EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/ES

ze xxx 12. xxxxxx 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx organismů xxxxxxxxxx xxx brambory xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx., původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx ochranu xxxxx organismu, aby xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a stanovil xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx xx zabránilo jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Xx xx doby xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx opatření.

(5)	V důsledku xxxxxx xxxxxx xx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx v přílohách směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx jde o postupy xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx jak v poslední xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (PCR), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx prvky xxxxxxxxxx opatření, jsou xxx xx vypracovány xxxxxxxx předpisy xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx zamořené xxxxxxx, xxxxxxxx, která xxxx xxx provedena x xxxxxxx produkce, která xxxx prohlášena za xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx nahrazují odpovídajícími xxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí. Neprodleně xxxxx Xxxxxx znění xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx stanoví členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice vstupuje x xxxxxxxx třetím xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Bruselu xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Komisi

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, s. 2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru;

ii)	zjištění Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a rostlin bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a validaci protokolů, xx v dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx negativní, xxx xxxxxx není považován xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx diagnózu bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx vykazujících xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z infikovaného vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogenu, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, potvrzením, že xxxxx xxxxxxx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2. VIZUÁLNÍ VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx a často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx s příznaky xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole na xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, i když xxxx v infikovaných místech xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx eventuálně odumřít. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx konci xxxxx xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxx exsudát xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva mohou xxxxxxxxx a příznaky xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích infekce xx objevují na xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx hnije s prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx k druhotnému xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx dutin x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3. PŘÍPRAVA VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup však xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx užitečný (není xxxx xxxxxxxxx) pro xxxxxx v případě, že xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx má xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti dejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a měly xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx v 4–10 °C) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx vzorku (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxx xxxxx, uchovávejte xx x&xxxx;xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v chladu xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků a růst xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx sáček Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx za použití xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Učiňte bezpečnostní xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx vzorek bylo xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (nože) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxx použit XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4 Dekantujte xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte jej xxx xxxxxxx odstředěním (xxx maximálně 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx a ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86 ° C (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx i pro xxxxxxx xx XX xxxxx a všechny testy.

3.2 Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx založeny na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx část o velikosti 1–2 xx ze xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části stonků xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx papírem.

Shromažďujte části xxxxxx v uzavření xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) po dobu 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx části. Jednu xxxxxxxx xxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou polovinu xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test XX xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx vyšetřovací test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx mít XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx xxx prováděn xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx lze xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového pufru. Xx často není xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve výluhu x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx negativní kontroly xxxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx mikroskopická xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky, xxxxxxx s 10 okénky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx (vzorků).

4.1 Připravte sklíčka xx test xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx vhodné 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx objem zvyšte) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx měřené standardní xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx xx řady xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2 Vysušte xxxxx xxx pokojové teplotě xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Fixujte bakteriální xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při teplotě 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V případě xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx v suchém xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (T/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

ii)	Podle přípravy xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx pracovní ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

4.3.4 Umístěte xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx vlhkém papíru xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X fosfátového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2 Pozorujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx ve stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx povinné další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se považuje xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx xx FISH xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx je možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na ml (xxxx. kmen NCPPB 4053 nebo PD 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl každého xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx dobu 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx noc při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X po dobu 30–60 minut.

5.1.4 Odstřeďujte xx xxxx 8 minut na 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 M PB (viz xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16 µl xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (v 0,01 X&xxxx;XX). Zbývající roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx množství 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, ale xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx dobře xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu a inkubujte xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx do demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μg.ml–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX CaCl2, pH 7,4) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% etanolu xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx alespoň 10 minut.

5.2.4 Připravte hybridizační xxxxxx (dodatek 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx sklíčky (24 × 24 mm) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes xxx x&xxxx;xxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure water = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx a 833 ml XXX). Předinkubujte každou x&xxxx;xxxx xx vodní xxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx při teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx UPW a položte xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) do každé xxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx ihned s mikroskopem xxxxxxx pro epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x nebo 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnejte xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx lepší xxx u pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx s typickou morfologií, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx obsahují xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx je negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte validovaná XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx metodě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. PCR xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

—	alikvotní xxxxx resuspendovaných xxxxx, x&xxxx;xxxx byl xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	pokud xxxxx xxxxxxxxxx xxx provádění XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál stejným xxxxxxxx jako vzorek (xxxxxx).

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lyzozymu xx 1 ml x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx míchejte xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx a vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C), xxxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500 µl 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx zachovejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx stát nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx) xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx xxxxxxxxx roztok xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční směs xxx PCR v prostředí, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx DNA xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx stejnou sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx amplifikované xxxxxxx směsi DNA x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bromidu (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx restrikčním xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s rostlinnými xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, pokud byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx s druhou xxxxx XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího X. x. subsp. sepedonicus xx xxxx, ale x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103 xx 104 xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx použít i na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx xxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx negativních výsledků xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x&xxxx;xxxx uvedených xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx fázi 2–3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 dny xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx napětí buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rostlinu xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx pravým listem xxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx proveďte xxxxx xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 průměru xxxxxx, řez xxxxxxx xx peletové xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní jehlou (xx méně xxx 23 G). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxx xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx bramboru (xxx xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx pufrem stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 18–24 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx a negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa zajistěte xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx různé vzorky xxxxxxxxxx blízko sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx věnujte maximální xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z jednoho xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx počínaje 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. m. subsp. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx vzhled. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx větší xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve fázi xxx xxxxx a nebo xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx i populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx může způsobit xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus, jelikož xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, mělo xx xxxxx k izolaci za xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx XX xxxx XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx (xxx oddíl 8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx místem inokulace. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena izolace xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx izolovat xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx testované xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx předpokladu, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx je X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx možno xx xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx pletiva xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx izolace C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx hlízy nebo xx xxxxxx rostliny.

Izolace xx provádí xx xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx stonků x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, ale u nichž xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena podle xxxxxx 3.1.3.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4053 xxxx PD 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx naprosto xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx by xx xxxx před použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho vhodnost xxx růst patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, že xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco patogen xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Petriho xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné xxxxxxxxx xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx použití pomůcek xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx počátečních 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx misku s agarem xxxxxxx nástrojem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx druhou misku x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, a tím xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx kolonií podobných X. x. subsp. xxxxxxxxxxx se provádějí xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (složení xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx subkultury),

agar z kvasničné xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx maximálně 10 xxx.

X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, obvykle tvoří xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx během 10 dní. (Xxxxxxxxxx typických xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rozetřete xxx xxxxxxxx čistoty.

U xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx v průměru 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) a proveďte zkoušku xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě potřeby xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx nepřítomné x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx inkubovat při 21&xxxx;°X a po xxxxx xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k žádnému xxxxx, xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy se xxxx provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx při 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– nebo slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2 IF xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx v pufru xx IF (dodatek 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu xx dosaženo, jestliže XX xxxx kultury xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (oddíl 5).

c)	Test FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx stejné reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Iso, 16:0 a 17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Curtobacterium, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte test xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx inokulum xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx z 3-denních kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3 Inkubujte xxx xxxxxxx 18–24 °C xxx xxxxxxxxxxx světle x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (xxx oddíl 7.8), xx se xxxx xxxxxxxxx až 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst lilku xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx se xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu C. x. xxxxx. sepedonicus.

10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx a suspendujte x&xxxx;xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X a sledujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx vyšetření xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene C. x. xxxxx. sepedonicus [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx pufru, abyste xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600 nm.

Odstraňte pupkové xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx části x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5&xxxx;xx, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx při teplotě –16 xx –24 °C xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství C. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx proveďte xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, FISH x&xxxx;XXX musí xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v nejméně 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx po xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový pufr xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1 % Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx homogenizací.

Dodatek 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx IF x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1.	Vypočítejte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus

a) Obecná xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Živný dextrózový xxxx (Nutrient dextrose xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx dobu 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Médium x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = YGM)

Kvasničný xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxx pH xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx na 50&xxxx;°X přidejte antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 mg/ml) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx x&xxxx;0,01 M NaOH, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% ethanolu, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx v destilované xxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný PCR xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx PSA-1	5′- ctc xxx xxx xxx xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- tac xxx gat xxx xxx xxx ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx aca xxx xxx xxx xxx -3′
Primer XX-8-X	5′- xxx xxx ggt xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (sada NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer NS-8-R (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta při xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx primerů)
	vii)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxx použití jiných xxxxxx bude xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bgl XX po inkubaci xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Tris Acetát XXXX (TAE) pufr, xX 8,0

Xxxxxxx pufr	48,4 g
Ledová xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

(1) Metody xxxx validovány za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx xxxx Gold) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. a) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX bude xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx FISH Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx gca cat xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx eubakteriální sonda XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX RUKAVICE A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (UPW)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 kapek 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxxx pH indikačním xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx jej xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tris-HCl	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx sensitivní xxxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx –20 °C. Během xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Vysejte xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přepichujte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 dní) xx sterilního xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx lilku vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981) (1)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx draselný	2 g
Destilovaná xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně xxxxxxxxx xxxxxx tloučku x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte a uložte.

Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem krystalové xxxxxxx a nechte xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a nechejte xxxxxxx xx xxxx xxxxx minuty.

5.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx kapkách přidávaného 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx detection xxx xxxxxxxxx of xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, I. G., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx fermentative versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Van Vaerenbergh. Xxx interpretation of xxx XX xxxxxx xxx the detection xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx potato. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Jansing, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx of a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bacteria. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Lelliott, R. X., E. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Hayward, 1966. A determinative xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Selection of Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx xxxxxx region xxx xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837–842.

15.	Mills, X., Xxxxxxx, B., W. x&xxxx;X., W. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Pastrik, K. -X. x&xxxx;X.X. Rainey. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies by xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx potato xxxxxx xx XXX-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx bacteria. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X&xxxx;xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Hennesy, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx the XXX-X1 Ralstonia solanacearum xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx V. X. Collins, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx laboratories: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Pseudomonas xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Wullings, X. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx xxxx xxxxxx komerčně dostupné xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

PŘÍLOHA II

1.

Při každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, které xxxx xxxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxx možno xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx testování xxxxx.

2.

X xxxxxxx potvrzení xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě produkce xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a),

—	místo/a xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

hlízy xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx v takovém/vých místě/ech xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx do xxxxx s hlízami xxxx xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx a staveb,

—

v důsledku xxxxx uvedených v článku 6 hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx sesterský xxxx xxxxxxxx vztah k hlízám xxxx rostlinám, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx výsledek xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx potvrzení identity xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx nebo xxxxxxx xxx provést xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce.

2.

Pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx následovně:

—

Bezprostředně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor,

—	druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx kategorie sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx riziko xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx nebo xx xxxxxx členského státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx xxxx, v němž xxx xxxxxx potvrzen, xxxxxxxxxx oznámit xxxxxxxxx xxxxxxxxx státu/státům xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx a příjemce,

—	datum xxxxxxx partie brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx v případě xxxxxxx, xxxx popřípadě registrační xxxxx pěstitele nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx ukončení xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rozšíření xxxxxxxx, včetně stupně xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx míst produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx s uvedením xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o vymezené oblasti, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx kontrolovaná xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx vylučuje xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx na xxxxxx schváleném xxxxx xxx likvidaci odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxx s úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, a se xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; tato opatření x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx zlikvidovat xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž se xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx určených ke xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, v místě s vhodným xxxxxxxxx xx likvidaci xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx v případě, že xx tak xxxx xxxxxxxx nebo po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, že nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx schválení xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, u kterých xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx státy xxxxxxx uvnitř vymezené xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, pro xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu;

—

v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxx bylo xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx xxxx jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

—

ve xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx úřední xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření

—	se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx a udržuje xxxxx xxxx jako xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx brambor následujícím xx období xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, a pod xxxxxxxxx, že xxxx xxxx při úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx pěstitelských xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují postupem xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx místě xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx smí xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a které xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx jiných, xxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, x&xxxx;xx buď xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx brambory,

—	alespoň xx dobu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx následujícího xx označení xxxxxxxx xx sázejí xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx případně přítomných xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a na xxxxxx xxxxxxxxxxx poli se xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxx stroje x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby a pomocí xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

x jednotkách xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pěstební substrát,

—

se xxxxxxxx xxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstranění xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx a dokud xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx opatření xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx vymezené xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xx veškeré xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx prostory x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, xxxxx xxxx používány x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx příslušných xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx období:

—	zajistí xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx kontrolu zařízení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx používanou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx po xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xxxxx byla xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, xxxx xxxxxxxxx systému xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx všech xxxxx sadbových xxxxxxx xx přiměřenou dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx XX odstavce 1 musí xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné riziko xxxxxx organismu:

i)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx xx prostředí, xxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx půdu. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx na místo x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Komisi x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

ii)

Xxxxxx odpad: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx odpad xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx xxxxxx likvidace xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx písm. x).

Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X v jádře po xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx schválení x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx mohl xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx opatření xx musí oznámit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, likvidací x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.