EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/56/ES

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx přílohy xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x xxxxxxx xxxxxx 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx organismů škodlivých xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx xx., původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru (xxxx jen „organismus“).

(2)	Organismus xx stále vyskytuje x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx xxxxxxxx místo xxxxxxx a stanovil rozsah xxxxxxxxx, předešlo se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx doby xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a kromě xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx opatření.

(5)	X důsledku xxxxxx vývoje se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a aktualizovat opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, jsou xxxxxxxxxxx jak x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) a polymerázová xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu, xxxxx potřebné xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/EHS xx nahrazují xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Neprodleně xxxxx Komisi xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx státy neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx unie.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice je xxxxxx xxxxxxxx státům.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Markos XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx al.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, naznačuje pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) pozitivní, existuje xxxxxxxxx na infekci Xxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx potvrzeno (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx screeningový xxxx negativní, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční schéma xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. m. subsp. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je X. m. subsp. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy x&xxxx;xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx omezené xx okraje xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i přes xxxxxxx xxxxxx rostou, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx postižené xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx cévních xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Prvním dobře xxxxxxxxxxxxxxx příznakem je xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx svazků x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx a příznaky xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. S postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx oddělit od xxxxxxx xxxxxx části. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s červenohnědými xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx nemožné, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxxxxxxx na internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3. PŘÍPRAVA VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx složitějšímu výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx o velikosti 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx lze xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x&xxxx;xxxx prostředky xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx v případě, xx xx xx vzorku xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx má provádět XXX test nebo xxxxx izolace.

3.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a testujte odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx provést xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xxxx korkovatět xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx teplotě a měly xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx testů. Všechny xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx hlíz s podezřelými xxxxxxxx) by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx nádoby xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, pokud to xxxx možné, xxxxxxxxxxx xx v nádobě bez xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx výkrojky xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3), xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; sterilovaný xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizované xxxxx (nože) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx být xxxxxx PCR test, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4 Dekantujte supernatant. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (10 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g po dobu 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) při teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.6 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 až 48 hodin.

3.1.7 Je xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a vzorky C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx na IF xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx xx xxxxxx strany každého xxxxxx přímo nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte části xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °C xxxx xx dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx částí x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Homex). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale lze xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx s 10–25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX TEST

Princip

Doporučuje xx použít XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx IF testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx další xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě připravených xxxxxxxxxx extraktech. V případě xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového xxxxx. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx sklíčka se xxxxxx fixována plamenem (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx srovnávacím xxxxxx X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více okénky, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako test xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx vhodné 15&xxxx;µx – pro xxxxx xxxxxx objem xxxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µl – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xx možná xxxxxxxxx dobu (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (WD) xxxxxxxxxx v IF pufru. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx papír. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství použitého xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) a následně x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly způsobit xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte okénka xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx v určeném xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním kontrolním xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx protilátky stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

i)

Při xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk na 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx potenciálně infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx negativní pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxx se považuje xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 xx –24 nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na ml (xxxx. kmen NCPPB 4053 xxxx PD 406) x&xxxx;0,01 M fosfátového xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx oligosond značených XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx všechny eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx dobu 8&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx po xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (v 0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx množství 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	okénko 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento roztok xxx skladovat, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu a inkubujte xx xxxx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo lyzozymu 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μg.ml–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx pokaždé xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka uschnout xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl na 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte sklíčka xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx každé xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l sterilní vody (Xxxxx xxxx water = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Předinkubujte xxxxxx x&xxxx;xxxx ve vodní xxxxx při teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx podložní sklíčka xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku inkubací xx xxxx 15 xxxxx v kádince x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák xxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx lehkým zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx ihned x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x nebo 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Použitím xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnejte xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx lepší xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, neberte x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost FISH xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru a částí xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x&xxxx;XX testu.

5.3.5 V xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopovém xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx se PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx metody v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx metodě x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. PCR xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx následující negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	pokud možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál stejným xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

X purifikaci cílové XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml v 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a vzorek začne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7.	Přidejte 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut při 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx xxxx nejméně 20 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX (xxxx. Qiagen XXxxxx Xxxxx Xxx) xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 až 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx reakce, která xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx použita xx xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx byl použit xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 bp xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s tímto mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech nových xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR testu:

PCR xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon typický xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx požaduje), za xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX primerů (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx obsahujícího C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx s C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx žádný x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx více negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na l ml xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx původně xxxx testovány s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx i na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti o pěstování xxx dodatek 8.

7.1 Rozdělte celý xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx pouze rostliny xx xxxx&xxxx;2–3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx úplné xxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxxx na stonek xxxx děložními xxxxxx x&xxxx;xxxxxx pravým listem xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx proveďte šikmý xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx začněte xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

7.4 Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nad děložními xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx s podkožní jehlou (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx vodní xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx možno x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx bramboru (xxx xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vlhkosti (70–80&xxxx;%) a zalévejte xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Buňky X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °C a optimální xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo při xxxxxxxxxx místa zajistěte xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx být xxxxxxxx xxx různé vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx komory xxxx chráněny před xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx xxxx přenášet xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx počínaje 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. x. subsp. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx vyvinutí xxxxxxxx, tím xxxxx xx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx vnímavější k nízkým xxxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve fázi xxx listů a nebo xxxxxx xxxx xx.

Xxxxxxx xxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx jiných xxxxxxxx xxxx xxx přítomných x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx hlízy. Xxxxx k nim Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx var. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx podobné xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jelikož xxxxxx vadnou xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Můžete xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx test xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx rostlin (macerace xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx vejcoplodého dezinfikujte xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx XX xxxx XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, že X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce dokonce x&xxxx;xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, proveďte xxxx XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, měla by xxx provedena izolace xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx izolovat xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx infikovány C. m. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE C. X. SUBSP. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. m.. xxxxx. xxxxxxxxxxx náročný organizmus, xx možno ji xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx ze xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx xx xxxx xxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx xx médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety nebo xxxxx x&xxxx;xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx desetinásobné ředění x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle v infikovaných xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx obvykle vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx velikosti xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx použití pomůcek xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx postupem xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxx s agarem xxxxxxx nástrojem a následné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx zopakujte x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx miskami a počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných X. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx následnou xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx by se xxxx provést xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx přerostlá, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx agar (pouze xxx subkultury),

agar z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

8.2.2 Znovu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx nebo barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx mají x&xxxx;xxxxxxx 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxx (viz oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Anonym (1987).

Veškerá xxxxx xx xx xxxx inkubovat při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného agaru. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) testy	Inertní xxxx xxxxx oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37 °C	–
Aktivita xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx škrobu	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2 IF xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx v pufru xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu xx dosaženo, jestliže XX xxxx kultury xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx ml xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx buněk podpořit xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx při xxxxxxx –16 až –24 °C xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (oddíl 5).

c)	Test FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

a)	Pěstujte xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °C (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx identický s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Iso, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o přítomnosti X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Curtobacterium, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxx xxxxxxxx podle (Smith x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk na xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx světle x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). U čistých xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX fostátového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nanesením xx XXXX a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx při teplotě 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx kmene C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx v 10 xX xxxxxxxxxxx pufru, abyste xxxxxxx hustotu xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Toho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx slupkou, o které xx xxxxx, že xxxx napadena X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx jako obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinná ředění x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx proto xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx proveďte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x&xxxx;XXX xxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx sterilizované pufry xxx skladovat xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx z výkrojků z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, co byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15 min.

2. Pufry xxx XX test

2.1 Pufry xxx IF (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém roztoku (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx používá k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

2.2 IF-pufr-Tween

Tento xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx okénka sklíček xx IF testy x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná voda	100 ml

Krycí xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v okénku mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx jednoho xxxx na sklíčku x&xxxx;xxxx jamkami x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx okuláru)
		K	=	tubusový xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx okénku a
	F	=	zřeďovací xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Xxxxxxxx Xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Yeast extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) v 96 % xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte v zásobních xxxxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% ethanolu, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- tac xxx gat gtt xxx xxx ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx NS-7-F	5′- gag xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx NS-8-R	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx z interní XXX xxxxxxxx 18S xXXX = 377 xx (xxxx NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Primer XXX-X (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx NS-8-R (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/µl) (1)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx xxx PCR

Postupujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
	vi)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx bude xxxxx xxxxx modifikace kroků xxxxx xx), xxx) xx), v), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkují xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	50 ml

2.2 Nakládací xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (TAE) pufr, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Gold) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxx bramboru xx xxxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 písm. x) x&xxxx;6.2). Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX bude nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX:	5’- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX a zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx a v případě potřeby xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X do xxxxxxx použití.

iv)	Poznámka: Alternativní fixační xxxxxx: 96&xxxx;% etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 mM (xX 7,4)
EDTA (sterilizovaný xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20 °C. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Solanum xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx amonného x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx rozetřete xxxxxx tloučku v misce. Xxxxxxx xx vody x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené nádobě xx rozpuštění.

Safraninový roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx barvení

1.	Připravte xxxxxxx, vysušte na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a nechejte xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx kapkách xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx detection xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, I. G., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, R. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic significance xx xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx xxx detection xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. x&xxxx;X. Rudolph, 1998. Physiological capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. A., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, R. X., X. Billing x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, R. X. x&xxxx;X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. et Xxxxx.) Xxxxx. et Xxxxx.) xx potato xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxx Chain Reaction xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx specific detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Mills, X., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., W. Hanus, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, K. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Identification and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative studies xx xxxx Gram-positive xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship to xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Xxxxxxx agric. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Sechler, X. x&xxxx;Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx BIO-PCR xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; St. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, P. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Antonie xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

PŘÍLOHA II

1.

Při xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx který xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích xxxxxxx) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, které xxxx součástí xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx test/y, xxxx. imunofluorescenční sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx postup xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, a

—	izolované xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx měsíce od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kontaminace xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a),

—	místo/a xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx užívají společné xxxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx rostliny označené xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx místě xxxxxxxx xxxxxxxx v první xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambory z míst xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx zařízení, xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx, nebo xxxxxx jednotky, a jakékoli xxxx xxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx hlízy nebo xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli xxxxxxxx xxxx předměty vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce před xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x důsledku xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xx, xxxxxx xxxxxxxx testů xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ke klonové xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx a klonově xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx testování xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce.

2.

Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx brambory xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zásob xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (konzumní, xxxxx atd.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí riziko xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx států, musí xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx státu/státům xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx pěstitele nebo xxxxxxxxxx a kopie dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx zamoření,

—	stručný popis xxxxxxxxx provedeného k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vzorků,

—	informace x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti o rozsahu xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx se x&xxxx;xxxx oblasti,

—	další informace xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i ohniskem/y, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx vyžádá.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx úpravě, xxxxx vylučuje xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx schváleném xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx zemědělskou xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostřednictvím přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedeného xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, balených xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx změnu xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx určenými x&xxxx;xxxxxxxxx lze ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx v případě, že xx xxx xxxx xxxxxxxx nebo xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních brambor xxxxxxxx k průmyslovému xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx zpracovatelskému xxxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx stanoveno, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx se xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx členské xxxxx xxxxxxx uvnitř vymezené xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

a)

na xxxx označeném za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření,

—	se xxxxxxx xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, rostliny xxx osivo xx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx plodiny, pro xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxx bylo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let před xxxxxxxx shledáno xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, je povolena xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx a sklizené xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx organismu, a

—	pozemek xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx jako xxxxx xxxxxxxx s častým nízkým xxxxxxx xxxx intenzivní xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují postupem xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx místě xxxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přesvědčeny, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx odstraněno:

—

v pěstitelském xxxx xx xxxx označeném xxxxxxxx se žádné xxxxxxxxxx hlízy, rostliny xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mohou pěstovat xxxxx jako xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx produkce jiných, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx dobu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx následujícího xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx jako xxxxxxxx brambory,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx případně přítomných xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli se xxxxxxx xxxxxx testování xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx I;

c)

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx prvním následujícím xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxx produkci xxxxxxx xxxxxxx a dezinfikují xxxxx xxxxxxx a pomocí xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

x)

x jednotkách xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx úplně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výměny pěstebního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx a dokud xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx udělen xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx brambor,

—	se xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx uvnitř vymezené xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx se veškeré xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx prostory x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, xxxxx xxxx xxxxxxxxx v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx bodu 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx kterých se xxxxxxx xxxx skladují xxxxxxxxxx xxxxx nebo xx s těmito xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx pronajímají xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx použita xxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx sklizni xxxxxxxxx brambory xx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu:

i)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx vyřazených brambor x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx xxxxx související x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx zlikvidují xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do prostředí, xxxx. prosáknutím na xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx být přemístěn xxxxx na místo x xxxxxx xxx izolován xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Komisi x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

xx)

Xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx likvidovány xxxxx xxxx. x).

Xxxxx xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, nebo

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx do styku xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx opatření xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx popsané x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx odpad xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.