EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

ze xxx 14. července 2006,

xxxxxx se xxxx xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. (1), x zejména xx článek 11 xxxxxxx směrnice,

vzhledem k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých pro xxxxxxxx x xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx., xxxxxxx bakteriální hnědé xxxxxxx bramboru a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx xxxxx organismu, xxx se xxxxxxxx xxxxx výskytu x xxxxxxxx rozsah rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Xx xx xxxx došlo x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x biologii a x postupech xxxxxxxxxx x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Pokud xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, xx zapracována xxxxxxx xxxxxxxx metoda xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx zahrnuta xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace xxxxxxxxx v jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx brambor, xx xxxx x xxxx.

(7)

Pokud xxx o xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx zajištěno vysledování xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx provést x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx vymezených oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx organismu.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx 98/57/XX se nahrazují xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx a zveřejní xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Komisi xxxxx těchto xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx předpisy x xxxxx směrnicí.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. července 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 235, 21.8.1998, s. 1.

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx různé postupy, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a bakteriálního vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin rajčete x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramu
	1.	Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě
	2.	Metody xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx výronu xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX test)
			6.1	Metody purifikace XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (FISH xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx imunoanalýzy XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx a enzymatický xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (FAP)
		7.	Metoda xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. solanacearum
		Dodatek 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx IF x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Seznam xxxxxxxxxx, které se xxxxxxxx na optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur R. xxxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx karanténu rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, selektivní izolace) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx infekci R. xxxxxxxxxxxx a musí být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx každý je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx testů.

3. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX JINÝCH XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1. Příznaky (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku svisle xx xxxx se x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru je xxxxx překrojit napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx fázi xx xxxxxxx pozná podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx hnědým a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Na xxxxxx xx mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx hnilob xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo dní xxxxxxx kroucení listů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx x&xxxx;xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X nebo není xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx vodě, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x&xxxx;xx i při xxxxxxx příznaků vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé screeningové xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testů:

2.1 Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx oddíl VI.A.7), testy XXXXX (viz oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při izolaci

Odeberte xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50mM xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (např. SMSA, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx tvoří malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx krémově xxxx.

—	X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný (není xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx je xx vzorcích xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové hlízy xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx uchovávat xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx xxx pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10 °C) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx uchovány podle xxxxxxx III.

1.1.2 Uložte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx nádob na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu používány, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx je v nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky z pupkových xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X nebo 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx drcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx každý xxxxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX zabraňte xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx přístroji. X&xxxx;xxxxx XXX se doporučuje xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. solanacearum se xxxxxxxxxx testovat smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx rostlinné populace.

2.1.1 Do xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx z paty xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postranní výhonek x&xxxx;xxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx nůžkami xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx díl x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx na 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo pro xxxxxx potenciální plevelnou xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozdního jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx patří plevelné xxxxxxxx bramboru, Solanum xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx stramonium a další xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Cerastium xxxxxxxxxx, Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx možné provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na rotační xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx při teplotě xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx zpracujte xxxxxxx xxxxx v pevném maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý nebo xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Jeden xxx xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a druhý xxx xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx detekce a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x&xxxx;xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxx může xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx zmínit, xx xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx ovlivňována xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem více x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx nižší. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx po provedení xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních populací. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by mělo xxx xxxxx v úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx se toto xxxxxx používá xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, je třeba xx uvědomit jeho xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xx vyhnuli xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxx patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou přítomny.

2.1.1 Na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování a odpadní xxxx odeberte xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) a testujte xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx kapalinu xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx metoda je xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx zpracování brambor xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné xxx detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx může xxx xxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx kalu z odpadní xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, aby xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx nepravidelně rozptýlených xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se mohou xxxxxxxxxx v přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx v úvahu omezenou xxxxxxxxx tohoto testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx půdy xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7 m). Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvyšte xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx uchovejte xxxxxx xxx teplotě 12–15&xxxx;°X. Xxx xx zpracování xxxxxxx a kanalizace navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 g sterilních xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4 °C.

2.2 Testování

Postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. SOLANACEARUM

A. DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízněte xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Ponořte xxx xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx se xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xx živné půdě XXXX xxxx SPA (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx rychle xxx plamenem, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx nilskou xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete kapkou xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx objeví xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární a zda xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx krátce xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx roztokem safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx v buňkách X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo v extraktech x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx latexovými xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx řiďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5 µl xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx v pozitivních xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte xxxxx xxxxxxxxxxx selektivní xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx půdě růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx mohou mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li podezření xx konkurenci xxxx xxxxxxxx, měl xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxx desetinné ředění xx xxxxxxxx 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla být xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Po 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx stav x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx kontrolu denně xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx až krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx s vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx částečně xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané kolonie X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6–8, xxx xxxxxx) xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě –68 až –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx identifikaci xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) a test patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní média xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx i ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx být neúspěšné x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx může xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx xxxxxx připravte xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx v 1,0 ml xxxxxxxxx živné půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx teplotě 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx bujónem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx uvedených testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx postupy zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště pokud xxxx vzorky fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx s homologickým kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx možností xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx množství (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího okénka xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 1.

ii)

Pro xxxx pelety:

Připravte xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety v peletovém xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhá řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx buňky xx sklíčko buď xxxxxxxx (15 minut xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx je možné xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (PŘ) xxxxxxxxxx v pufru IF. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx.&xxxx;5.1.x) a 5.3.i)

	Ředění resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx ředění antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá po xxxx 30 minut xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx IF. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xxx zvětšení 500× xx 1 000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx buněk zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu ředění. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném ředění xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Buňky s neúplným xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. To xx může stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx zjištění xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX jako xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou by xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx laboranty x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, aby bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím testován xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx R. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx také XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx být pokud xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx použít pro tento xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx DNA z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx účely xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx v dodatku 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx lyzátového xxxxx (100 mM NaCl, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Easy DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx xxxx do xxxx Eppendorfovy mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx po dobu 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu uschnout xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx teplotě nejméně 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20 °C až xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním a použijte 5&xxxx;µx supernatantu obsahujícího XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v prostředí, xx kterém nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu DNA xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx směs PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX místo xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx použit xxx xxxxxxxxxx testování, a spusťte xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx s 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (xxxxxxx 6) při 5–8 X/xx. Použijte xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech nových xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, jestliže xxxx získán xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx negativních xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Používejte xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (PB) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx používá x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx po xxxx 7&xxxx;xxxxx na 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx a rozpusťte peletu xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx a inkubujte 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx použijete 2 různé xxxxxx na jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx být xxxxxx xxx teplotě –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, že je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx a přidejte xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Krycí sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) a fixujte xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a pokračovat x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4 Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Nechte xxxxxxxxx ve vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45 °C.

7.2.6 Sejměte xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx je xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Napipetujte 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx odchylné. Prohlížejte xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx pozitivní buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií typickou xxx R. solanacearum x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky pozorovány xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně infikované Xxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8. Testy XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx testů XX, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx nízkou citlivost. Xxx použití DAS XXXXX xx obohacení x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx může se xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Doporučuje se xxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. solanacearum.

Vzorek, xxxxx jste předtím xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx výsledků xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxxxx destičce od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test vzorku(ů).

Validované xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx extraktu. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx topném xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx do každé xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx předtím (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx teplotě 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte absorbanci xxx 405&xxxx;xx v pravidelných 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx imunoglobulinu x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190 µl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx inkubovat 16 hodin xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) s obsahem 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění protimyšího xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného alkalickou xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx x-XXX/xx alkalické xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx hodnot x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích ukazují, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx ze vzorku xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx stonky xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx méně než 23X). Rozdělte xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx a první list.

Sterilním xxxxxxxxx xxxxxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx řez xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z injekční stříkačky.

9.3 Stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx jak přemokření, xxx xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve zcela xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z různých vzorků xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx činnostech xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx škůdců, protože xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx a/nebo xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx podezřelé xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky, xxxxxxxx test XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx biotestu jsou xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrňte xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml v pufru XX (dodatek 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1 Připravte xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3 Test XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx v porovnání x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx mohou být xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24 °C xx dalšího xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (oddíl VI.A.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jestliže xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.1 Pěstujte xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx kmenu použitím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx a tří hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx při teplotě 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx během 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx fenotypů xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2A (světově rozšířen)	Biovar 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x&xxxx;XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx k diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx až 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx mělo nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx po xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Proveďte xxxxxxx xx xxxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx možno xx selektivní xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx per x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X a přidejte filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco)	1,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 mg/l
Polymixin-B-sulfát (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 U (přibližně 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Sigma)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx reagencí xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. solanacearum.

Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxx růstu Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx a skladujte xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1 měsíce.

Misky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx pepton	5 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4	0,25 g
NaNO3	0,25 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. solanacearum

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, CFBP 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, KEL60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, X568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Spolehlivost xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx z původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx (4)
NCPPB 4163	52	CFBP 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 IPO X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 IPO 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (5)
NCPPB 4174	81	XXXX 1844.06	Flavobacterium xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx možné xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 x&xxxx;104 až 106 buněk xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Protože životaschopnost xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx rasy 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM fosfátovém xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx zakalenou suspenzí xxxxxxxxx se optické xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx z pupkových xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které víte, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx kontaminovaných mikrozkumavek xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx použity jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxxxxxxx řádně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100 µl xx xxxxxxxxxx 1,5 ml xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství xxxxxxxxx X. solanacearum v kontrolních xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx PCR xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX x&xxxx;XXXX proveďte xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx se xxxx xxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX, organismus X. solanacearum xxxx xxx detekován nejméně x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx u pozitivních kontrolních xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vzorků xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Pufry xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pelety xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx se používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 minut.

2.2 Pufr XX-Xxxxx

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 xx pufru XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Laboratories) xxxx Citifluor® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro účely xxxxxxxxx testu ELISA

3.1 Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx sodného pufrovaný xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1 l destilovanou vodou.

Přidejte 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx roztoku.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný pufr (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hodnotu xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx koncentrace XX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = c × S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx by rovněž xxxxxx xxxxxx žádné xxxxxxx pozitivní výsledky xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1	5′-XXX XXX AGC XXX XXX CCT XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX GCC XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 bp

1.2 Reakční xxxx PCR

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	17,65 µl
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx2)
Xxxx dNTP (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx OLI-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Protokol XXX Pastrika a Maisse (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx xxx aca xxx xxx ttg xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální koncentrace
Sterilní XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer AmpliTaq x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx I po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx RS-1-R	5′-CCC AGT XXX GGC XXX XXX T-3′
Přímý xxxxxx XX-5-X	5′-XXX TTA XXX XXX TTG XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG XXX XXX XXX TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza kopie)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AGT XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Primer Xx-1-X (10 µM)	2 µl	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

4.4 Restrikční xxxxxxxx analýza amplikonu.

Produkty XXX vzniklé amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bsm X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °C. Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -EDTA (XXX), pH 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (disodium xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Rovněž xxxxxxxx xx trhu (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx agg xxx xxx xxx xxx ccc-3′

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, KTERÝ XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpouští xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a míchání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1N XXx. Zkontrolujte xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx na 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (SDS)	0,01 %
Formamid	30 %,
Sonda XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 nebo OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dva různé xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx roztoku. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX POUŽIJTE XXXXXXXX A UČIŇTE POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx světlocitlivými oligosondami x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx použití xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku a rajčete xx měly xxx xxxx xxxxxxxxxxx pěstovány xx skleníku s následujícími xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24 °C noční: 14 až 18 °C
Vhodná xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Krumholz and X.X. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, phylogenetic and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 on xxx control xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. Xxxxxxxx Journal xx xxx European Communities X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, G., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Barlow, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx that xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x semi-selective xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Wilt Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism xx biovars xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, S., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx F. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X detection method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, P., Cubero, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx al., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx with repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx and Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Bruijn, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., X. Tavner, X. Holloway, J.-F Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, V. Krishnapillai, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. X novel xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Mol. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx chain reaction. X. Phytopathology 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S ribosomal xxxxxxxxxx spacer region xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Pathology 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Young, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, M. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.	Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, L.I., Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx blood xxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx on 16S xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, R. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. In: Xxxxx, X., Allen, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, S.A., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Akkermans. 1998. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx případech podezření x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y) xxxxxxxxx(x) xx xxxxxxxx rostlinném xxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx popsaných v příloze II xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx metodou xx ještě xxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx zcela xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jinou xxxxxx testování/Zadržení hlíz xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx škodlivého organismu xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 2:

—	materiál uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxx nebo xxxxxxx, xxx je to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx kultury organismu.

PŘÍLOHA IV

Prvky xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé rostliny xxxxxx, xxxxx pocházejí xx stejného xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx byla zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx byla xxxxxxx xxxxxx kontrola x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které jsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zamořených xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx míst produkce, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx z jakéhokoli xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx u nichž xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, u které xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx xxxx je podezření xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx nebo xxxxx zaplavila pole xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx mají xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xxx) a čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (místa) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx takových xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přímo xxxx xxxx společného dodavatele,

—

uvedený xxxxxxxxx materiál xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx xxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) byl xxxxxxxx xx tomto xxxxx xxxxxxxx podle xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx ostatní xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které mohly xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx styku s předměty xxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx xxxx jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), v případě xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xx sesterským xxxx rodičovským xxxxxxxx xxxxxxx k uvedenému xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, resp. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx osiva jako xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx byl podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) prohlášen xx xxxxxxxx, a u nichž, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx zamoření na xxxxxxx xxxxxxx vazby xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx provedena xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonálně xxxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx k zavlažování nebo xxxxxxxx xxxx, která xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovaný xx xxxxxx zaplavených povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv)

—	blízkost x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx produkce, xxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

ii)

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), kde xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii):

—	místo (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx které(á) xx xxxxx povrchovou xxxxx xxxxx(x) být zaplaveno(a),

—	každá xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nádrž, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx objekty, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx zamořenou, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx rostoucím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx poté, xx xx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský stát, xx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx riziko xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), ihned xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx nebo xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx partie brambor xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx případně xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx oznámení x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx šetření x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx potvrzení xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx uskutečněného xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zdroji (zdrojích) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx produkce a u brambor xxxxx partií x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx označena xxxx xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a rozsahu xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx každou zásilku xxxx partii rostlin xxxxxxx označenou xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx ii) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx X, odd. X.2.2 směrnice 2000/29/ES;

h)	jiné xxxxxx xxxxxxxxx, které xx týkají xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxx xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx schválenými xxxxxxxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a se xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředků,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxx uvedenými xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx neškodně odstranit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 6 odst. 2 pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (států), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx souhlasem příslušného xxxxxxxx subjektu xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx k odstraňování xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—

xxxxx použity jako xxxxxxxx brambory xxxxxx xx xxxxxxxx, již xxxxxxxx pro přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx odpadu. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx odděleně x&xxxx;xx očistě a dezinfekci,

nebo

—	budou xxxxxxx jako konzumní xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx zpracování a pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx dodávku xx zpracovatelského závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem,

ii)

jiné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx jinými xxxxxxx xxxxxxx xxxx likvidace, xxxxx xxxxxxxxxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a s podmínkou xxxxxxx xxxxxxxx příslušným xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx metody xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx provádějí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx členské xxxxx x&xxxx;xxxx vymezené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) a písm. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx ii):

na xxxx xxxx xx jednotce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii), tak:

během xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za zamořené:

—	budou xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxx přežití xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx podmínky, že xxxx xxxx shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxx pěstitelské xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xxxxxxxx podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx příslušném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx šetření xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx z čeledi lilkovitých, a

—

v xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx pěstování xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx stálé xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo pěstování xxxxxxxxx porostů trav x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx na poli xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých během xxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roky xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx bramborové xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx ostatní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a s podmínkou, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a ostatními planě xxxxxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx nebudou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, pouze xxx xxxxxxxx plodů,

—

ve xxxxxx pěstitelském xxxx, xxxxx následuje xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx sadbové brambory xxxx xxxxxxx brambory xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to buď xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx semen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx produkci xxxxx rajčete,

—

nejméně ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo konzumních xxxxxxx,

—	x xxxxxxx rajčat xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx rajčete pěstované xxx úředním dohledem x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx buďto na xxxxxxxx sadby xxxxxxx xxxx na xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx organismu a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a u každého bramborového xxxx se úředně xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu xx) x&xxxx;xx prvním následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx metod, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu ii), xxx xx xxxxx xxxxx vyměnit xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu xxxxxx rostlin x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, pokud nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelského xxxxxxxxxxx materiálu, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx dané xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx nebyl následně xxxxxx souhlas k produkci xxxxxxx nebo xxxxxx xx příslušných orgánů,

—	pro xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxx certifikované xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx tato produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx rostliny rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx úřední kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, včetně zákazu xxxxxx programů xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené xxxx, xxxx budou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx ihned xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx tři xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx o zamoření:

ba)

jestliže xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx xxxxxxx se xxxxxxx, skladují hlízy xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx se s nimi xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx brambor xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxx zóně xxxx xxx všechny kultury xxxxxxxx xxxxxxxxx výlučně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx a aby xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou xxxxxxxxxx xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx v zóně xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pěstování xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx odpovídá xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, nebo, xxxxx jsou rozmnožovány xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx úřední xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxx uvedené xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx průzkum xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) nebo xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx zdrojů možného xxxxxx organismu xxxxx xxxxxxx V bodu 2:

—

xxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx a případných hostitelských xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx případy,

—

zavedou xxxxxx kontroly nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx přezkoumán xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného každoročního xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx orgány xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx není xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx zákaz, xxxx xxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx schválené xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí výskyt xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx šíření,

—	jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro obnovu xxxxx porostů xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu:

bramborový x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a rajčaty (xxxxxx xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx organismu do xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx zemědělské xxxx xxxx kontaktem s vodními xxxxxx, jež by xxxxx xxx používány xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx přemístěn xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx izolace, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx ztráty odpadů,

nebo

—	spálením, nebo

—	jinými xxxxxxxxxx, pokud prokazatelně xxxxxxx žádné zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx obsahující xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx odstranění xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx tekutý odpad xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60&xxxx;°X xxxxxx objemu xx xxxx alespoň 30 minut před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou půdou xxxx vodními xxxxxx, xxxxx by mohly xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx způsobu ošetření xx oznamují xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx také xx odpad spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx produkt XXX xx podobnou xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, ale xxxxxx xxxx pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxx xxxxx hlíz bramboru xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX xxxx vyžadovat xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.