EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

ze xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou xx xxxx přílohy XX xx VII směrnice Xxxx 98/57/XX x xxxxxxx proti Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,

x ohledem xx xxxxxxxx Rady 98/57/XX xx dne 20. xxxxxxxx 1998 o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), x xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

vzhledem k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x rajčata xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí bramboru x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx se xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx výskytu a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx jeho xxxxxxx x xxxxxxxxx x při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx v poznatcích x xxxxxxxx a x xxxxxxxxx zjišťování x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx ochranných xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx se jeví xxxx nezbytné přezkoumat x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Pokud xxx o postupy xxxxxxxxxx a identifikace, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenční xxxxxxxxxxx (FISH). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx technických xxxxx xxxxxxxxxx postupů xxx zjištění a xxxxxxxxxxxx x metody xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x technické xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx pro xx xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, která je xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx označených jako xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jako hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského výboru.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy XX xx VII směrnice 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1. Členské xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Komisi xxxxx těchto předpisů x srovnávací xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými státy xxxx obsahovat xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx KYPRIANOU

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx hniloby v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii)	zjištění Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx výronu xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (FISH xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční a enzymatický xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx izolaci a pěstování X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		A)	Komerčně xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx kontaminace xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované protokoly x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů jsou xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx karanténního organismu x&xxxx;xxxxx zahrnovat použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES vyžaduje xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma xxx xxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx je xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx resuspendované xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících příznaky

ODDÍL II

PODROBNÉ XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX NEBO JINÝCH XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx infekce x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx k zotavení. V raných xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a uhynutím xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx se x&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx a podélně xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx žlutého až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Později se xxxxx zbarvení stává xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a z oček xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx přilepení xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx vnitřním kolapsem xxxxxxx pletiva. V pokročilejších xxxxxx infekce xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších listů. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx a vadnutí xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx méně příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx xxxxxx se xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního systému. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo není xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. u rostliny X. nigrum rostoucí x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx vnitřní světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx spodní xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx pod xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx dostačující. Xxxxxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxx platných xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

(Xxx oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx oddíl VI.A.7), testy XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při izolaci

Odeberte xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

Přeneste 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX nebo SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připravte případně xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

—

Xx universální živné xxxx vytvářejí virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů před xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

Omyjte hlízy. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx stranou xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, mělo xx xxx provedeno xxxxxxxx xxxxxxxxx takové hlízy xx řezu hlízy xx xxxxxxxx konci Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby mohlo xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx okamžitě. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě nižší xxx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher nebo Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Homex).

Pozn.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx pro každý xxxxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx xxxxx XXX zabraňte xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavek xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), filtr omyjte xxxxxxxxx (~10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 g po xxxx 15&xxxx;xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) při teplotě 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx vířením a uložte xxx teplotě –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx boxu x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx IF x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

2.1.1 Do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice z předpěstírny: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonkem. Odeberte xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx odeberte 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit po xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Tussilago xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxx: X této xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx bakteriální sliz). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx stonku x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70 % xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx chlazené, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx drcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Bioreba) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3 Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale lze xxx provést xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx vody. Je xxxx nutné zmínit, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx testu selektivní xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Zatímco níže xxxxxxx schéma předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce v odpadní xxxx ze zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx čistícího postupu (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxx v úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu v povrchové xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxxx mapování v odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxx patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx vody x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx jsou přítomny.

2.1.1 Na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxx podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) a testujte xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, slijte xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím xxxxxx x&xxxx;5–10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x&xxxx;xxxxxx odpadní xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

2. Metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx je použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx může xxx xxxxxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx v přirozeně infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx v mřížce 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počet xxxxxxxx míst xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 12–15&xxxx;°X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx kalu xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02 % sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4 °C.

2.2 Testování

Postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxxxx xxxxxx právě xxx xxxxxx země. Ponořte xxx xxxxxx do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx se xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu z infikovaného xxxxxxx xxxx ze 48 hodinové xxxxxxx xx živné xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB negativním xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx rychle xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx preparáty xxx xxxxxxx modří xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete kapkou xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx objeví xx XXX granulích jasně xxxxxxxx fluorescence. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx modročerné zbarvení XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx obarvenými xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx latexovými xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx komerčně dostupného xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxx xxxxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx řiďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx v pozitivních xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx, proveďte xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx selektivní živnou xxxx, xxxx. XXXX (xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdě růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, kolonie R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx morfologii, jestliže Xxxxxxx misky jsou xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktů ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx být xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx otestována xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1 Proveďte xxxxxxx xxxxxxxx ředění s cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Po 48 hodinách xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx na xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx částečně fluidní, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx rozetřete xxxx xxxxxxx metodou xxxxxxxxx xx universální xxxxxx půdu, abyste xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, bez chlóru) xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X) a test xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxxxxx k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx v extraktech ze xxxxxx a zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx(1:100). Je xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx často xxxxxxxx xxxx obohaceny. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100 µl extraktu xx xxxxxx do 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. U obohacovacího xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 hodin xxx teplotě 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx ELISA xxxx XXX xxxxx promíchejte.

4.2.4 S xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením extraktů xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx kvůli dokázané xxxxxxxxxxxxx v dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx hlavní x&xxxx;xxxxxxxx IF xxxxx xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Jestliže xx test IF xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovních xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx měl být xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx je xx nutné, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X v glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx vzorky xxxxxxxx xx sklíčka plamenem.

Připravte xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx použijte alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

5.1 Připravte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx pelety:

Připravte desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx podle konkrétních xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx ve zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xxxxxxxx krátkou xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx test v odst. 5.1.i): Připravte xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx mít 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx kontaminaci. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx jako předtím (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Zkoumejte xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou morfologií X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

5.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii)	Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice izolace xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Předběžné testování xxxxx metodou by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx možno, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx bezpečnostní opatření, xxxxxx zabránili xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx PCR xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA ze xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných pelet, xx xxxxxxx byla xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx R. xxxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste zabránili xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, které xxx použít pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace DNA

Používejte xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu proveďte xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx enzymových reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx účely xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl roztoku Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx fází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100 % etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80 % etanolu (–20&xxxx;°X) a promíchejte překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx uschnout xx vzduchu nebo x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vzorku xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v prostředí, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX jako xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx ve směsi XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx vícenásobné PCR x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx je xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Pozn.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx získán xxxxx xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije FISH xxxx a je pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx vyšetřovací test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Používejte xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx měl být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. solanacearum s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se používá x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (viz xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a rozpusťte peletu xx 200&xxxx;µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte etanol xxxxxxxxxxx a přidejte xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	okénko 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Krycí sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6 Nechte xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) a fixujte xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx po dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx necháte xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Umístěte sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx o teplotě 45 °C.

7.2.6 Sejměte xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) a položte xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo podobný) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Použitím filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření na xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test opakován. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxx x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx XX, PCR nebo XXXX pro jeho xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA může xxxxxx xxxxxxxxx testu, xxx xxxx se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx konkurenci xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx u titru komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx protilátek xxx suspenzi 105 xx 106 buněk xx 1 ml homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx bez vzájemného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx podíly vzorkových xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2 A a B). Xxx xxxxxxxx výsledků xx xxxxx destičce xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx materiály, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a promíchejte.

3)	Nakapejte 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v blokačním xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx a nechte inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx protilátek x&xxxx;xxxxx a vymyjte je xxxx předtím (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 µl xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx substrátového alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx polyklonálního imunoglobulinu x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx xxxx 4 ° C xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190 µl xxxxxxxx ze vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx a negativní kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) s obsahem 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx jamky. Xxxxxx stát 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá při xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx se substrátem) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových extraktů.

Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích ukazují, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že došlo x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx použít xx extrakty, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi třech xxxxxxx listů u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx pěstování xxx v dodatku 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx jsou xxxx xxxxxxx a vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

Rozdělte 100&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx stonky xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Rozdělte vzorek xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx list.

Sterilním xxxxxxxxx udělejte xxxxxx xxx asi 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx přibližně 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx řez xxxxxxxx xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, držte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Musejí-li být xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx činnostech věnujte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx a/nebo xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx proveďte xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6 Jestliže xxxxx 3 týdnů nejsou xxxxxxxxxx žádné příznaky, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx složeném vzorku xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, proveďte xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou být x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum.

B. IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx založených na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. solanacearum, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx aktivita	+
Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX metodu (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx kontroly.

3. Test ELISA

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X XXX (dodatek 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Pastrik x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH je xxxxxxxxx, jestliže xx x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného testu xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx schopnosti xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx půdy x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Je-li xxxxx xxxx rozdělena na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx něž xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x&xxxx;2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak bylo xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx et al., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Taghavi xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx R. solanacearum xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (viz xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx při teplotě 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx inokulace. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Proveďte xxxxxxx xx suspense zřeďovacím xxxxxxxx pokud možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum

a) živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx při teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx na litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Základní živná xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilizovaný xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Sigma)	5 mg/l
Polymixin-B-sulfát (Xxxxx P1004)	600 000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx se xxxxx tvořit x&xxxx;1–2 xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Bacto-Agar.

3.	Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2 500 U/l xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx a spotřebujte xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx být xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx podrobena kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X objeví xxxxxxx kolonie.

c) Validované obohacené xxxxx půdy

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx vynechte Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená živná xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Sacharóza	10 g
Proteázový xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50 °C.

Přidejte xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx pro živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx buď x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a lze xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2.	Sbírka xxxxxx xxxxx ochrany rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Pr 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, EURS21	Turecko	2
NCPPB 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, GONg7	Kostarika	1
NCPPB 4028	43	XXXX 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, CIP312	Peru	2T
NCPPB 3989	45	XXXX 4613, X568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx zaručena xxxxx v případě, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx cepacia (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 PD 2778	Ralstonia xx. (4)
NCPPB 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4)
NCPPB 3708	56	CFBP 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Banana Xxxxx Disease Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 XXX S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	IPO 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 IPO X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 IPO 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx sp. (4)
NCPPB 4173	–	XX 2318	Aureobacterium xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx možné xxxxxx ze xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 až 104 x&xxxx;104 až 106 xxxxx biovaru 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx SMSA xxxxx xxxx a suspendujte x&xxxx;10 mM fosfátovém xxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 cfu xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx zakalenou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx dřeň x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx víte, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinásobné ředění x&xxxx;xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx díly 100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx 1,5 ml xxxxxxxxxxxxxxx, čímž získáte 9&xxxx;xxxxx téhož xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v kontrolních xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx účely testů XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx u každé xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx testů XX, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx nejméně x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Pufry xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxxxx xxx uchovány xx xxxxx rok.

1. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx bramboru xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pelety odstředěním.

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx tekutina/roztok xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte pH x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

NaCl	80,0 g
KH₂PO₄	2,0 g
Na₂HPO₄.12H₂O	29,0 g
KCl	2,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

3.3 PBS-Tween

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Tween 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx xxxxxxx připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	doplnit xx 100 ml

3.5 Roztok xxx xxxxxxxx alkalické fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5&xxxx;xx xxxxxxxx fosfatázového xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

4.3 PBS-Tween

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hodnotu xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx typu okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a reagencie XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx panelu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx PCR Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1	5′-XXX XXX AGC TTG XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX ACT XXX GCC XXX XXX AGG XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5U/µl) (8)	0,1 µl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 sekund xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 minut xxx 72 °C (závěrečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Maisse (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer Xx-1	5′-xxx cga xxx xxx xxx ggg x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx primer Xx-2	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Původně optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer AmpliTaq x&xxxx;xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx extenze)
	vi)	ponechte při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) a iv).

2.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX TTA XXX XXX TTG XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(10) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Acetát -XXXX (XXX), pH 8,0

Tris	48,40 g
Ledová xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx na trhu (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLI-1-CY3 5′-ggc xxx xxx xxx xxx xxx ccc-3′

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct xxx xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX JEDOVATÝ. XXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx vody (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpouští po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; xX 7,0) a 5 kapek 1X XXx. Zkontrolujte pH xxxxxxxxxxxxxx papírky a případně xxxxxxx XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx roztok přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tri-HCl	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx filtrací a autoklávováním)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx xxxxxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, A PROTO XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxxx směsi.

Počet xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx všechny xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx použití xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx lilku (Xxxxxxx melongena) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku a rajčete xx měly xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx s následujícími xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx nebo xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 až 24 °C noční: 14 xx 18 °C
Vhodná xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná odrůda xxxxx	‚Xxxxx Beauty‘
Dodavatelé:	viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, R.I., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 on xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx et al. Xxxxxxxx Journal xx xxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, D., Xxxxxx, X. and Sequeira, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx specify xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, J.K. and Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx of detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, S. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Detection xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx and some xxxx on its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx analysis. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Kelman, X. 1954. Xxx relationship xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Klement X.; Xxxxxxx, K xxx D.C. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15.	Lelliott, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Gorris, M.T., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: H.W. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxx. 1997. A novel xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx disease xxxxxxxxx xx banana xxxxx on 16X xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Feuillade, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx disease: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Aspects. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Smith, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains using xx automated xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx TaqMan xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx rot of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Appl. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, kdy xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) xxxxxxxxx(x) xx xxxxxxxx rostlinném xxxxxxxxx podle vhodných xxxxx xxxxxxxxx v příloze II xxxxxx(x) xxxxxxxxx a na xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx metodou xx ještě xxxx, xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny vzorkované xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený materiál xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jinou xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx oznámení xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxx xxxx rostlin, xxx xx xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx i) x&xxxx;xxxxxxxxx případech zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou klonově xxxxxxxx rostlinám bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, které pocházejí xx xxxxxxxx zdroje xxxx rostliny xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx, xx xxxxx byla xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx podezření na xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé rostliny xxxxxxxx, které jsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterých bylo xxxxxxxx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx se pěstují xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zamořených xxxx produkce, včetně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx dochází xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx k zavlažování nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx podezření xx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx ze xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx u nichž existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx jsou xxxx xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem xxxx je podezření xx xxxxxxxx organismem,

ii)	povrchová xxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx nebo xxxxx (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx zaplavila xxxx xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx při stanovení xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vazbou xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, xx kterých xx xxxxxxxx nářadí x&xxxx;xxxxxxxx používají xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstovaný x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx předchozí odrážky xxxx xxxxxxxx v takovém xxxxx (místech) produkce xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx produkce xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx strojní xxxxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx kontejnery, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které mohly xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxx očistou xxxx dezinfekcí,

—

jako xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) bodu x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx rodičovským klonovým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, resp. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a u nichž, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx, xx zamoření na xxxxxxx klonové xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx obměna xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, kde xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx voda, xxxxx xxxx označena jako xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovaný xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx zamoření.

Prvky, xxx xxxx xxx zohledněny xxx určování xxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), zahrnují:

v případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx k jiným xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál,

—	společnou xxxxxxxx a použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxx, xxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vody xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxx které(á) xx xxxxx povrchovou vodou xxxxx(x) xxx zaplaveno(a),

—	každá xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nádrž, xxxxx má spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou prohlášenou xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx objekty, xxxxx xxxx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx,

—	xxxxx rostoucím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx poté, xx xx potvrzena přítomnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx jméno xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx požadavky na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský xxxx, xx kterém xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), ihned oznámí xxxxxx členskému státu (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

d)	velikost xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx rostlinolékařského xxxx nebo alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx šetření x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx případu:

a)	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx xxxxxx a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx zdroji (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o rozsahu vymezeného xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx partií s udáním xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o určení xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx a rozsahu označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, osvědčení xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx ii) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx A, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), jak xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx zvířata xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. průsakem xx zemědělské půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx být použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx neexistuje žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředků,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx daného xxxxxxxxx xxxxx (států), xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v němž xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení k odstraňování xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx brambory určené xx spotřebě, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx a použití xxx xxxxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu. S bramborami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx stejném místě xxxxxxxxxxx jen odděleně x&xxxx;xx xxxxxx a dezinfekci, nebo

—	budou xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx určené xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou dodávku xx xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx odpadu a systémem xxxxxx a dezinfekce alespoň xxxxxxxxxxxxx dopravních prostředků, nebo

—	budou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx tohoto organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem,

ii)

jiné xxxxxxxxx partie včetně xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx provádějí pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx členských xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx vymezené xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv) x&xxxx;xxxx. x) bodu iii), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx ii):

na poli xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx zamořené:

—	budou xxxxxxx opatření k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně hrozí xxxxxx přežití xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx pěstitelské xxxx xxxx pěstováním

—	v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x případě xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xx příslušném xxxxxxxx xxxxx, který xxxx činit xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx brambory, bude xxxxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx pěti xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx opatření, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

v xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx, anebo xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo intenzivní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pěstováním nehostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x prvním sklizňovém xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, které následuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx jiné planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxxx xxxxxxxx prohlídek xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x případě xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx rostliny rajčete, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx ostatní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx zamořené x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx příslušné xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě bramborových xxxx xxxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx pouze xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx buď xx sadbu xxxx xx produkci konzumních xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, nebo xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx semen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolou xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx produkci xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x případě rajčat xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxx xx semen, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx rajčete pěstované xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x každém pěstitelském xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx organismu x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a týkající xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx budou vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx metod, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování a postřiku, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx prevence xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu xx), xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx pěstovány xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, pokud nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxx xxxxxx kontrolovaná xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, včetně, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xx příslušných xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxx brambor nebo xxxx-xxxx nebo mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů,

—	u xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxx produkce xxxxxxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX xxxx, pokud xxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vypěstovaných xxx xxxxxx kontrolou,

—	budou xxxxxxxx úřední kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx budou dotčena xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx státy:

a)	musí xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx do produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx tři xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx následují xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zóna xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv):

—	zajistí xxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx, xx kterých se xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx rajčata xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, spolu xx xxxxxxxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx stroje xxx xxxxx xxxxxxxx brambor xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx všechny kultury xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iii), xxxx po sklizni xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin rajčete xxxxxxxxxxxxxxx z výše uvedených xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, u všech xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxxxx xx zamořenou podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xx) nebo xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx organismu xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx xxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vodních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx příslušných xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx a jiné xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx pro zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx to xxxxxx. Xxxxx zákaz xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx zákaz, může xxx povoleno, z úřední xxxx, xxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx schválené xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx a jeho šíření,

—	jestliže xxxx zamořeny xxxxxxx xxxxxxxx odpadu, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přílohy VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odpad (včetně xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a rajčaty (xxxxxx xxxx, kamenů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se odstraní xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx na xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělské xxxx xxxx kontaktem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxx používány xxx xxxxxxxxxxx zemědělské xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření organismu; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům,

ii)

tekutý xxxxx: před xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx částice podroben xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx částic. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 minut před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx zdroji, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

“

(1) Viz Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4) Potencionální xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reakce xx xxxxxxx testů, ale xxxxxx znám pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Polymerace.

Perkin Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F a NS-6-R xxxx optimalizovány xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx třepáním nebo xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.