EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/XX

ze xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx XX xx XXX směrnice Xxxx 98/57/XX x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze xxx 20. xxxxxxxx 1998 o ochraně xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), x xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx státech na xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx za xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat opatření xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx technických xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách, xxx xx brambor, xx xxxx a xxxx.

(7)

Xxxxx xxx o xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx označených jako xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx význam této xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX xx nahrazují xxxxxxxxxxx zněními v xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x touto xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti působnosti xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Tato směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx KYPRIANOU

člen Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test výronu xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx na xxxxx půdy
			4.2	Postup xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční a enzymatický xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		A)	Komerčně xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx testovací xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx úrovně kontaminace xxx xxxxxxx IF x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní izolace) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx živné xxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX ROSTLINÁCH S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx infekce v polních xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, přičemž x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx vadnutí zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx a mléčný xxxxxxxxxxx sliz nebo xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru je xxxxx překrojit napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx se xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Později xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx sekundární rozvoj xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně příznivých xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx méně xxx 21&xxxx;°X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx stonku xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx a kořeny xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném xxxx spodní části xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a to i při xxxxxxx příznaků vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé screeningové xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx súdánskou xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo vrstvu xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy bramboru xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx řadu xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µl suspenze x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX xxxx SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (např. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx metodou zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx případně xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, často s charakteristickými xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, které jsou xxxxx krémově xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx vzorku xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx k dispozici xxxxx množství hlíz

—	Validace xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx přípravou xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. solanacearum.

Omyjte hlízy. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Nechte hlízy xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo jestliže xx být proveden xxxx PCR nebo xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, tak xxx xxxx viditelné vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při vyříznutí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx xxxx xxxxx xx pupkovém konci Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx xxx pokojové xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx být hlízy xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10 °C) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx zpracujte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X nebo 16–24 hodin chlazené, nebo

homogenizujte xxxxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx drcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx pro každý xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při xxxxx XXX xxxxxxxx přenosu XXX na nádobách xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavek na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a odstraňte supernatant, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx části xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná přeprava xxxxxxxx, zajistěte přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx boxu x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Pro xxxxx xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx dlouhý 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx odeberte xxxxxxxxxxxx postranní výhonek x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx po xxxx rok x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx vodních xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx evropské xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx hastata, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Silene xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx dioica.

Pozn: X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx stranou xxxxxxxx xxx xxxxxx s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx možné, uložte xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx provést filtrací x/xxxx odstřeďováním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Jeden xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx detekce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx v tomto xxxxxx xx použitelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a rovněž xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě ze xxxxxxxxxx brambor a odpadní xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx nižší. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu v povrchové xxxx, je xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx při použití x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. solanacearum x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx teplota xxxx překračuje 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx v různé době xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx účinky xxxxxxx dešťů x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx toku, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx výskyt xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx jsou xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Při xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx výtoku odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3&xxxx;xx xxxxxxx toku x&xxxx;xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut (xxxx 7 000 g po dobu 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx kapalinu xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx metoda je xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně rozptýlených xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxx sledování, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx použití xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se mělo xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1 kg půdy xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (nebo x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 v 0,3 ha. Před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx dobře promíchejte.

2.1.2 Rozptylte xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 g sterilních xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx udržujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx stoncích vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: uřízněte xxxxxx právě xxx xxxxxx země. Xxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX nebo XXX (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rychle xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete kapkou xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, zda xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx imersí a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx obarvenými značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) se řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx xxxxx) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx po xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx předběžný xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx selektivní xxxxxx xxxx, např. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx velkou xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě od –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X každé xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla být xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx otestována její xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1 Proveďte vhodnou xxxxxxxx xxxxxx s cílem xxxxxxxx, aby všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx extraktu xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx živné xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx krvavě xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx rozetřete xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx izolované kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx krátkodobě ve xxxxxxxx vodě (pH 6–8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) a test xxxxxxxxxx (xxx oddíl VI.C).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx a zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx izolace organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx testu PCR xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx sterilních zkumavek xxxx xxxxx. U obohacovacího xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X v třepané xxxx xxxxxxxx kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX dobře xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx bujónem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx hlavní x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Jestliže xx xxxx IF xxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx test a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx protilátek R. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Doporučuje xx určit titr xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají všechna xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku odstraněn xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx není xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx možností xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx napipetujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének v řadě. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, fixovaná xxxxxxx je možné xxxxxxxxx ve zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx dalším testováním.

5.3 Postup XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test v odst. 5.1.i): Připravte xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx mít 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
(X = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx xx navlhčený xxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx osušením.

5.3.4 Umístěte sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx krycí tekutiny xx každého okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní imersí xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Zkoumejte xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou morfologií X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx při porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5 Interpretace xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Vzorek xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii)	Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx a je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza úplná.

Využití xxxx metody v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx R. solanacearum xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx schválená xxxxxxx a protokoly XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX použijte xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx než vzorky, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx pro tento xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxx enzymových reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx účely xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

a) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx termobloku nebo xxxxx lázně x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5 min. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx roztoku Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA, např. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx ředění vzorku xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx podle protokolů XXX (viz xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Použijte xxxxxx XXX marker, např. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 minut xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx je xxxxxxx u všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx je xxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní kontroly. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx xx získán xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. V multiplexních xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx dvou xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86 °C.

Jako negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se používá x&xxxx;xxxxx xxxxx, je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2 Napipetujte 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx po dobu 7&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200&xxxx;µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7 000 g, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx přidání 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Prázdný	Prázdný	Prázdný	Vzorek 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	okénko 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

7.2. Hybridizace

7.2.1 Dehydratujte xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx etanolové xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (dodatek 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; viz xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka necháte xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4 Přiložte xxxxx sklíčka (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx&xxxx;xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx a nechte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární kvalitou (Xxxxx Q), 1 l 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetujte 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vhodným xxx epifluorescenční mikroskopii xx zvětšením 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx R. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx být xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test opakován. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx sklíčka.

7.3.4 Specifičnost xxxxx FISH s sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx pravděpodobné, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx na xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx všech pozitivních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx volitelný xxxx kromě testů XX, XXX xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních protilátek xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx konkurenci xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky v pracovním xxxxxx, xxxxx je xxxxxx nebo xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx jste xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a suspenzi xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx v solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx destičce xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Smith et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X na 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx do každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xxxx přes xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx jamky třikrát xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v blokačním xxxxx. Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek a vymyjte xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (xxxxxxx 4) xx xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx absorbanci xxx 405&xxxx;xx v pravidelných 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx imunoglobulinu x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pufru pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190 µl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidejte rovněž xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx třikrát xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění specifických xxxxxxxxxxxxxx protilátek R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX) a přidejte 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx dobře vypláchnete xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Připravte xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá při xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z jamek xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x&xxxx;xxxx větší než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné hodnoty XX z jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx negativních kontrolních xxxxxxxx jsou xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, že došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorku x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx extrakty, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte xxxxxx xxxxxxx hned nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Rozdělte xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2 Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty a pipetou xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx udělejte příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30 °C x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační komory xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, xxxxxxxxx přísnou xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorků xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6 Jestliže xxxxx 3&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, který xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx zřeďovací xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx bakteriemi X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Výživové x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. solanacearum, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová aktivita	+
Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst při 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr IF xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx kontroly.

3. Test XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx hodnota xxxxxxxx xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2 Ohřívejte 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx vařící xxxxx xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx při teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx postupy PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Pastrik x&xxxx;Xxxxx (2000); Pastrik et al. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Opina et al. (1997), Xxxxxx et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentů jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, jestliže se x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX a absence 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx schopnosti využití x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), zbarvení xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx rozšířen)	Biovar 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx něž xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX a ERIC (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik xx xx, 2002; viz xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno analýzou XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx a k potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete nebo xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx půdy. U čistých xxxxxx xx typické xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx po xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx v malém množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Proveďte xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx kolonií xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Veneto Xxxxx Periferica per x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Investigaciones Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Sciences	Uppsala	Švédsko

Dodatek 2

Živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

a) živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Difco)	5,0 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4.7H2O	0,25 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Ochlaďte xx 50&xxxx;°X a přidejte filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx do xxxxxxxx konečné koncentrace 50&xxxx;xx na litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx
Xxxxxxxx kyseliny (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, abyste získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 mg/l
Polymixin-B-sulfát (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx může ovlivnit xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx případě xxxx růst R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xx však xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx déle x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií bez xxxxxxxxx růstu Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx s médiem xx měly xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte přílišnému xxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Validované xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx XXXX, xxx vynechte Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená živná xxxx Wilbrink (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro živnou xxxx SMSA.

Dodatek 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx buď x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny jsou xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxx z těchto xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3.	Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. solanacearum

Kód NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Francie	2
NCPPB 4158	39	XXXX 4608, Port 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	CFBP 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	CFBP 4612, X578, CIP312	Peru	2T
NCPPB 3989	45	XXXX 4613, X568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, SEQ225	Peru	3
NCPPB 3997	47	XXXX 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	CFBP 4615, X297/349, XXX121, CMIb2861	Srí Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	CFBP 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zaručena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx pickettii (4)
NCPPB 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4)
NCPPB 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Bacterium &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	IPO 1695	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 IPO 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (5)
NCPPB 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx ze xxxxxx xxxxxx NCPPB.

Mražené sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 a 104 xx 106 buněk xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu fixované xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 buňkami xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testů.

B. Příprava xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48hodinovou kulturu xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx rasy 3/biovaru 2&xxxx;(xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx přibližně 2&xxxx;× 108 cfu xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx zakalenou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxx, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracujte xxxxxxx xxxxx xxxx uvedeným xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použito jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100 µl xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejdříve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx účely xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a negativních kontrolních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx se xxxx testů IF, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx detekován nejméně x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx a u žádných xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx rok.

1. Pufry xxx xxxxx extrakce

1.1 Extrakční xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterií x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pupkových xxxxx xxxx bramboru xx xxxxxx zahuštění do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k oplachování podložních xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Vectashield® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Laboratories) xxxx Citifluor® (Leica) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	6,36 g
NaHCO₃	11,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

NaCl	80,0 g
KH₂PO₄	2,0 g
Na₂HPO₄.12H₂O	29,0 g
KCl	2,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Tween 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100 ml

3.5 Roztok xxx xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidejte 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5&xxxx;xx xxxxxxxx fosfatázového xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx roztoku.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX ELISA

4.1 Potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	1,59 g
NaHCO₃	2,93 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx a zkontrolujte xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Diethanolamin	100 ml
Destilovaná xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX a FISH pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovacím poli (x).

Xxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky
a	s	=	povrch pole xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx ukázat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx vybraných xxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx PCR Xxxx et al. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer OLI-1	5′-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX AGG XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx při 96 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 sekund při 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

1.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx ttc aca xxx gtc xxx xx -3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx a 96 bp.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT TA-3′
Reverzní xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GGC AGA XXX T-3′
Přímý primer XX-5-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(10) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

3.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfizsmus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx I nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °C.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et al, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3′
Xxxxxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum:

s Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Protokol XXX specifický pro xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Primer Xx-1-X (10 µM)	2 µl	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx PCR (13)	2,5 µl	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µM
Taq polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 sekund xxx 72 °C (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) a iv).

4.4 Restrikční xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Rovněž xxxxxxxx na xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované xxxxxxxxx xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx agg xxx xxx xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: USTALOVAČ XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX JEDOVATÝ. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx vody (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a míchání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Zkontrolujte xX xxxxxxxxxxxxxx papírky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací a autoklávováním)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 nebo XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx xxxxxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx dva různé xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 nebo OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světlocitlivými xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx teplotě –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx chraňte xxxx přímým xxxxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx lilku (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx pasterizovaného pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x&xxxx;xxxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxxxxx pěstovány xx skleníku s následujícími xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 hodin xxxx přirozená délka xxx xxxx delší
Teplota	denní: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 až 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná odrůda xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, R.I., X. Krumholz xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx cells xxx xxxxxxxxxxxxx, phylogenetic and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. Xxxxxxxx Journal of xxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division specific xxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Barlow, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx that xxxxxxx xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx for International Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx xxxx xxxx on its xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. The relationship xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum to xxxxxx xxxxxxxxxx on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 pp.

15.	Lelliott, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx diagnosis xx bacterial xxxxxxxx xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, M.T., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx molecular detection xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting to xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Timmis. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx PCR xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. and Xxxxx, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Sequence xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Schaad, W. 2001. Laboratory guide xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, S.E., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx disease xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx determined xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) pp. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Smith, X., Xxxxx, D.E. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) xxxxxxxxx(x) xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vhodných xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx vyvrácení xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx čeká, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady xxxxx xxxx výše xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx v případě xxxxxxx použít xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xx třeba zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx rostlin, xxx xx xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu.

PŘÍLOHA IV

Prvky xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu i) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rostliny rajčat, x&xxxx;xxxxxxx byla xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx kontrola x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx produkce, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx produkce, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx zařízení a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem nebo xx podezření xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx zdroje, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx se ukázala xxxx xxxxxxxx organismem xxxx u nichž xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, u které se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

ii)	povrchová xxxx použitá xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx nebo xxxxx (xxxx) xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx pole xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx být xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx v místě xxxxxxxx, xxxxx bylo podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) bodu xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) produkce x&xxxx;xxxxxxxxx produkční xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx používají společně xxx přímo xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx materiál pěstovaný x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx období, kdy xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx ii) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, ve xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx strojní xxxxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a všechny ostatní xxxxxxxx, včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx označeným xx zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx dezinfekcí,

—

jako xxxxxxxx xxxxxxx a testování xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx rodičovským xxxxxxxx xxxxxxx k uvedenému xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. v případě xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx vyrostly xx xxxxxxxx osiva jako xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx zamořených x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, kde se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx voda, která xxxx označena xxxx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovaný xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), zahrnují:

v xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx produkce, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál,

—	společnou xxxxxxxx a použití xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

—

místa xxxxxxxx, xxx se používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) produkce, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx xxxx povrchová voda xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, xx xxxxx xx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v bezprostřední xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx které(á) xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx zamořenou,

—

vodní xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx toku x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx hostitelským xxxxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x brambor:

a)	jméno odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx kategorii xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx partie x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx stát, xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxx členském xxxxx (x jiných xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx dané xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx rostlinolékařského xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx toto:

po xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx případu:

a)	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx provedeného xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a možného xxxxxxxxx zamoření včetně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zdroji (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx partií x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a v případě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o vymezení xxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx zdroje, včetně xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 odst. 1 bodu ii) xxxxxxxx 2000/29/XX a číslo xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, podle xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, odd. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx informace, které xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx následující:

—	použití xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	uložení xx xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx půdy xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zemědělské xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx zařízeními xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xx zajištěno, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, a se xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředků,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možnostmi xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx schválenými xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx souhlasem příslušného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v němž xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením pro xxxxxxxxx odpadu. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx stejném místě xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx zpracování x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx některými xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx tohoto organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx a listové xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx jinými xxxxxxx xxxxxxx xxxx likvidace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, uvedených v čl. 6 odst. 4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx vymezené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na xxxx xxxx xx jednotce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx za zamořené:

—	budou xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a rajčat, i jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx pěstovány:

—	hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x uvážením xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx přežití xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x prvním sklizňovém xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx v předchozí odrážce, x&xxxx;xx podmínky, xx xxxx xxxx shledáno xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor je xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xxxxxxxx podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx sklizňovém xxxxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, který xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx let následujících xx xxxx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx učiněna opatření, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, anebo xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo pěstování xxxxxxxxx porostů xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nehostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx období xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx jiné xxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx dva následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx povolena produkce xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx bramborové xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx testovány xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx produkce prohlášeného xx zamořené x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx orgány xx přesvědčily, že xxxxxx spojené s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bramborové hlízy xxxx xxxxxxxx bramboru xxxx osivo xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mohou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v případě xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx produkci xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to buď xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx semen a vypěstovaných xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx místech xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, x&xxxx;xx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx brambory xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx z úředně certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx produkci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x případě xxxxxx xxxxx být pěstovány xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx xx produkci xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx období se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx bramborového xxxx xx úředně xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx produkce brambor x&xxxx;xxxxxx budou vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx zavedeny patřičné xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx je možné xxxxx xxxxxxx pěstební xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx bramboru, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a osiva xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontrolovaná opatření xxx vyloučení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx nebo xxxxxx xx příslušných xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, bude xxxxxxx úředně certifikované xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx z testovaných xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX xxxx, pokud xxxx rostliny rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou,

—	budou xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx programů xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxx dotčena xxxxxxxxxx uvedená v bodu 4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikována xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

ihned a nejméně xx xxx pěstitelské xxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zóna xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, spolu xx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxx zóně xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx vypěstovány v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iii), xxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlin xxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, u všech xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx průzkum xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xx) xxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V bodu 2:

—

xxxxxxx xx vhodných termínech xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx zákaz xxxx xxx xxxxxxxxxx xx základě výsledků xxxxxxxxx z řečeného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) odvoláno, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxx není nadále xxxxxxxx. Použití xxxx, xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, z úřední xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí výskyt xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx výpustí xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo balících xxxxxxxx, ve kterých xx xxxxxxxxxx s uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx odstraňování xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx jakékoli zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a rajčaty (xxxxxx xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) xx odstraní xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx na xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx by xxxxx být xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx přemístěn xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx nehrozilo žádné xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx suspendované xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxx odstraněny xxxxx pododstavce i).

Následně xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60&xxxx;°X uvnitř xxxxxx xx xxxx alespoň 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx by xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx xxxx vodními zdroji, xxxxx by xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx použijí také xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (IF x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR xx podobnou velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx OLI-1 x&xxxx;X-2 (viz dodatek 6).

(6) Pravděpodobnost xxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx v Indonésii.

(7) Pro xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Research PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Polymerace.

Perkin Xxxxx XxxxxXxx a pufr mohou xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.