsané xxxxxxx xxxxxxx 15–25 lilků xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rostlinu xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx děložními lístky x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx proveďte xxxxx xxxxx xxxxxx xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, řez xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku inokulujte xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Vzorek xxxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxx bramboru (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx sterilním xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po dobu xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké vlhkosti (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X a optimální xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx růstové komoře xx jasně oddělených xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx s nimi. Pokud xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny před xxxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxx přenášet xxxxxxxx z jednoho xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx počínaje 8. xxxx prověřujte xxxxxxxxxx příznaků. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. x. subsp. xxxxxxxxxxx působí u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx vzhled. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx vnímavější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx hub xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx a E. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx var. xxxxxxx, xxxxx i populace saprofytických xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Jediným xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Jiné xxxxxxx vadnutí lze xxxxxxx od případů xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jelikož xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx za xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx dezinfikujte xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX nebo XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) média (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou po 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx výsledků xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, že X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. XXXXX. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že je X. x. subsp. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx možno xx xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx z pelety pletiva xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx izolace C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx xxxxx xxxx xx stonků rostliny.

Izolace xx provádí xx xxxxx xxxx bramboru xxxx částí xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxx od vzorků, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx na médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx bakterie xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco patogen xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Petriho misky x&xxxx;xxxxxxx 90 mm – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní části xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx s agarem xxxxxxx nástrojem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx druhou xxxxx x&xxxx;xxxxxx, tento postup xx závěr xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx kolonií podobných X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx podobných C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx se xxxx provést xxxxx, xxx jsou xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (složení xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu maximálně 10 xxx.

X. m. xxxxx. sepedonicus roste xxxxxx, xxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx během 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, hladké, vyvýšené, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx kultury pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xx xxxxxxx nejméně xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro každý xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně přítomné xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Lelliotta x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx šesti xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx inokula ze xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) testy	Inertní xxxx slabě oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza xxxxxx	– xxxx slabá
Tolerance 7 % NaCl	–
Tvorba xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx H2S	–
Využití xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (dodatek 3).

x)	Xxxxxxxxx série xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu xx dosaženo, jestliže XX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl suspenze xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx buněk podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX stejné xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxxxx XXXX (oddíl 5).

c)	Test XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly.

9.5 Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Anteiso xxxxx svědčí x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx neobvyklá kyselina, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx spp. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10. KONFIRMAČNÍ XXXX (XXXX PATOGENITY)

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované látky x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

10.2 Naočkujte 5–10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by mělo xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (xxx oddíl 7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx příznaky infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fostátového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx XXXX a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx dobu 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 nebo XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx pufru, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 až 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Toho obvykle xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600 nm.

Odstraňte xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 ml, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xxxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX musí xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx v žádné x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat po xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx následující složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx resuspenzi x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bramborových xxxx xxxx, co byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 k pufru xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx XX testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace IF x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (c).

2.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx jednoho xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Živný xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx živný xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx dobu 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktem a minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = YGM)

Kvasničný xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO4.H₂O	0,015 g
NaCl	0,05 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Baktoagar (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx média x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (při 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 mg/ml) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx B sulfát x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx s interní PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx ggg xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx xxx gtt xxx ctt xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx NS-8-R	5′- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3′

Předpokládaná velikost xxxxxxxxx z DNA X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (sada XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µM) (2)	0,1 µl	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx při teplotě 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (prodlužování kopie)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkují xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bgl XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Fragmenty získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx voda (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Tris Xxxxxx XXXX (XXX) pufr, xX 8,0

Trojitý xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx primerů XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X byla optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. a) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním nebo xxxxxx metodami xxxxxxx XXX bude xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx cat xxx xxx acg -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx cgt xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX RUKAVICE A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx pomocí HCl xxxx NaOH. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx jej xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační směsi

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Pozn.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx lehké sensitivní xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx elektrickým světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) do sterilního xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx sterilního pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Huckerově xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpusťte 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx amonného x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně rozetřete xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx do vody x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup barvení

1.	Připravte xxxxxxx, xxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx pod xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx pomocí xx kapkách xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx se zbarví xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx potato tubers. XXXX Bull. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Manual xx methods xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, J. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX method xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Jansing, X. x&xxxx;X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx of a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Diseases and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform bacteria. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Billing x&xxxx;X. X. Hayward, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of latent xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in potato xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx region xxx xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ssp. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx studies xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria and xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato tubers xx XXX-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 pp.

21.	Skerman, X. B. X., 1967. X&xxxx;xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx and Wilkins Xxxxxxx, Baltimore.

22.	Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between laboratories: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. X. X. Akkermans, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx ve vyšetřovacím xxxxx (vyšetřovacích xxxxxxx) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx mělo být xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, které xxxx součástí vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx není xxxx xxxxxxx postup xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X případě potvrzení xxxxxxxxx je třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného výluhem x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx kontaminace xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě xxxxxxxx xxxxxxxxx za zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx označeným za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx těch, xxxxx xxxxxxx společné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx místě/ech xxxxxxxx během období, xxx xx hlízy xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx místě produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, a jakékoli xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxx xxxxx xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx hlízy nebo xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx a dezinfekcí xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x důsledku xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx rostlinám, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx mohl xxx xxxxxxxxx, zamoření xxxx xxxx pravděpodobné xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx hlíz xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny,

—	společná xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx pododstavci xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx metod xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí riziko xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx xxxx xx xxxxxx členského xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx stát, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx potvrzen, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx státu/státům xxxxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx partie brambor,

—	kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx popřípadě registrační xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx informací xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, v každém případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx popis xxxxxxxxx provedeného x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru vzorků,

—	informace x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx zamoření, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx partií s uvedením xxxxxx a u sadbových xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx zamořená, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx oblasti,

—	další xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Komise xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně kontrolovaná xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx s úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce alespoň xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná opatření, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx související s výše xxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx vhodná xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx informování xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx souhlasem odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx a použití, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, v místě s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dodání xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx využití nebo xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a že xxxxxxx xxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, xxxxx xxxx členské státy xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

a)

na xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx přijmou xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx planě rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu;

—

v xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx následujícím po xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx dvou xx sobě jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx příslušném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xx xxxxxxxx použijí xxx xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxxxxx se úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, a

—	pozemek se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx organismu, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xx xxxxx ostatních xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxx xxxxx xxxx konzumní,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx se xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, které xxxx úředně testovány xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a které xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx brambory,

—	alespoň xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx sázejí xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx brambory,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx přítomných xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

c)	neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stroje a skladovací xxxxxxxx v místě produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí a dezinfikují xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

d)

v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na odstranění xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, členské xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xx veškeré xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx metod xxxxx bodu 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx období:

—	zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy nebo xx x&xxxx;xxxxxx hlízami xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx oblasti xxxx xxxxxxx jen xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx sklizni xxxxxxxxx brambory xx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx systému očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby program xx xxxxxxx všech xxxxx sadbových xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx IV xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Bramborový odpad (xxxxxx vyřazených brambor x xxxxxxxxxxxx slupek) x xxxx xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx x xxxxxx odpadového xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx schváleném xxxxx xxx likvidaci odpadu, x xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Tekutý xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý odpad xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx likvidace xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. x).

Xxxxx xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx před likvidací, nebo

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx schválení x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx nehrozilo žádné xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx do xxxxx xx zemědělskou xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx popsané x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.