EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/56/XX

ze xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem na xxxxxxxx Rady 93/85/EHS xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) o ochraně proti xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al., původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx (xxxx jen „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a stanovil xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx v poznatcích x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx opatření.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx jde x xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, xxxx xxxxxxxxxxx jak x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx je fluorescenční xxxxxxxxxxx (FISH) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prvků xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx prvky xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy pro: xxxxxx xxxxxxxx testovaných xxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx vysledování organismu, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx zamořené xxxxxxx, xxxxxxxx, která xxxx být provedena x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx nahrazují xxxxxxxxxxxxxx xxxxx v příloze této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxxx a touto směrnicí.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx xxxxxx členským státům.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, s. 2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (X. m. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. m. subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx také zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx vzorku, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí být xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, z nichž xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogenu, a následně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx jednoho screeningového xxxxx není xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx testy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx a zpočátku omezené xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i přes infekci xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx konci xxxxx xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a stav, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou v tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx omezeny na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx blízko pupkové xxxxx a mohou xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx s červenohnědými xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx příznaky maskovat x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3. PŘÍPRAVA XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Postup však xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx o velikosti 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx vzorkem. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx vyžadován) xxx xxxxxx v případě, že xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx a jestliže xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx příznaky podezření x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx této hlízy xx naříznutí xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx hlíz s podezřelými xxxxxxxx) by měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx nádoby xxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v chladu xx xxxx maximálně 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Schnutí x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx výkrojky z pupkového xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) nebo rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx jednorázovém maceračním xxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150 mm × 250&xxxx;xx; sterilovaný xxxxxxx) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Učiňte bezpečnostní xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxxxxxxxx, xxx pro xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte jej xxx pomalým odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx přímo nad xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx následujících xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex). Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx trvat 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale lze xx dosáhnout filtrací x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx nebo koncentrovaný xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX TEST

Princip

Doporučuje xx xxxxxx XX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx prokázána jeho xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx vyšetřovací test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx používán xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxxxxx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se určovat xxxx xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) v blízkosti xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx by xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. V případě xxxxxxx může být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována plamenem (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 okénky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx test jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o průměru 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx zbývajících okének x&xxxx;xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná ředění (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) nad plamenem xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka před xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx co možná xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (T/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx pracovní ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx IF Tween (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a kolem xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okéncích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

i)

Při xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx s typickou xxxxxxxxxx xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Výsledek XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx není xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl být xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx PD 406) x&xxxx;0,01 M fosfátového xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve vzorku.

Proveďte xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte fixační xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky a odstřeďujte xx dobu 8 minut xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro jeho xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 minut.

5.1.4 Odstřeďujte xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (viz xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µl) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné množství 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx na vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °C) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX EDTA, pH 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu a inkubujte xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xxxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo lyzozymu 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2&xxxx;xX CaCl2, pH 7,4) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% etanolu xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x&xxxx;1x hybmixu (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx alespoň 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl xx 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx horkou plotnu xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx každého xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes noc x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx UPW) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x&xxxx;1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx XXX a položte xx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx FISH xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx ihned x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx imerzí. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx být lepší xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se mohou xx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx v žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití rhodaminového xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx jen tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do vzorku xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx na 1 ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx bez zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace DNA

Používejte xxxx popsané pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál stejným xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s validovanou metodou XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [pH 8,0]) xx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx mikrozkumavku xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl Easy XXX® xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, až usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X pro oddělení xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na vzduchu xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx nejméně 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxx XXX použijte 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx) xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX z kontrolních vzorků xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx směs PCR x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi XXX x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 V na xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA barvením x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx x) po xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx vzor restrikčního xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx amplikon xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx požaduje), za xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Spolehlivého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, pokud xxx očekávaný amplikon xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx žádný x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx l ml xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z oddílu 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx zajistili xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25 lilků xx vzorek.

7.2 Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na stonek xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (přibližně 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx proveďte šikmý xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, xxx začněte xx peletové xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx vodní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pufrem stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx při teplotách xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly a negativní xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx růstové komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx ke kontaminaci. Xx nezbytné, aby xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků. Xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může zprvu xxx tmavozelené xxxx xxxxxxxx, ale xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx vzhled. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx vnímavější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx fázi xxx listů a nebo xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. carotovora x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx var. foveata, xxxxx i populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Erwinia xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jediným xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx chrysanthemi. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus, jelikož xxxxxx xxxxxx celé xxxxx xxxx celé xxxxxxxx. Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, mělo by xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx optimální, se xxxx stát, xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v rostlinách xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx po 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, proveďte xxxx XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla xx xxx provedena xxxxxxx xx vhodná (selektivní) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, že X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE C. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, následně xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx je X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx x&xxxx;xxxxxx pletiva xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. NCPPB 4053 nebo PD 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx dávku xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx xx médium

8.1.1 Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xx xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se obvykle xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx bakterie xx obvykle v infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Proto se xxxxxxxxxx rozetřít 100 µl x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Petriho xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx roztěrů.

Poznámka:

Alternativním xxxxxxxx xx xxxxxxxxx počátečních 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxx s agarem xxxxxxx nástrojem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx téhož nástroje xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, tento postup xx xxxxx zopakujte x&xxxx;xxxxx miskou, a tím xxxxxxxxx xxxxxx zředění.

8.1.3 Inkubujte xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4 Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx třech xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx po 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se xxxx pěstovat xx XXX médiu; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu xxxxxxxxx 10 dní.

C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxx tvoří xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx mají x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9) může xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx přítomné xxxx nepřítomné v C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx inkubovat při 21&xxxx;°X a po xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Pokud xxxxxxx k žádnému xxxxx, xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx při 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx H2S	–
Využití xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného antiséra.

c)	Proveďte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX titr kultury xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx čerstvě připraveného XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx specific xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Boer, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

d)	Identifikace X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx jsou xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxx xxxxxxxx xxxxx (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX PATOGENITY)

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). U čistých xxxxxx xx mělo xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx vadnutí, avšak xxxxxxxx, které po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3 týdny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx po 3&xxxx;xxxxxxx příznaky infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx formu X. x. subsp. sepedonicus.

10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx MTNA x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx dobu 3–5 xxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx typických xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře podílející xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Institute, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] na xxxxxxxxx xxxxx MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx buněk xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, xx xxxx napadena C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu v 10 ml.

Připravte 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100 µl xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinná xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx při teplotě –16 xx –24 °C xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x&xxxx;XXX musí být X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx v žádné x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Pufry xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx po xxxx až jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci bakterie x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °C po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF test

2.1 Pufry xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx pufr xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 min.

2.2 IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx používá xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

(1) Pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx IF x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1.	Vypočítejte xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v okénku mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha jednoho xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx jamkami x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1&xxxx;% D(+) xxxxxxx (monohydrátu). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx salts xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte 0,5 litru xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
NaCl	0,05 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO₄. H₂O	0,015 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Agar (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °C xx dobu 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx na 50&xxxx;°X xxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, amphotericin X&xxxx;(Xxxxx) (1 mg/ml) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média je 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003 g, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx v 50 % xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx v destilované xxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 buněk C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -R	5′- xxx xxx gat xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx NS-7-F	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Primer XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3′

Předpokládaná velikost xxxxxxxxx z DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer PSA-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µM) (2)	0,1 µl	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/µl) (1)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx při teplotě 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 minut xxx xxxxxxx 72 °C (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program je xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx bude možná xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) xx), v), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bgl XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 bp a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Tris Acetát XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Trojitý xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

(1) Metody xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. a) x&xxxx;6.2). Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xxxx nutná xxxx optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx cat xxx xxx acg -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX RUKAVICE A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx a v případě potřeby xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx jej chráněný xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tris-HCl	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μl hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Solanum xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx pěstovat xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 hodin xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Huckerově xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx destilované vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx draselný	2 g
Destilovaná voda	300 ml

Pevné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx tloučku x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx do xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx rozpuštění.

Safraninový roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx a fixujte zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte pod xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a nechejte xxxxxxx po dobu xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx vodou a vysušte xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte pomocí xx xxxxxxx přidávaného 95&xxxx;% xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, nebo xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the detection xxx xxxxxxxxx xx xxx ring rot xxxxxxxxx Corynebacterium sepedonicum xx xxxxxxx of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx plants. Rev. Xx. Path., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx bacteriology, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx cell fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX method xxx xxx detection xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx potato. XXXX Bull., x.&xxxx;17, 1987, pp. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. x&xxxx;X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. X., 1966. The plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., E. Billing x&xxxx;X. X. Hayward, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx pseudomonads X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, R. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in potato xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Mills, X., Xxxxxxx, B., W. x&xxxx;X., X. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ssp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Sechler, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx tubers xx BIO-PCR and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection system. Xxxxx Disease 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 pp.

21.	Skerman, X. X. X., 1967. A guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx genera xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx and Wilkins Xxxxxxx, Baltimore.

22.	Smith, X. X.; Hennesy, J; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx in test xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in situ xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

PŘÍLOHA II

1.

Při xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, je třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx možno rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx vyšetřovací test/y, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx není xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx měsíce xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx produkčního xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx v předchozí xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx během xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx rostliny označené xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx místě xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v odrážkách xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, nebo xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli stavbami xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx a staveb,

—

v důsledku xxxxx uvedených v článku 6 hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx sesterský xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx rostlinám, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx testů xx xxxxxxxxxx mohl xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ke klonové xxxxxxxxxxx. Xxx potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce.

2.

Pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx zohlednit tyto xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, kde se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské rostliny,

—	společná xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zásob xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy, xx xxxxxxx metod stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx odrůdy xxxxxx brambor,

—	druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) a v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z jiného xxxxxxxxx státu/jiných členských xxxxx xxxx do xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx dotčenému xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ke splnění xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx partie brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx v případě potřeby, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx a kopie dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx partií x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a u sadbových xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx zamořená, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx informace xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx si Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx vylučuje xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx prostřednictvím přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx opatření x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedeného xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx dotyčných xxxxxxxxx států xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx k likvidaci xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, balených pro xxxxxx dodávku a použití, xxxxx xxxxxxxxxx změnu xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx tak xxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx dodání xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx odvozových vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx odpovědnými xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx metodami xxx xxxxxx a dezinfekci xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx metody, u kterých xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx metody xx xxxxxxx xxx kontrolou xxxxxxxxxxx úředních subjektů xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a):

a)

na xxxx označeném xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx na odstranění xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, pro xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxx bylo xxx úředních kontrolách x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, je povolena xxxxx produkce xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx testují postupem xxxxx přílohy I;

—

ve xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx příslušném xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx xxxx, pokud xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxx xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx úřední xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx čtyř pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření

—	se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, a

—	pozemek xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, a pod xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx v průběhu xxxxxxx xxxx po sobě xxxxxxxx pěstitelských xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx organismu, je xxxxxxxx produkce xx xxxxx nebo konzumní xxxxxxxx a sklizené xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx označeném xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx po označení xxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, a to xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx brambory,

—	alespoň xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, buď na xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx brambory,

—

v každém xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxxx postupem xxxxx přílohy X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a pomocí xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

d)

v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné úplně xxxxxxxx xxxxxxxx substrát,

—

se xxxxxxxx xxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx produkce xxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výměny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednotky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx veškeré xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, které xxxx používány v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx bodu 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx kterých xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx k produkci xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx porostů bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx jen xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx sklizni xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxx podle xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx nakládáním xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx program xx xxxxxxx xxxxx xxxxx sadbových xxxxxxx xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx organismu:

i)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slupek) x xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx zlikvidují xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx prostředí, xxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx izolován xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

xx)

Xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. x).

Xxxxx xxxxx musí být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx likvidací, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx nehrozilo žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xx odpad xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.