EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/ES

ze xxx 14. července 2006,

kterou xx xxxx přílohy XX xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al.

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. (1), x zejména xx článek 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x významných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx jeho xxxxxxx x rozšíření x při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se ochranná xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x biologii a x xxxxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx toho xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx přezkoumání xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx ochranných xxxxxxxx.

(5)	X důsledku tohoto xxxxxx xx jeví xxxx xxxxxxxx přezkoumat x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx metoda xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR) i xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxx zjištění a xxxxxxxxxxxx x metody xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx brambor, xx xxxx a půdě.

(7)

Xxxxx xxx o xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, prvky potřebné xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx provést x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx některé předpisy xxx xxxxx, x xxxxxxx xx význam této xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx směrnicí jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského xxxxxx.

PŘIJALA XXXX SMĚRNICI:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Členské xxxxx xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro dosažení xxxxxxx s touto xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Komisi xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx tabulku xxxx těmito předpisy x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí být xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 14. xxxxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx KYPRIANOU

člen Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené schéma xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody pro xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx výronu xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (IF test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX test)
			6.1	Metody xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx hybridizace in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx podílející se xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a pěstování X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx potvrzeno (podezření x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES vyžaduje xxxxxxx a identifikaci čisté xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramboru s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx selektivní živné xxxx a v případě pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma pro xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za podezřelý.

Screeningové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx bramboru nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX ROSTLINÁCH X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1. Příznaky (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1 Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách během xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé nekrózy. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx se x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx konce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx konec. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx od pupkového xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje přilepení xxxxxx půdy. Na xxxxxx xx mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx postižená místa, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx infekce je xxxxxxx sekundární xxxxxx xxxxxxx hnilob xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx straně xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx spodu stonku, xxxxx jsou dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném řezu xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx podmínek jsou x&xxxx;xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx rostoucí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx vnitřní xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx slizu, jestliže xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

(Xxx oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX v buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), testy XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx řadu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx suspenze x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx inkubovat 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx krémově bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou popsány x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou vzorku:

a)	Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X po xxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech populací X. solanacearum.

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má xxx proveden PCR xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Nechte hlízy xxxxxxxx na vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden xxxx XXX xxxx xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx všechny (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové hlízy xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx III.

1.1.2 Uložte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx zpracovat výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx přidání pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °C nebo 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx gumového tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (např. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Učiňte xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx použili čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX na nádobách xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. U testu XXX se doporučuje xxxxxx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx pomalým odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx supernatant, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxxxxx vířením a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Postup lze xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

2.1.1 Do xxxxxxxx sterilní nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx kousky xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx z paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postranní výhonek x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx nad spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami odeberte 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě xxxxxxxx 1–2 cm díly xx&xxxx;xxxxxx pod vodou xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozdního jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Solanum xxxxxxxxx, S. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Pelargonium xxx. a Portulaca oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx dioica.

Pozn: X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx stonku s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte části xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Bioreba) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního pufru (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xxx provést xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhý díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x&xxxx;xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx použito k testování xxxxxx xxxxxxx vody xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx testu selektivní xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Zatímco níže xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně nižší. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx čistícího postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx bráno v úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Vzhledem k tomu, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a v odpadní xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx dešťů a geografii xxxxxxx toku, xxxxxx xx vyhnuli xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx vzorkovacích místech xxxxxxxx xxxxxx vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx odeberte xxxxxx x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, že přítoky xxxx rovněž xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím xxxxxx x&xxxx;5–10 ml peletového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx inhibuje detekci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu xx vzorcích xxxx, xxx může xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z odpadní xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx při sestavování xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx nebo xxxx je třeba xxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx unikne nízký xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

2.1 Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7 m). Je-li xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvyšte xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a kanalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x&xxxx;xxxx reprezentujících celkový xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx kalu xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10–20 g sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. SOLANACEARUM

A. DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test xx xxxxx slizu ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Ponořte xxx xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx vlákna bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx SPA (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx je uschnout x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx plamenem, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx preparáty xxx nilskou xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx vodu xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450&xxxx;xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx súdánské černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx xxxxxx a vysajte savým xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx zdraví škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým papírem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX granulí v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx obarvenými xxxxxxxxxx, xxxx. červenými buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (přibližně 5 µl xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a heterologního kmenu.

c)	Pozorujte, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx po dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx půdu

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx tuto metodu xxxxxx, xxxxxxxx předběžný xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. SMSA (xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx morfologii, jestliže Xxxxxxx misky jsou xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lze xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vysoká. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xx suspenze 106 xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k testování.

U každé xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem jako xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vhodnou xxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 misku xxx každé ředění.

4.1.2 Nechte xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 dní. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx až krvavě xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx se xx xxxxx médiu tvoří xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum rozetřete xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu, abyste xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (pH 6–8, xxx xxxxxx) xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx negativní, xxxxxxxx xx 6 dnech nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx předpokladu, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx bakteriemi x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx podezřelé kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx xxxxxx a zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx obohaceného xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx předem připravte xx sterilních xxxxxxxx xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx v 1,0 ml xxxxxxxxx živné xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX dobře xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test a je xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx xxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použitím vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky v pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx vzorky fixovány xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx obr. 1.

xx)

Xxx xxxx pelety:

Připravte desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx vhodné pro xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být použita xxxx rezervní xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 minut xxx teplotě 60 °C), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v suchém xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx mít 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx ředěním protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx pufru s glycerolem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, musí být xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5 Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx odhadněte xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další testování.

ii)	Výsledek XX testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx a vzorek se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx vzorků extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx zabránili xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	extraktu xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx použít xxx&xxxx;xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace DNA

Používejte xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Tris-HCl (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1&xxxx;xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx teplotě nejméně 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20 °C až xx použití xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním a použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, xx se xxxxx použít, pokud xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx vzorku.

6.2.5 Umístěte XXX mikrozkumavky xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s tímto mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX je negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u všech pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx primerů XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx získán xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx použije XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx být xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými extrakty, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86 °C.

Jako negativní xxxxxxxx používejte alikvotní xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. solanacearum xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického kmenu xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xx používá x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx v dodatku 3 bodu X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a rozpusťte xxxxxx xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7 minut xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx fixované suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Prázdný	Prázdný	Prázdný	Vzorek 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) a fixujte nad xxxxxxxx.

X této fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a v suchu xxx xxxxxxxx teplotě.

7.2. Hybridizace

7.2.1 Dehydratujte xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo filtračním xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx box x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45 °C po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxx 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; viz xxx.7.1) na xxxxxx xxxxxxx, přičemž dvě xxxxxxxx xxxxxx necháte xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx hybridizace xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x hybmixem xxx teplotě 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Milli X&xxxx;xxxxx) a položte xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx krycího xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, CA, XXX xxxx podobný) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630× xxxx 1 000× pod olejovou xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx R. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo málo xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, neberte x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx ve várce xxxxxxx pozitivní buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x&xxxx;xxxxx xxxx několik xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, xx x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xx xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

Xxxxxxxx FISH testu xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek FISH xxxxx xx negativní, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto typické xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx xxxx použitím xxxxx ELISA xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx konkurenci jiných xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, při kterém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle doporučení xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx nebo xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx v solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

Standardizované pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx používají pro xxxxx test, jsou xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X na 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat vznik xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek. Xxxxxxx jamky xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx proti X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx předtím (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 µl xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx teplotě 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechte inkubovat x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx nebo 4 ° C xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx jamky. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrná xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx vzorky xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx než dvojnásobek XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx jsou menší xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx test xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 až 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním výsledkem (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary s rovnocennou xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx a vyvíjejí xx xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx list.

Sterilním xxxxxxxxx udělejte xxxxxx xxx xxx 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx suspenzí 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxxxx a peletovým xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační komory xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx z různých xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko sebe, xxxxxxx je vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx skleník nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx proveďte izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx podezřelé xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky, xxxxxxxx test XX/XXX/xxxxxxx xx složeném xxxxxx xx segmentů stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, proveďte xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte všechny xxxxx kultury x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx nevykazují žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx bakteriemi X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1. Výživové x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx antiséra (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx ELISA

Pozn.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (dodatek 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. solanacearum.

3.3 Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx hodnota výsledku xxxxx ELISA xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx v porovnání x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Seal xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx et al. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Opina et al. (1997), Weller xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx stejnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx hexosových xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X. Xx-xx živná xxxx rozdělena xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx od olivově xxxxxx xx žlutou x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx rozšířen)	Biovar 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx něž patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s využitím primerů XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16S xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx a k potvrzení xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx musí xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx při teplotě 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx jako patogenní xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx izolaci xx xxxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx kolonií xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University of Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. solanacearum

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Difco)	5,0 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4.7H2O	0,25 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem sterilizovaný xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx reagencí xxxx xxxxxxxxx může ovlivnit xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx však xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1 měsíce.

Misky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx po 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X objeví xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx půdy

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx přípravu jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx zabránilo vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx dostupné x&xxxx;xxx xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, UK.

2.	Sbírka kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. solanacearum

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx původu	Biovar
NCPPB 4153	6	CFBP 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Pr 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	CFBP 4601, 502, EURS55	Belgie	2
NCPPB 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	XXXX 4608, Port 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, R568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxxxxx z původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2 Referenční xxxxx XXX sérologicky nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx testů

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	CFBP 1954	Bacillus xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. (4)
NCPPB 1127	53	CFBP 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Burkholderia xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	CFBP 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Xxxxxx Xxxxx Disease Bacterium &xxxx;(4) &xxxx;(5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 XXX S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	CFBP 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	CFBP 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx ze sbírky xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 a 104 xx 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 106 xxxxxxx xx 1 ml x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx půdě a suspendujte x&xxxx;10 mM fosfátovém xxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxx hustotu přibližně 2&xxxx;× 108 xxx xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx xx dosáhne xxxxx zakalenou suspenzí xxxxxxxxx xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx z pupkových xxxxx 200 hlíz x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx s bílou xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx pozitivní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx označte.

Připravte xxxxxxx xxxx 100 µl xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx v kontrolních xxxxxxxx by měly xxx nejdříve potvrzeny xxxxxx IF.

Pro účely xxxxx XXX proveďte xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx patogenity xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx u každé série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX a PCR, organismus X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx a u žádných vzorků xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx rok.

1. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx třepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx pomocné složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx konců xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx zahuštění do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx pufru XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	doplnit xx 100 ml

3.5 Roztok pro xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5&xxxx;xx xxxxxxxx fosfatázového xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely testu XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X PBS	50 ml
10 % Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Diethanolamin	100 ml
Destilovaná xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hodnotu xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx ukázat žádné xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenů (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx et al. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX ACT XXX XXX XXX XXX AGG XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum = 288 bp

1.2 Reakční xxxx PCR

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5U/µl) (8)	0,1 µl	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Ava XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1	5′-xxx cga xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx optimalizovaná xxx termocykler XX Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund xxx 68 °C (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) a iv).

2.4 Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx fragmentů s enzymem Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifické xxx X. solanacearum xxxx velikost 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG ACC XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr PCR (10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µM
Primer XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující cyklický xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů s templátovou XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfizsmus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX specifický pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AGT CAC XXX AGA GAC X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX GCA XXX XXX CTC-3′

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (12)	0,2 µl	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µM)	1 µl	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx reakce xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxx primerů Rs-1-F x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx FISH

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx xxx xxx cgt xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i)	Zahřejte 9&xxxx;xx ultračisté vody (XXX) na zhruba 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpouští xx xxxxxxx 5 kapek 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxx míchačce.

ii)	Upravte xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (PB; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1N XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X do dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací a autoklávováním)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství hybridizačního xxxxxxx podle výpočtů x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx sklíček:	1	4	6	8	10
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda EUB 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx množství (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX a autoklávujte xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Zasejte xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přesaďte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx listy (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx měly být xxxx xxxxxxxxxxx pěstovány xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing of xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx et al. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Elphinstone, X.X., Hennessy, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx of xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx potato tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. In: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for International Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate metabolism xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx and xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Janse, J.D. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Microbiology 14; 335-345.

13.	Kelman, A. 1954. Xxx relationship xx xxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx on x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Rudolph, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15.	Lelliott, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx xx al., (xxx). Klewer Academic Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx and strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Bruijn, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Holloway, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx analysis xxx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx internal xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx M.J. Daniels. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Xxxxxxxxxx, M. and Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 in Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx of strains xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Wullings, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which causes xxxxx rot xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx organismu, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) provedený(é) xx uvedeném xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) uvedenou xxxxxxx xx ještě xxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx hlízy, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx dokud xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx použít jinou xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx je xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, xxxxx pocházejí xx stejného zdroje xxxx rostliny xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx organismu,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx produkce, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx ukázala xxxx zamořená xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx nebo xxxx zaplavena povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem xxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx zamoření organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx bylo podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, na xxxxxxx xx pracovní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

uvedený xxxxxxxxx materiál xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii) xxx xxxxxxxx xx tomto xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, ve xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, dopravní prostředky, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jejich xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxx mohly xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx přišel xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx brambor xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx rodičovským klonovým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx rostlinnému xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a u nichž, xxxxxxx xxxx vyšetřeny xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx zamoření xx xxxxxxx xxxxxxx vazby xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx k zavlažování xxxx xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx xxx zohledněny xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), zahrnují:

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv)

—	blízkost x&xxxx;xxxxx xxxxxx produkce, na xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxx, xxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx nebo xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

ii)

v případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v bezprostřední xxxxxxxxx povrchové xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx které(á) by xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou prohlášenou xx zamořenou, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx xxxx a průtoku xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx které odkazuje xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx poté, xx xx potvrzena přítomnost xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x brambor:

a)	jméno xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx podezřelého xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský xxxx, xx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x jiných xxxxxxxxx xxxxxxx), ihned oznámí xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 odst. 3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx, xxxx případně xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx toto:

po xxxxxxxxx všech šetření x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx případu:

a)	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx zdroje x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx včetně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně počtu xxxx xxxxxxxx a u brambor xxxxx partií s udáním xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, včetně xxxxx xxxx produkce, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx zdroje, včetně xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx označenou xxxx xxxxxxxxx, osvědčení xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/ES a číslo xxxxxxxx k přepravě, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx X, odd. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, které xx týkají xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx případně požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx jako xxxxxx xxx zvířata xx tepelné xxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx schválené skládce xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx do zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx podle čl. 6 odst. 2 pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx členského xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členského xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, xxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením xxx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx stejném xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	budou xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx určené xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou dodávku xx xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx a systémem xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx partie xxxxxx xxxxxx a listové xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx způsoby xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx šíření xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx přijmou členské xxxxx x&xxxx;xxxx vymezené xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv) a písm. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx místa xxxxxxxx prohlášena za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx):

xx poli xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx prohlášení xxxxx xxxxxxxx za zamořené:

—	budou xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a rajčat, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

nebudou xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, rostliny xxxxxxxx xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Brassica, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu,

—	plodiny, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx xxxx shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxx pěstitelské xxxx xxxx pěstováním

—	v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx pouze produkce xxxxxxxxxx brambor,

—	v xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx sklizňovém xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx příslušném xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx opatření, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

v xxxxxxx třech xxxxxx xxx ponechání pole xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, anebo jeho xxxxxxx xxxx stálé xxxxxxxx s častým nízkým xxxxxxx nebo intenzivní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx trav x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nehostitelských xxxxxxx v dalších xxxx xxxxxx, které prokazatelně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxx následuje xx období xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx na xxxx xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx prohlídek provedených xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx bramborové xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx rajčete, xxxxx xxxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx xxxxxxx polích xxxxx xxxxxxxx prohlášeného xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vyloučeno:

—

v pěstitelském roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bramborové xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxxx xxx produkci plodů,

—

ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx sadbové brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to xxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx pěstovány xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxx xxxxx jsou rozmnožovány xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx buď xx produkci sadbových xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny rajčete xxxxxxxxxxx ze xxxxx, xxxxx odpovídají požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx na xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx odstranění xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx organismu x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxxxx sklizené xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu ii) x&xxxx;xx xxxxxx následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a skladovací zařízení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx budou vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx zavedeny xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx šíření organismu;

na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx xx xxxxx xxxxx vyměnit pěstební xxxxxxxx:

—

xxxxxxx pěstovány xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxx xxx xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx plodin zavedena xxxxxx kontrolovaná opatření xxx vyloučení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx média a očisty x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx nebyl následně xxxxxx souhlas k produkci xxxxxxx xxxx xxxxxx xx příslušných xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx brambor, xxxx xxxxxxx úředně certifikované xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené zóně, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat, xxxxxx vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

ihned x&xxxx;xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zóna xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo rajčata xxxx xx s nimi xxxxxxxxxx, spolu xx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat,

—

vyžadují, xxx x&xxxx;xxxx xxxx byla xxx všechny kultury xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx manipulaci xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx a případně xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pouze z osiva, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo, xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxx xx xxxxxx možného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášené za xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxx postřik xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx to xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx každoročního xxxxxxxx a prohlášení (o xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx příslušné xxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx kterou xx xxxxxxxx zákaz, xxxx xxx povoleno, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxxxx a jeho xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx odpadu, zavedou xx úřední kontroly xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx výpustí xxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně schválené xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu:

bramborový x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor a bramborových xxxxxx a rajčat) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (včetně xxxx, kamenů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, jež xx xxxxx být xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx přímo xx skládku xx xxxxxxxx xxxxxxxx izolace, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud prokazatelně xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx oznámena Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům,

ii)

tekutý xxxxx: xxxx likvidací xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx suspendované xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné částice xxxx xxx odstraněny xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx, xx by xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vodními xxxxxx, xxxxx xx mohly xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx oznamují xxxxxxxx xxxxxxxx státům x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této příloze xx použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním a zpracováním xxxxxxxxxx partií.

“

(1) Viz Lelliott x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3) Použijte xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx produkt PCR xx xxxxxxxx velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx při použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (viz dodatek 6).

(6) Pravděpodobnost xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Xxxxx XxxxxXxx a pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco BRL.

(11) Koncentrace xxxxxxx XX-5-X a NS-6-R xxxx optimalizovány xxx xxxxxxxx xxxxxxx pupkových xxxxx xxxx bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metod xxxxxxx XXX xxxx vyžadovat xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.