EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. června 2006,

xxxxxx xx mění xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru, x xxxxxxx článek 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Jedním x xxxxxxxxxx organismů škodlivých xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx et al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx v členských xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxx výskytu a rozšíření x xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx doby došlo x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a postupech zjišťování x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx několika technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx opatření.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx se xxxx xxxx nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx jde o postupy xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxx xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx i zlepšení xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx, podrobnosti oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx prohlášena xx xxxxxxxx, x xx vymezených xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx stanoviskem Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů a srovnávací xxxxxxx mezi těmito xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx je xxxxxx členským xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx různé postupy, xxxxx jsou součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru;

ii)	zjištění Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx (XX nebo XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx není považován xx xxxxxxxxxx Cms.

Z xxxx důvodu xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx kultura xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx práh 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx se příznaky xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx a často xxx xx xx xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje listů. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní lístky, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx pupku. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Tento exsudát xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum. Zpočátku xxxxx být xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část prstence, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx a mohou se xxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit od xxxxxxx xxxxxx části. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, kdy střední xxxx hnije x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. Intenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz.

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx xxx použít xxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx vyžadován) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dejte xxxxxxx a testujte odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx korkovatět xx xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx být uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do nepoužitých xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx maximálně 72 hodin nebo xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Schnutí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx a růst xxxxxxxxx v průběhu skladování xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po dobu 4&xxxx;xxxxx při teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3), xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150 mm × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za použití xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxxxxxxxx, xxx pro xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx nebo xxxxx zařízení. Pokud xx být xxxxxx XXX test, doporučuje xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte jej xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě mezi 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) při teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500 µl pro xxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Ralstonia xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx vzorku, promíchejte xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx a vzorky X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i pro xxxxxxx na IF xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx část x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx ze xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx má xxxxx 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s 10–25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce), xxxxx je xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx jako hlavní xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx XX test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je XX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx je stanoven xxxx xxxxxxxx ředění, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální protilátky xx xxxx mít XX titr xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo na xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx skladovaných xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol lze xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x&xxxx;xxxxxxx podle xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24 °C) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Používejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředění (1/10 a 1/100) resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx okénka x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx lze potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

ii)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx pracovní xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 písm. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx na test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxx papír. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx okénku musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx barevnost odchylná, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2 Pozorujte xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx lepší. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx kontaminaci pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku IF testu:

i)

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx screeningový test xxxxxxx FISH test x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Wullings x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μl 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dobu 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 X&xxxx;XX (viz xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX EDTA, pH 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx dobře pokryjte xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, pouze jednou, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% etanolu pokaždé xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx vzduchu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x hybmixu (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx v hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx na 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xxx, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes xxx x&xxxx;xxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l sterilní xxxx (Xxxxx pure water = UPW), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx podložní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx každé xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx se zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx pro fluorescein xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx gramnegativních buněk) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx být lepší xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, neberte x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx z jakékoli kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx stát, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost XXXX xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx často než x&xxxx;XX testu.

5.3.5 V úvahu xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou morfologií, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx negativní.

ii)

Výsledek FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX TEST

Principy

Použije-li xx XXX test xxxx xxxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. PCR xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx xx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx vzorků xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál stejným xxxxxxxx jako vzorek (xxxxxx).

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx extrakt ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně míchejte xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx a míchejte xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx při 4&xxxx;°X pro xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 minut xxx 4&xxxx;°X, peletu zachovejte x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx vody (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx) xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx použita xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX barvením x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx restrikčním xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou xxxxxxxxxxx gelu a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx amplikon xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován s daným xxxxxxx).

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx požaduje), za xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx výsledku lze xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxx, ale x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR k inhibici xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx získán žádný x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze xxx xxxxxxxxx na kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx více negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103 až 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které původně xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx negativních výsledků xxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx dodatek 8.

7.1 Rozdělte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx z oddílu 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx zajistili xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx nezalévejte, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty a pipetou xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx pravým xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2 Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Vzorek xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx známé kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) a zalévejte je xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx místa zajistěte xxxxxx oddělení mezi xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx věnujte maximální xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx komory xxxx xxxxxxxx před xxxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxx přenášet xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. dnem xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, ale xxx xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx větší xx xxxxxx na xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx hub přítomných x&xxxx;xxxxxx z pletiv hlízy. Xxxxx x&xxxx;xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Erwinia xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx podobné xxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jediným xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx infekcí Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Jiné xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx od případů xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus, jelikož xxxxxx vadnou xxxx xxxxx nebo celé xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx test xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx k izolaci xx xxxxxxx xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin (xxxxxxxx xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx listů a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX na šťávě x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx vhodná (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a potvrďte xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, z těchto rostlin xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx předpokladu, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. m.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx x&xxxx;xxxxxx pletiva xxxxx xxxx stonku (oddíl 3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx izolace X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety z pupkové xxxxx hlízy nebo xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je třeba xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4053 nebo PD 406). Abyste vyloučili xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx naprosto xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx desetinásobné ředění x&xxxx;xxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 médium (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné xxxxxxxxx xxxxx objem xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx postupem xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx misku s agarem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx závěr zopakujte x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx miskami x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

živný xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubujte xxx teplotě 21 °C–24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) může xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx obecně přítomné xxxx nepřítomné v C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Klementa x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx inkubovat xxx 21&xxxx;°X a po xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx k žádnému xxxxx, xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula ze xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) testy	Inertní xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7 % NaCl	–
Tvorba xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk/ml x&xxxx;xxxxx xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série dvojnásobného xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX postup (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxx, jestliže XX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (Xxxxx xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl suspenze xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx dobu 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx buněk podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (oddíl 5).

c)	Test XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx stejné reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný postup XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx FAP xx pozitivní, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí o přítomnosti X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX PATOGENITY)

Pro konečné xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního kontrolního xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus.

10.2 Naočkujte 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3 Inkubujte xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx se po 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx nebo nanesením xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx dobu 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Diagnóstico xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx osoby: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx buněk xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které xx xxxxx, xx xxxx napadena X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte pupkové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx mikrozkumavky. Nechte xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test proveďte xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX musí xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v nejméně 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol a nesmí xxx zjištěn x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 min.

Užitečné mohou xxx následující složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 mM fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), pH 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 k pufru xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx IF x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v jednom xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v okénku mikroskopického xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha xxxxxxx xxxx na sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8–24 xxxxx xxxx okuláru)
		K	=	tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x atd.)

3.

Vypočítejte počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = YGM)

Kvasničný xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 litru média x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Sigma) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, amphotericin X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Po přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx se skupinou vybraných xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx NS-7-F	5′- xxx xxx ata xxx xxx ctg xxx xxx -3′
Xxxxxx NS-8-R	5′- xxx xxx xxx xxx cct xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (sada XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx NS-8-R (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72 °C (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bude xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) xx), x), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 bp x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	50 ml

2.2 Nakládací xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx voda (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Tris Xxxxxx XXXX (TAE) pufr, xX 8,0

Trojitý pufr	48,4 g
Ledová xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx extrakci pupkové xxxxx bramboru xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 písm. x) x&xxxx;6.2). Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01:	5’- xxx cgg xxx xxx cat xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxxx pH indikačním xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 ng/μl

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx sensitivní xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx pěstovat xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpusťte 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx destilované xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně xxxxxxxxx xxxxxx tloučku v misce. Xxxxxxx xx vody x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx barvení

1.	Připravte xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx a fixujte xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx xxxxx minuty.

5.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10 s.

9.	Opláchněte xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx se zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx methods for xxxxxxx bacteriology, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx EC method xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxx ring xxx infections (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. XXXX Bull., x.&xxxx;17, 1987, pp. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx of x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas pyocyanea xx the oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. A., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., E. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. et Xxxxx.) xx potato xxxxxx. EPPO Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Li, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Selection of Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx chain reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx to xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx BIO-PCR xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. X., 1967. A guide to xxx identification of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx in test xxxxxxxxxxxxxxxx between laboratories: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, B. X.; van Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx xxxx xxxxxx komerčně dostupné xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx který xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx možno xxxxxxxx, xxxxx jsou součástí xxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a vhodným způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený v odstavci 1, a

—	vzorek xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, a

—	izolované xxxxxxx organismu

nejméně do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupu podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a),

—	místo/a xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých v předchozí xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx rostliny označené xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx místě xxxxxxxx xxxxxxxx v první odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v odrážkách xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx jednotky, a jakékoli xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, které xxxxx přijít xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, které xxxx označeny xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, zamoření xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonově příbuzných xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce.

2.

Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx zohlednit tyto xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx následovně:

—

Bezprostředně xx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx metod xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, alespoň:

—	název odrůdy xxxxxx brambor,

—	druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx nebo xx xxxxxx členského státu/jiných xxxxxxxxx států, musí xxxxxxx stát, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx dotčenému xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx splnění xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx a příjemce,

—	datum xxxxxxx partie brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

—

Xx ukončení xxxxx xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx stupně xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx zamoření, včetně xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o vymezené xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i xxxxxxxx/x, xxxxx si Komise xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití jako xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx dodávky xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxx xxxxxx, u kterého xxxx xxxxxxxxx, že x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a se xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx související s výše xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx se xxxx zlikvidovat xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx informování xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž se xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx jako konzumních xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, balených pro xxxxxx xxxxxxx a použití, xxxxx xxxxxxxxxx změnu xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx tak děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich použití xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému zpracování, x&xxxx;xxxxxx pro přímé x&xxxx;xxxxxxxx dodání xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx metodami xxx xxxxxx a dezinfekci předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod kontrolou xxxxxxxxxxx úředních subjektů xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření,

—	se přijmou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx xxxxx xx xxxx planě rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, pro xxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx organismu;

—

v xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxx xxxx xxx úředních kontrolách x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx dvou xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx před xxxxxxxx shledáno xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx mají pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxx xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx jako xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x prvním sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

b)

na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přesvědčeny, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxx odstraněno:

—

v pěstitelském roce xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, a to buď xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xx sázejí xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové brambory, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí a dezinfikují xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x jednotkách xxxxxxxx produkce, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx žádné hlízy, xxxxxxxx ani osivo, xxxxx nebyla xxxxxxxx xxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx materiálu hostitelských xxxxxxx včetně přinejmenším xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx mikrorostlin získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx opatření xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx se veškeré xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx používány v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx podle potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx období:

—	zajistí xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx kontrolu xxxxxxxx, xx kterých xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx hlízami xxxxxxx, jakož x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby k výsadbě xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx kontrolou, a aby xx po sklizni xxxxxxxxx brambory xx xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, která byla xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx systému očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi nakládáním xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí xxxxxx xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (včetně půdy, xxxxxx a jiného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx likvidací xx xxxxxx schváleném xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do prostředí, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx přemístěn xxxxx na xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Tekutý odpad: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx odpad xxxxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx pevné částice xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. i).

Xxxxx xxxxx musí xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X x xxxxx xx xxxx alespoň 30 xxxxx před xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx způsobem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx na odpad xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.