EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/56/ES

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) o ochraně xxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Jedním x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Směrnice 93/85/XXX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx ochranu xxxxx xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, předešlo xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx výskytu xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx a prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx praktické xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx několika xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	V xxxxxxxx xxxxxx vývoje se xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx v přílohách směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace.

(7)

Xxxxx xxx o technické prvky xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy pro: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, která xxxx být provedena x xxxxxxx produkce, která xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx nahrazují xxxxxxxxxxxxxx xxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx dosažení souladu x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx vyhlášení v Úředním xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx et al. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Davis xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. m. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a budou zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx znázorněno v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je x&xxxx;xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, izolaci xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx patogenu, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2. VIZUÁLNÍ XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky xx poli xxxxxx xxx zřídkakdy x&xxxx;xxxxx xxx xx na xxxxx sezóny. Xxxxx xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx neobvykle tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx mezižeberní partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx pouze menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx cévních na xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx zbarvení xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou v tomto xxxxxx podobné příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum. Zpočátku xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx prstenec. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx xxxx se xxxx oddělit od xxxxxxx korové xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx k druhotnému xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady příznaků xxxxxxxxx na internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na vzorcích xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx chlóru, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx (není xxxx vyžadován) xxx xxxxxx v případě, xx xx xx vzorku xxxxxx zeminy a jestliže xx xx provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx minimum (xxx xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx provést vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx korkovatět po xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx a měly xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx v 4–10 °C) xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávejte xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, x&xxxx;xxxxxx xx dobu maximálně 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (např. silný xxxxxxxxxxxxxx sáček Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx pro xxxxx vzorek xxxx xxxxxxx čerstvě sterilizované xxxxx (nože) a nádoby. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx zařízení. Pokud xx xxx xxxxxx XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx pomalým odstředěním (xxx maximálně 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5 Zahustěte xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. subsp. sepedonicus, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx účely. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) nebo xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx testy.

3.2 Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup je xxxxxx pro kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx zahradnických nůžek xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 cm xx xxxxxx strany každého xxxxxx přímo nad xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx dezinfikujte xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě osušte xxxxx papírem.

Shromažďujte části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 hodin chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxxx části stonků x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Jednu xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx polovinu xxxxxxxxx s 10–25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx), xxxxx je xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx použít IF xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx prokázána jeho xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx pro dokončení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx XX testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx je stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx měly mít XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx podle xxxxxxx 2, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C) xx xx mělo xxxxx možnosti použít xxxx paralelní kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní kontroly xxxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx mikroskopická xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (vzorků).

4.1 Připravte sklíčka xx xxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít jako xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx měřené standardní xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx plamenem xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx sklíčka před xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první xxxxx xx xxx být xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) a dvojnásobný xxxx (2T).

ii)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx pracovní ředění (WD) xxxxxxxxxx v IF pufru. Pracovní xxxxxx ovlivňuje přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx podle xxxxxx 4.1 xxxx. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Umyjte ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M fosfátového xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 3) nebo xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ve stejném xxxxxx protilátky stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx test zopakován. Xx xx xxxx xxxx, když všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

i)

Při xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx považuje xx negativní. Další xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx screeningový test xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je možné xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxxxxx a inkubujte xxxx xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Promíchejte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 minut.

5.1.4 Odstřeďujte xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 M PB (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (v 0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 M PB (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX EDTA, pH 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, ale xxx xx xx xxxxx jednou zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx dobu 10 xxxxx při pokojové xxxxxxx. Potom ponořte xxxxxxx do demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX CaCl2, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka uschnout xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;1x hybmixu (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx dobu alespoň 10 minut.

5.2.4 Připravte xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx každé xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx sklíčky (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx pod xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = UPW), 1 l 1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Předinkubujte xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v kádince x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraňte nadbytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x nebo 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx odchylné. Prohlížejte xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxxx. Xx se xxxx stát, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x&xxxx;XX testu.

5.3.5 V úvahu xxxxxx pouze fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx buněk v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně než 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx jako xxxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx používá xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištění 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx DNA. PCR xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PRC xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx být pokud xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál stejným xxxxxxxx jako vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx cílové XXX z komplexních substrátů xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx metodou XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. do ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Tris HCl, xX 8,0) a inkubujte xxx teplotě 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok A (Invitrogen), xxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X xx dobu 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx míchejte xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx stane homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX (např. Qiagen XXxxxx Xxxxx Xxx) xx xx mohly xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR je xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx DNA xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx UPW, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx počátečním xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx PCR elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (w/v) agarózového xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) xx xxxx 30–45 minut, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx nebyl zjištěn x&xxxx;xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, pokud xxx očekávaný amplikon xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX k inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx žádný x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z jedné xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx xxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx dodatek 8.

7.1 Rozdělte celý xxxxxx testované resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx nezalévejte, xxx xx snížilo xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty a pipetou xxxxxxxx xx stonek xxxx děložními lístky x&xxxx;xxxxxx xxxxxx listem xxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx dlouhý asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx méně než 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk na 1&xxxx;xx známé kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 18–24 °C. Inkubujte xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) a zalévejte je xxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Buňky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx růstové xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx xxx rostliny xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, protože xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx z jednoho xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx často mastně xxxxxxx vzhled. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx větší xx naděje xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus než xxxxxx xxxxxxxx, proto xx nezbytné používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx jiných bakterií xxxx hub přítomných x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx k nim Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. carotovora a E. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Phoma xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Erwinia xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx podobné xxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Můžete také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx test xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů nebo xxxxxx rostlin (macerace xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx IF nebo XXX na šťávě x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx dokonce x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, proveďte xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx nejsou xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže testované xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE C. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx izolována, následně xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv je X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx organizmus, xx možno ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx z pelety pletiva xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx být xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx stonků x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují příznaky xxxxxxxx, xxx u nichž xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Jako pozitivní xxxxxxxx připravte desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxxxxx vyloučili xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly naprosto xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx před použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku resuspendované xxxxxxxxxx pelety nebo xxxxx x&xxxx;xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx kvůli náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx saprofytů. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích, lze xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 až 1/10 000 xx XXXX médium xxxx NCP-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx velikosti xxxxx objem xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx roztěrů.

Poznámka:

Alternativním xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx téhož nástroje xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx postup xx závěr xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx zředění.

8.1.3 Inkubujte xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4 Počáteční kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx třech dnech, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

agar z kvasničné xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními solemi.

Inkubujte xxx xxxxxxx 21 °C–24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, xxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) může xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx obecně xxxxxxxx xxxx nepřítomné x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx po dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula ze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání se xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx slabě oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx při 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza škrobu	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7 % NaCl	–
Tvorba xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx XX titr kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml xx xxxxxxxx vodě (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx suspenze xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx buněk xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24 °C xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus specific xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (např. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

d)	Identifikace X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx jsou xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (oddíl 5).

c)	Test FISH xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx postup XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický s profilem xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí o přítomnosti X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx ve všech Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxx (Smith x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk na xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

10.2 Naočkujte 5–10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 týdnů xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých xxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozdrťte a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo nanesením xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X a sledujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx za biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx médiu XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx jako obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu v 10 ml.

Připravte 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100 µl xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx proto opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx proveďte xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx kontrol x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP-40)	Vázání xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků z pupkových xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx pufr xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx IF x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2.

Vypočítejte xxxxx typických fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx a
	s	=	plocha xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx živný xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktem a minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = YGM)

Kvasničný extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115 °C xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte pH xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx) a ochlazení na 50&xxxx;°X xxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, amphotericin X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Sigma) (xxx 5 mg/ml) v 96 % xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx NCP-88

Živný agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx autoklávování x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v zásobních xxxxxxxxx následovně: nalidixic xxxx v 0,01 M NaOH, xxxxxxxxxxxx v 50 % xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- ctc xxx gtg ggg xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx xxx gtt xxx xxx ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx ata xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx NS-8-R	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Předpokládaná velikost xxxxxxxxx z DNA X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x&xxxx;xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx PCR

Postupujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 sekund xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 minut xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program je xxxxxxxxxxxxx pro použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxx použití jiných xxxxxx bude xxxxx xxxxx modifikace xxxxx xxxxx xx), xxx) xx), x), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po inkubaci xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají rozměry 282 bp x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	50 ml

2.2 Nakládací xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (TAE) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X byla xxxxxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metodami xxxxxxx XXX bude xxxxx xxxx optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx gca xxx xxx tgc acg -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- gct xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí po xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH xx 7,0 přidáním 1xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx HCl xxxx NaOH. [UPOZORNĚNÍ: V ROZTOCÍCH X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx roztok přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (sterilizovaný xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx EUB 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 ng/μl

Připravte xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 μx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx všechny roztoky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Během xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx vejcoplodého

Vysejte xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx destilované xxxx.

Xxxxxxxxx xxx roztoky.

Lugolův xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně rozetřete xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a nechejte xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx kapkách přidávaného 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se zbarví xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Commission xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and preliminary xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, I. X., 1984. The extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx methods for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx metabolism of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx infections (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Bull., x.&xxxx;17, 1987, pp. 1–10.

8.	Jansing, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Lelliott, X. X., E. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx scheme xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Bact., 29, 470–489.

13.	Lelliott, X. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. et Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. de Boer, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Mills, D., Xxxxxxx, B., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, K. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, K.-H., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ssp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx some Gram-positive xxxxxxxxxxxxxxx bacteria and xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx xxxxxx xx XXX-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx identification xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2nd ed., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived PCR xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralstonia solanacearum xxxxxx xxx rapid xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx in test xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx and some xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Janse, X. D. a A. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx komerčně dostupné xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx mělo být xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx rostliny, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady,

dokud není xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx ukončen.

Zadržení hlíz xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx v odstavci 1, a

—	vzorek xxxxxxxxxx materiálu lilku xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu

nejméně do xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx za zamořené xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx těch, xxxxx xxxxxxx společné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx v takovém/vých xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx místě produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, nebo xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx xx xxxxx s hlízami xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli stavbami xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx se, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx organismus xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx jako pravděpodobné xxxxxxxx ke klonové souvislosti. Xxx potvrzení identity xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxx provést xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních míst xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zásob xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx následovně:

—

Bezprostředně po xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx odrůdy xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, musí xxxxxxx xxxx, v němž xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx dotčenému xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx v případě xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a kopie dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx ukončení všech xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx zamoření,

—	stručný popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vzorků,

—	informace x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti o rozsahu xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx s uvedením xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx brambor xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která nebyla xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx si Komise xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx kontrolovaná opatření xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro zvířata xx tepelné xxxxxx, xxxxx vylučuje xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx závod x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx prokázáno, xx x&xxxx;xxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli zbývající xxxxx xxxxxxxxxxx s výše xxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx určených xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx nevyžaduje změnu xxxxx, v místě s vhodným xxxxxxxxx xx likvidaci xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx určenými x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx místě manipulovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich použití xxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením xx likvidaci odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx využití xxxx xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a že xxxxxxx schválení xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx metodami pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx stanoveno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, která xxxx členské xxxxx xxxxxxx xxxxxx vymezené xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x):

x)

xx xxxx označeném xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) buď

i)

—

během xxxxxxx xxx pěstitelských let xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na odstranění xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x

—	xx nepěstují xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, pro xxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxx bylo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxxxx xxxxxxx a sklizené xxxxx xx testují postupem xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx činit xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxxx použijí xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx pěstitelských xxx následujících po xxxx označení zamoření

—	se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx jako xxxxx xxxxxxxx s častým nízkým xxxxxxx nebo intenzivní xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, a pod xxxxxxxxx, že xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx a sklizené hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

b)

na xxxxx ostatních polích x&xxxx;xxxxxxxxx místě xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx označeném xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx brambory, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx jiných, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx buď xx xxxxx xxxx xxxx konzumní brambory,

—	alespoň xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx následujícího xx označení xxxxxxxx xx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx I;

c)

neprodleně xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx produkce, xxx xx možné úplně xxxxxxxx xxxxxxxx substrát,

—

se xxxxxxxx žádné hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx na odstranění xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx příslušnými úředními xxxxxxxx udělen souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx mikrorostlin získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

b)

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xx s těmito hlízami xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby k výsadbě xxxxx porostů xxxxxxxx xxxxxx xxxx oblasti xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx po xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx sadbových brambor xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Bramborový odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx xxxxx související x xxxxxxxxxx (xxxxxx půdy, xxxxxx x xxxxxx odpadového xxxxxxxxx) xx zlikvidují xxxxx:

—	xxxxx likvidací xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko úniku xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu. Xxxxx xxxx xxx přemístěn xxxxx na xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx prokázáno, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření se xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Tekutý odpad: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxx písm. x).

Xxxxx xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60 °X x xxxxx po xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, nebo

—	xxxxxxxxx xxxxx způsobem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx schválení x xxx xxxxxx kontrolou, xxx xxx nehrozilo xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx opatření xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx popsané x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.