EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx II xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 98/57/XX ze xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et xx. (1), a zejména xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

vzhledem k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx bramboru a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus se xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, která xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx xxxxx organismu, xxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx ochraně xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx o xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Rovněž xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX) i xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxx zjištění a xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x identifikace xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx x půdě.

(7)

Xxxxx xxx o xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob uchování xxxxxxxxxxx vzorků, xxx xxxx zajištěno vysledování xxxxxxxxx, prvky potřebné xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx oblastí, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx provést x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx a v xxxxx vymezených xxxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx význam xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx rostlinolékařského xxxxxx.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Komisi xxxxx těchto předpisů x srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, které xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. července 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

člen Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX PRO XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx různé postupy, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx rostlin bramboru, xxxxxxx nebo jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě
	2.	Metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx půdy
			4.2	Postup xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx imunoanalýzy ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a pěstování X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		A)	Komerčně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX PRINCIPY

Optimalizované xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, schválená činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, např. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, izolaci patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové xxxxx a izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly v každé xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX NEBO XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1. Příznaky (viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1 Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx v polních xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx teplotách během xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx také x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx kolapsem a uhynutím xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a mléčný xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx překrojit xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce a podélně xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx se xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx žlutého xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Později xx xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx vně xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx postižená místa, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx infekce xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnilob xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx příznivých xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx méně xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx spodu stonku, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx příčném řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx x&xxxx;xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx půdy nepřevyšují 25&xxxx;°X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. u rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx stonky a kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx pod vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx svisle do xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx

(Xxx oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx A nebo xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), testy XXXXX (xxx oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx rostliny bramboru, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (NA, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Připravte případně xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx suspenzí R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při teplotě 28&xxxx;°X.

—

Xx universální xxxxx xxxx vytvářejí virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx xxxxxxx bílé.

—	U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx množství xxxx xx vzorku vedou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství hlíz

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Nechte xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx být xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, tak xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a potom by xxxx být xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxxx nádob xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx okamžitě. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx jedno použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher nebo Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx použili xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Při testu XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, pročistěte xxx pomalým odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Použijte 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx by xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx z paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx skleníku: čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx uříznutým xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx odeberte 1&xxxx;xx dlouhý díl x&xxxx;xxxx každého stonku xxxx xxx xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě odeberte 1–2 cm xxxx xx&xxxx;xxxxxx pod xxxxx xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx u víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx známé hostitelské xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Pelargonium xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X této xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx stranou jakýkoli xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx při teplotě xx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstřeďováním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Jeden xxx xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné k detekci xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxx, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx ovlivňována xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx více x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx než x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce v odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

2.1.1 Na xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30&xxxx;xx pod hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx xxxxxx podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) a testujte xx 24 hodin.

2.1.3 Je-li xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx pomocí následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, slijte xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a zachycením xxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxx pro velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx detekci patogenu xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být xxxxxx použito k testování xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě nebo xxxx je třeba xxxx x&xxxx;xxxxx omezenou xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx sledování, xxx xxxx infikována, xxx x&xxxx;xxx použití xxxx xxxxxx unikne nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (nebo v mřížce 7&xxxx;× 7 m). Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2 Rozptylte xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx nebo kalu xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02 % xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx právě xxx xxxxxx země. Xxxxxxx xxx stonku do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx xxxx ze 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx uschnout x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx fixovali.

4.	Obarvěte xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx vodu savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem při 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx vodní imersí xx xxxxxxxxx 600× xx 1 000× s použitím xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx objeví xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 % (w/v) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Upozornění: safranin xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí sklíčko.

f)	Zkoumejte xxxxxxxx roztěr mikroskopem x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx imersí x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými buňkami Xxxxxxxxxxxxxx aureus nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) se xxxxx xxxxxxxxxxx výrobce. Jinak xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a heterologního xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx v pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 sekund xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování na xxxxxx půdu

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx tuto metodu xxxxxx, proveďte předběžný xxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 jednotek xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte řádně xxxxxxxxxxx selektivní xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Rozlišení X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx konkurenci nebo xxxxxxxx, měl by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí jiného xxxxx.

Xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx lze xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx vysoká. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx desetinné xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx virulentního kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1 Proveďte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx s cílem xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 hodinách xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx s vnitřními xxxxx xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, zcela xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx krátkodobě ve xxxxxxxx xxxx (pH 6–8, bez chlóru) xxx xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) a test patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx i ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx neúspěšné x&xxxx;xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx z obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx obohaceného bujónu (xxxxxxx 2), který xx předem xxxxxxxxx xx sterilních zkumavek xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA může xxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 µl x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit lepších xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF testu xx pozitivní, musí xxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Použijte xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Doporučuje xx xxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx XX nejméně 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx je xx xxxxx, může xxx xxxxxxx proveden xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx vzorky fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx s homologickým kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx zmrazením při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx test, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx prvního xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx sklíčko buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95&xxxx;% etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, fixovaná xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx podložních sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx každého okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Zkoumejte xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet typických xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 × 103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR jako xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, a sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX test xx měl zahrnovat xxxxxxxxxxx negativní kontroly:

—	extraktu xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx kontroly v odděleném xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx budou testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx účely použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

a) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx xxxxxx a umístěte xx termobloku nebo xxxxx lázně x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1&xxxx;xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx roztoku Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchejte xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx fázi do xxxx Eppendorfovy mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15 000 g po xxxx 20 minut xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx sraženinu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx efektivní.

6.2. PCR

6.2.1 Připravte xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR v prostředí, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (viz xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx zdroj XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx směsi XXX místo xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx do xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx testování, a spusťte xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx s 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx amplifikován x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx primerů XXX (dodatek 6).

Pozn.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V multiplexních xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je získán x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx XX test. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními kontrolními xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx referenčního xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se používá x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

7.1.2 Napipetujte 100&xxxx;µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx a rozpusťte xxxxxx xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení.

7.1.4 Odstřeďujte 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49&xxxx;µx) xxxx být uložen xxx xxxxxxx –20 °C xx přidání 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidejte xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Krycí xxxxxxx 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6 Nechte xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (nebo sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) a fixujte nad xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx možné xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) na 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sklíčka (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45 °C.

7.2.6 Sejměte xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx nadbytek xxxxxx inkubací po xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx krátce xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační papír. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Napipetujte 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60 mm).

7.3. Hodnocení XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx nejsou zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, neberte x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření xx xxxxxxxxx kontaminaci musí xxx xxxx opakován. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx pravděpodobné, že x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx volitelný xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx ve vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2 A a B). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx používají xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test XXXXX (Xxxxxxxx Smith xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X na 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X nebo xxxx xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx jamky třikrát xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5 minut.

5)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proti X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx komerčních protilátek xxxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte absorbanci xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx ze vzorku xx xxxxxxx dvou xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX) a přidejte 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx stát 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx v substrátovém pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxx extraktu xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 až 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx s rovnocennou citlivostí xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx v dodatku 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary s rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

Rozdělte 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx rostlinu mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx list.

Sterilním xxxxxxxxx udělejte příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, abyste xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci.

9.4 Nechte xxxx testovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, abyste xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx a negativní kontrolní xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx komory xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx z různých xxxxxx xx dobu inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník nebo xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx mohli přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx podezřelé xxxxx kultury (bod VI.B).

9.6 Jestliže xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, který xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, proveďte zřeďovací xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte xxxxxxx xxxxx kultury s podezřením xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx mohou být x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml v pufru XX (dodatek 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1 Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3 Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly.

4. Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxx vody (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2 Ohřívejte 100&xxxx;µx xxxxxxx suspense v uzavřených xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx vařící vodní xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů specifických xxx R. solanacearum (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Pastrik a Maiss (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Boudazin xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx jako profil xxxxxxxxx kontroly. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx z následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace tří xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx půda pro xxxx biovaru xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx lze úspěšně xxxxxxx očkováním xx xxxxx půdy x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx destičky x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx několikerými xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et al., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (viz xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. U čistých xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx selektivní xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx teplotě 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx do optimalizace x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Veneto Xxxxx Xxxxxxxxxx per x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X a přidejte xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná půda XXXX (Englebrecht, 1994 xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco)	1,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx a sterilujte v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilizovaný xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxxxx konečnou xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Sigma)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx P1004)	600 000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma B-0125)	1 250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25 mg)/l
Chloramfenikol (Xxxxx X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxx ovlivnit xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V takovém xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to však xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx o 1–2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx s médiem xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže živné xxxx by měla xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx přípravu xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx pepton	5 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4	0,25 g
NaNO3	0,25 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx buď x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (CFBP), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních kultur XXX R. solanacearum

Kód NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx původu	Biovar
NCPPB 4153	6	XXXX 4582, Pr 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	CFBP 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Nizozemsko	2
NCPPB 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	XXXX 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	IVIA-1632-2	Španělsko	2
NCPPB 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, R568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	CFBP 4615, X297/349, CIP121, CMIb2861	Srí Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx cepacia (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. (4)
NCPPB 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Burkholderia xxxxxxx (4)
NCPPB 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Banana Xxxxx Xxxxxxx Bacterium &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	CFBP 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (5)
NCPPB 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx standardizovaný kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx možné xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 až 104 x&xxxx;104 až 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) s 106 xxxxxxx xx 1 ml x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx půdě x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX fosfátovém xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 cfu xx 1 ml. Xxxxxxx xx jí dosáhne xxxxx zakalenou suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx z pupkových xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxx, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracujte pupkové xxxxx výše uvedeným xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx R. solanacearum xx první mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100 µl xx xxxxxxxxxx 1,5 ml xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx účely xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx DNA z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX a FISH proveďte xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx u každé xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX, organismus X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx rok.

1. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx pomocné xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Tento xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění extraktů x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx po xxxxxx zahuštění xx xxxxx xxxxxx odstředěním.

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Tween 20 do xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx tekutina/roztok xx xxxxxxxx sklíčko ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Leica) xxxx dostupné xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx testu XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	6,36 g
NaHCO₃	11,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

3.3 PBS-Tween

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Tween 20	5 ml
Destilovaná xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx xxxxxxx připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Tween 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx mléko	0,5 g
Destilovaná voda	doplnit xx 100 ml

3.5 Roztok pro xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Diethanolamin	97 ml
Destilovaná xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1 l destilovanou xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx a zkontrolujte xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

4.3 PBS-Tween

10X PBS	50 ml
10 % Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Diethanolamin	100 ml
Destilovaná xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Stanovení xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v 1 okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx pole xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx typu okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx okénku
a	F	=	faktor xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx ukázat xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxx vybraných xxxxxxxxxxxxx kmenů (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx Y-2	5′-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx při 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 sekund xxx 94&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	30 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

1.4 Restrikční enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací z R. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Pastrika a Maisse (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1	5′-xxx cga xxx xxx xxx ggg x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2	5′-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2 Reakční směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální koncentrace
Sterilní XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Původně optimalizovaná xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

2.4 Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifické xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 bp.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX AGT XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxx primer XX-5-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG XXX XXX XXX TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 mM MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

3.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx vytvářejí xxxxxxxx polymorfizsmus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX GCA XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro biovary 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 minut xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Bsm X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	50 ml

5.2 Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -EDTA (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Invitrogen xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované xxxxxxxxx xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx agg xxx caa gct xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct gcc xxx xxx agg xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: USTALOVAČ XX PARAFORMALDEHYD, KTERÝ XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i)	Zahřejte 9&xxxx;xx ultračisté vody (XXX) na zhruba 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpouští po xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX a míchání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxxxxxx papírky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx na 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX JE VELMI XXXXXXXX, A PROTO XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 nebo XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx použití xxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Zasejte xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx listy (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a rajčete xx měly být xxxx naočkováním pěstovány xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx xxxx delší
Teplota	denní: 21 až 24&xxxx;°X xxxxx: 14 až 18 °C
Vhodná xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Krumholz xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Barlow, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, J.K. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx of detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx tuber xxxxxxxx. EPPO Bulletin 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Nydegger, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and specificity. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, A. 1954. The relationship xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Klement X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15.	Lelliott, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16.	Lopez, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Specific genomic xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, V. Krishnapillai, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Pac. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16S-23S ribosomal xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Plant Pathology 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification of xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Xxxxx, xxx M.J. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, Pseudomonas xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, M. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.	Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Xxx, L.I., Xxxxx, M. 1996. Analysiss xx the phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Burkholderia solanacearum, Xxxxxxxxxxx syzygii, and xxx blood xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx on 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Western Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, RC-PFGE xxx rep-PCR. In: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, D.E. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx flourogenic 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot of xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, kdy xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) provedený(é) xx xxxxxxxx rostlinném xxxxxxxxx xxxxx vhodných xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx nebo vyvrácení xxxxxxxx(x) uvedenou xxxxxxx xx xxxxx xxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx hlízy, a pokud xxxxx, všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx dokud xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jinou xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxx nebo xxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu x) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx pocházejí xx stejného xxxxxx xxxx rostliny xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx byla zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx které xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx produkce, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bramboru nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx produkce, xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na xxxxx xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx z jakéhokoli zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchová xxxx ze zdroje, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx zamořená xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx jsou nebo xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx místa (xxxx) produkce xxxx xxxxx xxxxxxxxx pole xxxx místo (místa) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx mají být xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) prohlášeno xx xxxxxxxx,

—	xxxxx (místa) produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx společného xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pěstovaný x&xxxx;xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx období, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) byl xxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxxxx podle xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jejich xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx mohly xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx označeným xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx xxx skladován x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx výsledek xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx rostlinnému xxxxxxxxx, resp. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vazby xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx provedena xxxxxx xxxxxxxxx pro ověření xxxxxxxxx zamořených x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx, která xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, u které xx xxxxxxxxx zamoření.

Prvky, jež xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx možného xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), zahrnují:

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx)

—	xxxxxxxx k jiným xxxxxx produkce, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxx voda, jestliže xx nebo xxxx xxxxxx odtoku povrchové xxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (označených) xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

ii)

v případech xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové xxxx xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxx xxxxx(x) xx xxxxx povrchovou xxxxx xxxxx(x) být zaplaveno(a),

—	každá xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx objekty, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx a průtoku xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec čl. 5 odst. 2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, co xx potvrzena přítomnost xxxxxxxxx laboratorním testováním xxxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x brambor:

a)	jméno xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx kategorii xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx partie x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský stát, xx xxxxxx xx xxxxxx potvrdil, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x jiných xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx oznámí xxxxxx členskému státu (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 3, xxxx.:

x)	xxxxx odrůdy xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx případně registrační xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx všech šetření x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx zamoření včetně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx odběru xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx s udáním xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, včetně počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx zdroje, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vodního xxxxxxx a rozsahu označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx partii xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx ii) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, xxx. X.2.2 směrnice 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (ohnisek), jak xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx jako xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx na xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. průsakem xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx kontaktem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx být xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zemědělské xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xx zajištěno, xx neexistuje xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředků,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx oznamují Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedenými možnostmi xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx VII této xxxxxxxx.

Xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 6 odst. 2 pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (států), xxx xxxxxx xxxxxxxxx informování xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx souhlasem příslušného xxxxxxxx subjektu xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení k odstraňování xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—	xxxxx použity xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, již xxxxxxxx xxx přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx místě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu. S bramborami xxxxxxxx k pěstování xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx očistě x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx zpracování a pro xxxxxx a okamžitou xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx tohoto organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx partie včetně xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx způsoby xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx příslušných úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) a písm. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx byla xxxxx xxxxxxxx prohlášena za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na poli xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a rajčat, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx organismu:

—	jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Brassica, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, že xxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nejméně xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx před pěstováním

—	v xxxxxxx brambor xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupem xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx sklizňovém xxxxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, bude xxxxxxxxx xxxxxx šetření xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx třech letech xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zjištěného xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx jako stálé xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx trav x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších dvou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx na xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete xxxx jiné planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxx prohlídek xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx brambor xxxx xxxxxxxx produkce xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx orgány xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a ostatními xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo nebo xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx bramborových xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx pěstovat xxxxxxxx xxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx produkci plodů,

—

ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx prohlášeného xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx pod úředním xxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx buď xx xxxxx xxxx xx produkci konzumních xxxxxxx,

—

x případě rajčete xxxxx být pěstovány xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx vyprodukovaných z výše xxxxxxxxx semen a vypěstovaných xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete,

—

nejméně ve xxxxxx pěstitelském roce xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové brambory xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx certifikovaných xxxxxxxxx brambor buď xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo konzumních xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx pěstovány xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pěstované xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených rostlin, x&xxxx;xx buďto xx xxxxxxxx sadby xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxx předchozích xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx pro odstranění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx prohlídky xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx po xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx metod, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx zavedeny patřičné xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx xxxxxx těchto xxxxxxxx jako prevence xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx ii), xxx xx možné xxxxx vyměnit pěstební xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxx bramboru, rostliny xxxxxxxx nebo osivo xxxxxxxx ani jiné xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxx rostlin x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx dané xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx nebyl následně xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat xx xxxxxxxxxxx orgánů,

—	pro xxxxxxxx brambor, xxxx xxxxxxx úředně certifikované xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx rajčat xxxx xxx tato produkce xxxxxxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx, xxxxx xxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, včetně zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené xxxx, xxxx budou dotčena xxxxxxxxxx xxxxxxx v bodu 4.1, xxxxxxx státy:

a)	musí zajistit, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx xx produkce xxxxxxx nebo rajčat, xxxxxx vyčištěna a dezinfikována xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

ihned x&xxxx;xxxxxxx xx tři pěstitelské xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, skladují hlízy xxxxxxxx xxxx rajčata xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, xxxxx smluvně xxxxxxxxx stroje pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx všechny kultury xxxxxxxx používána xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx vypěstovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iii), xxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx a případně xxxxxxxxxx xxxx manipulací xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxxx z výše uvedených xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx v rámci xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx voda prohlášena xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) nebo je xxxxxxxxxx xx jeden xx zdrojů xxxxxxx xxxxxx organismu xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx vzorků xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx příslušných xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx případy,

—

zavedou xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zavlažování a postřiku, xxxxxx xxxxxx používání xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu a jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin organismu, xxx xx to xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného každoročního xxxxxxxx a prohlášení (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx orgány xxxxxxxxx, xx povrchová xxxx xxxx nadále xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx zákaz, xxxx xxx povoleno, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxxxxx xxxx použity xxxxxx schválené xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx odpadu, zavedou xx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z průmyslového xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem;

c)	případně xxxxxxx xxxxxxx xxx obnovu xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v rámci xxxxxxxxxxx xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně xxxxxxxxx xxxxxx odstraňování odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx splňovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření organismu:

bramborový x&xxxx;xxxxxxxxx odpad (včetně xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) a jiný xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiných xxxxxxxx) xx odstraní xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělské xxxx xxxx kontaktem s vodními xxxxxx, xxx xx xxxxx být xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxxxx xxxxxxx žádné zjistitelné xxxxxx šíření organismu; xxxx opatření xxxx xxx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: před likvidací xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx nebo sedimentaci xx účelem odstranění xxxxxx pevných částic. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx být odstraněny xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx dobu xxxxxxx 30 minut před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxxxx do xxxxx xx zemědělskou půdou xxxx vodními xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx k zavlažování xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Komisi.

Možnosti xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx také xx xxxxx spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

“

(1) Viz Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (IF x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze kterého xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx podobnou velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx při použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reakce xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Research XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Elmer XxxxxXxx a pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metod izolace XXX může xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizace xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.