EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

ze xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem na xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto důvodům:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx organismů škodlivých xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. sepedonicus (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al., původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, předešlo se xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a prováděla se xxxxxxxx opatření za xxxxxx jeho xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx opatření.

(5)	V xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxx a aktualizovat opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx o postupy xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, jsou xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx postupy, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx testovaných xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx vysledování organismu, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, která xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx prohlášena xx xxxxxxxx, x xx vymezených xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx xxxxxxxxx odpovídajícími xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx přijmou x xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx dosažení souladu x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx odkaz učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx vstupuje x xxxxxxxx třetím xxxx xx vyhlášení v Úředním xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx státům.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI BRAMBORU, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx a rostlin bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx a validaci protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných vzorků. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným chybám, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 93/85/XXX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (IF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 směrnice 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx není xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, aby xxx xxxxxx považován za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx poli zjistí xxx xxxxxxxxx a často xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i přes xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní lístky, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx eventuálně odumřít. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx sklovitost xxxx průsvitnost pletiva xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx cévních na xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx svazků x&xxxx;xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné příznakům xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx solanacearum. Zpočátku xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx blízko pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx šířit na xxxx prstenec. S postupem xxxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx se x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx dutin x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx příznaky maskovat x&xxxx;xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady příznaků xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx 1&xxxx;xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz.

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Použijte xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, jestliže xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX test nebo xxxxx izolace.

3.1.1 Pomocí čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové části x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx naříznutí hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx v 4–10 °C) xx do xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II.

3.1.2 Shromážděte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x případě, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx a růst xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx skladování xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx jedním z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150 mm × 250 mm; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) za použití xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx použití xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby nebo xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo vakuovou xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) při teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx pro xxxx na X. x. subsp. sepedonicus, 500&xxxx;µx xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx a 500 µl pro xxxxxxxxxx účely. Přidejte xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchejte xxxxxxx a uložte při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx testování xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7 Je xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx XX xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx osušte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 xxxxx chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx dosáhnout filtrací x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx použít XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test XX xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další vyšetření xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspenze obsahující 105 xx 106 xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxx kmene C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (WD) v blízkosti xxxxx nebo xx xxxxx. Používejte validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx proveden na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx odstranit xxxxxxxx 1&xxxx;xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx sklíčka se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx srovnávacím xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve výluhu x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xx test xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek podle xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší okénka xxxxx zvyšte) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) a dvojnásobný xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx pracovní xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx v IF pufru. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. i) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx excitaci FITC xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Zkoumejte xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a kolem xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým počtem xxxxx zkoumejte nejméně 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx v určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky stejná xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3 Existuje několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií v titru xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx nejméně 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5&xxxx;× 103 buněk na 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx dobu 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx a inkubujte xxxx noc při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx je 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (viz xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (v 0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) může xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	okénko 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	okénko 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	okénko 10
Xxxxx sklíčko 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci další xxx. Sklíčka by xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Sigma L-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx xxxxxxxxx, ale xxx by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx 10 xxxxx při pokojové xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx jednou, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μg.ml–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační peci xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx na 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte po xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6 Přikryjte každé xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xxx, aby pod xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167 ml 3x hybmix x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx krycí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx podložní xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx UPW x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do každé xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx imerzí. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx gramnegativních buněk) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx nebo při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxxx se PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. PCR xxxx xx měli xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx biologii, aby xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PRC xxxx by měl xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx byl xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx xx 1 ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx provádění XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx PCR dispozici x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s validovanou metodou XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. do xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1&xxxx;xx v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx DNA® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx stane homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X pro oddělení xxxx a vytvoření mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx fázi xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1 ml 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X a odstraňte x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15 000 g po dobu 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte xxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxx XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Kit) xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při purifikaci XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx PCR xxxxx validovaného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx desetinný roztok xxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v prostředí, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu DNA xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx XXX, která xxxx použita xx xxxxx PCR namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně optimalizovaný xxxxxxx PCR (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Používejte vhodný xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx s vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty elektroforézou xxxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s rostlinnými xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xx xxxx, ale x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX k inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx více negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx l ml xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx původně xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx růst C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by měly xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx celý xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx rostliny xx fázi 2–3 listů xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx zajistili xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, xxxx xxx xxxx popsané xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx nezalévejte, xxx se xxxxxxx xxxxxxx napětí xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx pravým xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xxxxxxxx šikmý xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, řez xxxxxxx xx peletové xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku inokulujte xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23 G). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx vodní xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx po dobu xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24 °C. Inkubujte xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a vysoké vlhkosti (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx je xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx druhý.

7.8 Pravidelně xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující příznaky. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx působí u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová nebo xxxxxxxxxxx ochablost. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx vzhled. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx trvá xxxxxx xx vyvinutí xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx jiných bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx k nim Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jediným xxxxxxxx je zčernání xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx chrysanthemi. Jiné xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx od případů xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx celé xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxxxx k izolaci xx xxxxxxx xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin (xxxxxxxx xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx XX nebo XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx zůstává v rostlinách xxxxx vejcoplodého jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx izolace xx vhodná (selektivní) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx izolovat xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx nejsou xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX C. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx ukončena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx organizmus, xx xxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx hlízy nebo xx xxxxxx rostliny.

Izolace xx xxxxxxx ze xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, ale x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx by se xxxx před xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx velikosti xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx postupem xx rozetření xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx pelety na xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx nástrojem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nástroje xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, tento xxxxxx xx xxxxx zopakujte x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu zředění.

8.1.3 Inkubujte xxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x&xxxx;xxxxxx počítáním po 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie podobné X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx jedno x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21 °C–24 °C xx xxxx maximálně 10 xxx.

X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx během 10 dní. (Xxxxxxxxxx typických xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx mají x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxx metod Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Klementa x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx růstu, xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula ze xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxx	Xxxxxxx xxxx slabě oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7 % NaCl	–
Tvorba xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba H2S	–
Využití xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– nebo xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx v pufru xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx dvojnásobného xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx buněk xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4 FISH xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxxxx XXXX (oddíl 5).

c)	Test XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °C (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o přítomnosti X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Jiné rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx z těchto kyselin, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx pro xxxx xxxxxxxx neobvyklá kyselina, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx inokulum přibližně 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3 Inkubujte xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). U čistých xxxxxx by xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (viz oddíl 7.8), xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx C. x. subsp. sepedonicus.

10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx části stonku 2&xxxx;xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx nanesením xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx dobu 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X a sledujte vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Norwegian Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene C. x. xxxxx. sepedonicus [XXXXX 4053 nebo XX 406] na xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx hustotu xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600 nm.

Odstraňte pupkové xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, že xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx části x&xxxx;100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x&xxxx;XXX xxxx být X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx kontrol a nesmí xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx až jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, zkontrolujte xX a sterilizujte v autoklávu xxx 121 °C po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (PVP-40)	Vázání xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Tento xxxx xx používá k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

(1) Pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních buněk

1.	Vypočítejte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (c).

2.

Vypočítejte xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x
	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Živný dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx dobu 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Médium x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktem a minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
NaCl	0,05 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO₄. H₂O	0,015 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002&xxxx;x, amphotericin X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx v zásobě roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx acid (Sigma) 0,008&xxxx;x, Cycloheximide (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 ml vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx gtg xxx xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -R	5′- tac xxx gat gtt xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx gca xxx xxx cct xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx z interní XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (sada XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (frakce V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µM) (2)	0,1 µl	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (prodlužování xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 sekund xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
	vi)	30 xxxxxx při teplotě 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bude xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkují xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx s enzymem Bgl XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx specifického xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Xxxx Acetát XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx pufr	48,4 g
Ledová xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

(1) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx bramboru za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro Cms XXX-XX3-01:	5’- xxx xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX:	5’- gct gcc xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx pomocí XXx xxxx NaOH. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx jej xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 mM (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx až 1x, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx EUB 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx lehké xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20 °C. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do sterilního xxxxxxxxx substrátu. Přepichujte xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981) (1)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx vody x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx přípravu xxxxxxxxxx roztoku.

Postup barvení

1.	Připravte xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx a nechte působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx minuty.

5.	Opláchněte xxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% etanolu tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx a vysušte savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx from xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx ring xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Jansing, X. x&xxxx;X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10.	Klement Z.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, R. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Selection of Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer region xxx xxxxxxxx detection xx Clavibacter michiganensis xxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, K. -X. x&xxxx;X.X. Rainey. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Pastrik, K.-H., 2000. Detection of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. S., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship to xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx BIO-PCR xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx identification xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx test xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Pseudomonas xxxxxxx xxxxx. Antonie xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx and some xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Wullings, B. X.; xxx Beuningen, X. X.; Janse, X. X. x&xxxx;X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích testech) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, xxxxx xxxx součástí xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou součástí xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený materiál xxx xxxxxxxxxxx test/y, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, a

—	izolované xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx postupu podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamořené xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx produkčního xxxxxxx xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx místě/ech xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx hlízy xxxx rostliny xxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, vozidlo, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx jednotky, a jakékoli xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx nebo jsou x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx předměty vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx sesterský xxxx xxxxxxxx vztah x&xxxx;xxxxxx xxxx rostlinám, které xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx testů xx xxxxxxxxxx mohl xxx xxxxxxxxx, zamoření xxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ke klonové xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx a klonově příbuzných xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x produkce hlíz xxxx xxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ostatních míst xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx hostitelské rostliny,

—	společná xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx následovně:

—

Bezprostředně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy, za xxxxxxx xxxxx stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx členského xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx výskyt potvrzen, xxxxxxxxxx oznámit xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx informace xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako např.:

—	název xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	kopie xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx popřípadě xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx a kopie dodacího xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, v každém případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rozšíření xxxxxxxx, xxxxxx stupně xxxxxxxxxxx xxxxxx vzorků,

—	informace x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx zamoření, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx partií x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o vymezené oblasti, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx vyžádá.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx xxxxxxxxxx místě xxx likvidaci odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx závod s úředně xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx prokázáno, xx x&xxxx;xxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná opatření, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; tato opatření x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli zbývající xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx xxxx vhodná xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx zpracovávat, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, balených xxx xxxxxx dodávku a použití, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx xxx xxxx xxxxxxxx nebo po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx odvozových vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx metody, u kterých xxxx stanoveno, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx členské xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx v čl. 7 odst. 4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx zamořená xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx pěstitelských let xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx xxxxx xx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu, xxxxxxxx xxxxxxx, pro xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, xx povolena xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx I;

—

ve xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po příslušném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx použijí xxx xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx označení xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx a udržuje ladem xxxx jako stálá xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx období upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx v průběhu alespoň xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx I;

b)

na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxxxxxxx xxxxxx subjekty xxxx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nepěstují, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx úředně xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx dobu třetího xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

d)

v jednotkách xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx úplně xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx ani xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx xx odstranění xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výměny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx mikrorostlin získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx jsou xxxxxxx opatření xxxxx xxxx 4.1, členské xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx příslušných xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx nebo skladují xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx pronajímají xxx xxxxxxxxxxx používanou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx jen xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, a aby xx po xxxxxxx xxxxxxxxx brambory na xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx uvnitř oblasti xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx od xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx zásobami xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby program xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx IV xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slupek) x xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci odpadu, x xxxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu. Odpad xxxx xxx přemístěn xxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na povrchu xxxxx částice podroben xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx písm. x).

Xxxxx xxxxx musí xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx před xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx podléhajícím xxxxxxxx schválení a pod xxxxxx kontrolou, xxx xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx mohl xxxxxx do styku xx zemědělskou půdou. Xxxxxxxxxxx těchto opatření xx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx s manipulací, likvidací x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.