EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/XX

xx xxx 14. července 2006,

xxxxxx se xxxx xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx proti Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Yabuuchi xx al.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. (1), x xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx směrnice,

vzhledem x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x významných xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x rajčete (dále xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od té xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku v poznatcích x xxxxxxxx x x postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx toho xxxxxxxxx xxxxxxxxxx získané xxx ochraně xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx tohoto xxxxxx xx xxxx xxxx nezbytné xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x postupy xxxxxxxxxx a identifikace, xx xxxxxxxxxxx moderní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx polymerázové řetězové xxxxxx (PCR) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx zjištění a xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách, než xx xxxxxxx, xx xxxx a půdě.

(7)

Xxxxx xxx o technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx zajištěno xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxx xxxxxxx potvrzeného xxxxxxx organismu a xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Opatření xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX směrnice 98/57/XX xx nahrazují xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této směrnice.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Komisi xxxxx těchto xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx členskými státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Komisi znění xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato směrnice xxxxxxxx v platnost třetím xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx KYPRIANOU

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky.
	3.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx na xxxxx půdy
			4.2	Postup xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX test)
			6.1	Metody xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		A)	Komerčně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Pufry xxx xxxxxxxxx postupy
		Dodatek 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx druhý screeningový xxxx negativní, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) hlíz bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx a v případě pozitivního xxxxxxxx identifikaci kultury Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx je X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý jako xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX SOLANACEARUM V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX NEBO XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY NEBO XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1. Příznaky (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1 Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx infekce x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou a objevují xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx výhonku nebo xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx možné sliz xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx fázi se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, ze xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Později se xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx vně od pupkového xxxxx xxxxx a z oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx mohou xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx postižená xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je povadlý xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení listů xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx jedné straně xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, které končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °C) rostlina xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx postranních xxxxxx. Xx možné pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum rostoucí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx jsou příznaky xxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení vodivých xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx pod vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A nebo súdánskou xxxxx (Viz xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

(Viz oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxxx je v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX xxxx SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (např. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx biovar 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx universální živné xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Avirulentní formy X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx být xxxxxx xxxxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Nechte hlízy xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx PCR nebo xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx viditelné vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, mělo xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx naříznuté hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx v chladu (4–10 °C) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx hlízy xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx III.

1.1.2 Uložte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx přidání pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

homogenizujte xxxxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo drcením x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx jedno použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx přístroji. U testu XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx v sáčcích xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxxxx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), filtr xxxxxx xxxxxxxxx (~10 ml) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4 Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. solanacearum, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) k 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxxxxx vířením a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Extrakty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Pro účely xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx uříznutým xxxx nad xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx díl x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. U lilku potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx díly xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit xx xxxx rok u víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Pelargonium xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx evropské plevelné xxxxx, které mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus scleratus, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx fázi xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx stonku jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xx 24&xxxx;°X nebo 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního pufru (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx možné, uložte xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx provést filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxxxx popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) pro případné xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma detekce xxxxxxx x&xxxx;xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx může xxx použito k testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx vody. Je xxxx nutné xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx ovlivňována xxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx více x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx než x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě bude xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu se xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx by mělo xxx bráno v úvahu xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx se xxxx xxxxxx používá úspěšně x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a v odpadní vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx toku, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx výskyt xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Doporučená velikost xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) a testujte xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7 000 g po xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X, slijte kapalinu xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte filtraci xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx vody, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků odpadní xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx popsané x&xxxx;xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být xxxxxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu v polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxx sledování, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx zamoření pozornosti.

2.1 Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (nebo x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvyšte xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx uchovejte xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2 Rozptylte xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02 % sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 g sterilních xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování udržujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx bramboru, rajčete xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: uřízněte xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx stonku xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx se xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB negativním xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní xxxxxx xxxxxxx sklíčka xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx nilskou modří xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx roztokem nilské xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Krátce opláchněte xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx kapkou xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450&xxxx;xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx XXX granulích jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx morfologie xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx sklíčka 0,3 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte barvicí xxxxxx a krátce opláchněte xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx xxxxxx do xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 % (w/v) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

f)	Zkoumejte xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx xxxxxxxxxx latexovými xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx xxxxx xxxxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx řiďte následujícím xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx v pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx xxxx metodu xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, abyste zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 jednotek xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx extraktů xx vzorků, které xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, např. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx růst xxxxxxxx velkou pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li podezření xx konkurenci xxxx xxxxxxxx, měl by xxx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx však použitelná x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx xx vyhnuli xxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx být xxxx xxxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál testujte xxxx způsobem jako xxxxxx (vzorky).

4.1.1 Proveďte xxxxxxx xxxxxxxx ředění s cílem xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °C. Po 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6&xxxx;xxx. Typické xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx se rozvine xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx na xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou být xxxx, kruhové, zcela xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx rozetřete xxxx očkujte metodou xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx, abyste xxxxxxx izolované kolonie (xxx dodatek 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (pH 6–8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx identifikaci xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, za předpokladu, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx i ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx R. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx vzorku xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx předem připravte xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit větší xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx živné půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX nebo XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx bujónem xxxxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxx.: Použijte xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx IF nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx na čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktech ze xxxxxx. Xxxxxxxx je xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx vzorky fixovány xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx jiným referenčním xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx podle možností xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Použijte xxxxxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx s průměrem nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního materiálu xxxxxxxx týmž způsobem xxxx test vzorků.

5.1 Připravte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetujte odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx obr. 1.

ii)

Pro xxxx pelety:

Připravte desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx od dodavatele protilátek.

Pokud xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx testováním.

5.3 Postup XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných zředění. Xxxxx jamka xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (PŘ) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka na xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx xx navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx musí xxx nejméně stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na vlhkém xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Tween (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro excitaci XXXX pod olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte pozitivní xxxxxxxxx vzorek. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx zopakován. Xx xx může xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx další testování.

ii)	Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx screeningový test x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx vzorků extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli došlo x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

—	alikvotní xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, xxx XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx (xxx dodatek 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu proveďte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla optimalizována xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lyzátového pufru (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxx xx termobloku nebo xxxxx lázně s teplotou 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx fázi xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx při 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx uschnout xx xxxxxxx nebo x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě nejméně 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx použití xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx sraženinu xxxxxxxxx odstředěním a použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx efektivní.

6.2. PCR

6.2.1 Připravte xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém nehrozí xxxxxxxxxxx podle zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx podle protokolů XXX (xxx dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž zdroj XXX xxxx xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Použijte xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 minut xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti a (případně) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním testu x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V multiplexních xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka: Používejte xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován na X. solanacearum s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. solanacearum xxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx jiného referenčního xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx používá x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu xx 200 µl fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxxx a inkubujte 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7 minut xxx 7 000 g, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a resuspendujte peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované suspenze xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Zbývající xxxxxx vzorku (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidejte xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Prázdný	Prázdný	Prázdný	Vzorek 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Krycí xxxxxxx 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možné postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx a v suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx etanolové xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Osušte vzduchem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo filtračním xxxxxxx nasáklým hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx ohřejte box x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, přičemž xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xx xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Umístěte xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 l 1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a umístěte xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx xxxxxx do XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx je xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl krycího xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, CA, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60 mm).

7.3. Hodnocení XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo málo xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx nastat x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx ve várce xxxxxxx pozitivní xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx okénka xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx než x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8. Testy XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které je xxxxxx xxxx stejné xxxx x&xxxx;xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

Vzorek, xxxxx jste xxxxxxx xxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 buněk xx 1 ml xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx výsledků xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleny na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx používají pro xxxxx test, jsou xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx protilátek proti X. xxxxxxxxxxxx v blokačním xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx do každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx je xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx v blokačním xxxxx. Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx předtím (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (xxxxxxx 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Nechte inkubovat xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky třikrát xxxxx vypláchnete použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx x-XXX/xx alkalické xxxxxxxxx v substrátovém xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do každé xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, jestliže průměrná xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx vzorky xx xxxxx než dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x&xxxx;xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX z jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx OH xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelnou detekci 103 xx 104 xxxxxxxx tvořících kolonie X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorku x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx listů x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx fázi 2. xx 3. xxxxx xx do xxxxxx rozvinu třetího xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx jsou xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Rozdělte xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx rostlinu xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx a první xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx udělejte xxxxxx xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky stonku, xxxxxxx řez začnete x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a peletovým pufrem (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny xxx teplotě 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, abyste xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, držte xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx místech skleníku xxxx vegetační xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx přísnou xxxxxxx. Musejí-li být xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx činnostech xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx zřeďovací xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Výživové x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst při 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v pufru XX (dodatek 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3 Použijte XX xxxxxx (oddíl VI.A.5).

2.4 Test XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF xxxxxxx odpovídá titru xxxxxxxxx kontroly.

3. Test XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx hodnota výsledku xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx vařící xxxxx xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Pastrik x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx et al. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx velikost x&xxxx;xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx fragmentů jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými pro X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx rozdělen xx biovarů xx xxxxxxx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx očkováním xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX a ERIC (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx k diferenciaci kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum xxxx xxx proveden test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum o hustotě xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k testování x&xxxx;xxxxxxxxx kmen pozitivní xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx fázi 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s přiměřeným xxxxxxxxx, bez vystavení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako patogenní xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx stonku xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Proveďte xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx per x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. solanacearum

a) živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Sacharózopeptonový xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Ochlaďte na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx na litr.

b) Validované selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Difco) (viz xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50 °C x&xxxx;xxxxxxxx filtrem sterilizovaný xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx konečnou xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Sigma)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25 mg)/l
Chloramfenikol (Sigma X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Xxxxx X-3032)	825 U (přibližně 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx)	50 mg/l

Pozn.:

1.	Použití xxxxxx reagencí výše xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. solanacearum.

Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx se xxxxx tvořit x&xxxx;1–2 xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2 500 U/l xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu a spotřebujte xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx šarže živné xxxx by xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Sacharóza	10 g
Proteázový xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	CFBP 4582, Pr 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	CFBP 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, CFBP 3857	Nizozemsko	2
NCPPB 4157	66	XXXX 15.59	Francie	2
NCPPB 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	IVIA-1632-2	Španělsko	2
NCPPB 4161	76	B3B	Německo	2
NCPPB 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, GONg7	Kostarika	1
NCPPB 4028	43	XXXX 4611, R303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, R568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, CIP121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	CFBP 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v případě, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx (4)
NCPPB 4163	52	CFBP 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 CSL Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Burkholderia xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Burkholderia xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	CFBP 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Burkholderia plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) (5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx anthropi &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Aureobacterium xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxxx xxxxxxxx je možné xxxxxx ze sbírky xxxxxx NCPPB.

Mražené sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 103 až 104 x&xxxx;104 xx 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx rasy 3/biovaru 2&xxxx;(xxxx. kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx xxxx a suspendujte x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxx xxxxxxx přibližně 2&xxxx;× 108 xxx xx 1&xxxx;xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxx, xx je prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a resuspendujte peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx pozitivní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx řádně označte.

Připravte xxxxxxx díly 100 µl xx xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx nejdříve potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX proveďte xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX a FISH xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx u každé série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx a u žádných vzorků xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Pufry xxx testovací postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být uchovány xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx třepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx prostředek (7)	0,5 g
Silikonový xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx konců xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX xxxxxx chloridu xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx protilátek

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
NaCl	8,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Tween 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx sklíčko ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro účely xxxxxxxxx testu ELISA

3.1 Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

NaCl	80,0 g
KH₂PO₄	2,0 g
Na₂HPO₄.12H₂O	29,0 g
KCl	2,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (musí xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44)	2,0 g
10 % Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx roztoku.

4. Pufry xxx účely xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X PBS	50 ml
10 % Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Diethanolamin	100 ml
Destilovaná xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx a nastavte hodnotu xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky
a	s	=	povrch xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (liší xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xx 104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx žádné xxxxxxx pozitivní výsledky xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Y-2	5′-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 288 bp

1.2 Reakční xxxx PCR

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx2)
Xxxx dNTP (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx OLI-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	2 xxxxxx při 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 sekund při 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	30 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 minut xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Ava XX po inkubaci xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2	5′-ggg xxx ttc xxx xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (denaturace templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx fragmenty specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx a 96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX CAT XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX XXX ACG XXX X-3′
Xxxxxxxx primerNS-6-R	5′-GCA XXX XXX ACC XXX TAT TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx I nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX GAA XXX XXX ATG XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3′
Xxxxxxxx primer Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum:

s Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (12)	0,2 µl	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Rs-1-F x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační době 30 xxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X. Produkty XXX vzniklé amplifikací x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Acetát -XXXX (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx test FISH

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc-3′

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx gcc xxx xxx agg xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpouští xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxx míchačce.

ii)	Upravte xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx papírky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx na 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 ng/μl
Sonda XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX JE XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx sklíček:	1	4	6	8	10
Sterilní xxxxx xxxxx voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 nebo XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx množství (μl)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Pozn.: Xxxxxxxxxxx všechny xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx použití xxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a autoklávujte xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Zasejte xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxx xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx listy (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a rajčete xx xxxx xxx xxxx naočkováním pěstovány xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx nebo xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 až 24 °C noční: 14 až 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Beauty‘
Dodavatelé:	viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx studies xx xxxxxxxxxxxx. J. Bacteriol. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 July 1998 on xxx control xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx xxx European Communities X235, 1-39.

3.	Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. and Sequeira, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx that xxxxxxx xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx response. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, J., Xxxxxx, J.K. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. EPPO Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. In: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx International Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal of Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Ushijima, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Janse, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Klement X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Cubero, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. In: H.W. Xxxxx xx al., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx for development xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA probes xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (formerly Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Pac. X. Mol. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxxx internal xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Production xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Immunology 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Pseudomonas pickettii xxx Blood Disease Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Sly, L.I., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx blood disease xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Western Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, P., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx automated xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) provedený(é) xx uvedeném xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx a na xxxxxxxxx nebo vyvrácení xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx ještě xxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx dokud xxxx xxxx uvedený xxxxxx zcela xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X případě potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx jednoho xxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného výluhem x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx xx to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu.

PŘÍLOHA IV

Prvky xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx nebo xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx úřední xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx organismu,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé rostliny xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx produkce, včetně xxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx ukázala xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx je podezření xx zamoření xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo postřik xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (místa) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx xxxx být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkční xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx předchozí odrážky xxxx xxxxxxxx v takovém xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) byl xxxxxxxx na tomto xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx strojní xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jejich xxxxx a všechny xxxxxxx xxxxxxxx, včetně obalového xxxxxxxxx, které mohly xxxxxx do styku x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx byl xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxx očistou xxxx dezinfekcí,

—

jako výsledek xxxxxxx a testování xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) bodu x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xx sesterským xxxx rodičovským xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx osiva xxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) bodu xx) xxxxxxxxx za xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem, xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx provedena obměna xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (místa) xxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, kde xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx voda, xxxxx xxxx označena xxxx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovaný xx xxxxxx xxxxxxxxxxx povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx zamoření.

Prvky, xxx xxxx být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx možného xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx k jiným xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx pěstuje xxxxxxx xxxxxxxxx materiál,

—	společnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx produkce, xxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx nebo xxxx xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) produkce, xxxxxxxxxx (označených) za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

ii)

v případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv), xxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii):

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx, xx xxxxx xx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) by xxxxx povrchovou vodou xxxxx(x) být xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací nádrž, xxxxx xx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx objekty, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx zamořenou, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx a průtoku xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx xxxxx odkazuje xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) a případně xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x rajčat xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxx potvrdil, xxxxx xx riziko xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx členském xxxxx (x xxxxxx členských xxxxxxx), ihned oznámí xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

d)	velikost xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu, xxxx xxxxxxxx registrační xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx odkazuje xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx obsahovat xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx uskutečněného xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti o vymezení xxxx, včetně xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o určení xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx každou xxxxxxx xxxx partii xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 odst. 1 bodu xx) xxxxxxxx 2000/29/ES x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, podle xxxxxxx uvedeného v příloze V, xxxxx X, odd. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx informace, které xx týkají potvrzeného xxxxxxx (ohnisek), jak xxxx případně xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx následující:

—	použití jako xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx kontaktem s vodními xxxxxx, xxxxx xx xxxxx být použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx do zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx zařízeními xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx neexistuje xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vzniklý z výše xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx daného xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení k odstraňování xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx určené xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx pro přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx. S bramborami xxxxxxxx k pěstování xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx určené xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou xxxxxxx xx zpracovatelského závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních prostředků, nebo

—	budou xxxxxxx některými xxxxxx xxxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem,

ii)

jiné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx provádějí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx v zóně xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx byla místa xxxxxxxx prohlášena xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na poli xxxx na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii), tak:

během xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících po xxxx prohlášení místa xxxxxxxx za zamořené:

—	budou xxxxxxx opatření k odstranění xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a rajčat, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx pěstovány:

—	hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s uvážením xxxxxxxx organismu:

—	jiné hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Brassica, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx podmínky, xx xxxx bylo shledáno xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nejméně xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx pěstováním

—	v xxxxxxx brambor je xxxxxxxx pouze xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx bramborové xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx a po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx pěti xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx učiněna xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx i jiných xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx pěstování xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx stálé xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nehostitelských xxxxxxx v dalších xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx žádné riziko xxxxxxx nebo šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxx xx období xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx xx poli xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx roky před xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx rajčete, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx xxxxxxx polích xxxxx produkce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a ostatními xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx označeném xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx pouze xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v případě xxxxxxx rajčete se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx produkci xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxxxxxx zamoření,

—

v xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na jiných xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to xxx xx sadbu xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx semen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx místech xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx uvedena v bodu 4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx z úředně certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx produkci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a u každého xxxxxxxxxxxx xxxx se úředně xxxxxxx sklizené xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfikována xxxxxxxx xxxxxxxx metod, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx patřičné xxxxxx kontroly nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx prevence xxxxx šíření xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, pokud nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontrolovaná xxxxxxxx xxx vyloučení organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, včetně, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx brambor, bude xxxxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx-xxxx xxxx mikrorostlin xxxxxxxxx z testovaných zdrojů,

—	u xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx tato produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx, pokud xxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx z osiva vypěstovaných xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx programů xxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx zóně, xxxx xxxxx dotčena xxxxxxxxxx uvedená x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx státy:

a)	musí xxxxxxxx, xx ihned xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení v takových xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodných xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, spolu xx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx stroje xxx xxxxx xxxxxxxx brambor xxxx rajčat,

—

vyžadují, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx všechny kultury xxxxxxxx používána xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx manipulaci xx sklizenými sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami ve xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx sadbovými a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx uvedené xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxx je xxxxxxxxxx xx xxxxx xx zdrojů xxxxxxx xxxxxx organismu xxxxx xxxxxxx V bodu 2:

—

xxxxxxx xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx příslušných xxxxx stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx zavlažování a postřiku, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx každoročního xxxxxxxx a prohlášení (o xxxxxxxx) xxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx není xxxxxx xxxxxxxx. Použití vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, z úřední xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx technologie, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxxxx a jeho šíření,

—	jestliže xxxx zamořeny výpusti xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx pevného xxxxxx nebo výpustí xxxxxxxx xxxxxx z průmyslového xxxxxxxxxx xxxx balících xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx splňovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx jakékoli xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (včetně xxxx, kamenů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx uložením xx xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx např. prosáknutím xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx přemístěn přímo xx xxxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxxxxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření organismu; xxxx xxxxxxxx musí xxx oznámena Komisi x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx xxxxxx odpad xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 minut xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx odpad xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx xxxx vodními xxxxxx, xxxxx xx mohly xxx xxxxxxx k zavlažování xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx způsobu ošetření xx xxxxxxxx ostatním xxxxxxxx státům x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (XX x/xxxx ELISA) s polyklonálním xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx produkt XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (viz xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx testů, ale xxxxxx znám xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx koncentracích.

(10) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X a NS-6-R xxxx optimalizovány pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.