EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. července 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al.

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze dne 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), x xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (dále xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se ochranná xxxxxxxx za účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x biologii a x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti získané xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přezkoumání xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx jeví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx o xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace, xx zapracována moderní xxxxxxxx metoda xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymerázové řetězové xxxxxx (PCR) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx x metody xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx x půdě.

(7)

Pokud xxx x technické xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, která xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho byly xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx směrnicí xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského výboru.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy II xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zněními x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí. Xxxxxxxxxx oznámí Komisi xxxxx těchto xxxxxxxx x xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx obsahovat odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx státy neprodleně xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Tato směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx KYPRIANOU

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (SMITH) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx a některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění xxxxx xxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx (X. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy
	3.	Postup při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test výronu xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX test)
			6.1	Metody purifikace XXX
				x)	Xxxxxx podle Pastrika (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx produktu XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace in xxxx (FISH xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx imunoanalýzy ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx enzymová imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx a enzymatický xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (FAP)
		7.	Metoda xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx půdy xxx izolaci a pěstování X. solanacearum
		Dodatek 3		A)	Komerčně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Validovaná xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské podmínky xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ PRINCIPY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx potvrzeno (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma pro xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx doplněn izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx je X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek pouze x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

3. Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx bramboru nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx nevykazujících příznaky

ODDÍL II

PODROBNÉ XXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX SOLANACEARUM X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX HNILOBY NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1 Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Raná xxxx xxxxxxx v polních xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny při xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, přičemž x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny se xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a uhynutím xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx a podélně xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx fázi se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx žlutého xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne prýštit xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx hnědým x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vně xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx postižená místa, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx kolem 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů a vadnutí xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx se xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxx. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx vodivá xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx nebo částí xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx cévních svazků xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A nebo súdánskou xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3 Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx oddíl VI.A.7), xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50mM xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (např. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx metodou zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx případně xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx inkubovat 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, často x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující výskyt X. xxxxxxxxxxxx v podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx k dispozici xxxxx množství xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na podporu xxxxxxx všech xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro odstranění xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx vhodný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx být proveden xxxx XXX nebo xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx minimum (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx by xxx provedeno xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém konci Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xx měly xxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx hlízy xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10 °C) xx xxxxxxx karanténních xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části do xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány prostředky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx zpracovat výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx přidání xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační třepačce (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx procesu. Xxxxxxxxx, xxxxxx pro xxxxx xxxxxx použili xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při xxxxx XXX xxxxxxxx přenosu XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavek na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Je-li xxxxxx zakalený, pročistěte xxx pomalým odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), filtr xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 g po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Použijte 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na konečnou xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx zbývající ke xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly uchovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx testů a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx by xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné populace.

2.1.1 Do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1–2 cm xxxxxx kousky xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx z paty xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx nad spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx stonku xxxx xxx úrovní xxxx. U lilku potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xxxxxxxx 1–2 cm xxxx xx&xxxx;xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx o počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx bude nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium a další xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx evropské xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Ranunculus scleratus, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx jakýkoli xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% etanolem x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx chlazené, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxx stonků v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx lze xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstřeďováním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo –68 až –86 °C (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx a rovněž xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx brambor a odpadní xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx v odpadní xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx v úvahu xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx se toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a v odpadní vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější v období xxxxxxxx xxxx, léta x&xxxx;xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu xxxxxx xxxxxxx dešťů x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx toku, abyste xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxx patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

2.1.1 Na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxxxx vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, může být xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7 000 g po xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 xx peletového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz postupový xxxxxxx a popis xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxx, xxx může být xxxxxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x&xxxx;xxxx při sestavování xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx nebo xxxx je xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx pro vzorkování xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (nebo x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvyšte počet xxxxxxxx xxxx na 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného kalu. Xxxx xxxxxxxxxx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 g sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování udržujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů xxxxxxx v příslušném xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxxxxxx xxx stonku xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní povrch xxxxxxx sklíčka xxxxxx xxx plamenem, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx mikroskopická xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx. Krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xx zvětšením 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, zda xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx intracelulární a zda xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx súdánské černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx a inkubujte 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx a vysajte savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte přebytečnou xxxx savým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx obarvenými značkovači, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx se x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 sekund objeví xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, proveďte předběžný xxxx, abyste zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx selektivní xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx schopných xx xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx otestován xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx metodou xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu xxx xxxxxxx xx –68 do –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 106 xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx vyhnuli xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx odděleně od xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla být xxxx jejím použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx otestována xxxx xxxxxxxx pro kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál testujte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Naneste 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 misku xxx xxxxx ředění.

4.1.2 Nechte xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °C. Po 48 hodinách xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6 dní. Typické xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX jsou mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx s vnitřními xxxxx xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou být xxxx, xxxxxxx, zcela xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx rozetřete xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (pH 6–8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo dlouhodobě xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X xxxx lyofilizované.

4.1.5 Proveďte identifikaci xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní média xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx být neúspěšné x&xxxx;xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických organismů, xxxxx xxxxxx často xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx izolace organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx obohaceného xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx připravte xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx použit větší xxxxx extraktu xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 µl v 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X v třepané xxxx xxxxxxxx kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX dobře promíchejte.

4.2.4 S xxxxxxxxxx bujónem zacházejte xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se test XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla analýza xxxxx.

Xxxx.: Použijte xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx titr xxx každou novou xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx na čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Jestliže je xx nutné, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx to není xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx pelety:

Připravte xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího okénka xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx pro xxxxx xxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx teplotě nebo xxxxxxxx na teplotu 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx) xxxx dalším testováním.

5.3 Postup XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test v odst. 5.1.i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka by xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx v pufru XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx test xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx ředění antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papír. Pokryjte xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte pufrem XX. Xxxxxx ponořením xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka zakrytá xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx každého xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte pozitivní xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx při porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii)	Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x&xxxx;xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX test xx měl zahrnovat xxxxxxxxxxx negativní kontroly:

—	extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx resuspendovaných pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx než vzorky, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx bez zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro tento xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx popsané pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx v dodatku 6.

a) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lyzátového pufru (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X na 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5 min. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X po xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx xxxx do xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100 % etanolu (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx sraženinu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX pro xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx efektivní.

6.2. PCR

6.2.1 Připravte xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx možno, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (viz xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž xxxxx XXX xxxx byl xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve směsi XXX místo xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a spusťte xxxxxx optimalizovaný program XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx s 3 µl nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx gelu v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Použijte vhodný XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30–60 minut xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx je xxxxxxx, xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxxxxx u žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lze xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Pozn.: Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon ze xxxxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx IF test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86 °C.

Jako negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. solanacearum biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx s pozitivními kontrolními xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného referenčního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx roztok (viz xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx vzorkového extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx po xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1 hodinu x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení.

7.1.4 Odstřeďujte 7 minut xxx 7 000 g, odstraňte xxxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx použijete 2&xxxx;xxxxx xxxxxx na jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx uložen xxx teplotě –20&xxxx;°X xx přidání 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	okénko 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a pokračovat x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx etanolové řadě 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte vlhkou xxxxxxxxx komoru přikrytím xxx vzduchotěsného boxu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, přičemž dvě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) na xxxxx a poslední 4 okénka, x&xxxx;xx xxx, aby xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Umístěte sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka a umístěte xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechte inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx opakován. Xx může nastat x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxx x&xxxx;xxxxxx kontaminace pufru xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx okénka xxxxxxx) xx xxxxx sklíčka.

7.3.4 Specifičnost xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx několik xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx ze stonkových xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx reakci se xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, i když mnohem xxxx xxxxxxx než x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx filtru pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8. Testy XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx použít xxxxx xxxx volitelný xxxx xxxxx testů XX, XXX nebo XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX může xxxxxx xxxxxxxxx testu, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování suspense xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxx x&xxxx;xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní a suspenzi xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx jako vzorky xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx otestovány jako xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání výsledků xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 až 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;XXX R. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx destičce od xxxxxx k testování.

Standardizované pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx materiály, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx test vzorku(ů).

Validované xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx nebo topném xxxx xxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a nechte inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx při teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx poslední xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx komerčních xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx do každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx je xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx absorbanci xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxxx rovněž xxxxxxxxx a negativní kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx na každé xxxxxxxx. Xxxxxx inkubovat 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Připravte xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX) a přidejte 190 µl xx xxxxx jamky. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx dobře vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml alkalické xxxxxxxxx v substrátovém pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do každé xxxxx. Xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx větší než xxxxxxxxxxx XX získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx tvořících kolonie X. solanacearum na 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte stonky xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx listy pomocí xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23X). Xxxxxxxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx asi 1&xxxx;xx xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xxxxxxx x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx suspenzí 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx kontaminaci, držte xxxxxxxxx a negativní kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, v případě xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx přísnou xxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx z různých xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx nad místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx zřeďovací xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte xxxxxxx xxxxx kultury s podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx mohou být x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže testovací xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1. Výživové x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx inkluze	+
Test xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx ELISA

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly.

4. Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx při 100 °C 4 minuty. Xxxxxx mohou být xxxxxxxx při teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (xxxx. Seal et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Weller xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte metodu XXXX (oddíl VI.A.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx nový případ xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenu použitím xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx biovaru je xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Je-li xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200 µl na 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Van xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16X xXXX (Taghavi xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx ve fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako patogenní xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx X. solanacearum.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Periferica xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Sciences	Uppsala	Švédsko

Dodatek 2

Živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky a sterilujte xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Difco)	5,0 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4.7H2O	0,25 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X a přidejte xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxxxx konečnou koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Sigma)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125)	1 250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. solanacearum.

Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx však xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx xxxxxx o 1–2 xxx déle x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Bacto-Agar.

3.	Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx měly být xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx přílišnému xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx by měla xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Validované xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx přípravu xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx půdu SMSA, xxx vynechte Bacto-Agar x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka patogenních xxxxxxxx rostlin (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3.	Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	XXXX 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	XXXX 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	IVIA-1632-2	Španělsko	2
NCPPB 4161	76	B3B	Německo	2
NCPPB 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	CFBP 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, R303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, X568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2 Referenční panel XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx (4)
NCPPB 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 CSL Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. (4)
NCPPB 1127	53	CFBP 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Burkholderia caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Burkholderia xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 XXX X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	CFBP 4621 IPO X306	Xxxxxxxxxxxx anthropi &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 IPO 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx sbírky xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového extraktu xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 x&xxxx;104 xx 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 buňkami xx 1 ml x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx screeningové testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48hodinovou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx půdě x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX fosfátovém xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx s bílou xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. solanacearum xx první xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použito jako xxxxxxxxx pozitivní xxxxxx. Xxxxx nekontaminované mikrozkumavky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx řádně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx 1,5 ml xxxxxxxxxxxxxxx, čímž xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx téhož kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx potvrzeny xxxxxx IF.

Pro účely xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx testovacích xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx patogenity na xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX a PCR, organismus X. xxxxxxxxxxxx musí xxx detekován xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vzorků xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředek XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pupkových konců xxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx odstředěním.

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx protilátek

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
NaCl	8,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Vectashield® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte pH x&xxxx;xxxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx mléko	0,5 g
Destilovaná voda	doplnit xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx upravíme xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidejte 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

Rozpusťte xxxxxx a zkontrolujte xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný xxxx (XXX) pH 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	950 ml

4.4 Substrátový xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

Stanovení xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx fluorescenčních buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rovněž xxxxxx xxxxxx žádné xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenů (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1	5′-XXX XXX AGC TTG XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. solanacearum = 288 bp

1.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx dNTP (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx OLI-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx při 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	20 xxxxxx při 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Ava XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx gcg ggg x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx ttc aca xxx gtc xxx xx -3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2 Reakční směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut při 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx fragmenty specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 bp.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX TTA AAG XXX TTG XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr PCR (10) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 minut při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací z DNA X. solanacearum vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	2 µl	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	1 µl	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 sekund xxx 58&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72 °C (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) a iv).

4.4 Restrikční xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bsm X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx modř (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx gct xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT V DIGESTOŘI.]

i)	Zahřejte 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx vody (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Paraformaldehyd xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxx míchačce.

ii)	Upravte pH xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx HCl xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a autoklávováním)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle výpočtů x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX JE VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx sklíček:	1	4	6	8	10
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 xxxx OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μl)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Pozn.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světlocitlivými xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Zasejte xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx lilku (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a rajčete xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx s následujícími xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx nebo delší
Teplota	denní: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18 °C
Vhodná xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx odrůda xxxxx	‚Xxxxx Beauty‘
Dodavatelé:	viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 on xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. Xxxxxxxx Journal xx xxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3.	Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Pathology 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Ralstonia solanacearum xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx that specify xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx of detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the isolation xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, S., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Detection xx xxxxxx cells of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X detection method xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx symptomless xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12.	Janse, X.X. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. Xxx relationship xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Fulbright, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Fulbright, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Timmis. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx XXX primers xxx xxxxxxxxxxx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx R. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx internal positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies to Xxxxxxxxxxx solanacearum, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Young, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Pseudomonas pickettii xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X rRNA sequencing: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Burkholderia solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx blood disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Elphinstone, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) pp. 44-49.

29.	Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx automated xxx xxxxxxxxxxxx flourogenic 5’ xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Janse xxx A.D.L. Akkermans. 1998. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx fluorescent xx situ hybridization xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y) provedený(é) xx xxxxxxxx rostlinném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) uvedenou metodou xx ještě xxxx, xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx způsobem konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx xxxxx, a pokud xxxxx, všechny vzorkované xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx použít xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny bramboru, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx stejného xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx které xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx podezření xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx produkce, xx xxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v sousedství xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx z jakéhokoli xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx ze zdroje, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx podezření xx xxxxxxxx organismem,

ii)	povrchová xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxx xxxx xxxxx (xxxx) produkce xxxx xxxxx zaplavila xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx mají xxx xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx bylo xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (místa) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx společně xxx přímo xxxx xxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx odrážky xxxx přítomný x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (místech) produkce xxxxx období, xxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx xx zamořený xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx ii) xxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx produkce xxxxx xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx materiálem označeným xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx skladován x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx přišel xx styku s předměty xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx jejich očistou xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx výsledek xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx rodičovským xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, resp. v případě xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx osiva xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a u nichž, xxxxxxx xxxx vyšetřeny xx xxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vazby xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx provedena xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx zamořených a klonálně xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) produkce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx uvedeného x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx voda, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) bod ii),

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx určování xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx)

—	xxxxxxxx k jiným xxxxxx xxxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx rostlinný materiál,

—	společnou xxxxxxxx a použití partií xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx, xxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx nebo xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx zaplavení x&xxxx;xxxxx (xxxx) produkce, xxxxxxxxxx (označených) xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxx v bezprostřední xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) by xxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací xxxxx, xxxxx xx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx objekty, xxxxx mají spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx rostoucím hostitelským xxxxxxxxx z čeledi lilkovitých.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, co xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx dané xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx rostlinného materiálu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx oznámí xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a kopii xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx které odkazuje xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx toto:

po xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx uskutečněného xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx xxxx produkce a u brambor xxxxx partií x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx produkce, která xxxxxx označena xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx partii xxxxxxx xxxxxxx označenou xxxx xxxxxxxxx, osvědčení xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/XX a číslo xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, podle xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxx potvrzeného xxxxxxx (ohnisek), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx následující:

—	použití xxxx xxxxxx pro zvířata xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxx riziko xxxxxxx organismu, nebo

—	uložení xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, xxxx. průsakem xx xxxxxxxxxx půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx by xxxxx být použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx zemědělské půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx s přímým x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx schválenými xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx a dezinfikování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx z výše xxxxxxxxx možností se xxxx xxxxxxxx odstranit xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx přílohy XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx použití nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—

xxxxx použity xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, xxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx místě x&xxxx;xxxxxxx zařízením xxx xxxxxxxxx odpadu. S bramborami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx stejném xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx některými xxxxxx xxxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení souhlasu xxxxxxxxxx úředním subjektem,

ii)

jiné xxxxxxxxx partie xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx příslušným xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx metody xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx příslušných úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx členské xxxxx v zóně xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) xxxx iii), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx):

xx xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx opatření x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, i jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

nebudou xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxx bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s uvážením xxxxxxxx organismu:

—	jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Brassica, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx přežití xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně hrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor a rajčat, xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během úředních xxxxxxxxx provedených xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx bramborové hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, bude xxxxxxxxx úřední šetření xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx pěti xxxxxxxxxxxxx let následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx produkce za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx opatření, xxxxx vyloučí výskyt xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

v xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx pole xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx podle zjištěného xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx porostů xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nehostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx následuje xx období specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx na poli xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx prohlídek provedených xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x případě xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx bramborové xxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxx, xxxxx testovány postupem xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx ostatní polích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx příslušné xxxxxx xx přesvědčily, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx označeném xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx pěstovány xxxxx bramborové hlízy xxxx rostliny bramboru xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, pouze xxx produkci plodů,

—

ve xxxxxx pěstitelském xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx prohlášeného zamoření,

—

v xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx xxx xx sadbu xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě rajčete xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx ze semen, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxx xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, pěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx pěstitelském xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx produkci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx rajčat xxxxx xxx pěstovány xxxxx rostliny rajčete xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx buďto xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx na xxxxxxxx xxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx prohlídky xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx bramborového xxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx místa produkce xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx strojní xxxxxxxx a skladovací zařízení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfikována xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx patřičné xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx těchto xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx je xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxx bramboru, xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx ani xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu xxxxxx rostlin x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxx xxx jednotku x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, včetně, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx média a očisty x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce dané xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vybavení, x&xxxx;xxxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx nebo rajčat xx příslušných orgánů,

—	pro xxxxxxxx brambor, bude xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx brambor nebo xxxx-xxxx nebo mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vypěstovaných xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx xxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx xxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xx s nimi xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx smluvně xxxxxxxxx stroje pro xxxxx produkce brambor xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx výlučně xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx mezi manipulací xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pěstování xxxxxxx xxxxxxx pouze z osiva, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxx pod úřední xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx v rámci uvedené xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášena xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xx) nebo je xxxxxxxxxx za jeden xx xxxxxx možného xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—	xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx a případných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx uvedený rostlinný xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx kontroly nad xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášené za xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xxx xx xx xxxxxx. Tento zákaz xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného každoročního xxxxxxxx a prohlášení (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx nadále xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, může xxx povoleno, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny xxxxxxx xxxxxxxx odpadu, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx likvidací pevného xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx zavedou xxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx přiměřeného xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně schválené xxxxxx odstraňování odpadu xxxxx přílohy XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx splňovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření organismu:

bramborový x&xxxx;xxxxxxxxx odpad (včetně xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) x&xxxx;xxxx xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a rajčaty (včetně xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx uložením xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx např. prosáknutím xx xxxxxxxxxx půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx být xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx izolace, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx; xxxx opatření xxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům,

ii)

tekutý xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X uvnitř xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné riziko, xx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx xxxx vodními zdroji, xxxxx by xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx ošetření xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Komisi.

Možnosti xxxxxxx v této xxxxxxx xx použijí také xx odpad spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3) Použijte xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4) Potencionální xxxxxxx xxxxxxxxx kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (IF x/xxxx XXXXX) s polyklonálním xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx produkt XXX xx xxxxxxxx velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx primerů XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reakce xx xxxxxxx testů, ale xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx metody.

(8) Metoda xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Původně xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Research PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx rovněž xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx optimalizovány xxx xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxx xxxxx hlíz bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx izolace XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda xxxx xxxxxxxxxx použitím Taq xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.