EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. července 2006,

xxxxxx se xxxx přílohy II xx VII xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES x xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

s ohledem xx xxxxxxxx Rady 98/57/XX xx dne 20. xxxxxxxx 1998 x ochraně xxxxx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. (1), x zejména xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx a rajčata xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx bramboru a xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x rajčete (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se ochranná xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti získané xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se ochranných xxxxxxxx.

(5)	X důsledku tohoto xxxxxx se xxxx xxxx nezbytné přezkoumat x aktualizovat opatření xxxxxxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Pokud xxx o xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Xxxxxx xxxx zahrnuta xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx a půdě.

(7)

Xxxxx xxx x technické xxxxx ochranných xxxxxxxx, xxxx pro ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx zajištěno xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého potvrzeného xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx provést x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jako hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského výboru.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX směrnice 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Členské státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. července 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1) Úř. věst. L 235, 21.8.1998, s. 1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii)	zjištění Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramu
	1.	Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx hostitelských rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx vodě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (FISH test)
		8.	Testy xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx podílející se xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx testech IF x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované protokoly x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadu a za xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajišťovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna opatření xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, selektivní izolace) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma pro xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že čistá xxxxxxx je X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx příznaky nebo xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Xxxx xxxx xxxxxxx v polních xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, ale xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý a mléčný xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx se x&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza bramboru. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx konec. X&xxxx;xxxx fázi xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Později se xxxxx zbarvení stává xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx může xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se infekce xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a z oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje přilepení xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx pletiva. V pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx kolem 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx málo dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx méně xxx 21&xxxx;°X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů. Xx možné pozorovat xxxxx nasáklé pruhy xx spodu stonku, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (např. u rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x&xxxx;xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxx platných testů:

2.1 Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jsou zviditelněny xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx vrstvu xxxxxxxxxx pletiva x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a nechte 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte řadu xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx případně xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vytvářejí virulentní xxxxxxx R. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s charakteristickými xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx bílé.

—	U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxx SMSA jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství hlíz xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech populací X. solanacearum.

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (s obsahem xxxxxx, xxxxxxxx má xxx proveden PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Nechte xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx (xxxx xxxx vyžadován) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, když xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx být xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx konci každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy s podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx při vyříznutí xxxxxxxx zjištěny příznaky xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, mělo xx xxx provedeno xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx Xxxxxxx naříznuté hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xx dobu nejméně 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx být xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10 °C) xx xxxxxxx karanténních xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx prostředky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxxx xxx přidání pufru; x&xxxx;xxxxxx nejdéle 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky z pupkových xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C nebo 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx nebo Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, sterilovaný zářením) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx rozlití během xxxxxxxxxxx procesu. Zajistěte, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx použili čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) k 500 µl xxxxxxxxxx poměrné části x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, xxxxxxxxx přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx boxu x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Postup lze xxxxxx použít xx xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx skleníku: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx nad spojením x&xxxx;xxxxxxx stonkem. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx díl x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin rostoucích xx vodě xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vodních xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických podmínek, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X této xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx stranou jakýkoli xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx má trvat 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstřeďováním popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a druhý xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo –68 xx –86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx a rovněž může xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx v odpadní xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat odpadní xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti testovacího xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx se xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxx výše uvedených xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx toku, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx výskyt xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxxxx vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx pod xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx zpracování a odpadní xxxx odeberte vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx místo, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx intenzivním mapování xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx toku x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) a testujte xx 24 hodin.

2.1.3 Je-li xxxxxxx, může xxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 minut (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx kapalinu xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x&xxxx;5–10 xx peletového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx xxxxxx je xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x&xxxx;xxxxxx odpadní xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu z odpadní xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia solanacearum, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v přirozeně infikovaných xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x&xxxx;xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx polní xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (nebo v mřížce 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx reprezentujících celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2 Rozptylte xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx nebo xxxx xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 g sterilních xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx do xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx nebo xx 48 hodinové xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX nebo SPA (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx povrch xxxxxxx sklíčka xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx nilskou xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx roztokem nilské xxxxx a nechte inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450&xxxx;xx pod olejovou xxxx xxxxx imersí xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Také xxxxxxxxx v procházejícím normálním xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx sklíčka 0,3 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx a inkubujte 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a pracujte v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

f)	Zkoumejte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX granulí v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v extraktech x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) se xxxxx xxxxxxxxxxx výrobce. Jinak xx xxxxx následujícím xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx suspense xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a heterologního xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx se v pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování xx xxxxxx půdu

Pozn.: Než xxxxxxxxx tuto metodu xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živnou xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx velkou xxxxxxxxx. Xxxx, kolonie X. xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxx morfologii, jestliže Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lze xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx vysoká. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx extrakty, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleně xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X každé xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné půdy xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx testování xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1 Proveďte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických bakterií, xxxx vyloučeny. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx a po 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx na xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx částečně xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu, abyste xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx –68 xx –86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx jsou nalezeny xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx a zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx R. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx vzorku do 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx bujónu (xxxxxxx 2), xxxxx xx předem připravte xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx teplotě 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx bujónem zacházejte xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test a je xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx jako titr.

Test xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx vzorky fixovány xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým kmenem xxxx xxxxx referenčním xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, které xxx použít xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx k testování jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx rezervní nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx nezbytně krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx by xxxx mít 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v pufru IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Pokryjte xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx okénku musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Zabraňte xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx jako předtím (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Zkoumejte xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou morfologií X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií podobnou X. solanacearum.

5.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx počet typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být povinně xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx úplná.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx s interní kontrolou.

Používejte xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx, xxxxxx zabránili kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly pufru xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, xxx XXX xxxxxxxx také XXX extrahovanou z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste zabránili xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx být pokud xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Následující xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně s teplotou 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně promíchejte xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu uschnout xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C až xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou sraženinu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx možno, doporučuje xx použít multiplexní xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx xxxxx protokolů XXX (xxx dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx směsi XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx termocykleru, který xxx použit při xxxxxxxxxx testování, a spusťte xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12 µl směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Použijte vhodný XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 xxxxx xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx produkty PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx zjištěn, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx primerů XXX (xxxxxxx 6).

Pozn.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní kontroly X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. V multiplexních xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je získán x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx IF xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka: Používejte xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx je xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který byl xxxxxxx testován na X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. solanacearum xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém extraktu, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní materiál, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (viz xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx na 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200 µl fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M PB (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované suspenze xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidejte xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	okénko 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Krycí xxxxxxx 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6 Nechte xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80 % a 96 %, xxxxxxx po dobu 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo filtračním xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxx 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; viz xxx.7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx tak, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Umístěte xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx zahřáté vlhké xxxxxx a nechte proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx ve vodní xxxxx o teplotě 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechte inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) a položte je xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující a zcela xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx ve várce xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx sklíčka.

7.3.4 Specifičnost xxxxx FISH s sebou xxxx několik problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx z bramborových hlíz x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a ke xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx IF.

7.3.5 V xxxxx xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx XXXX testu xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx negativní.

ii)

Výsledek FISH xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze použít xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx se xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx konkurenci xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx druhotných konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx nebo stejné xxxx u titru xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1 ml biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 až 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

Standardizované pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Smith xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X na 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a promíchejte.

3)	Nakapejte 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx přes xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx jamky třikrát xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx komerčních xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx je xxxx předtím (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx předtím (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (xxxxxxx 4) xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidejte rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) s obsahem 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte inkubovat 2&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x-XXX/xx alkalické xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx vzorky xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx se substrátem) x&xxxx;xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx s negativním výsledkem (xxxxxxxx viz x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8 nebo xxxxxxxx lilek (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. až 3. xxxxx xx do xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací rostliny.

9.2.1 Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23X). Rozdělte xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2 Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx rostlinu xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx děložní xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech skleníku xxxx xxxxxxxxx komory xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorků xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxxx test XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte všechny xxxxx kultury x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx mohou být x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

B. IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Výživové x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx následující xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx aktivita	+
Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (dodatek 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX metodu (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx této metody xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2 Ohřívejte 100&xxxx;µx xxxxxxx suspense x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx vařící xxxxx xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx postupy PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů specifických xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Pastrik x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx et al. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Opina et al. (1997), Weller xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (FAP)

6.1 Pěstujte xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX a absence 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx během 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx po žlutou x&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum lze xxxxxxxxx několikerými technikami, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2 Repetitivní xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx et al., 1989) a sekvenováním 16X xXXX (Xxxxxxx et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx ve fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by typické xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se po xxxx době příznaky, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud možno xx selektivní xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Investigaciones Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. solanacearum

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx do xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx na litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx kyseliny (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem sterilizovaný xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx konečnou xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 mg/l
Polymixin-B-sulfát (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx ovlivnit xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx o 1–2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx a skladujte roztoky xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx a spotřebujte xx 1 měsíce.

Misky x&xxxx;xxxxxx xx měly být xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx přílišnému xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2&xxxx;xx 5 dnech při xxxxxxx 28&xxxx;°X objeví xxxxxxx kolonie.

c) Validované xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx přípravu xxxx xxx selektivní agarovou xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx xx 50 °C.

Přidejte xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx xxxxxxxx a lze xx xxxxxx z těchto xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka patogenních xxxxxxxx rostlin (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2.	Sbírka xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (CFBP), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. solanacearum

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx původu	Biovar
NCPPB 4153	6	CFBP 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	CFBP 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, CFBP 3857	Nizozemsko	2
NCPPB 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Port 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, R303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, CIP312	Peru	2T
NCPPB 3989	45	CFBP 4613, X568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, CMIb2861	Srí Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v případě, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 CSL Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4)
NCPPB 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	CFBP 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Xxxxxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx &xxxx;(4) (5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 IPO X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	IPO 1695	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	CFBP 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 IPO 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Flavobacterium xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx standardní kontrolní xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx ze xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 103 xx 104 x&xxxx;104 xx 106 xxxxx biovaru 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 buňkami xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx půdě x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hustotu přibližně 2&xxxx;× 108 xxx xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx dřeň x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které xxxx, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracujte xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx označte.

Připravte xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum v kontrolních xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro xxxxx xxxxx XXX proveďte xxxxxxxx DNA z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx testovacích xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX a FISH proveďte xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx u každé xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX a PCR, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx nejméně x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx uchovány xx xxxxx rok.

1. Pufry xxx účely xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředek XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx extraktů x&xxxx;xxxxxxxx pupkových xxxxx xxxx bramboru xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 do xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1 Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	6,36 g
NaHCO₃	11,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx aromatických xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

3.3 PBS-Tween

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44)	2,0 g
10 % Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	doplnit xx 100 ml

3.5 Roztok xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Diethanolamin	97 ml
Destilovaná voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx HCl upravíme xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely testu XXXX ELISA

4.1 Potahovací pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný xxxx (XXX) pH 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	950 ml

4.4 Substrátový xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx koncentrace XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v 1 okénku xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx by xxxxxx xxxxxx xxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxx vybraných xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX XXX TCC XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx při 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx při 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Ava XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1	5′-xxx xxx acg xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx ttc aca xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

2.4 Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx a 96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX AAC XXX GCA GAG XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3′
Přímý primer XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx primerNS-6-R	5′-GCA XXX CAG XXX XXX XXX TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 mM MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (syntéza kopie)
1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °C.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX AGT CAC XXX AGA XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX AGA XXX CTC-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (12)	0,2 µl	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro biovary 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

4.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Xxxxxx -EDTA (XXX), pH 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx na xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované xxxxxxxxx xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXXXXXXX, KTERÝ XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 přidáním 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (PB; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1N XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx HCl nebo XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Hybmix

NaCl	2,7 M
Tri-HCl	60 xX (pH 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx dvakrát) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX A UČIŇTE XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi.

Počet sklíček:	1	4	6	8	10
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx EUB 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx teplotě –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a autoklávujte xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Lycopersicon xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Přesaďte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a rajčete xx měly xxx xxxx xxxxxxxxxxx pěstovány xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne	14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18 °C
Vhodná xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná odrůda xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx cells for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Anon. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al. Xxxxxxxx Xxxxxxx of xxx European Communities X235, 1-39.

3.	Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, D., Barlow, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx of xxxxxxxxxxx fragment length xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, J., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx of xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx for International Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, A.C., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, S., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, S. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X detection method xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Janse, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum to xxxxxx xxxxxxxxxx on x xxxxxxxxxxx medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Klement X.; Xxxxxxx, K xxx D.C. Xxxxx, 1990. Methods in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx bacterial xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Ltd., Xxxxxx. 216 pp.

16.	Lopez, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. In: H.W. Xxxxx et xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Specific xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx and strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xanthomonas xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, V. Krishnapillai, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Timmis. 1997. A novel xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (formerly Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx R. solanacearum xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Sequence xxxxxxxx xxx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies to Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Agricultural Immunology 7, 67-79.

23.	Schaad, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, S.E., L.A. Xxxxxxx, J.P.W. Young, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, M. and Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx plant xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.	Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx blood disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, RC-PFGE xxx xxx-XXX. In: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Ecological Aspects. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx strains using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx TaqMan assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot of xxxxxx, xx fluorescent xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, kdy xxxxxxxxxxxx(x) test(y) provedený(é) xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v příloze II xxxxxx(x) xxxxxxxxx a na xxxxxxxxx xxxx vyvrácení xxxxxxxx(x) uvedenou xxxxxxx xx xxxxx xxxx, xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený materiál xxx screeningový(é) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka a

—	všechny xxxxxxxxx podklady dokud xxxx výše xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx použít xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 2:

—	materiál uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného výluhem x&xxxx;xxxx xxxx rostlin, xxx xx xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu i) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rostliny xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx byla zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují rostoucí xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx kontrola x&xxxx;xxxxxx podezření xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx, které jsou xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx se pěstují xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na xxxxx xx k zavlažování nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx potvrdilo xxxxxxxx organismem xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

—	na nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx s místy xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx nebo xxxx zaplavena povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx xxxx xx podezření xx xxxxxxxx organismem,

ii)	povrchová xxxx použitá xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx místa (xxxx) xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx xxxx být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vazbou xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, na kterých xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx používají xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (místech) produkce xxxxx předchozí xxxxxxx xxxx přítomný v takovém xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx ii) xxx xxxxxxxx xx tomto xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a všechny xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx označeným xx zamořený podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx přišel xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx brambor xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx vyrostly ze xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a u nichž, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx klonové xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx pro ověření xxxxxxxxx zamořených x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) produkce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx, která xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx zaplavených xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx k jiným xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

—	místa xxxxxxxx, xxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx xxxx bylo xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx nebo zaplavení x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bod ii),

ii)

v případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv), xxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii):

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstuje x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za zamořenou xxxx xxxxx(x) xx xxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx(x) být xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx rostoucím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx které xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx poté, xx xx xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, sadbové, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx kategorii xxxxxxx;

—	x rajčat jméno xxxxxx xxxx partie x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx xxxx, xx kterém se xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx státu (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

d)	velikost xxxxxxxx partie brambor xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx rostlinolékařského xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx oznámení, xx které odkazuje xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx všech xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za účelem xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx uskutečněného odběru xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vymezeného xxxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx partií x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a v případě xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx označena xxxx xxxxxxxx, ale jsou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vodního xxxxxxx a rozsahu označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 odst. 1 bodu ii) xxxxxxxx 2000/29/XX a číslo xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, xxx. X.2.2 směrnice 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (ohnisek), jak xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx tepelné xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	uložení xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx půdy xxxx kontaktem s vodními xxxxxx, které by xxxxx být xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx zařízeními xxx likvidaci odpadu, x&xxxx;xxxxxxx je zajištěno, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředků,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx neškodně odstranit xxxxxx schválenými xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx daného členského xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx účelem zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bez xxxxxxxxx, xx místě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx odpadu. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx k pěstování xxx xx stejném místě xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx a dezinfekci, nebo

—	budou xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx a listové tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a případnou xxxxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx provádějí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx v čl. 6 odst. 4, xxxxx xxxxxxx členské xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx ii):

na poli xxxx na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx čtyř pěstitelských xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za zamořené:

—	budou xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x prvním sklizňovém xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nejméně xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor xx xxxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx postupem podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx brambor a rajčat, xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, který xxxx xxxxx alespoň xxx roky, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, bude xxxxxxxxx xxxxxx šetření xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vyloučí výskyt xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx ponechání xxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx, anebo xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx riziko xxxxxxx nebo šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce a s podmínkou, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxxx xxxxxxxx prohlídek xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roky xxxx xxxxxxxxxx:

—	x případě xxxxxxx xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx rajčete, xxxxx testovány postupem xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx ostatní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx přesvědčily, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vyloučeno:

—

v pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx pěstovány xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx produkci xxxxx,

—

xx xxxxxx pěstitelském roce, xxxxx následuje po xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx pouze úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx pod úředním xxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx buď xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx xx semen, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx pouze úředně xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x případě xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny rajčete xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se provádějí xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx období xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx a u každého xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx II;

ihned xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii) x&xxxx;xx xxxxxx následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfikována xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx zavedeny patřičné xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx těchto xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xxxxxx organismu;

na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, prohlášené xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx bramboru, xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin a osiva xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontrolovaná opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx nebyl následně xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx z testovaných xxxxxx,

—	x xxxxxxxx rajčat xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx programy xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx programů xxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx zajistit, xx ihned xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxx xxxxxxx vybavení x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xx produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx a nejméně xx tři xxxxxxxxxxx xxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx o zamoření:

ba)

jestliže xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xx kterých xx xxxxxxx, xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxx brambor xxxx rajčat,

—

vyžadují, aby x&xxxx;xxxx xxxx byla xxx všechny kultury xxxxxxxx xxxxxxxxx výlučně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vypěstovaná pod xxxxxx xxxxxxxxx a aby xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iii), xxxx xx sklizni xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx manipulaci xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx a případně xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pěstování xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, u všech rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx voda prohlášena xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxx je xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx organismu xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx a případných hostitelských xxxxxxx z čeledi lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx případy,

—

zavedou xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx zákazu xxxxxxxxx xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx orgány xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Použití xxxx, xx xxxxxx se xxxxxxxx zákaz, xxxx xxx povoleno, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxxxxx jsou použity xxxxxx schválené xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxxxx a jeho xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx likvidací xxxxxxx xxxxxx xxxx výpustí xxxxxxxx odpadu z průmyslového xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem;

c)	případně xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx porostů xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx přiměřeného xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx jakékoli xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxxxxx xxxxxxx a bramborových xxxxxx a rajčat) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, kamenů a jiných xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx uložením na xxxxxx schválené skládce xxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx organismu xx xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, jež by xxxxx být používány xxx zavlažování zemědělské xxxx. Odpad musí xxx xxxxxxxxx přímo xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx izolace, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty odpadů,

nebo

—	spálením, nebo

—	jinými xxxxxxxxxx, pokud prokazatelně xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům,

ii)

tekutý xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx být odstraněny xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx tekutý xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx kterém xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx by xxxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx mohly xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx oznamují xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Komisi.

Možnosti xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx odpad spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním a zpracováním xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3) Použijte xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (IF x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx produkt PCR xx podobnou velikost, xxxx je očekávaná xxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (viz xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reakce ve xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla validována xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Elmer (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Research XXX 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx rovněž xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X a NS-6-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx třepáním nebo xxxxxx xxxxx izolace XXX může xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizace xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.