Plné znění - 32006L0063

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/ES

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou se xxxx xxxxxxx II xx XXX směrnice Xxxx 98/57/XX x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze xxx 20. xxxxxxxx 1998 x ochraně xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.  (1), x xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

vzhledem x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx x rajčata xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Společenství.

(3)

Směrnice 98/57/XX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx proti organismu, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx se zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se ochranná xxxxxxxx za účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx zjišťování x identifikace organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx ochraně proti xxxxxxxxx xxxxxxxx přezkoumání xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se ochranných xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 98/57/XX.

(6)

Pokud xxx x postupy xxxxxxxxxx x identifikace, xx xxxxxxxxxxx moderní xxxxxxxx metoda xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (XXX) i xxxxxxxx různých technických xxxxx současných xxxxxxx xxx zjištění x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách, xxx xx brambor, xx xxxx a xxxx.

(7)

Pokud xxx o xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x xxxxxxxxxxx zamořených oblastí, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx označených xxxx xxxxxxxx x x xxxxx vymezených oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx některé xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx xxxxxx této xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx organismu.

(8)	Opatření xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx II xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zněními x xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1.   Členské xxxxx xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx těchto xxxxxxxx x srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx předpisy x touto směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx obsahovat odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2.   Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, které xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx po vyhlášení x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.

---

(1)  Úř. věst. L 235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

---

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX

	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky.
	3.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx bramboru a v rostlinách xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx testy
	3.	Postup xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy R. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx zjištění a identifikaci X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Pastrika (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (XXXX test)
		8.	Testy xxxxxxxx imunoanalýzy XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. solanacearum
		Dodatek 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Validovaná xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx podmínky xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx testovaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx na optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení kvality, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx uvedeno v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx. Pokud je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx selektivní xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze dvou xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx jiných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

ODDÍL II

PODROBNÉ XXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX A V ROSTLINÁCH BRAMBORU, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem x&xxxx;xxxxxxx rostliny při xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. V raných xxxxxx vadnutí zůstávají xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Při ponoření xxxxxxxxxx xxxxxx svisle xx vody se x&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx překrojit xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx a podélně xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx fázi xx xxxxxxx pozná podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, xx xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx hnědým x&xxxx;xxxxxxxx xx může xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. V pokročilejších xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx půdy. Na xxxxxx xx mohou xxxxxxx červenohnědá, lehce xxxxxxxx postižená xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2   Příznaky x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx nasycené vzdušné xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx kroucení listů xxxxxx xxxx a vadnutí xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, které končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx nevadne, ale xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx postranních xxxxxx. Xx možné pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx jsou dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx podmínek jsou x&xxxx;xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx vysoká koncentrace xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx rostoucí x&xxxx;xxxxxxx rostliny bramboru xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dostačující. Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx stonku

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx sklíčku nilskou xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Viz oddíl VI.A.2).

2.3   Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4   Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx xxxx IF (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

x)

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy bramboru xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxxxx 50–100 µl suspenze x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Připravte případně xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. — Xx universální živné xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xxxxxxx krémově bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx bílé. — U Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Avirulentní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

1.1   Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech populací X. xxxxxxxxxxxx.

x)

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx vhodné desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (není xxxx vyžadován) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx nebo jestliže xx xxx proveden xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na pupkovém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx minimum (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xx dobu nejméně 2&xxxx;xxx při pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx III.

1.1.2   Uložte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části do xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány prostředky x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx drcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx xxx každý xxxxxx použili xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Při testu XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx přístroji. X&xxxx;xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx pomalým odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 g po xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Použijte 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Přidejte sterilní xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Extrakty xxxxxxxxx během testování xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx IF x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských rostlin

2.1   Příprava xxxxxx

Xxxx.: Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li se xxxxxxx, měl xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx kousky stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice z předpěstírny: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx skleníku: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny uříznutým xxxx xxx spojením x&xxxx;xxxxxxx stonkem. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Pelargonium xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Silene xxxx, X. nutans., Tussilago xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx stonku jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxx stonků v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3   Po usazení, xxxxx má trvat 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Jeden xxx xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhý díl xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2   Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1.   Schéma xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné k detekci xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx povrchové xxxx a rovněž může xxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx než v povrchové xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx v odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), při xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx bráno v úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx k tomu, xx xx xxxx xxxxxx používá xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a v odpadní xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. solanacearum x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx toku, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

2.1.1   Na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx výtoku odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xxxx obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx toku x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3   Je-li xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 minut (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro velké xxxxxx vody, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků odpadní xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2   Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

2.   Metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx detekční xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu xx vzorcích půdy, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx je třeba xxxx v úvahu omezenou xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx v mřížce 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počet xxxxxxxx míst xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx xx zpracování xxxxxxx a kanalizace navzorkujte xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. SOLANACEARUM

A.   DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1.   Test na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxxxx xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx kultury xx živné xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx preparáty xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx sklíčka 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a nechte inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte přebytečnou xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx vodu xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou nebo xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, zda xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx fluorescence. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx morfologie buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx súdánské xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx a inkubujte 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým papírem x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX granulí x&xxxx;xxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx xxxx v extraktech x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx xx v pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx předběžný xxxx, abyste zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 jednotek xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, např. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx velkou xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxx morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx konkurenci xxxx xxxxxxxx, měl by xxx xxxxxx otestován xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly připravte xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx být xxxx xxxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx testování xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1   Proveďte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx s cílem xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Naneste 50–100 µx extraktu xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx ředění.

4.1.2   Nechte xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Po 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx stav x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3 dnech xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pruhy xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx fluidní, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4   Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, bez chlóru) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx vhodném ochranném xxxxx xxx teplotě –68 xx –86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx identifikaci xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) a test patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx bakteriemi x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. solanacearum.

4.2   Obohacovací testy

Použijte xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Tímto způsobem xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají často xxxxxxxx také obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx může xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx pro xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx obohaceného xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx předem xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit větší xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx v 1,0 ml xxxxxxxxx živné xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx zacházejte xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla analýza xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek R. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Doporučuje xx xxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx měl xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích uchovaných xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx to není xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Použijte xxxxxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxx xxxxxx, pokud možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu: Napipetujte odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, jak xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Napipetujte odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být použita xxxx rezervní nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 minut xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test v odst. 5.1.i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy sklíčka xx test v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka na xxxx podle odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx navlhčený xxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2   Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Umyjte xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx zvětšení 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte pozitivní xxxxxxxxx vzorek. Buňky xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, musí být xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5). Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování není xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx PCR použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a je pozitivní, xx nutné provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx s interní kontrolou.

Používejte xxxxxx bezpečnostní opatření, xxxxxx zabránili xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx extrakce XXX x&xxxx;XXX) xx xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx měl zahrnovat xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx být xxxxx xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

a)   Metoda xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx termobloku nebo xxxxx lázně x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxx Easy DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně promíchejte xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx fází a vytvoření xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx a inkubujte na xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 minut.

16.	Skladujte při xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx sraženinu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx efektivní.

6.2.   PCR

6.2.1   Připravte xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3.   Analýza produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx s 3 µl nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx vícenásobné PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx amplifikován u žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Pozn.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx xxx xxxxx možno proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx referenčního xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, je xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx vzorkového extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx po xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200 µl fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované suspenze xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx použijete 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 M PB). Zbývající xxxxxx vzorku (49 µl) xxxx být uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, že je xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	okénko 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 6	xxxxxx 7	okénko 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X po xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx okénka xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4 okénka, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Umístěte sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60 mm).

7.3.   Hodnocení XXXX testu

7.3.1   Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo málo xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí mikroskopu.

7.3.2   Hledejte xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx kontaminaci musí xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx okénka sklíčka) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, že x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, i když mnohem xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx IF.

7.3.5   V úvahu xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky pozorovány xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8.   Testy ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx použít xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX nebo XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost testu, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx ve vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Titr je xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které je xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx u titru xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 2 A a B). Xxx srovnání výsledků xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X na 4&xxxx;xxxxxx xx vodní xxxxx xxxx topném xxxx xxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum v blokačním xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx komerčních protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx je titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx v blokačním xxxxx. Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx předtím (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (xxxxxxx 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pufru xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Přidejte rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx na každé xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Připravte xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného alkalickou xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Připravte xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxxx probíhá při xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrná xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx extraktu xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou menší xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx test nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. solanacearum xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx s rovnocennou citlivostí xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti pěstování xxx v dodatku 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale jen xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx méně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxxxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx rostlinu mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx příčný xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx nainokulujte 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx rostlin, xxxxxx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, abyste xxxxxxxxx jak přemokření, xxx xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx vody. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx komory xxxx, v případě xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx z různých xxxxxx xx xxxx inkubace xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník nebo xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx mohli přenést xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx a/nebo xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx podezřelé xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6   Jestliže xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u pozitivních kontrolních xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

B.   IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech.

Zahrňte xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak chybí x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1   Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v pufru XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3   Použijte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx ELISA

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx hodnota xxxxxxxx xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx vařící vodní xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx být xxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Boudazin xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (oddíl VI.A.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (dodatek 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.   Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx využití x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx biovaru xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Je-li živná xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx destičky x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2   Repetitivní sekvenční XXX s využitím xxxxxxx XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) X. xxxxxxxxxxxx, jak bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16S xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

3)

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se po xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5)

Xxxxxxxx izolaci z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx destilované vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Proveďte xxxxxxx xx xxxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

“

---

(1)  Viz Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx R. solanacearum xxxxxx 2 (rod 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx produkt XXX xx podobnou velikost, xxxx xx očekávaná xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx primerů XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx dodatek 6).

(6)  Pravděpodobnost xxxxxxx reakce ve xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx znám pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Research XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(11)  Koncentrace xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx optimalizovány xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Použití xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX může xxxxxxxxx xxxx provedení optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

---