EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. července 2006,

xxxxxx se xxxx xxxxxxx II xx VII směrnice Xxxx 98/57/ES o xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx al.

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. (1), a xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx směrnice,

vzhledem x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x rajčete (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Xx té xxxx xxxxx k xxxxxxxxxx pokroku v poznatcích x biologii x x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx proti xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx ochranných xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx tohoto xxxxxx xx jeví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x postupy xxxxxxxxxx x identifikace, xx zapracována xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Rovněž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx různých technických xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx brambor, ve xxxx a xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, prvky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx potvrzeného xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx v místech xxxxxxxx označených xxxx xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx některé xxxxxxxx xxx rajče, x xxxxxxx xx význam xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx 98/57/XX xx nahrazují xxxxxxxxxxx zněními v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Tyto předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx odkaz učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. července 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx KYPRIANOU

člen Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx stonku
		2.	Detekce granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx hybridizace in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)
		7.	Metoda xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx kontaminace xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, je x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx karanténního organismu x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx příslušných povolení xxxxxxxx úředními orgány xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, selektivní izolace) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx infikovaný R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx bramboru, rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx k tomu, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

ODDÍL II

PODROBNÉ XXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX HNILOBY NEBO XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1. Příznaky (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1 Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx také x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody se x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx slizu.

Hlíza bramboru. Xxxxx bramboru je xxxxx překrojit xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx žlutého až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se infekce xxxxxxx vně xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy a z oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx přilepení xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx kolem 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů a vadnutí xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx stonku xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx postranních xxxxxx. Xx možné pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x&xxxx;X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx nebo částí xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxx platných testů:

2.1 Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

(Viz oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx nebo jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx SMSA jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Avirulentní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx být xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při teplotě 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo jestliže xx xxx proveden xxxx PCR nebo xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém konci x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a potom xx xxxx xxx hlízy xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx karanténních xxxxxxxx. Všechny hlízy xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části do xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx prostředky x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to možné, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx nejdéle 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4 hodiny xxx xxxxxxx nižší xxx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx chlazené, nebo

homogenizujte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx každý xxxxxx použili xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Xxx xxxxx XXX zabraňte xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx zkumavek na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Je-li xxxxxx zakalený, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a odstraňte supernatant, xxxx by se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) k 500 µl xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly uchovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx sklíčka XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů a optimalizovaných xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kousek dlouhý 1&xxxx;xx z paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postranní xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Odeberte xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami odeberte 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad úrovní xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xxxxxxxx 1–2 cm díly xx&xxxx;xxxxxx xxx vodou xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x&xxxx;xxxxx nejméně 10 rostlin xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx potenciální plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a podzimu, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx po xxxx rok x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx vodních tocích. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Cerastium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X této fázi xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70 % etanolem x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx drcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě na 24 hodin.

2.1.3 Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, ale xxx xxx xxxxxxx filtrací x/xxxx odstřeďováním popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86 °C (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx detekce a identifikace X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx a rovněž může xxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxx, xx očekávaná citlivost xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce v odpadní xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), při nichž xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx mělo xxx bráno x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, xx xxxxx xx uvědomit jeho xxxxxxx při xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. solanacearum x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy teplota xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxx patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx jsou přítomny.

2.1.1 Na xxxxxxxxx vzorkovacích místech xxxxxxxx vzorky vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx zpracování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Doporučená velikost xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) a testujte xx 24 hodin.

2.1.3 Je-li xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx usazeninou x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 xx peletového xxxxx a zachycením filtrátu. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx vody, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků odpadní xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx popsané x&xxxx;xxxxx xxxxxx je použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx poznamenat, že xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx nebo xxxx xx xxxxx xxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na jeden xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvyšte xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx uchovejte vzorky xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 g sterilních xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. SOLANACEARUM

A. DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxxx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx vlákna bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx živné xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu biovaru 2&xxxx;X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx fixovali.

4.	Obarvěte xxxxxxxxx xxx nilskou xxxxx xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx mikroskopická pozorování xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a)	Zakápněte xxx sklíčka 1&xxxx;% xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte přebytečnou xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx kapkou xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem při 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx objeví xx XXX granulích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3 % xxxxxxxx xxxxxxxx černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx krátce xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Upozornění: xylol xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx roztokem safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

e)	Opláchněte xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX granulí x&xxxx;xxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo v extraktech x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxx následujícím xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 sekund objeví xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx předběžný xxxx, xxxxxx zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx morfologii, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Je-li podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, měl xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány v glycerolu xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly připravte xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X každé xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx živné půdy xx měla xxx xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx otestována xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (vzorky).

4.1.1 Proveďte vhodnou xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6 dní. Typické xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx živné xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3 dnech xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zbarvení ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx na xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx částečně xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané kolonie X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx očkujte xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (xX 6–8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl VI.C).

Interpretace výsledků xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Tímto způsobem xxxxx i ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx(1:100). Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx z obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx může xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx bujónu (xxxxxxx 2), xxxxx xx předem připravte xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X v třepané xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX dobře promíchejte.

4.2.4 S xxxxxxxxxx bujónem zacházejte xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx ve xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx postupového diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx při testování xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovních xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx je xx xxxxx, může xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx není xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx vzorky xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované přirozenou xxxxxx (uchovávané lyofilizací xxxx zmrazením při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx použijte alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka s více xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího okénka xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx vhodné xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – u většího okénka xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky xxx xxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx xxxxxxx, fixovaná xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx v suchém xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx mít 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v pufru IF. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované pelety
(T = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na navlhčený xxxx papír. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako předtím (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx sklíčka (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx xxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx nelze brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií podobnou X. solanacearum.

5.4.4 Uvažujte pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx odhadněte xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx povinně xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza úplná.

Využití xxxx metody v celém xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx možno, vyberte xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx, xxxxxx zabránili xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx mělo vždy xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx kterých byla xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste zabránili xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx než xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx extrakty z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx použít xxx&xxxx;xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace DNA

Používejte xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx materiálu proveďte xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl extraktu xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx s teplotou 95&xxxx;°X na 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl roztoku Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxx Easy XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx fází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx supernatantu obsahujícího XXX pro test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX podle schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25 µl PCR xxxxxx xxxxx protokolů XXX (xxx dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž zdroj XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx vhodný XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx vícenásobné PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx je zjištěn, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx amplifikován x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx mít podezření xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco ze xxxxxx pozitivní kontroly X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V multiplexních xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je získán x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními kontrolními xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx na 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx a rozpusťte peletu xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx dodatek 7).

7.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µl (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte etanol xxxxxxxxxxx a přidejte stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možné xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (dodatek 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) na každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) na xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx&xxxx;xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx xxxxxx do XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx je xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetujte 5–10 μx krycího xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého okénka x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx vhodným xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí být xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx fluorescenci, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx test xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu sklíčka.

7.3.4 Specifičnost xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, xx x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a ke xxxxxxx reakci se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako volitelný xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx použití DAS XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx druhotných konjugátů xxxxxxxxxx podle doporučení xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a suspenzi xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2 A a B). Xxx srovnání výsledků xx každé destičce xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx destičce od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx materiály, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx přes xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx třikrát xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx komerčních protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx je titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx a nechte inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx je xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xx xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx absorbanci xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx nebo 4&xxxx;°&xxxx;X xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx do dvou xxxxx na každé xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) s obsahem 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX) a přidejte 190&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxx 2 hodiny xxx teplotě 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Připravte roztok 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrná xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX u negativního kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích ukazují, xx xxxx nebyl xxxxxxxx správně nebo xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou detekci 103 až 104 xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx do xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx s podkožní jehlou (xx méně než 23X). Rozdělte xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty a pipetou xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx děložní xxxxx a první xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xxxxxxx x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx řez xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx nainokulujte 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, držte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx, v případě xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při hnojení, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky, xxxxxxxx test XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, proveďte zřeďovací xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx testovací rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx jsou infikovány xxxxxxxxxx X. solanacearum.

B. IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx chybí x&xxxx;X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3 Použijte XX metodu (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx této metody xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1 Připravte xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3 Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx v porovnání x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní kontroly.

4. Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2 Ohřívejte 100&xxxx;µx xxxxxxx suspense x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx při 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Seal et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Pastrik xx&xxxx;xx. (2002); Boudazin xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Weller xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx z následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx schopnosti xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2A (světově xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s využitím xxxxxxx XXX, XXX a ERIC (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Van xxx Wolf et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx k diferenciaci kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx a k potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml ze 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete nebo xxxxx ve fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké relativní xxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Proveďte xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx selektivní xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Periferica xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx

a) živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx na litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná půda XXXX (Englebrecht, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx kyseliny (Difco)	1,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50 °C x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx P1004)	600 000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma B-0125)	1 250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Sigma X-3032)	825 U (přibližně 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. solanacearum.

Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Agar #1. V takovém případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, ale xxxx to xxxx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií bez xxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx podrobena kontrole xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx se po 2&xxxx;xx 5 dnech při xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx dostupné a lze xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3.	Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx původu	Biovar
NCPPB 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, EURS21	Turecko	2
NCPPB 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, EURS55	Belgie	2
NCPPB 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	XXXX 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	CFBP 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, R568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Spolehlivost xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 CSL Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 PD 2778	Ralstonia xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Xxxxxx Xxxxx Disease Bacterium &xxxx;(4) (5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 XXX S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	IPO 1695	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 IPO X306	Xxxxxxxxxxxx anthropi (4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 IPO 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx sp. (4)
NCPPB 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 x&xxxx;104 xx 106 xxxxx biovaru 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Protože životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48hodinovou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx půdě a suspendujte x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx jí dosáhne xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx dřeň x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx s bílou xxxxxxx, o které xxxx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použito xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx označte.

Připravte xxxxxxx díly 100 µl xx xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum v kontrolních xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx PCR xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx testovacích xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX x&xxxx;XXXX proveďte xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a negativních kontrolních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Co xx xxxx testů XX, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx detekován xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxxxx být uchovány xx jeden rok.

1. Pufry xxx účely xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx homogenizací xxxx třepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředek XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (PVP-40)	Váže xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx zahuštění do xxxxx pelety xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx protilátek

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
NaCl	8,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Tween 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx tekutina/roztok xx xxxxxxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Leica) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1 Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	6,36 g
NaHCO₃	11,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100 ml

3.5 Roztok xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx HCl xxxxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) v 15 ml roztoku.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	1,59 g
NaHCO₃	2,93 g
Destilovaná voda	1 000 ml

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx a nastavte xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Stanovení koncentrace XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v 1 okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx okénky
a	s	=	povrch pole xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (liší xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx typu okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku
a	F	=	faktor xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a reagencie XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx by xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX AGC XXX XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx X-2	5′-XXX ACT XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx OLI-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx při 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 sekund xxx 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Ava XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Pastrika x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1	5′-xxx cga acg xxx gcg xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2	5′-ggg xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3′

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum XXX = 553 bp.

2.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer AmpliTaq x&xxxx;xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx kopie)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx byl optimalizován xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x&xxxx;xxxxxxx Xxx I po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Pastrik xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GCA GAG XXX CAT TA-3′
Reverzní xxxxxx XX-1-X	5′-XXX AGT XXX GGC XXX XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX TTA XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG ACC XXX TAT XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(10) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-5-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µM
Primer XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	12,925 µl
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Rs-1-R (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro biovary 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) a iv).

4.4 Restrikční xxxxxxxx analýza amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bsm X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X. Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx modř (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Acetát -XXXX (XXX), xX 8,0

Tris	48,40 g
Ledová xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (disodium xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Invitrogen xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx reagencie xxx xxxx FISH

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx agg xxx xxx xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX JEDOVATÝ. XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx ultračisté xxxx (XXX) na zhruba 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX a míchání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; pH 7,0) a 5 kapek 1N XXx. Zkontrolujte xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx HCl xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný před xxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx filtrací x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 ng/μl
Sonda XXX-1 xxxx OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx dvakrát) se xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx sklíček:	1	4	6	8	10
Sterilní xxxxx čistá xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx oligosondami x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku a rajčete xx měly být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 až 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, R.I., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 on xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al. Xxxxxxxx Journal of xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx of xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx potato xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Englebrecht, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx xxx xxx isolation xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, S., X. Ushijima, T. Xxxxx, S. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx medium and x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx some xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Janse, J.D. 1991. Infra- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Klement X.; Xxxxxxx, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15.	Lelliott, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Cubero, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enrichment improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Pseudomonas xxxxxxxxx and strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Timmis. 1997. A novel xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx species and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Pac. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx in xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Elphinstone, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx analysis xxx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx internal xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx and Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Analysiss xx the xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16S xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 in Western Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Aspects. Xxxxxxxx (Xxxxxx) pp. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Smith, N., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx fluorescent xx situ hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, kdy xxxxxxxxxxxx(x) test(y) provedený(é) xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx, xx třeba zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jinou xxxxxx testování/Zadržení xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx škodlivého organismu xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do jednoho xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx rostlin, xxx xx to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx kultury organismu.

PŘÍLOHA IV

Prvky xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx nichž se xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx stejného zdroje xxxx rostliny rajčat, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx pěstují rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx organismu,

—	na nichž xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem nebo xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx xx xxxxxx, xxxxx se používá xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u nichž xxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx zaplavena povrchovou xxxxx, u které xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

ii)	povrchová xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxx xxxx místa (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx mají xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxx v místě produkce, xxxxx bylo xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) prohlášeno xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx za zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx používají společně xxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx v takovém xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx strojní xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx kontejnery, xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo jejich xxxxx a všechny ostatní xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx materiálem označeným xx zamořený podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu x), x&xxxx;xxxxxxx brambor xx hlízy xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx k uvedenému rostlinnému xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxx za xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, xxxxxxx xxxx vyšetřeny xx xxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx, xx zamoření xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx xxxxxxxxx obměna xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx k zavlažování xxxx xxxxxxxx xxxx, která xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zaplavených xxxxxxxxxx xxxxx, u které xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx produkce, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxx voda, jestliže xx nebo xxxx xxxxxx odtoku povrchové xxxx nebo zaplavení x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

ii)

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx iv), xxx xxxx povrchová xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx):

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nichž xx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vody xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx které(á) xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx mají spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx zamořenou, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx,

—	xxxxx rostoucím hostitelským xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx které xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, co xx potvrzena přítomnost xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, sadbové, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx kategorii xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx dané xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž jsou xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx stát, xx kterém xx xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinného materiálu x&xxxx;xxxxx členském státu (x jiných xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 odst. 3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx dané xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx doručení xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx případně xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx a kopii oznámení x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx odkazuje xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx obsahovat toto:

po xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx odběru xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zdroji (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx a u brambor xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx sadbových xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, včetně xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx označena xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti o určení xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx partii xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, osvědčení xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/XX a číslo xxxxxxxx k přepravě, podle xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/ES;

h)	jiné xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), jak xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	uložení xx xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, které by xxxxx být xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xx zajištěno, xx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, pokud bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx oznamují Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možnostmi xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možností xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx VII této xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektu členského xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx zpracovávat, s ohledem xx xxxxxxxx k odstraňování xxxxxx uvedená v první x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, xxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx. S bramborami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx stejném xxxxx xxxxxxxxxxx xxx odděleně x&xxxx;xx očistě a dezinfekci, nebo

—	budou xxxxxxx jako konzumní xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jinými xxxxxxx použití nebo xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem,

ii)

jiné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx a listové xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx způsoby xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a s podmínkou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx prohlášena za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na poli xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii), xxx:

xxxxx xxxxxxx čtyř pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx zamořené:

—	budou xxxxxxx opatření k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, i jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, rostliny bramboru xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx provedených nejméně xxx xxxxxxxxxxx pěstitelské xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x případě xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupem xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx roky, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx xxxxxxxx:

—	xxxxx učiněna opatření, xxxxx vyloučí výskyt xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx třech xxxxxx xxx xxxxxxxxx pole xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pěstování xxxxxxxxx porostů trav x&xxxx;xxxxxxxxx pěstováním nehostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dvou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx žádné riziko xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor nebo xxxxxx, které následuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxx prohlídek provedených xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx rostliny rajčete, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx ostatní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx orgány xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a ostatními xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx bramborových xxxx mohou být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxx pěstovat xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx produkci plodů,

—

ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx následuje po xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx xxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě rajčete xxxxx být pěstovány xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx semen a vypěstovaných xxx úřední xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx pěstitelském xxxx xx prohlášení místa xxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx bramboru budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx rostlin, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a u každého xxxxxxxxxxxx xxxx xx úředně xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx II;

ihned po xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce a týkající xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx metod, jak xx xxxxxxx v bodu 3,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření organismu;

na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx bramboru, rostliny xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxx jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin a osiva xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelského xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, včetně, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx dané xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vybavení, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx brambor xxxx xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů,

—	u xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxx rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx programů xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx zóně, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx zajistit, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikována xxxxxx xxxxxxxx metod, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

ihned x&xxxx;xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx o zamoření:

ba)

jestliže xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx nebo rajčata xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, xxxxx smluvně xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat,

—

vyžadují, aby x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx kultury xxxxxxxx používána xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx kontrolou x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx po sklizni xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx byla xxxxxxxxx voda xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxx je xxxxxxxxxx za xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—	provádí xx vhodných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z čeledi lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx případy,

—

zavedou xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu používání xxxx prohlášené za xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxx postřik xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx přezkoumán xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (o xxxxxxxx) odvoláno, xxxxxxxx xx příslušné xxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, z úřední xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí výskyt xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny xxxxxxx xxxxxxxx odpadu, xxxxxxx xx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxxx pevného xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem;

c)	případně xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx odstraňování odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření organismu:

bramborový x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a bramborových xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiných xxxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx např. xxxxxxxxxxx xx zemědělské půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx odpadů,

nebo

—	spálením, nebo

—	jinými xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx oznámena Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: před xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx obsahující xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx odstranění xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60&xxxx;°X xxxxxx objemu xx xxxx alespoň 30 minut před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx, xx xx xxxxx xxxxxx do styku xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vodními xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Lelliott x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4) Potencionální xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx při použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx OLI-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx testů, xxx xxxxxx znám xxxxx x&xxxx;xxxxxx v Indonésii.

(7) Pro účely xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx metod xxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco BRL.

(13) Metoda xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.