EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx se xxxx xxxxxxx II xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES o xxxxxxx proti Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Yabuuchi xx al.

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx směrnici Rady 98/57/XX xx dne 20. xxxxxxxx 1998 x ochraně xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), a xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

vzhledem x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z významných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x xxxxxxx (dále xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx x při xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx rozšíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx ochraně proti xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx ochranných xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx xx jeví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x identifikace, xx xxxxxxxxxxx moderní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Rovněž xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx zjištění a xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x identifikace xxxxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, ve xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků, aby xxxx zajištěno xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx potvrzeného xxxxxxx organismu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx oblastí, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx provést v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx a v xxxxx vymezených xxxxxxx. Xxxxx xxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxx předpisy xxx xxxxx, x xxxxxxx xx význam xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru.

PŘIJALA XXXX SMĚRNICI:

Xxxxxx 1

Přílohy II xx VII xxxxxxxx 98/57/XX se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx a zveřejní xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Komisi xxxxx těchto xxxxxxxx x srovnávací xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1) Úř. věst. L 235, 21.8.1998, s. 1.

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro zjištění xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx bramboru a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum xx xxxxxxxx rostlin bramboru, xxxxxxx nebo jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a v rostlinách xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy
	3.	Postup při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy R. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě
	2.	Metody xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum v půdě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace in xxxx (FISH xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx půdy xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx testovací xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx kontaminace xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX PRINCIPY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, existuje podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramboru s podezřením x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx a dále, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx je X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující k tomu, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 až 104 buněk/ml resuspendované xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX A V ROSTLINÁCH BRAMBORU, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1 Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx infekce x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx k zotavení. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx zůstávají xxxxx zelené, ale xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx také x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx kolapsem a uhynutím xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx a mléčný xxxxxxxxxxx sliz nebo xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx svazků táhnou xxxxxx slizu.

Hlíza bramboru. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx překrojit xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje přilepení xxxxxx xxxx. Na xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx postižená místa, xxxxxxxxx vnitřním kolapsem xxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u rajčete

Rostlina xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °C) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx stonku se xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx postranních xxxxxx. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x&xxxx;X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx podmínek jsou x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (např. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, která xx xxxxxx a kořeny xx vodě, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo částí xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx stonku xxxxxxx svisle xx xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx IF (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx řadu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx na universální xxxxxx xxxx (NA, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, často x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx tetrazolového média x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Avirulentní xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx vedou x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně použít x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X po xxxx xx 2&xxxx;xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, když xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, tak aby xxxx viditelné vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém konci x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, mělo by xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx takové hlízy xx řezu hlízy xx pupkovém xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx měly uchovávat xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx při pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a potom by xxxx xxx hlízy xxxxxxxx v chladu (4–10 °C) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx III.

1.1.2 Uložte výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxx xxxx znovu používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx přidání xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (např. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx R. solanacearum, 500&xxxx;µx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Přidejte sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. To platí xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx hned nad xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny uříznutým xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonkem. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx stonku xxxx xxx úrovní xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx vodou xxxx oddenků s vodními xxxxxx.

Xxx vzorkování určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx bude nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Pelargonium xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx hastata, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Chenopodium album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Silene xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xxxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (např. Xxxxxxxxx xxxx Bioreba) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má trvat 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx díl xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhý xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) pro případné xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1. Schéma xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a rovněž xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné xxxxxx, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx xx liší x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx více x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx v odpadní xxxx ze zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx k tomu, xx se toto xxxxxx používá xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, je třeba xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx a v odpadní xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx jara, léta x&xxxx;xxxxxxx, kdy teplota xxxx překračuje 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx toku, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxx jsou xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx odeberte vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx na xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků vody xx zpracování xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje detekci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a popis testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma pro xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z odpadní xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx při sestavování xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx patogenu v polní xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

2.1 Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx mělo xxxxx standardními principy xxxxxxxxxxx pro vzorkování xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (nebo v mřížce 7&xxxx;× 7 m). Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx teplotě 12–15 °C. Xxx xx zpracování xxxxxxx a kanalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1 kg x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02 % xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování udržujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4 °C.

2.2 Testování

Postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx stonku xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, zda se xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 hodinové kultury xx živné půdě XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum a případně xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx sklíčka rychle xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx preparáty xxx nilskou modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, xxx xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zda xx morfologie buněk xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu a inkubujte 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Upozornění: xylol xx zdraví škodlivý, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky je xxxxxxx pozorovatelná pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) se řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx následujícím xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx suspense xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx se v pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx po xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx, proveďte xxxxxxxxx xxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živnou xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx od jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx velkou xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, měl by xxx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lze xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx však použitelná x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx desetinné xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vhodnou xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx extraktu xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6 dní. Typické xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx na xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx kolonie X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx očkujte metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (pH 6–8, xxx chlóru) xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo dlouhodobě xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při teplotě –68 až –86&xxxx;°X xxxx lyofilizované.

4.1.5 Proveďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou nalezeny xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

4.2 Obohacovací xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zředění xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx poznamenat, že xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx organismů, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum z obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. U obohacovacího xxxxx ELISA může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx do bujónu (xxxx. 100 µl v 1,0 ml xxxxxxxxx živné půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx teplotě 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX dobře xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx vzorků před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití testu XX jako hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se test XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx izolace, PCR xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx měl xxx xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X v glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx ve stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx referenčním xxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

5.1 Připravte xxxxxxx k testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 mm – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx obr. 1.

xx)

Xxx xxxx pelety:

Připravte xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx každé xxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxx řada xxxx být xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

5.3 Postup XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx jamka by xxxx mít 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), ostatní 1/4 titru (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx v pufru IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované pelety
(T = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

5.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný a je xxxxxxx xxxxx testování.

ii)	Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou by xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX by xxx být prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní kontroly:

—	extraktu xx vzorku, který xxx předtím xxxxxxxx xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu proveďte xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx vzorků jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla optimalizována xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X na 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx lysozymu (50&xxxx;xx lysozymu/na 1&xxxx;xx 10 mM TrisHCl, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx xxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) a promíchejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx supernatantu obsahujícího XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxx efektivní.

6.2. PCR

6.2.1 Připravte xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vzorku xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém nehrozí xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu DNA xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx směsi XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a spusťte xxxxxx optimalizovaný program XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl směsi xxxxxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 minut xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx zbývajícím vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx je xxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxx amplifikován u žádného xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (dodatek 6).

Xxxx.: Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. solanacearum v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx dvou xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx provede xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. solanacearum xxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx pufru (PB) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného referenčního xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testu, je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxxxxxx test kontrolního xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx dobu 7&xxxx;xxxxx na 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200 µl fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7 minut xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X PB (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx použijete 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidejte xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) a fixujte xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možné postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Sklíčka xx xxxx být xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx a v suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx ohřejte box x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; viz xxx.7.1) na každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sklíčka (24 × 24 mm) na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4 okénka, x&xxxx;xx xxx, aby xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx o teplotě 45 °C.

7.2.6 Sejměte xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx zakryjte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, neberte x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření na xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx ve várce xxxxxxx pozitivní buňky x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx sklíčka.

7.3.4 Specifičnost xxxxx XXXX s sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx XXXX testu xxxx platné, xxxxx xxxx xxx použití XXXX filtru jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx tyto xxxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX lze xxxxxx xxxxx jako volitelný xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost testu, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Titr je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx k optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a suspenzi xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx v solném roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx podíly vzorkových xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1 ml biovaru 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání výsledků xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleny na xxxxxxxxxxxx destičce xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx materiály, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx krycího pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx jamky třikrát xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx poslední xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5 minut.

5)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx dvojnásobné koncentrace, xxx je xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx protilátek x&xxxx;xxxxx a vymyjte je xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek a vymyjte xxxx předtím (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405 nm v pravidelných 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pufru xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) a přidejte 190&xxxx;µx xx každé jamky. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml alkalické xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrná xxxxxxx optické hustoty (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx vzorky je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné hodnoty XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx extraktu xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxxxxxx hodnot x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx listů u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx pěstování xxx v dodatku 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

Rozdělte 100 µl xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23X). Rozdělte xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx rostlinu xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx přibližně 2/3 tloušťky stonku, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

9.3 Stejnou xxxxxxxxx nainokulujte 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a peletovým pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx testovací rostliny x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, abyste xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx vadnutí z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorků xx dobu inkubace xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx proveďte xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu jsou xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx u pozitivních kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže testovací xxxxxxxx jsou infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx známé referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové inkluze	+
Test xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx aktivita	+
Oxidázový xxxx podle Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml x&xxxx;xxxxx XX (dodatek 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (oddíl VI.A.5).

2.4 Test XX je pozitivní, xxxxxxxx titr XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx kontroly.

3. Test XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů nepoužívejte xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx ELISA xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx být xxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Weller et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jestliže xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP je xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx podezřelé kultury xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je rozdělen xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx lze úspěšně xxxxxxx očkováním xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200 µl na 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx od olivově xxxxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2 Repetitivní xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx k diferenciaci kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x&xxxx;2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx R. solanacearum xxxx xxx proveden test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete nebo xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez vystavení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx xx stonku xxx 2 cm nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Proveďte xxxxxxx xx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud možno xx selektivní xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Veneto Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
Instituto Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. solanacearum

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Difco)	5,0 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4.7H2O	0,25 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Rozpusťte složky x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx médium

kasein hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx znění Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Základní živná xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilizovaný xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 mg/l
Polymixin-B-sulfát (Xxxxx P1004)	600 000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Sigma X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx reagencí xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx déle x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Bacto-Agar.

3.	Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx a spotřebujte xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx s médiem xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx po 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Validované xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Elphinstone et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx půdu XXXX, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Sacharóza	10 g
Proteázový xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx buď x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx zabránilo vzájemnému xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká laboratoř Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3.	Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. solanacearum

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Pr 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	XXXX 4585, 550, EURS21	Turecko	2
NCPPB 3857	12	CFBP 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Francie	2
NCPPB 4158	39	XXXX 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	IVIA-1632-2	Španělsko	2
NCPPB 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	CFBP 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	CFBP 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	CFBP 4613, X568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, R280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Spolehlivost xxxx uvedených kmenů xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Ralstonia xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Burkholderia xxxxxxx (4)
NCPPB 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	IPO 1695	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	CFBP 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx možné xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 až 104 a 104 xx 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx standardy x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1 ml x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx SMSA xxxxx půdě x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX fosfátovém xxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx se optické xxxxxxx 0,15 při 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které xxxx, xx je prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. solanacearum xx první xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx díly 100&xxxx;µx xx sterilních 1,5 ml xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejdříve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx testů XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx patogenity xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx IF, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx a u žádných xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx uchovány xx jeden xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx extrakce

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pletiv homogenizací xxxx třepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředek DC	Odpěňovací xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx konců xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx zahuštění xx xxxxx pelety xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, zkontrolujte pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Tween 20 do xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx tekutina/roztok xx xxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx Vectashield® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica) xxxx xxxxxxxx na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Tween 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx mléko	0,5 g
Destilovaná xxxx	xxxxxxx xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Diethanolamin	97 ml
Destilovaná xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1 l destilovanou xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx roztoku.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný xxxx (XXX) pH 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx a nastavte xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx pole xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100×, 40× atd.)

Vypočtěte počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx a reagencie XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xx 104 buněk X. solanacearum xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rovněž xxxxxx ukázat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenů (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx et al. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1	5′-XXX XXX AGC XXX XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX AGG XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 288 bp

1.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(8) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx PCR

Proveďte následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	2 xxxxxx při 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx při 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 minut xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po inkubaci xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1	5′-xxx cga acg xxx xxx ggg x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx ttc aca xxx gtc xxx xx -3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx být xxxxxx použity ve stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx kopie)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití jiných xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 bp.

3. Protokol xxx multiplexní PCR x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Pastrik xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx RS-1-F	5′-ACT XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX XXX ACG XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund při 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX AGT CAC XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs PCR

Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	12,925 µl
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Primer Rs-1-R (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µM
Taq polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro biovary 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72 °C (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných přístrojů xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř	5 g
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Acetát -XXXX (XXX), pH 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (disodium xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx trhu (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct gcc xxx xxx agg xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) na zhruba 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Zkontrolujte pH xxxxxxxxxxxxxx papírky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx na 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx xxxxxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxx různé xxxxxx dvakrát) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx světlocitlivými oligosondami x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx chraňte xxxx přímým xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx měly xxx xxxx naočkováním xxxxxxxxx xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne	14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24 °C noční: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Beauty‘
Dodavatelé:	viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, R.I., X. Krumholz xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx xxx European Communities X235, 1-39.

3.	Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific xxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Monoclonal Antibody xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Barlow, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx specify xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx response. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, J.K. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx isolation xxx quantification of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, A.C., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, S. Tanaka, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Klement X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15.	Lelliott, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 pp.

16.	Lopez, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Cubero, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx xx al., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, C.T. and Xx Bruijn, X.X., 1994. Specific genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx with repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Bruijn, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, T.-H Li, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Krishnapillai, X.X. Hong, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Timmis. 1997. X novel xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Pukall, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Production xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification of xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (synonym Xxxxxxxxxxx solanacearum) race 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, M., Hayward, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx syzygii, and xxx blood xxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx on 16S xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Bacteriology 46; 10-15.

28.

Xxx Der Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Smith, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Wullings, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) provedený(é) xx uvedeném xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle vhodných xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx čeká, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx vzorkované xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx ukončen.

Uschování xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx použít xxxxx xxxxxx testování/Zadržení hlíz xxxxxx xxxxxxxx testování xxxxx.

X případě potvrzení xxxxxxx škodlivého xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 2:

—	materiál xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxx nebo rostlin, xxx je xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx klonově xxxxxxxx rostlinám bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zdroje xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx úřední xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx v sousedství xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx produkce, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx používá povrchová xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx se potvrdilo xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx používá povrchová xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u nichž existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx nebo xxxx zaplavena povrchovou xxxxx, u které xx xxxxxxxxx zamoření organismem xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx nebo xxxxx (xxxx) produkce nebo xxxxx xxxxxxxxx pole xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx zamořený xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xx), xxxxxx takových xxxx, na xxxxxxx xx pracovní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx společně xxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx odrážky xxxx přítomný x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx xxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx produkce xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx mohly xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) bod ii),

—	veškerý xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx byl skladován x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx a testování podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), v případě brambor xx xxxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. v případě xxxxxx ty xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx vyšetřeny na xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx obměna xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx zamořených a klonálně xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) produkce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, kde xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx zamoření.

Prvky, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx určování xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

—

místa xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx nebo xxxx xxxxxx odtoku povrchové xxxx nebo zaplavení x&xxxx;xxxxx (míst) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii):

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstuje x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx toku a průtoku xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx které odkazuje xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx jméno xxxxxx xxxx partie x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský stát, xx xxxxxx se xxxxxx potvrdil, xxxxx xx riziko zamoření xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx státu (x jiných xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx členskému xxxxx (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx dané xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx nebo xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx partie brambor xxxx rajčat;

e)	kopii xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu, xxxx případně xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx oznámení x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx popis xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za účelem xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx včetně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx odběru xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti o vymezení xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti o určení xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx a rozsahu označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx předepsaná x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/ES x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, odd. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, xxxx. průsakem xx zemědělské xxxx xxxx kontaktem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx být xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zemědělské půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx do zpracovatelského závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx je zajištěno, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx z výše xxxxxxxxx možností se xxxx xxxxxxxx odstranit xxxxxx schválenými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx VII této xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (států), při xxxxxx vzájemném informování xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektu xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx brambory určené xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu. S bramborami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx očistě a dezinfekci, nebo

—	budou xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou xxxxxxx xx zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením pro xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jinými xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, pokud nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx jinými způsoby xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu, a s podmínkou xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné metody xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx v zóně vymezené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) xxxx iii), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx byla xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx):

xx xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, i jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

nebudou xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bramboru xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xx podmínky, xx xxxx bylo shledáno xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v případě xxxxxxx a rajčat xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx postupem podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx brambor a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, který xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx pole xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zjištěného xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx intenzivní xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx porostů xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pěstováním nehostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxxxxx xxxxx riziko xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce a s podmínkou, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxx dva xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx:

—	x případě xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx rostliny xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx xxxxxxx polích xxxxx xxxxxxxx prohlášeného xx xxxxxxxx a s podmínkou, xx xxxxxxxxx orgány xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a ostatními xxxxx xxxxxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě xxxxxxxxxxxx xxxx mohou být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx pěstovat xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx xxxxxxxx plodů,

—

ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx po xxxx prohlášeného xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx pouze xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové brambory xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx jiných xxxxxxx produkce, než xxxxx jsou uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to xxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—

x xxxxxxx rajčete xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny rajčete xxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx semen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolou xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než která xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx zamořené,

—	v xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pod úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx produkci xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx rajčat xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ze xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx sadby xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx podle předchozích xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx odstranění xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx bramborového xxxx xx úředně xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II;

ihned po xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce:

—	veškerá xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx produkce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx budou vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx zavedeny xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu xx), xxx je xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nebo osivo xxxxxxxx xxx jiné xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx vyloučení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelského xxxxxxxxxxx materiálu, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxx certifikované xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx-xxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx rajčat xxxx xxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vypěstovaných xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx zóně, xxxx budou dotčena xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx zajistit, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení v takových xxxxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx do produkce xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx a nejméně xx tři pěstitelské xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx prohlášení x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat,

—

vyžadují, xxx x&xxxx;xxxx xxxx byla xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx vypěstovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx&xxxx;xxx), xxxx po sklizni xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami xx xxxxx podnicích v zóně xxxx xxxxxx a případně xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše uvedených xxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) bodu xx) xxxx je xxxxxxxxxx za xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx V bodu 2:

—

provádí xx vhodných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vodních zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx podle příslušných xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx x&xxxx;xxxx případy,

—

zavedou xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx být přezkoumán xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx každoročního xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) odvoláno, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx povrchová xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, z úřední xxxx, pro xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx technologie, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny výpusti xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx úřední kontroly xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx sadbových xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odpad (včetně xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) a jiný xxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiných xxxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx uložením na xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, odkud nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, jež xx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx zavlažování zemědělské xxxx. Odpad musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx; xxxx opatření musí xxx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům,

ii)

tekutý xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx xxxxxx odpad xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx dobu alespoň 30 xxxxx před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx jiným úředně xxxxxxxxx a kontrolovaným xxxxxxxx, xxx kterém xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx xxxx xxxxxxx zdroji, xxxxx by xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx také xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním a zpracováním xxxxxxxxxx partií.

“

(1) Viz Lelliott x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3) Použijte xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (IF x/xxxx ELISA) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx produkt PCR xx podobnou xxxxxxxx, xxxx je očekávaná xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx dodatek 6).

(6) Pravděpodobnost xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Elmer (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Research XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx a pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx optimalizovány xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.