EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

ze xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx II xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES o xxxxxxx proti Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze xxx 20. xxxxxxxx 1998 x ochraně xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), x zejména xx xxxxxx 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

vzhledem x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z významných xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, která mají xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx rozšíření x xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx za účelem xxxx eradikace.

(4)	Xx xx xxxx došlo k xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x kromě toho xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx ochraně xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxx xxxx nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx moderní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx rostlinách, xxx xx brambor, xx xxxx a půdě.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: způsob uchování xxxxxxxxxxx vzorků, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxx xxxxxxx potvrzeného xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, která xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx xxxxxx této xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského xxxxxx.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX xx nahrazují xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Komisi xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz učiněn xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX PRO XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a některých xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramu
	1.	Detekční xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx testy
	3.	Postup xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum v půdě
	2.	Metody xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum v půdě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (IF xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (FISH test)
		8.	Testy xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx a enzymatický xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Pufry xxx testovací xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX PRINCIPY

Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx pozitivních kontrol xx testovaných xxxxxx. Xxxx být uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx screeningový xxxx negativní, xxx xxxxxx xxxx považován xx infikovaný R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx a identifikaci čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx rychlý screeningový xxxx, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx resuspendované xxxxxx zahrnutý jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX A V ROSTLINÁCH XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX HNILOBY XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1. Příznaky (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx listů xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách během xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. V raných xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx také x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a uhynutím xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx konce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx konec. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a z oček xxxx vytékat bakteriální xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx mohou xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx místa, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním viditelným xxxxxxxxx je povadlý xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedné straně xxxxxxxx nebo celé xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx odumřením. Xx méně příznivých xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx postranních výhonů. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx nasáklé pruhy xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x&xxxx;X. nigrum. Za xxxxxxxxxx podmínek xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx rostoucí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, která xx stonky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx na příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x&xxxx;xx i při xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testů:

2.1 Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické granule XXX v buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx oddíl VI.A.7), xxxxx XXXXX (xxx oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva z cévního xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx metodou zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx inkubovat 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. solanacearum v podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vedou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je k dispozici xxxxx množství xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2 týdnů před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx na vzduchu. Xxxxx postup mytí xx xxxxxx (xxxx xxxx vyžadován) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx proveden xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx xxxxxx xx minimum (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx při vyříznutí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, mělo by xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu hlízy xx pupkovém konci Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx měly xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx pokojové xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx být xxxxx xxxxxxxx v chladu (4–10&xxxx;°X) xx řádných karanténních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz s podezřelými xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx nádob xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx je v nádobě xxx přidání pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě nižší xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx drcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx jedno použití (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, sterilovaný zářením) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx každý xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při testu XXX zabraňte přenosu XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx pomalým odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4 Zahustěte bakteriální xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. solanacearum, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Pro účely xxxxxxx latentních populací X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít na xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, měl by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx kousek dlouhý 1&xxxx;xx z paty xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postranní xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny uříznutým xxxx nad spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 cm xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx nejméně 10 xxxxxxx na 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx bude nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx u víceleté Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx čeledi Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Pelargonium xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Ranunculus xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx stonku x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Bioreba) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale lze xxx xxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxxxx popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhý díl xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo –68 xx –86 °C (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a rovněž xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx liší x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Zatímco níže xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx detekce v odpadní xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx čistícího postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx úspěšně x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, je třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a v odpadní xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu účinky xxxxxxx dešťů x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx toku, xxxxxx xx vyhnuli xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx pod xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Při xxxxxxxxxx xxxxxxx vody xx zpracování x&xxxx;xxxxxxx xxxx odeberte xxxxxx x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx je 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3 Je-li xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7 000 g po dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx v 1 ml pufru (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx pórů 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a zachycením xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

2. Metody pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x&xxxx;xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx může xxx xxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia solanacearum, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx třeba xxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx unikne nízký xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

2.1 Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (nebo v mřížce 7&xxxx;× 7 m). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvyšte počet xxxxxxxx xxxx xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx uchovejte vzorky xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a kanalizace navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxx slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízněte xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx XXXX xxxx SPA (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx kmenu xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx plamenem, abyste xxxxxxx fixovali.

4.	Obarvěte xxxxxxxxx xxx nilskou modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx opláchněte xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx vodu xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem při 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní imersí xx zvětšením 600× xx 1&xxxx;000× s použitím xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, zda xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx morfologie xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou černí:

a)	Zakápněte xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx súdánské černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx a inkubujte 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte barvicí xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx a vysajte savým xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5 % (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem pod xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace buněk X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx latexovými xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) se řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 sekund xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Pozn.: Než xxxxxxxxx tuto metodu xxxxxx, proveďte předběžný xxxx, xxxxxx zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx extraktů xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx selektivní živnou xxxx, xxxx. SMSA (xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, kolonie X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx konkurenci xxxx xxxxxxxx, měl by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx metodou xxxx xxxxx vysoká. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 106 xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických bakterií, xxxx xxxxxxxxx. Naneste 50–100 µx extraktu xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx stav a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx až krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx se na xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx kolonie X. solanacearum rozetřete xxxx očkujte metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx vodě (xX 6–8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx při teplotě –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx identifikaci xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx oddíl VI.C).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx nejsou nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xx předpokladu, xx nedošlo k inhibici xxxxxx bakteriemi a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx a zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Je však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také obohaceny. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10&xxxx;xx obohaceného xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx připravte xx sterilních zkumavek xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx větší xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 µl x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C v třepané xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX dobře xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx bujónem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním nebo xxxxxx postupy zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se test XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Titr xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X v glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku odstraněn xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxx vzorky xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Použijte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, fixovaná xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (T/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) a 5.3.i)

	Ředění resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované pelety
(T = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx xx navlhčený xxxx xxxxx. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx ponořením xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

5.3.4 Umístěte xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx zvětšení 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx může stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx saprofytické bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;× 103. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx možno, xxxxxxx xxxxxx s interní kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními kontrolami (x xxxxxxx extrakce XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, xxxxxx došlo x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, xxx XXX použijte xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx použití PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace DNA

Používejte xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Test xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lyzátového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Tris-HCl (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně s teplotou 95&xxxx;°X na 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5 min. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx homogenní.

8.	Pro xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx po dobu 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °C, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX pro xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a kontroly pro XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít multiplexní xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve směsi XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx s 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 minut xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s tímto mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxx u zkoumaného vzorku xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx vícenásobné XXX x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxx amplifikován x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Pozn.: Xxx mít podezření xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx xx získán xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx dvou xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo více xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx provede xxxx xxxxx vyšetřovací test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx oligosondy specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 buněk R. xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx možno proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2 Napipetujte 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx a rozpusťte peletu xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx a resuspendujte peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, odstraňte etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	okénko 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Krycí xxxxxxx 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) a fixujte nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a v suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx etanolové řadě 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx po dobu 1&xxxx;xxxxxx. Osušte vzduchem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx box x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45&xxxx;°X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, přičemž dvě xxxxxxxx okénka necháte xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx tak, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka a umístěte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx krátce xx XXX (např. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo podobný) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× pod olejovou xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, pozorujte nejméně 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, neberte x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx okénka xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx několik xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx častěji xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX filtru jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití rhodaminového xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 × 103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek FISH xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx testů XX, PCR xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx obohacení x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovním xxxxxx, které xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx u titru komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a suspenzi xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C na 4&xxxx;xxxxxx ve vodní xxxxx nebo xxxxxx xxxx může v některých xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx přes xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proti X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné koncentrace, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte je xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 µl xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx nebo 4&xxxx;°&xxxx;X xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx do dvou xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) s obsahem 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx dobře vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx do každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrná xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx než dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX z jamek se xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX ve xxxxx negativních kontrolních xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že došlo x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx třech xxxxxxx listů x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx pěstování xxx v dodatku 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx lilek (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx fázi 2. xx 3. xxxxx až do xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx méně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.1 Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx stonky xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx udělejte příčný xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx řez xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx řez xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx nainokulujte 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml připravenou xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx komory xxxx, v případě omezeného xxxxxxxx, xxxxxxxxx přísnou xxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení a všech xxxxxxxxx činnostech věnujte xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx škůdců, protože xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte podezřelé xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6 Jestliže xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx složeném vzorku xx segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx zřeďovací xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrňte xxxxxxxx známé referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx chybí x&xxxx;X. solanacearum, metodami Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx inkluze	+
Test xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných zředění xxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx hodnota výsledku xxxxx ELISA xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx vařící xxxxx xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx dalšího xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (xxxx. Seal et al. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx velikost x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (dodatek 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenu použitím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je rozdělen xx biovarů na xxxxxxx schopnosti xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx očkováním xx xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx při teplotě 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µl xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx rozšířen)	Biovar 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, BOX a ERIC (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx a k potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum o hustotě xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur k testování x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx po xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx izolaci xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno xx selektivní xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx de la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Periferica per x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

a) živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx tlakem xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50 °C x&xxxx;xxxxxxxx filtrem sterilizovaný xxxxx roztok následujících xxxxxx, abyste získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx P1004)	600 000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25 mg)/l
Chloramfenikol (Sigma X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Xxxxx X-3032)	825 U (přibližně 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx však xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum se xxxxx xxxxxx o 1–2 xxx déle a červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx a rozptýlenější xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Validované obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx půdu XXXX, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx pepton	5 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4	0,25 g
NaNO3	0,25 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50 °C.

Přidejte xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 1) nebo během xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a lze xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2.	Sbírka xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX R. solanacearum

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx původu	Biovar
NCPPB 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	B3B	Německo	2
NCPPB 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, R303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	CFBP 4613, X568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	CFBP 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx testů

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	CFBP 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis pv. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 CSL Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Burkholderia xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	CFBP 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Bacterium &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	IPO 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx sp. (4)
NCPPB 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (5)
NCPPB 4174	81	XXXX 1844.06	Flavobacterium sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx ze xxxxxx xxxxxx NCPPB.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 až 104 a 104 xx 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx standardy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) s 106 buňkami xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx půdě x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX fosfátovém xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 cfu xx 1 ml. Xxxxxxx xx xx dosáhne xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy s bílou xxxxxxx, o které xxxx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx pozitivní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100 µl xx xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, čímž xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx téhož xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx účely testů XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx se xxxx testů XX, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a u žádných xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx uchovány xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pletiv homogenizací xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý prostředek (7)	0,5 g
Silikonový xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění extraktů x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx bramboru xx xxxxxx zahuštění xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx s glycerolem, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx možné jako xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

3.3 PBS-Tween

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Tween 20	5 ml
Destilovaná xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx mléko	0,5 g
Destilovaná voda	doplnit xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Diethanolamin	97 ml
Destilovaná voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx upravíme xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx roztoku.

4. Pufry xxx účely testu XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

4.3 PBS-Tween

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX a FISH pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

Xxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = c × X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky
a	s	=	povrch xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxx okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte počet xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku
a	F	=	faktor ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx panelu vybraných xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX AGC XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX ACT XXX XXX XXX XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 bp

1.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	17,65 µl
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (8)	0,1 µl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 sekund xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (hybridizace primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx optimalizován pro xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

1.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací z R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Pastrika a Maisse (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1	5′-xxx cga xxx xxx xxx ggg x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2	5′-ggg xxx xxx aca xxx xxx ttg xx -3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 bp.

2.2 Reakční směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální koncentrace
Sterilní XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx PCR (9)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx AmpliTaq x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

2.4 Restrikční enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s enzymem Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní PCR x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx RS-1-R	5′-CCC XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxx primer XX-5-X	5′-XXX TTA XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (sada xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální koncentrace
Sterilní XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µM
Primer XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund při 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx pro použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s enzymem Xxx I nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C.

4. Protokol XXX specifický xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX AAC GAA XXX XXX XXX XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX CAC XXX XXX GAC X-3′
Xxxxxxxx primer Rs-3-R	5′-TTC XXX GCA AGA XXX CTC-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	12,925 µl
10X pufr XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Produkty XXX vzniklé amplifikací x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-3-X nemají žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx modř (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx na xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované reagencie xxx xxxx FISH

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: USTALOVAČ XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i)	Zahřejte 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a míchání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1N XXx. Xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a případně xxxxxxx HCl xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací a autoklávováním)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 nebo XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dva xxxxx xxxxxx dvakrát) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX POUŽIJTE XXXXXXXX A UČIŇTE XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx směsi.

Počet xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx EUB 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světlocitlivými xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxx elektrickým světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo lilku (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do pasterizovaného xxxxxxxxx substrátu. Přesaďte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx listy (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx delší
Teplota	denní: 21 až 24&xxxx;°X xxxxx: 14 až 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Krumholz and X.X. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of xxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Boudazin, X., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Barlow, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. EPPO Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Variation xx nitrate metabolism xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 69; 269-280.

10.	Ito, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole cell xxxxx-xxxx analysis. Systematic xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Kelman, X. 1954. Xxx relationship xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx bacterial diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, B., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular detection xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Specific xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx and xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx R. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X ribosomal xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx antibodies to Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Young, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, M. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 in Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of strains xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx blood disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Der Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Race 3 in Western Xxxxxx as determined xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. In: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, X.X., Smith, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx TaqMan xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx organismu, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) xxxxxxxxx(x) xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vhodných xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx vyvrácení xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx čeká, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx ukončen.

Uschování xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx použít jinou xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx testování xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx rostlin, xxx je xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zdroje xxxx rostliny rajčat, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé rostliny xxxxxxxx nebo xxxxxxx, xx které xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx zamoření organismem,

—	na xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx se potvrdilo xxxxxxxx organismem xxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx podezření xx zamoření xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx místa (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx zaplavila xxxx xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx mají být xxxxxxxxxx při stanovení xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx takových xxxx, xx kterých xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přímo xxxx xxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstovaný x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx období, kdy xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx podle xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladovací xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx mohly xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx přišel xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx výsledek xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx brambor xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx k uvedenému xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, resp. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx vyrostly ze xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxx za xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, xxxxxxx xxxx vyšetřeny xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx zamoření xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx pravděpodobným. Může xxx xxxxxxxxx obměna xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx uvedeného x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx, která xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx zaplavených povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx být zohledněny xxx určování xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál,

—	společnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx partií xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx produkce, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx rostlinného materiálu xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx nebo xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx), kde xxxx povrchová xxxx xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové vody xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) xx xxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx(x) xxx zaplaveno(a),

—	každá xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx má xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx xxxx a průtoku xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx jméno xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx stát, xx xxxxxx xx xxxxxx potvrdil, xxxxx xx riziko xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx členských xxxxxxx), ihned xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx dané xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx a adresu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx doručení xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx rostlinolékařského xxxx nebo xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx, xxxx případně xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx které xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx všech xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx potvrzení xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx uskutečněného xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx s udáním xxxxxx a v případě xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a rozsahu označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx partii xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 odst. 1 bodu xx) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, podle xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx X, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), jak xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. průsakem xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx kontaktem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx schválenými zařízeními xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx neexistuje xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx a dezinfikování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx oznamují Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx odpad související x&xxxx;xxxx uvedenými možnostmi xxxx xxxxxxx z výše xxxxxxxxx možností xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx schválenými metodami xxxxx xxxxxxx VII této xxxxxxxx.

Xxxxxx použití nebo xxxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx xxxxx čl. 6 odst. 2 pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (států), xxx xxxxxx vzájemném informování xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx se xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx brambory xxxxxx xx xxxxxxxx, již xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx a použití xxx xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx jen xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx určené xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx dodávku xx zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx a systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jinými xxxxxxx použití nebo xxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx tohoto organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx jinými xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, a s podmínkou xxxxxxx xxxxxxxx příslušným xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx členské xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv) a písm. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx byla místa xxxxxxxx prohlášena za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx):

xx xxxx xxxx na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

nebudou pěstovány:

—	hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Brassica, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu,

—	plodiny, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru a rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nejméně xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx před pěstováním

—	v xxxxxxx brambor je xxxxxxxx pouze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx brambor a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, který xxxx xxxxx alespoň xxx xxxx, pokud xx xxxx pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx xxxx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx učiněna xxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

v xxxxxxx třech xxxxxx xxx ponechání xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších dvou xxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx následuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xx poli xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx brambor xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx rajčete, xxxxx testovány xxxxxxxx xxxxx přílohy II;

na xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx příslušné xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx a ostatními xxxxx xxxxxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx pěstovány xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx pěstitelském xxxx, xxxxx následuje xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx testované na xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pod úředním xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx jsou uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny rajčete xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx na produkci xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx certifikovaných xxxxxxxxx brambor xxx xx produkci sadbových xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx pěstovány xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pěstované xxx xxxxxxx dohledem x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx buďto xx xxxxxxxx sadby rajčete xxxx xx produkci xxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx pro odstranění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx období xx xxxxxxxxx xxxxxx prohlídky xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxxxx sklizené xxxxx xxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a týkající xx produkce brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfikována použitím xxxxxxxx xxxxx, jak xx uvedeno x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx patřičné xxxxxx kontroly nad xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii), xxx je xxxxx xxxxx vyměnit xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx ani jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin zavedena xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vyloučení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx média a očisty x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vybavení, x&xxxx;xxxxx xxxxx následně xxxxxx souhlas k produkci xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx brambor xxxx xxxx-xxxx nebo mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx musí xxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxx z osiva, která xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxx rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx z osiva xxxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx ihned xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx xx produkce xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxxx vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx tři pěstitelské xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx o zamoření:

ba)

jestliže xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, skladují xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, spolu xx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx používána xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx vypěstovaná pod xxxxxx xxxxxxxxx a aby xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx vypěstovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou xxxxxxxxxx xx sklizenými sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx podnicích v zóně xxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlin xxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxx, xxxxx odpovídá xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx xxx úřední xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx v rámci xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx organismu podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx vzorků povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx příslušných xxxxx stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx zákazu používání xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxx. Xxxxx zákaz xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) odvoláno, jestliže xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx nadále xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx kterou se xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxx schválené technologie, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx úřední xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx pevného xxxxxx nebo výpustí xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem;

c)	případně zavedou xxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxx sadbových xxxxxxx v rámci přiměřeného xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně schválené xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx splňovat následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx jakékoli xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, kamenů a jiných xxxxxxxx) xx odstraní xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx být xxxxxxxxx xxx zavlažování zemědělské xxxx. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud prokazatelně xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům,

ii)

tekutý xxxxx: xxxx likvidací xxxx být tekutý xxxxx obsahující xxxxxxxxxxxx xxxxx částice podroben xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx tekutý odpad xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 minut xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko, xx by xxxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vodními xxxxxx, xxxxx by mohly xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx použijí také xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3) Použijte xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4) Potencionální xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR xx podobnou xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx při použití xxxxxxxxxxxx primerů OLI-1 x&xxxx;X-2 (viz xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx testů, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx v Indonésii.

(7) Pro xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx metody.

(8) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx a pufr mohou xxx xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X a NS-6-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Použití extrakční xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx izolace XXX xxxx vyžadovat xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.