EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/ES

ze xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx al.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 98/57/XX ze dne 20. xxxxxxxx 1998 x ochraně xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. (1), a xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x rajčete (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx se zjistilo xxxxx výskytu x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x rozšíření x při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x kromě toho xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx proti xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx ochranných xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx nezbytné přezkoumat x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v některých xxxxxxxxx směrnice 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx o xxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR) i xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx, xx xxxx x půdě.

(7)

Xxxxx xxx o technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx zajištěno vysledování xxxxxxxxx, prvky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu a xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx některé xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx význam této xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

PŘIJALA XXXX SMĚRNICI:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zněními x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Členské xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x zveřejní xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx s touto xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx státy neprodleně xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx KYPRIANOU

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA TESTU PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlinách xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky.
	3.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx nebo jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a v rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nevykazujících příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx metody pro xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě
	2.	Metody xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum v půdě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxxxxx a identifikaci X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx produktu XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxx (FISH test)
		8.	Testy xxxxxxxx imunoanalýzy XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx ELISA
			b)	DASI ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a pěstování X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx IF x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ PRINCIPY

Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Seznam xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly obsahují xxxxxxxx karanténního organismu x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx také zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx s činidly a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není považován xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn izolací xxxxxxxx a dále, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy xxxx umožnit detekční xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX NEBO JINÝCH XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1 Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx infekce x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny při xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx k zotavení. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a uhynutím xxxxxxxx. Z cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svisle xx vody xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx žlutého xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx hnědým a odumření xx xxxx rozšířit xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy a z oček xxxx vytékat xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2 Příznaky u rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx kolem 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx straně xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx xx spodu stonku, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. u rostliny X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx jsou příznaky xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí rostliny X. dulcamara, xxxxx xx stonky x&xxxx;xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx vnitřní světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx pod xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx dostačující. Xxxxxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX v buňkách R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

(Viz oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx oddíl VI.A.7), testy XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny. Xxxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx suspenze x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX nebo SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (např. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky s rozředěnou xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s charakteristickými xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx vzorku xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx na testování vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx zjištění xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

a)	Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx všech populací X. solanacearum.

Omyjte hlízy. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (s obsahem xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Nechte hlízy xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx být xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx svazky omezte xx minimum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx všechny (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx provedeno vizuální xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xx měly uchovávat xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx při pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx hlízy xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx přidání xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx zpracujte jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační třepačce (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx použili xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx vířením x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx testování xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx testů a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky o počtu xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx z paty každého xxxxxx hned nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx skleníku: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx uříznutým xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Odeberte xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xxxxxxxx 1&xxxx;xx dlouhý díl x&xxxx;xxxx xxxxxxx stonku xxxx nad xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx odeberte 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx nejméně 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo xxx xxxxxx potenciální plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx hastata, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Chenopodium album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X této xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx jakýkoli xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte části xxxxxx 70 % xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx zpracujte drcením xxxxx v pevném maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního pufru (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx teplotě na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale lze xxx provést xxxxxxxx x/xxxx odstřeďováním popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx v tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx a rovněž xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých je xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx toto xxxxxx používá xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, je třeba xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx dešťů a geografii xxxxxxx xxxx, xxxxxx xx vyhnuli xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx jsou xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3&xxxx;xx vodního toku x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) a testujte xx 24 hodin.

2.1.3 Je-li xxxxxxx, může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz postupový xxxxxxx a popis xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx v přirozeně infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx použití xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

2.1 Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Xx jeden xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (nebo v mřížce 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvyšte xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 12–15&xxxx;°X. Xxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů xxxxxxx v příslušném xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxxxxxx xxx xxxxxx do xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxxx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx SPA (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx je uschnout x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx povrch xxxxxxx sklíčka xxxxxx xxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx sklíčka 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, zda xx objeví xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zda xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx a inkubujte 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx a pracujte v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX granulí x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. solanacearum v bakteriálním xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx obarvenými xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx suspense xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (přibližně 5&xxxx;µx xxxxx látky) na xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx po dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx selektivní xxxxxx xxxx, např. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Rozlišení R. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx schopných xx xxxxx půdě růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, měl xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lze xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx však použitelná x&xxxx;xxx extrakty, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě od –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx vyloučeny. Xxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Po 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx stav x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Typické xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx živné xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a nefluidní nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx kolonie X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx očkováním na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 dnech nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Wilbrink (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx a zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx i ke zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx neúspěšné x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx organismů, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx z obohacené xxxxxxx obtížná. Kromě xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx bujónu (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx připravte xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx teplotě 27 xx 30&xxxx;°X v třepané xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx bujónem zacházejte xxxx způsobem xxxx xx vzorky xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit lepších xxxxxxxx obohacením extraktů xx xxxxxx před xxxxxxxxx odstřeďováním nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X v glycerolu. Xxxxxxxx může xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané lyofilizací xxxx zmrazením xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktů xx xxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka s více xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx napipetujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Druhá xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx ve zmrazeném xxxxx v suchém xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx na navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx opláchněte pufrem XX. Umyjte xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, které xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx osušením.

5.3.4 Umístěte sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s filtry xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorek. Buňky xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky s neúplným xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může stát, xxxx všechna sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. solanacearum.

5.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií v titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v celém xxxxxxx jako hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx předtím xxxxxxxx xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, při XXX xxxxxxxx xxxx XXX extrahovanou z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx než xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx&xxxx;xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní vzorky (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx v dodatku 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Tris-HCl (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X po dobu 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchejte xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx homogenní.

8.	Pro xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 min xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100 % etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX pro xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx reakční směs xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxx zdroj XXX jako byl xxx, xxxxx byl xxxxxx xx směsi XXX místo vzorku.

6.2.5 Umístěte XXX mikrozkumavky xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx s 3 µl nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Použijte vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx vícenásobné XXX x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx je xxxxxxx, xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx výsledky. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx dvou xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a je pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 103–104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx vzorku, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolními xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie přítomné xx vzorku.

Standardizovaný pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx po xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a to neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Prázdný	Prázdný	Prázdný	Vzorek 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	okénko 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx a pokračovat x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

7.2. Hybridizace

7.2.1 Dehydratujte buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx ohřejte xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) na každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 ml vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Nechte xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x hybmixem xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do XXX (např. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx je xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60 mm).

7.3. Hodnocení XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční mikroskopii xx zvětšením 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující a zcela xxxxxxxx. Test FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx sklíček (viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx než u pozitivního xxxxxxxxxxx kmene. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx opakován. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx xx pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx než x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledků testu XXXX

Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx při xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, které xxxxxxxx alespoň 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx použít xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které je xxxxxx nebo stejné xxxx u titru xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx jste předtím xxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleny na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx používají xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx do každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx třikrát xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx poslední xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proti X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx komerčních xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy v blokačním xxxxx. Přidejte 100 µl xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (xxxxxxx 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx v pravidelných 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx ze vzorku xx xxxxxxx dvou xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx a negativní kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx jamky. Xxxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx do každé xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže průměrná xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx extraktu xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně nebo xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, že došlo x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum na 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx v dodatku 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx kultivary x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve fázi 2. až 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

Rozdělte 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte xxxxxx xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx xxxx než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2 Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi děložní xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx asi 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx přibližně 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx řez xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx xxxxxxx skleníku xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx z různých xxxxxx xx xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mezi vzorky.

Hledejte xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx proveďte xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, proveďte zřeďovací xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého organismu X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs přítomny xxxx naopak chybí x&xxxx;X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml v pufru XX (dodatek 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx antiséra (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3 Použijte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr XX xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx nepoužívejte xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly.

4. Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx v uzavřených xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů specifických xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Seal xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Opina et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx velikost x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenu použitím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx očkováním xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx při teplotě 28&xxxx;°X. Je-li živná xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), zbarvení xx xxxx během 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx něž xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2 Repetitivní xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplifikovaných xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) lze xxxxxx k diferenciaci kmenů xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum a k potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum musí xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx ve fázi 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by typické xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Investigaciones Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx

a) živné xxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Difco)	5,0 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4.7H2O	0,25 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte v autoklávu xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50 °C x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma B-0125)	1 250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Xxxxx X-3032)	825 U (přibližně 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma)	50 mg/l

Pozn.:

1.	Použití xxxxxx reagencí xxxx xxxxxxxxx xxxx ovlivnit xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx to však xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx může být xxxxxxxxx a rozptýlenější xxx xxxxxxx Bacto-Agar.

3.	Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx a spotřebujte xx 1 měsíce.

Misky x&xxxx;xxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx vynechte Bacto-Agar x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx na 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál buď x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (tabulka 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2.	Sbírka xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), Ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční panel xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, EURS21	Turecko	2
NCPPB 3857	12	CFBP 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	CFBP 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, CIP312	Peru	2T
NCPPB 3989	45	CFBP 4613, R568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	CFBP 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	CFBP 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v případě, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2 Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

Kód NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	CFBP 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 PD 2778	Xxxxxxxxx xx. (4)
NCPPB 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Burkholderia xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	CFBP 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 IPO S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	CFBP 4621 IPO X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	CFBP 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Aureobacterium sp. (5)
NCPPB 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx je možné xxxxxx xx sbírky xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 až 104 a 104 xx 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických a PCR xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, abyste získali xxxxxxxx hustotu přibližně 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx xx dosáhne xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx dřeň x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx víte, xx je prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx řádně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejdříve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx účely xxxxx PCR proveďte xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx se xxxx testů IF, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované pufry xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pletiv xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (PVP-40)	Váže xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění extraktů x&xxxx;xxxxxxxx pupkových xxxxx xxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pelety odstředěním.

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx protilátek

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
NaCl	8,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Tween 20 do xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx např Vectashield® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica) xxxx dostupné na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	6,36 g
NaHCO₃	11,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	doplnit xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1 l destilovanou vodou.

Přidejte 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely testu XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný pufr (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

4.3 PBS-Tween

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx a nastavte xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky
a	s	=	povrch xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx panelu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer OLI-1	5′-GGG XXX AGC XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX ACT XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx při 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx optimalizován pro xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Maisse (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1	5′-xxx cga xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx primer Ps-2	5′-ggg xxx ttc aca xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx PCR (9)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Původně optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity ve stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx extenze)
	vi)	ponechte xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx bude možná xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

2.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F	5′-ACT XXX XXX XXX GAG XXX XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx XX-1-X	5′-XXX AGT XXX GGC XXX XXX T-3′
Přímý primer XX-5-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (sada xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µM
Taq xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfizsmus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °C.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X	5′-XXX XXX GCA XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Rs-1-R (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5U/µl) (12)	0,2 µl	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx PCR (13)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 minut xxx 72 °C (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	50 ml

5.2 Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Rovněž xxxxxxxx na xxxx (xxxx. Invitrogen nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované reagencie xxx xxxx FISH

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx caa gct xxx ccc-3′

Nespecifická eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct xxx xxx xxx agg xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: USTALOVAČ XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i)	Zahřejte 9&xxxx;xx ultračisté xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Paraformaldehyd xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX a míchání na xxxxxxxxxx míchačce.

ii)	Upravte xX xx 7,0 přidáním 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Zkontrolujte xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X do dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx podložní xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi.

Počet xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx EUB 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx použití chraňte xxxx přímým slunečním xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx listy (10 xx 14 dní) xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxx xxxx naočkováním pěstovány xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 hodin xxxx přirozená xxxxx xxx nebo xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24 °C noční: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, R.I., X. Krumholz and X.X. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx cells xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Bacteriol. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 on xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, G., X.X. Le Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx specify xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx International Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Tanaka, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12.	Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx on x tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx et al., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Pseudomonas xxxxxxxxx and xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation of xxxxxxx structure by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx R. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Sequence xxxxxxxx xxx detection of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx M.J. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Pseudomonas pickettii xxx Blood Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by polymerase xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, L.I., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Analysiss xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx disease xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx on 16S xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Der Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Western Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) pp. 44-49.

29.	Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, D.E. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Wullings, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx of X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx případech xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) xxxxxxxxx(x) xx xxxxxxxx rostlinném xxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v příloze II xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx metodou xx ještě xxxx, xx třeba zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady dokud xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx ukončen.

Uschování xxxx xxxxxx v případě xxxxxxx xxxxxx jinou xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx případné testování xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 2:

—	materiál xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxx nebo xxxxxxx, xxx je to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx i) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé rostliny xxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zdroje xxxx rostliny xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx podezření xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v místech produkce, xx xxxxxxx bylo xxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx x&xxxx;xxxxx existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, u které se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

ii)	povrchová xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx místa (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx pole xxxx místo (místa) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxx v místě produkce, xxxxx bylo podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) prohlášeno xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkční xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx za zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx nářadí x&xxxx;xxxxxxxx používají xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx předchozí odrážky xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, kdy xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx ii) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, ve xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx do styku x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo přišel xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx očistou xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx výsledek xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x), v případě xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx se sesterským xxxx rodičovským xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx rostlinnému xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx vyrostly xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) prohlášen xx xxxxxxxx, a u nichž, třebaže xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx zamořených x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovaný xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, jež xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv)

—	blízkost k jiným xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx partií xxxxxxxxx brambor,

—

místa produkce, xxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx xxxx bylo xxxxxx odtoku xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx), xxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx):

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstuje x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx má spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx zamořenou,

—

vodní xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx hostitelským xxxxxxxxx z čeledi lilkovitých.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx potvrzena přítomnost xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) a případně xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x rajčat xxxxx xxxxxx dané partie x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxx potvrdil, xxxxx xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx členském xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), ihned xxxxxx xxxxxx členskému xxxxx (xxxxxxxx státům) potřebné xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx odkazuje xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx obsahovat xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx zdroje x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vymezeného xxxxxxxx, včetně xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx počtu xxxx produkce, xxxxx xxxxxx označena xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vodního xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx předepsaná x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx ii) xxxxxxxx 2000/29/ES x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx k přepravě, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko úniku xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xx zemědělské xxxx xxxx kontaktem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zajištěno, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedenými xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx členského xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v němž se xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx k odstraňování xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx brambory xxxxxx xx xxxxxxxx, již xxxxxxxx xxx přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bez xxxxxxxxx, xx místě x&xxxx;xxxxxxx zařízením pro xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx místě xxxxxxxxxxx jen xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx určené pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx a systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx některými xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx příslušným xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx metody xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xx provádějí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx přijmou xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx vymezené xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx):

xx xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii), tak:

během xxxxxxx čtyř pěstitelských xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, i jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxx přežití xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx podmínky, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx xxxxx úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx pěstitelské xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx a po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, který xxxx xxxxx xxxxxxx xxx roky, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, bude xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během pěti xxxxxxxxxxxxx let následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vyloučí výskyt xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx i jiných xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx třech xxxxxx xxx ponechání xxxx xxxxx nebo pěstování xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx jeho xxxxxxx xxxx stálé xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx na xxxx xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx dva následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XX;

xx xxxxx ostatní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a s podmínkou, xx xxxxxxxxx orgány xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a ostatními planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx po označeném xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx pěstovány xxxxx bramborové xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mohou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx rajčete se xxxxx pěstovat xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají požadavkům xxxxxxxx 2000/29/ES, pouze xxx produkci plodů,

—

ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové brambory xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to xxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx pěstovány xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx na produkci xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx pěstitelském roce xx prohlášení místa xxxxxxxx xx zamořené,

—	v xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx z úředně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx brambor buď xx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx rajčat xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených rostlin, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx na produkci xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx období xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx produkce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx metod, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx zavedeny patřičné xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx jako prevence xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii), xxx xx xxxxx xxxxx vyměnit pěstební xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxx bramboru, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx jednotku x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin zavedena xxxxxx kontrolovaná xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, včetně, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo rajčat xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, bude xxxxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxx brambor xxxx xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx rajčat xxxx xxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX nebo, pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx z osiva vypěstovaných xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx úřední kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx budou dotčena xxxxxxxxxx xxxxxxx v bodu 4.1, xxxxxxx státy:

a)	musí zajistit, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat, xxxxxx vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

ihned a nejméně xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu xx):

—	xxxxxxx xxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx nad zařízeními, xx kterých xx xxxxxxx, skladují xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx zóně xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx výlučně xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx zařazených xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou manipulaci xx sklizenými sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx mezi manipulací xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx uvedené xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx průzkum xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx voda prohlášena xx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xx) nebo xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx možného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

provádí xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx a případných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx případy,

—

zavedou xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx používání xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, xxx je to xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného každoročního xxxxxxxx a prohlášení (x xxxxxxxx) odvoláno, xxxxxxxx xx příslušné xxxxxx xxxxxxxxx, že povrchová xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx zákaz, xxxx xxx povoleno, z úřední xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxxxx a jeho xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo výpustí xxxxxxxx xxxxxx z průmyslového xxxxxxxxxx xxxx balících xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx zavedou xxxxxxx xxx obnovu xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v rámci přiměřeného xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx šíření xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) a jiný xxxxx odpad související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) xx odstraní xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx být používány xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx přemístěn xxxxx xx skládku xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxx odpadů,

nebo

—	spálením, nebo

—	jinými xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx oznámena Komisi x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx částice podroben xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx dobu xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx by xxxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx půdou xxxx xxxxxxx zdroji, xxxxx xx mohly xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx oznamují xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a zpracováním xxxxxxxxxx partií.

“

(1) Viz Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (IF x/xxxx XXXXX) s polyklonálním xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx xxxxxxx xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx produkt XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx dodatek 6).

(6) Pravděpodobnost xxxxxxx reakce xx xxxxxxx xxxxx, ale xxxxxx znám xxxxx x&xxxx;xxxxxx v Indonésii.

(7) Pro xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx rovněž xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Taq xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pletiva pupkových xxxxx xxxx bramboru xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metod izolace XXX může xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.