EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. července 2006,

kterou se xxxx xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze dne 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), a xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x významných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxx (dále xxx „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x při xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxx v poznatcích x xxxxxxxx x x postupech xxxxxxxxxx x identifikace organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti získané xxx ochraně proti xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx tohoto xxxxxx se jeví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x postupy xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx moderní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Rovněž xxxx zahrnuta zlepšení xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR) x xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx postupů xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx, ve xxxx x xxxx.

(7)

Pokud xxx o technické xxxxx ochranných opatření, xxxx pro xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx vzorků, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, prvky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, podrobnosti xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx některé xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx této xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx směrnicí xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského výboru.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zněními v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Členské xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro dosažení xxxxxxx s touto xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x srovnávací tabulku xxxx xxxxxx předpisy x touto směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Tato směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx různé postupy, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a v rostlinách xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx testy
	3.	Postup xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx metody pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě
	2.	Metody xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx výronu xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx půdy
			4.2	Postup xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx produktu PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx ELISA
			b)	DASI ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx podílející se xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. solanacearum
		Dodatek 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Validovaná xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx testovaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a musí být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx není považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx selektivní živné xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx ze dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý je xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 až 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin rajčete xxxxxxxxxxxxxx příznaky nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx v polních xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx také k ohýbání xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a uhynutím xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx se x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx překrojit xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Později xx xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx hnědým x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx vytékat bakteriální xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Na xxxxxx xx mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx xxxxxxxxx místa, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx infekce xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2 Příznaky u rajčete

Rostlina xxxxxxx. Prvním viditelným xxxxxxxxx je povadlý xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx se xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx spodu xxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx vylučují xxxxx xxxxxxxx vodivá pletiva xxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (např. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na příčném xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx částí xxxxxx pod xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A nebo xxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3 Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx FISH (xxx oddíl VI.A.7), xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx vrstvu xxxxxxxxxx pletiva z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

Přeneste 50–100 µx suspenze x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx inkubovat 2–6 xxx při teplotě 28&xxxx;°X.

—

Xx universální živné xxxx vytvářejí virulentní xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx tvoří malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx tetrazolového média x&xxxx;xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vedou x&xxxx;xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx být rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2–30&xxxx;°X po dobu xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech populací X. solanacearum.

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Nechte xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx vhodný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže xx být proveden xxxx XXX xxxx xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx viditelné vodivé xxxxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx stranou všechny (xxxxxxx) hlízy s podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx konci Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx měly xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx uchovány podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx zpracujte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx 16–24 hodin chlazené, nebo

homogenizujte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo drcením x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný zářením) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (např. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx pro každý xxxxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX zabraňte xxxxxxx XXX na nádobách xxxx x&xxxx;xxxxxx přístroji. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavek na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx zakalený, pročistěte xxx pomalým odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7 000 g po xxxx 15 minut (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Použijte 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro referenční xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To platí xxx xxxxxxx IF x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx by xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx z paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny z pole xxxx xxxxxxxx: čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x&xxxx;xxxxx rostliny uříznutým xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx odeberte 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě xxxxxxxx 1–2 cm xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx vodou xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx zjistit xx xxxx xxx u víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé hostitelské xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, S. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Silene xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx dioica.

Pozn: X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx jakýkoli xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70&xxxx;% etanolem x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx na rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3 Po usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale lze xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Xxxxx díl xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma detekce xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a rovněž může xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx zmínit, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se liší x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxxxxx je xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx detekce x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po provedení xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), při nichž xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by mělo xxx bráno v úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem k tomu, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování v odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, léta x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx v různé době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx účinky xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx toku, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována menší xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx bude obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30 ml. Xxx intenzivním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X, slijte kapalinu xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx u vzorků xxxxxxx xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu xx vzorcích půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z odpadní xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě nebo xxxx xx třeba xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx použití xxxx xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx půdy xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (nebo v mřížce 7&xxxx;× 7 m). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx uchovejte xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného kalu. Xxxx testováním každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx kalu xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx do xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxxx, xxx se xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx plamenem, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx preparáty xxx nilskou xxxxx xxxx súdánskou černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže uvedeného xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450&xxxx;xx pod olejovou xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1 000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a)	Zakápněte xxxxxxx sklíčka 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xylol xx zdraví škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx při pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx savým papírem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) xx xxxxx xxxxxxxxxxx výrobce. Jinak xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx látky) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx xxxx metodu xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx schopných na xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, měl xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx však xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu xxx teplotě xx –68 do –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx virulentního kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx měla xxx xxxx jejím použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx otestována xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vhodnou xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Mohou být xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx částečně xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx xxxx (pH 6–8, bez chlóru) xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx identifikaci xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx média.

Test očkování xx selektivní média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx podezřelé kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx neúspěšné x&xxxx;xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických organismů, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx organismu X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, protože může xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx předem xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 hodin xxx teplotě 27 xx 30&xxxx;°X v třepané xxxx xxxxxxxx kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX jako hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se test XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Použijte xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají všechna xxxx XX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako titr.

Test xx xxx být xxxxxxxx na čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, může xxx úspěšně xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx xxxxxx fixovány xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Použijte xxxxxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

5.1 Připravte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 mm – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx prvního xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 mm – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v suchém boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx mít 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, řiďte se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx vlhký papír. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx pufru x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx pro excitaci XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. solanacearum.

5.4.4 Uvažujte pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx zjištění xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx infikovaný a je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 × 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxxxxxx je pozitivní, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx s interní kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx laboranty v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli došlo x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	extraktu xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx viz dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX použijte xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx budou testovány.

Extrakty xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx enzymových reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx účely použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

a) Metoda xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx vzorku a umístěte xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx na 5 min. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl roztoku Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X po dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchejte xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx xxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx stát při xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v prostředí, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu DNA xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX jako byl xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx směsi XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx s 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (xxxxxxx 6) při 5–8 X/xx. Použijte vhodný XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx zjištěn, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx amplifikován x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou primerů XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx xx získán xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V multiplexních xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx je získán x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx provedena izolace xxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka: Používejte xxxxxxxxx oligosondy specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx vzorku, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně provést x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx suspenzi obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 denní xxxxxxx. Připravte samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx kontrolu procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se používá x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

7.1.2 Napipetujte 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu xx 200 µl fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení.

7.1.4 Odstřeďujte 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µl (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidejte xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) a fixujte xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a v suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx ohřejte xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxx 7) na 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; viz xxx.7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx necháte xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xx xxxxx a poslední 4 okénka, x&xxxx;xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární kvalitou (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 ml vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx o teplotě 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx s 1x hybmixem xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) a položte je xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxxx nadbytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte sklíčka xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, neberte x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx ve várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Xx pravděpodobné, xx x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;× 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx testů XX, PCR xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX xx obohacení x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx ELISA může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může se xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx testování suspense xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. solanacearum a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx testování xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

Vzorek, xxxxx jste xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 buněk xx 1&xxxx;xx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, aby byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleny na xxxxxxxxxxxx destičce od xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx používají xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx může v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (xxxxxxx 4) a promíchejte.

3)	Nakapejte 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx roztok x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte absorbanci xxx 405&xxxx;xx v pravidelných 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Nechte inkubovat xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx nebo 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx a negativní kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v PBS (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) a přidejte 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx v substrátovém pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá při xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx než dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových extraktů.

Test XXXXX je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxx menší xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 až 104 xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním výsledkem (xxxxxxxx viz v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve fázi 2. až 3. xxxxx až do xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx méně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.1 Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte stonky xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23X). Rozdělte vzorek xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx list.

Sterilním xxxxxxxxx xxxxxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx suspenzí 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a peletovým xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci.

9.4 Nechte xxxx testovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, držte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, v případě xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení a všech xxxxxxxxx činnostech xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx škůdců, protože xx mohli přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6 Jestliže xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, který xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, proveďte xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx X. solanacearum.

B. IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech.

Zahrňte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx každý xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1. Výživové a enzymatické xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml v pufru XX (dodatek 4).

2.2 Připravte xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX metodu (oddíl VI.A.5).

2.4 Test XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx nepoužívejte xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický test.

3.1 Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx poloviční v porovnání x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2 Ohřívejte 100&xxxx;µx xxxxxxx suspense x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxx. Seal et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx et al. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH je xxxxxxxxx, jestliže xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx xxxxx z následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx biovaru

Organismus R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx schopnosti využití x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx a tří hexosových xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx biovaru xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx lze úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx živná xxxx rozdělena xx xxxxxxxx destičky x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), zbarvení xx xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx xx žlutou x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx pro rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů komplexu X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplifikovaných xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum xxxx xxx proveden test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (viz xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx mělo nastat xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx z rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 cm nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxx do optimalizace x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Periferica xxx x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Sciences	Uppsala	Švédsko

Dodatek 2

Živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. solanacearum

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po dobu 15 minut.

Ochlaďte xx 50&xxxx;°X a přidejte filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx do xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit x&xxxx;1–2 xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Bacto-Agar.

3.	Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx měly xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx po 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx půdu SMSA, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx na 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a lze xx získat z těchto xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx původu	Biovar
NCPPB 4153	6	CFBP 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, EURS21	Turecko	2
NCPPB 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, EURS55	Belgie	2
NCPPB 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	XXXX 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	B3B	Německo	2
NCPPB 325	41	XXXX 2047, KEL60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	CFBP 4610, X285, GONg7	Kostarika	1
NCPPB 4028	43	XXXX 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	CFBP 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	CFBP 4613, X568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	CFBP 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

Kód NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	CFBP 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx (4)
NCPPB 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx cepacia &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4)
NCPPB 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. (4)
NCPPB 1127	53	CFBP 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Burkholderia xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	IPO 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	CFBP 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Aureobacterium sp. (5)
NCPPB 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xx sbírky xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx 103 až 104 x&xxxx;104 až 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) jako pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu fixované xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx pletiv PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Obvykle xx jí dosáhne xxxxx zakalenou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx z pupkových xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které xxxx, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracujte xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx kontaminovaných mikrozkumavek xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xxxxx použity jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx účely xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx testovacích xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx patogenity na xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx u každé série xxxxxxxxxxx vzorků.

Co xx xxxx testů IF, XXXX a PCR, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx detekován xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a u žádných xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxxxx xxx uchovány xx xxxxx rok.

1. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx k extrakci bakterií x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx homogenizací xxxx třepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředek DC	Odpěňovací xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pupkových xxxxx xxxx bramboru xx xxxxxx zahuštění do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx chloridu xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k oplachování podložních xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Tween 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	6,36 g
NaHCO₃	11,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

3.3 PBS-Tween

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Tween 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5&xxxx;xx xxxxxxxx fosfatázového substrátu (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃	1,59 g
NaHCO₃	2,93 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx a zkontrolujte xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Diethanolamin	100 ml
Destilovaná xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v 1 okénku xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (liší se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx xx rovněž xxxxxx ukázat xxxxx xxxxxxx pozitivní výsledky xx panelu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol PCR Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer OLI-1	5′-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 bp

1.2 Reakční xxxx PCR

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx při 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	10 minut xxx 72 °C (závěrečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Pastrika x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1	5′-xxx xxx acg xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx primer Xx-2	5′-xxx xxx xxx aca xxx xxx ttg xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum DNA = 553 bp.

2.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X pufr PCR (9)	2,5 µl	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Taq polymerasa (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler MJ Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx být xxxxxx použity ve stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

2.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací z R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx fragmenty specifické xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx RS-1-F	5′-ACT AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx RS-1-R	5′-CCC XXX XXX XXX AGA XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX XXX XXX TTG XXX XXX G-3′
Reverzní xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr PCR (10) (15 mM MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

3.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °C.

4. Protokol XXX specifický xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX TA-3′
Reverzní primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3′
Xxxxxxxx primer Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs PCR

Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Primer Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	1 µl	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx optimalizován pro xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza amplikonu.

Produkty XXX vzniklé amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X vytvářejí zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), pH 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (disodium xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxx na 1X.

Rovněž xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx gct xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct gcc xxx cgt agg xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: USTALOVAČ XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. DOPORUČUJE XX PRACOVAT V DIGESTOŘI.]

i)	Zahřejte 9&xxxx;xx ultračisté xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpouští xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a míchání na xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx papírky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 M
Tri-HCl	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (SDS)	0,01 %
Formamid	30 %,
Sonda XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 nebo XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dva xxxxx xxxxxx dvakrát) se xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX POUŽIJTE XXXXXXXX A UČIŇTE XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx sklíček:	1	4	6	8	10
Sterilní xxxxx xxxxx voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda EUB 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 xxxx OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx použití xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a autoklávujte xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx listy (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx xxxx delší
Teplota	denní: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18 °C
Vhodná xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al. Xxxxxxxx Journal xx xxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Barlow, X. xxx Sequeira, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx biovars of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells of Xxxxxxxxx solanacearum in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. The relationship xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance on x tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Gorris, M.T., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, serological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx of phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx with repetitive xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Louws, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., F. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, B.W. Xxxxxxxx, J.N. Timmis. 1997. X xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx in xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Pukall, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Immunology 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, J.P.W. Young, xxx M.J. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Holderness, M. and Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 in Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Sly, L.I., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx the phylogenetic xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx determined xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) pp. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, D.E. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx flourogenic 5’ xxxxxxxx TaqMan xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx případech xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, kdy xxxxxxxxxxxx(x) test(y) provedený(é) xx xxxxxxxx rostlinném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx nebo vyvrácení xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx ještě xxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady xxxxx xxxx výše xxxxxxx xxxxxx xxxxx ukončen.

Uschování xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx škodlivého organismu xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx oznámení xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx xx to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx i) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx nichž se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny bramboru, xxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zdroje xxxx rostliny xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx nebo xxxxxxx, xx které byla xxxxxxx xxxxxx kontrola x&xxxx;xxxxxx podezření xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v místech produkce, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx se pěstují xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx produkce, xxx dochází xx xxxxxxx zařízení a vybavení xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na nichž xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx používá povrchová xxxx xx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx s místy xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, u které xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo postřik xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx mají být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx bylo podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vazbou xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx takových xxxx, na xxxxxxx xx pracovní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx v takovém xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) xxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxxxx podle xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx ostatní xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx skladován x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx brambor xx hlízy xxxx xxxxxxxx xx sesterským xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx k uvedenému xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. v případě xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx vyrostly xx xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) prohlášen xx xxxxxxxx, a u nichž, xxxxxxx xxxx vyšetřeny xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx zamoření na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx pravděpodobným. Může xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx pro ověření xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu uvedeného x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx, která xxxx označena xxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovaný na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, jež xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx určování xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu iv) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), zahrnují:

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx pěstuje xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného materiálu xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx nebo xxxx xxxxxx odtoku povrchové xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, xx xxxxx xx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstuje x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za zamořenou xxxx xxxxx(x) xx xxxxx povrchovou xxxxx xxxxx(x) být xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx má spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx mají spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx zamořenou, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx a průtoku xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx rostoucím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých.

Oznámení, xx které xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, sadbové, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx kategorii xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx dané xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx podezřelého výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx rostlinného materiálu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx členských xxxxxxx), xxxxx oznámí xxxxxx členskému xxxxx (xxxxxxxx xxxxxx) potřebné xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

d)	velikost xxxxxxxx xxxxxx brambor xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx a kopii oznámení x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxx xxxxxxxxx toto:

po xxxxxxxxx všech xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx provedeného xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx uskutečněného xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném nebo xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx a u brambor xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a v případě sadbových xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o vymezení xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti o určení xxxxxxx zdroje, xxxxxx xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx každou xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx označenou xxxx xxxxxxxxx, osvědčení xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/ES x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx k přepravě, podle xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, xxx. X.2.2 směrnice 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx informace, xxxxx xx týkají xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx případně xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx jako xxxxxx xxx zvířata xx tepelné xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. průsakem xx zemědělské xxxx xxxx kontaktem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx být použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx zařízeními xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx, a se xxxxxxxx xxxxxx a dezinfikování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx a jejich odůvodnění xx oznamují Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možností xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx VII této xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (států), xxx xxxxxx vzájemném informování xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx souhlasem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členského xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx k odstraňování xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, xxx xxxxxxxx xxx přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, na místě x&xxxx;xxxxxxx zařízením xxx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx odděleně x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou dodávku xx zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředků, nebo

—	budou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx partie xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx likvidace, xxxxx xxxxxxxxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu příslušným xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a případnou xxxxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření tohoto xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, uvedených v čl. 6 odst. 4, xxxxx přijmou členské xxxxx v zóně xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx místa xxxxxxxx prohlášena xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx):

xx xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii), xxx:

xxxxx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bramboru xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Brassica, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu,

—	plodiny, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx podmínky, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx během úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx pouze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedeném v předchozí xxxxxxx a po xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, bude xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx prohlášení xxxxx produkce xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx nebo pěstování xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx trav x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxx xx období xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx xx poli xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx dva následující xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx brambor xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	xxxxxxxx bramborové xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx xxxxxxx polích xxxxx produkce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx nebudou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě bramborových xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx následuje xx xxxx prohlášeného zamoření,

—

v xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové brambory xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx produkce, xxx xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx xxx xx sadbu nebo xx produkci konzumních xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo xxxxx jsou rozmnožovány xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx na produkci xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx produkci sadbových xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x případě rajčat xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ze semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES xxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xx produkci xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx bramborového xxxx xx xxxxxx xxxxxxx sklizené hlízy xxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx místa produkce xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu ii) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce:

—	veškerá xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx zavedeny xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx šíření organismu;

na xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii), xxx je xxxxx xxxxx vyměnit xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx bramboru, xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vyloučení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, včetně, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce xxxx xxxxxxxx a veškerého vybavení, x&xxxx;xxxxx xxxxx následně xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xx příslušných xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx brambor xxxx xxxx-xxxx xxxx mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx tato produkce xxxxxxxxx z osiva, která xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx rostliny rajčat xxxxxxxxxxxx vegetativně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx programy zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx proti šíření xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené zóně, xxxx budou dotčena xxxxxxxxxx xxxxxxx v bodu 4.1, xxxxxxx státy:

a)	musí xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx strojní vybavení x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

ihned x&xxxx;xxxxxxx xx tři xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx prohlášení o zamoření:

ba)

jestliže xxxx xxxxxxxx zóna xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx rajčata xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx stroje xxx xxxxx produkce brambor xxxx rajčat,

—

vyžadují, aby x&xxxx;xxxx zóně byla xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx výlučně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx vypěstovány v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx po sklizni xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami ve xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx úřední xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx úřední průzkum xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxxxx xx zamořenou podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) nebo xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx zdrojů xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx vzorků xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx uvedený rostlinný xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx být přezkoumán xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a prohlášení (o xxxxxxxx) odvoláno, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx orgány xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxxxxx xxxx použity xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny výpusti xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx likvidací pevného xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx zavedou xxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně schválené xxxxxx odstraňování xxxxxx xxxxx xxxxxxx VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiných xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, jež by xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx zavlažování zemědělské xxxx. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx přímo xx xxxxxxx za xxxxxxxx podmínek xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření organismu; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx oznámena Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx být tekutý xxxxx obsahující xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx účelem odstranění xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx být odstraněny xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx odpad xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 minut před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx odpad xxxxxx xx styku xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx zdroji, xxxxx xx xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx také xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

“

(1) Viz Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3) Použijte xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (XX x/xxxx ELISA) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx produkt XXX xx podobnou xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx dodatek 6).

(6) Pravděpodobnost xxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx testů, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Research PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Polymerace.

Perkin Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx optimalizovány xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx metod xxxxxxx XXX xxxx vyžadovat xxxx provedení optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.