Plné znění - 32006L0063

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/ES

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx se xxxx přílohy II xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx al.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.  (1), a xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx a rajčata xx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Organismus xx xxxxx vyskytuje v xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 98/57/XX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx mají xxx přijata x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se jeho xxxxxxx x xxxxxxxxx x při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx v poznatcích x biologii a x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x identifikace xxxxxxxxx x kromě xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx získané xxx ochraně proti xxxxxxxxx vyžadují přezkoumání xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxx xx ochranných xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx přezkoumat x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx o xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Rovněž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (PCR) x xxxxxxxx xxxxxxx technických xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx zjištění x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx, xx xxxx a xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, prvky potřebné xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx oblastí, xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx předpisy xxx xxxxx, s ohledem xx xxxxxx této xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1.   Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx těchto xxxxxxxx x srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx předpisy x touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2.   Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

---

(1)  Úř. věst. L 235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

---

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (SMITH) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii)	zjištění Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX

	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramu
	1.	Detekční xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin bramboru, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nevykazujících příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx výronu xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (IF xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx purifikace XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx imunoanalýzy XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx kontaminace xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Validovaná xxxxxxx xxx xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx podmínky xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx testovaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními orgány xxx karanténu rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna opatření xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (test XX, XXX/XXXX, selektivní izolace) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje podezření xx infekci X. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx bramboru s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx živné xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.   Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx k tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační testy xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx kontroly v každé xxxxx testů.

3.   Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX ROSTLINÁCH S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1.   Příznaky (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1   Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx v polních xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. V raných xxxxxx xxxxxxx zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx také k ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku nebo xxxx rostliny xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Při ponoření xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Později se xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vně xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a z oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx přilepení xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx postižená místa, xxxxxxxxx vnitřním kolapsem xxxxxxx pletiva. V pokročilejších xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx sekundární rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2   Příznaky x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedné straně xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, které končí xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx méně xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx nevadne, ale xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx spodu stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném řezu xxxxxxx vylučují hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3   Příznaky u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká koncentrace xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky a kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx vnitřní xxxxxx xxxxx zbarvení vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx příznaků vadnutí.

2.   Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dostačující. Xxxxxxxx xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX v buňkách R. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nilskou xxxxx X&xxxx;xxxx súdánskou xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3   Sérologické xxxxxxxxxxx testy

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

x)

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50mM xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX nebo XXX; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (např. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. — Xx universální xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s charakteristickými xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. — X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x&xxxx;xxxxx SMSA jsou xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou popsány x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vedou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k dispozici xxxxx xxxxxxxx hlíz

—	Validace xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2&xxxx;xxxxx před xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x)

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx aby xxxx viditelné xxxxxx xxxxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx výkrojky vodivých xxxxxx na pupkovém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx stranou xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx je odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx provedeno xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx měly xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a potom xx xxxx být hlízy xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx III.

1.1.2   Uložte výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části do xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx to možné, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx přidání pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Učiňte xxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx xxxxx XXX zabraňte xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. U testu XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), filtr xxxxxx xxxxxxxxx (~10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 g po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. solanacearum, 500&xxxx;µx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) k 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx boxu x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx odděleně, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To platí xxx xxxxxxx IF x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

2.1.1   Do xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 cm xxxxxx kousky xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxx nad spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Odeberte xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx x&xxxx;xxxxxxx výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x&xxxx;xxxxx nejméně 10 rostlin xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx bude nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Silene xxxx, X. nutans., Tussilago xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70&xxxx;% etanolem x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxx zpracujte drcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex). Není-li xx možné, uložte xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový extrakt xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1.   Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx detekce a identifikace X. solanacearum ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x&xxxx;xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích povrchové xxxx a rovněž xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po provedení xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx ke snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx bráno x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx toto xxxxxx používá xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, je třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx účinky xxxxxxx dešťů x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx toku, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx výskyt patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky vody x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx xxxxxx podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7 000 g po xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, slijte kapalinu xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx membránu (minimální xxxxxxxx pórů 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím xxxxxx x&xxxx;5–10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx odpadní xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2   Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1.   Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx popsané v tomto xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx detekci patogenu xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx zpracování xxxxxxx xxxx kalu x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx v úvahu omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx sledování, zda xxxx infikována, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx jeden xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počet xxxxxxxx míst xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2   Rozptylte xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02 % sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx xxxxxxx v příslušném dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1.   Test na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. solanacearum xx stoncích vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Ponořte xxx stonku do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx živné xxxx XXXX nebo XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx plamenem, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx preparáty xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a nechte inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx vodu xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600× xx 1&xxxx;000× s použitím xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, zda xx objeví xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx sklíčka 0,3&xxxx;% xxxxxxxx súdánské xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx a krátce opláchněte xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx xxxxxx a vysajte xxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 % (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx imersí x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami buněk.

3.   Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) se řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx řiďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a heterologního kmenu.

c)	Pozorujte, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1   Očkování na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxx metodu xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, např. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx růst xxxxxxxx velkou xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx metodou bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx se vyhnuli xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla být xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx testování xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vhodnou xxxxxxxx xxxxxx s cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µl extraktu xxxxxx xx 1 misku xxx každé ředění.

4.1.2   Nechte xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách zkontrolujte xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx půdě XXXX jsou mléčně xxxx, ploché, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx částečně xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx kolonie X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx očkujte metodou xxxxxxxxx na universální xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4   Uchovávejte xxxxxxx krátkodobě ve xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, xxx xxxxxx) xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X xxxx lyofilizované.

4.1.5   Proveďte identifikaci xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx oddíl VI.C).

Interpretace výsledků xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx negativní, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné bakterie xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx R. solanacearum xxxx xxx neúspěšné x&xxxx;xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx organismu X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku do 10&xxxx;xx obohaceného xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx předem xxxxxxxxx xx sterilních zkumavek xxxx baněk. U obohacovacího xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx větší xxxxx extraktu xx xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100 µl x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx teplotě 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX dobře xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx hlavní x&xxxx;xxxxxxxx IF testu xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Použijte validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Titr xx definován xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako titr.

Test xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech ze xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, může xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx při 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx referenčním xxxxxx R. solanacearum xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka s více xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx pelety: Připravte xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – u většího okénka xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx buňky xx sklíčko buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, fixovaná xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v suchém xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v pufru XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) a 5.3.i)

	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

5.3.1   Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2   Podložní sklíčka xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx okének xxxx být xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako předtím (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4.   Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx olejovou xxxx vodní xxxxxx xxx zvětšení 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

5.4.4   Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5). Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a je pozitivní, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. solanacearum xx 1 ml přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx, xxxxxx zabránili kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolami (x průběhu extrakce XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

—	alikvotní xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx být xxxxx xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro tento xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu proveďte xxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx účely xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1&xxxx;xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchejte xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx fází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi do xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx efektivní.

6.2.   PCR

6.2.1   Připravte xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2   Připravte xxxxxxxxxx reakční směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3   Přidejte xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx směsi XXX místo xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a spusťte xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Naneste xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx s 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (xxxxxxx 6) při 5–8 X/xx. Xxxxxxxx vhodný XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2   Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx např. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx vícenásobné PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx velikosti a (případně) xxxxx je xxxxxxx, xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxxxxx u žádného xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Pozn.: Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx xx dvou amplikonů.

V xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl být xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován na X. solanacearum s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1.   Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M PB (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5   Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	okénko 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx etanolové xxxx 50&xxxx;%, 80 % a 96 %, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného boxu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx box x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °C po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Umístěte xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx zahřáté vlhké xxxxxx a nechte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární kvalitou (Xxxxx Q), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx xx vodní xxxxx o teplotě 45 °C.

7.2.6   Sejměte xxxxx xxxxxxx a umístěte xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x hybmixem xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

7.2.9   Ponořte xxxxxxx xxxxxx do XXX (např. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60 mm).

7.3.   Hodnocení XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx reakci se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

x)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou pozorovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně než 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx použít xxxxx xxxx volitelný xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx titru xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxx u titru komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2 A a B). Xxx xxxxxxxx výsledků xx každé destičce xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, aby byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxx test, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx vodní xxxxx xxxx topném xxxx může x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X nebo přes xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx jamky třikrát xxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztok x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx protilátek proti X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx je xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy v blokačním xxxxx. Přidejte 100 µl xx každé jamky x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx xxxx 4 ° C xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190 µl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxxx inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx do každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v substrátovém xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx než dvojnásobek XX u negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx negativních kontrolních xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx hodnot x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx do xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorku x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx kultivary x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.1   Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx a první xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx příčný xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci.

9.4   Nechte xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Musejí-li být xxxxxxxx z různých xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx činnostech věnujte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník nebo xxxxxxxxx prostor bez xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx mezi vzorky.

Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6   Jestliže xxxxx 3&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxxx test IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx kultury x&xxxx;xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx jsou infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. solanacearum, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx inkluze	+
Test xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx při 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných zředění xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3   Použijte XX metodu (oddíl VI.A.5).

2.4   Test XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X PBS (dodatek 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3   Test XXXXX je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx kultury xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly.

4.   Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx na 1&xxxx;xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2   Ohřívejte 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx vařící xxxxx xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx et al. (1997), Weller et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx stejnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.   Analýza xxxxxxxx kyselin (FAP)

6.1   Pěstujte xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX a absence 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx rozdělen xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µl xx 1&xxxx;xxxxx), zbarvení se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2   Genomická variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými technikami, xxxx xxx patří:

7.2.1   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2   Repetitivní xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplifikovaných xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx definováno analýzou XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16S xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur k testování x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

3)

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. U čistých xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx po xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5)

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Proveďte izolaci xx xxxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kolonií pro X. solanacearum.

“

---

(1)  Viz Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) s polyklonálním xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx znám xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx účely xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx koncentracích.

(10)  Metoda byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metod xxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

---