EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/ES

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES x xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx al.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), x zejména xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x významných xxxxxxxxx škodlivých pro xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí bramboru x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 98/57/XX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx mají xxx přijata v xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx výskytu a xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx rozšíření a xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx za xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a x postupech zjišťování x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx xx jeví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx o xxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Xxxxxx xxxx zahrnuta xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx zjištění x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx pro ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx zajištěno vysledování xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx oblastí, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx provést v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx význam xxxx xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx směrnicí xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského xxxxxx.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx 98/57/XX se nahrazují xxxxxxxxxxx zněními x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Členské státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii)	zjištění Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro zjištění xxxxx xxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx bramboru a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX test)
			6.1	Metody xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx produktu XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (FISH xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Pufry xxx testovací xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx úrovně kontaminace xxx xxxxxxx IF x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro test XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, xxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx musí zajišťovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, izolaci patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 až 104 xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

3. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX JINÝCH XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. V raných xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné sliz xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx se xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx žlutého až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx prstence, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx krémový bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °C, xxx nasycené vzdušné xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx a vadnutí xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx se xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X nebo není xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (např. u rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx příčném xxxx spodní xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx pod xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x&xxxx;xx i při xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX v buňkách X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx súdánskou xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3 Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx oddíl VI.A.7), testy XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx izolaci

Odeberte xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx bramboru xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx validované selektivní xxxxxx (např. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky s rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

—	Xx universální xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, xxxxx s charakteristickými xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx bílé.

—	U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující výskyt X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vedou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx na testování vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou vzorku:

a)	Inkubace xxxxxx xxx teplotě 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro odstranění xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx být xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx svazky xxxxxx xx minimum (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx naříznuté hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx měly xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx v chladu (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx hlízy xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx III.

1.1.2 Uložte výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být důkladně xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx zpracujte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) nebo drcením x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním sáčku xx jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Při testu XXX xxxxxxxx přenosu XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Použijte 500 µl xxx X. solanacearum, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx testovat smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice z předpěstírny: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny uříznutým xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx odeberte 1&xxxx;xx dlouhý díl x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 cm xxxx xx&xxxx;xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 rostlin na 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, S. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Chenopodium album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba, X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx a Urtica dioica.

Pozn: X této fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx bakteriální sliz). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte savým xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx zpracujte xxxxxxx xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xxx provést xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx najdete v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum ve xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné zmínit, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx než x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu se xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. sedimentace nebo xxxxxxxx), při xxxxx xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx se xxxx xxxxxx xxxxxxx úspěšně x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx v odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější v období xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, které xx xxxxx výskyt xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx pod xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Při xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx místo, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxx podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx kapalinu xxx usazeninou x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx metoda xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx detekční xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx kalu x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx hostitelské rostliny x&xxxx;xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x&xxxx;xxx použití xxxx xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx každý xxxxxx dobře xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx nebo kalu xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02 % xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10–20 g sterilních xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. SOLANACEARUM

A. DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test na xxxxx slizu ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízněte xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Ponořte xxx xxxxxx do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx živné xxxx XXXX nebo SPA (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní povrch xxxxxxx sklíčka rychle xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx fixovali.

4.	Obarvěte preparáty xxx xxxxxxx xxxxx xxxx súdánskou černí x&xxxx;xxxxxxxx mikroskopická xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx sklíčka 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1 000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda jsou xxxxxxx intracelulární a zda xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx a inkubujte 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx xxxxxx do xxxxxx a vysajte xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xylol xx zdraví škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte v digestoři.

e)	Opláchněte xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým papírem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx X. solanacearum s růžově xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx xxxx v extraktech x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) se xxxxx xxxxxxxxxxx výrobce. Jinak xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a heterologního xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 sekund xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, proveďte předběžný xxxx, xxxxxx zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx selektivní živnou xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Rozlišení R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx přítomny antagonistické xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx konkurenci nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx vzorek otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx vysoká. Metoda xx však xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X každé xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx testování vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ředění s cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx ředění.

4.1.2 Nechte xxxxx inkubovat při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Po 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx živné půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xx na xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, xxx chlóru) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo dlouhodobě xx vhodném ochranném xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx oddíl VI.C).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx i ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx do 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx živné xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X v třepané xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF testu xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Doporučuje xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx XX nejméně 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích uchovaných xxx teplotě –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxx vzorky fixovány xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx použijte alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

Použijte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetujte odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx vhodné pro xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx být použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx sklíčko buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka by xxxx mít 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (PŘ) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1 Uspořádejte podložní xxxxxxx na navlhčený xxxx xxxxx. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx pro excitaci XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Zkoumejte xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx nebo malým xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx při porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx nelze brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části bramboru x&xxxx;xxxxx stonku se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5 Interpretace výsledků xxxxx XX:

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx odhadněte xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx počet typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5&xxxx;× 103. Vzorek xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx izolace xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a je pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx R. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) by xx mělo xxxx xxxxxxxx jako s konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	extraktu xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX použijte také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x&xxxx;xxxxxx enzymových reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx lázně x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl roztoku Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud vzorek xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx fází a vytvoření xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 min xxx xxxxxxx 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx xxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní UPW x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx použití při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx supernatantu obsahujícího XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx DNA xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx týž xxxxx XXX jako xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx fragmenty elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx zjištěn, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx u žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx mít podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je získán xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx získán žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. solanacearum s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (PB) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xx používá x&xxxx;xxxxx testu, je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx dobu 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7 minut xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované suspenze xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µl) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidejte stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a v suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx etanolové xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka necháte xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4 Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xx xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Umístěte sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechte xxxxxxxxxx xxxxxx hybridizace xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx ve vodní xxxxx o teplotě 45 °C.

7.2.6 Sejměte xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C

7.2.8 Přemístěte xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechte inkubovat xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx je xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetujte 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60 mm).

7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx opakován. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy všechna xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx než x&xxxx;xxxxx IF.

7.3.5 V xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx FISH testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx negativní.

ii)

Výsledek FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, jestliže xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX je obohacení x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX může xxxxxx citlivost testu, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování suspense xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx stejné xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr protilátek xxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní a suspenzi xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A a B). Xxx srovnání výsledků xx xxxxx destičce xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx ve vodní xxxxx nebo topném xxxx může v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a nechte inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5 minut.

5)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx do každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx předtím (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy v blokačním xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do každé xxxxx. Nechte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx v pravidelných 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxxx rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 hodin při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrná xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx rostlin citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx v dodatku 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx lilek (např. xxxxxxxx Black Beauty xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx testovací rostliny.

9.2.1 Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hned nad xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx a hluboký přibližně 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez začnete x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx řez xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, abyste xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci.

9.4 Nechte xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx činnostech xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné je xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů nejsou xxxxxxxxxx žádné příznaky, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx zřeďovací xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte xxxxxxx xxxxx kultury x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x&xxxx;xxxxxx rostlin znovu xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx bakteriemi X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, jestliže testovací xxxxxxxx jsou infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx známé referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx chybí x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx inkluze	+
Test xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml v pufru XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx antiséra (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX metodu (oddíl VI.A.5).

2.4 Test XX xx pozitivní, xxxxxxxx titr XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx nepoužívejte xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx hodnota výsledku xxxxx ELISA xxxxxxx x&xxxx;xxxx kultury xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx suspense x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx postupy PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Boudazin xx&xxxx;xx. (1999); Opina xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx jako profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxx xx biovarů na xxxxxxx schopnosti využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx biovaru xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx půdy s čistou xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx destičky x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými technikami, xxxx xxx xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Van xxx Wolf xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx et al., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx při teplotě 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by typické xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx optimalizace x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx per x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum

a) živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X a přidejte xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco)	1,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem sterilizovaný xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 mg/l
Polymixin-B-sulfát (Xxxxx P1004)	600 000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25 mg)/l
Chloramfenikol (Sigma X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Sigma X-3032)	825 U (přibližně 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx)	50 mg/l

Pozn.:

1.	Použití xxxxxx xxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. solanacearum.

Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx R. solanacearum se xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx přílišnému xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx půdu SMSA, xxx vynechte Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Sacharóza	10 g
Proteázový pepton	5 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4	0,25 g
NaNO3	0,25 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx xx 50 °C.

Přidejte xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx získat z těchto xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, UK.

2.	Sbírka xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Pr 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Pr 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	CFBP 4613, R568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, SEQ225	Peru	3
NCPPB 3997	47	XXXX 4614, R280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, CMIb2861	Srí Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	CFBP 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Spolehlivost xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v případě, xx xxxxxxxxx z původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx testů

Kód NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	CFBP 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx cepacia (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4)
NCPPB 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4)
NCPPB 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Banana Xxxxx Disease Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 XXX X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas sp. (4)
NCPPB 4173	–	XX 2318	Aureobacterium xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Flavobacterium xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx standardní kontrolní xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xx sbírky xxxxxx NCPPB.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 103 až 104 x&xxxx;104 xx 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) x&xxxx;106 buňkami xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx screeningové testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48hodinovou kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx se optické xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx z pupkových xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx s bílou xxxxxxx, o které xxxx, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx uvedeným xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx pozitivní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx řádně označte.

Připravte xxxxxxx xxxx 100 µl xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, čímž xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx téhož kontrolního xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v kontrolních xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx PCR xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Co xx xxxx xxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX, organismus X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx detekován xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vzorků xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx sterilizované pufry xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pletiv homogenizací xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte v autoklávu xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx pomocné složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx konců xxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX xxxxxx chloridu xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

2.2 Pufr XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx pufru XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx s glycerolem, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100 ml

3.5 Roztok pro xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Diethanolamin	97 ml
Destilovaná voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx upravíme xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidejte 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx roztoku.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx a zkontrolujte xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X PBS	50 ml
10 % Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná voda	950 ml

4.4 Substrátový xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = c × S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx pole xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx umožnit reprodukovatelnou xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx by rovněž xxxxxx ukázat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx vybraných xxxxxxxxxxxxx kmenů (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol PCR Xxxx et al. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1	5′-XXX XXX AGC TTG XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX ACT XXX XXX TCC XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx OLI-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx při 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 sekund při 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	30 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 minut xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx s enzymem Ava XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Protokol XXX Pastrika a Maisse (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1	5′-xxx cga xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2	5′-ggg xxx xxx aca xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum DNA = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx ve stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Pastrik xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxx primer XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX TTG XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx primerNS-6-R	5′-GCA XXX XXX XXX XXX XXX TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 bp (sada xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální koncentrace
Sterilní XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 72&xxxx;°X (konečná syntéza)
	vi)	nechte xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx vytvářejí xxxxxxxx polymorfizsmus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX CAC XXX AGA GAC X-3′
Xxxxxxxx primer Rs-3-R	5′-TTC XXX XXX AGA XXX CTC-3′

Očekávaná velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	12,925 µl
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	2 µl	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru PCR (13)	2,5 µl	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento program xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) a iv).

4.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Acetát -XXXX (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Rovněž xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované reagencie xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct xxx xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i)	Zahřejte 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx vody (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpouští xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX a míchání na xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 přidáním 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; pH 7,0) a 5 kapek 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tri-HCl	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle výpočtů x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx dva různé xxxxxx dvakrát) se xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, A PROTO XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Zasejte xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx pasterizovaného pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a rajčete xx měly xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx přirozená délka xxx nebo xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24 °C noční: 14 xx 18 °C
Vhodná xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná odrůda xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 on xxx control xx Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx xx xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of xxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx the identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx that specify xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7.	Englebrecht, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, A.C., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, U. xxx De Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate metabolism xx biovars of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, S. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum in xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Infra- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Cubero, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, T.-H Li, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Agricultural Immunology 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx M.J. Xxxxxxx. 1993. Detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx blood xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, X., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx solanacearum Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Elphinstone, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx automated and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx TaqMan assay. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by fluorescent xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, kdy xxxxxxxxxxxx(x) test(y) xxxxxxxxx(x) xx uvedeném rostlinném xxxxxxxxx xxxxx vhodných xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx čeká, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny vzorkované xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx dokud xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jinou xxxxxx testování/Zadržení hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx škodlivého organismu xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do jednoho xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 2:

—	materiál xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx naočkovaného výluhem x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx xx to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu.

PŘÍLOHA IV

Prvky xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx nichž se xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx pocházejí xx stejného zdroje xxxx rostliny rajčat, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo rajčete, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx podezření na xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zamořených xxxx produkce, xxxxxx xxxxxxxx míst produkce, xxx dochází xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx používá povrchová xxxx z jakéhokoli xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx ze zdroje, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx se ukázala xxxx xxxxxxxx organismem xxxx x&xxxx;xxxxx existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx nebo xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, u které xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx xxxx xx podezření xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xxxx místa (xxxx) produkce xxxx xxxxx zaplavila xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) prohlášeno za xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx za zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx), xxxxxx takových xxxx, na kterých xx pracovní nářadí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstovaný x&xxxx;xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx xxxxxx, kdy xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx xx zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným materiálem x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladovací xxxxxxxx nebo jejich xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx mohly xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx materiálem označeným xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	veškerý xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx s předměty xxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx xxxx jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx a testování xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x), v případě brambor xx hlízy xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx rodičovským klonovým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx osiva xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) prohlášen za xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx vyšetřeny na xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx provedena xxxxxx xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) produkce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx uvedeného x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx voda, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxxx povrchovou xxxxx, u které xx xxxxxxxxx zamoření.

Prvky, jež xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx pěstuje xxxxxxx xxxxxxxxx materiál,

—	společnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx partií xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx nebo xxxx xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx xxxx zaplavení x&xxxx;xxxxx (xxxx) produkce, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii):

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xx uvedený rostlinný xxxxxxxx xxxxxxx v bezprostřední xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxx které(á) xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) být xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx mají xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou prohlášenou xx zamořenou, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx potvrzena přítomnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, sadbové, xxx.) a případně xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx jméno xxxxxx dané xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský stát, xx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx riziko zamoření xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxx členském xxxxx (x jiných členských xxxxxxx), xxxxx oznámí xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx odrůdy xxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx doručení partie xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

e)	kopii rostlinolékařského xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx šetření x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx potvrzení xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx zdroje a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx zdroji (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vymezeného xxxxxxxx, včetně počtu xxxx produkce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx s udáním xxxxxx a v případě xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx označena xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vodního xxxxxxx a rozsahu xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx zásilku xxxx partii rostlin xxxxxxx označenou xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/ES x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, odd. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/ES;

h)	jiné xxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (ohnisek), xxx xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx tepelné úpravě, xxxxx xxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, např. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxx být xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zemědělské xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s přímým a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx schválenými xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možnostmi xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx neškodně odstranit xxxxxx schválenými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx xxxxx čl. 6 odst. 2 pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v němž se xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx použity jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, již xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx a použití xxx xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx místě xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx a dezinfekci, nebo

—	budou xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx určené pro xxxxxxxxxx zpracování x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx zpracovatelského závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx některými xxxxxx xxxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení souhlasu xxxxxxxxxx úředním xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx partie včetně xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx příslušným xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx metody xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, uvedených v čl. 6 odst. 4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) a písm. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx prohlášena xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx za zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx pěstovány:

—	hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxx bramboru xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu,

—	plodiny, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx podmínky, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor je xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupem xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx sklizňovém xxxxxx uvedeném v předchozí xxxxxxx a po příslušném xxxxxxxx xxxxx, který xxxx činit xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx mají pěstovat xxxxxxx brambory, bude xxxxxxxxx xxxxxx šetření xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx roce prohlášení xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx opatření, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx i jiných xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx letech xxx ponechání xxxx xxxxx nebo pěstování xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx jeho xxxxxxx xxxx stálé xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx trav x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx žádné riziko xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, které následuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx na xxxx xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých během xxxxxxxx prohlídek xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxxxxxx xx zamořené a s podmínkou, xx příslušné orgány xx přesvědčily, že xxxxxx spojené s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx označeném xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bramborové xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě xxxxxxxxxxxx xxxx mohou být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx semen, xxxxx odpovídají požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx produkci xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx následuje xx xxxx xxxxxxxxxxxx zamoření,

—

v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx produkce, xxx xxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to buď xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny rajčete xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstované z rostlin xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx zamořené,

—	v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx certifikovaných xxxxxxxxx brambor xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx být pěstovány xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pěstované xxx xxxxxxx dohledem x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx rostlin, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx předchozích xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx období xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx bramborového xxxx xx úředně xxxxxxx sklizené xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce:

—	veškerá strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce a týkající xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxx dezinfikována xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx uvedeno v bodu 3,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx těchto xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx, prohlášené xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx), xxx je xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx bramboru, rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx ani jiné xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxx rostlin x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce dané xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, bude xxxxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx-xxxx xxxx mikrorostlin xxxxxxxxx z testovaných xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx musí xxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX xxxx, xxxxx xxxx rostliny rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolou,

—	budou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx ihned xx xxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikována xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

ihned x&xxxx;xxxxxxx xx tři xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx kterých xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx produkce xxxxxxx xxxx rajčat,

—

vyžadují, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx kontrolou x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx vypěstovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx zařazených xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou xxxxxxxxxx xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami xx xxxxx xxxxxxxxx v zóně xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx manipulací xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše uvedených xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, u všech xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxxxx xx zamořenou podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V bodu 2:

—	xxxxxxx xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx vzorků xxxxxxxxx xxxx a případných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vodních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stanovených v příloze II xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a jiné případy,

—

zavedou xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx xxxxxx používání xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx pro zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin organismu, xxx xx xx xxxxxx. Tento xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (o xxxxxxxx) xxxxxxxx, jestliže xx příslušné xxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx není xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, z úřední xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx použity xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxxxx a jeho šíření,

—	jestliže xxxx zamořeny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, zavedou xx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxxx pevného xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z průmyslového xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx zavedou xxxxxxx pro obnovu xxxxx xxxxxxx sadbových xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně schválené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) a jiný xxxxx odpad související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx uložením na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx např. xxxxxxxxxxx xx zemědělské půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx skládku xx xxxxxxxx podmínek xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx tekutý xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx objemu xx xxxx alespoň 30 minut před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx kterém xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxx ošetření xx xxxxxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx a Komisi.

Možnosti xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

“

(1) Viz Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (IF x/xxxx ELISA) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx xxxxxxx xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR xx podobnou xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx testů, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla validována xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Původně xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Research XXX 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx koncentracích.

(10) Metoda xxxx xxxxxxxxxx použitím Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx optimalizovány xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metod izolace XXX xxxx vyžadovat xxxx provedení optimalizace xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.