EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/ES

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou xx xxxx přílohy XX xx XXX směrnice Xxxx 98/57/ES o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Yabuuchi xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 98/57/XX xx dne 20. xxxxxxxx 1998 o ochraně xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. (1), x zejména xx článek 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x významných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx x rajčata xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx x při xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx za účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx získané xxx ochraně proti xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Pokud xxx x postupy xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx metoda fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (XXX) i xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx postupů xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx brambor, ve xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx ochranných xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx zlepšené předpisy xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků, xxx xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx oblastí, xxxxxxxx, která je xxxxx xxxxxxx v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx xxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx rajče, s ohledem xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu.

(8)	Opatření stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru.

PŘIJALA XXXX SMĚRNICI:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této směrnice.

Xxxxxx 2

1. Členské xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x zveřejní xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Komisi xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx tabulku xxxx těmito předpisy x xxxxx směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA XXXXX PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, rajčete a některých xxxxxxx hostitelských rostlin,

ii)	zjištění Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky.
	3.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody pro xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a v rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx vodě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě
	2.	Metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx výronu xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx půdy
			4.2	Postup obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx půdy xxx xxxxxxx a pěstování X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Pufry xxx xxxxxxxxx postupy
		Dodatek 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Validovaná xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské podmínky xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX PRINCIPY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, existuje podezření xx infekci R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx pro hlízy x&xxxx;xxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, v případě xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je R. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k tomu, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX A V ROSTLINÁCH BRAMBORU, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX ROSTLINÁCH X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx vadnutí zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a mléčný xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx vody xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx překrojit xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx a podélně xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx žlutého až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx hnědým a odumření xx může xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx vytékat bakteriální xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx postižená místa, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnilob xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2 Příznaky x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx je povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) se během xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro patogena (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx stonku xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů. Xx možné pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx xx spodu xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum dulcamara x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. u rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x&xxxx;xx i při xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Použijte xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx platných testů:

2.1 Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx súdánskou xxxxx (Viz xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx testy jsou xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx FISH (xxx oddíl VI.A.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx vrstvu xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx řadu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µl suspenze x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx krémově xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Avirulentní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. solanacearum v podezřelých xxxxxxxxx xxxx popsány x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody xxx zjištění a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx popsaný xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné ošetření xxxx přípravou xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech populací X. solanacearum.

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx na vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný (xxxx xxxx vyžadován) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, když je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden xxxx PCR xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, tak aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx stranou xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, mělo by xxx provedeno xxxxxxxx xxxxxxxxx takové hlízy xx řezu xxxxx xx pupkovém konci Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke zkorkovatění (xxxxxxxxxx) a potom xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx nádob na jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx přidání xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z pupkových xxxxx zpracujte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx xxx každý xxxxxx použili xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xxxxxxxx přenosu XXX xx&xxxx;xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx přístroji. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx zkumavek xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx xxxxxxx odstřeďováním (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4 Zahustěte bakteriální xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx supernatant, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx sterilní xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly uchovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx sklíčka IF x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

2.1.1 Do xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1–2 xx xxxxxx kousky xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx z paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx skleníku: čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postranní xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Odeberte xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami odeberte 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad úrovní xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 rostlin na 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx u víceleté Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx vodních tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X této xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% etanolem x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxx zpracujte drcením xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uložte xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xx 24 hodin.

2.1.3 Po usazení, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý nebo xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx najdete v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx v tomto oddíle xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx může xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx nutné zmínit, xx xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx ovlivňována xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxxxxx je xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx bráno x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem k tomu, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx úspěšně x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx toku, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

2.1.1 Na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní vody xx zpracování x&xxxx;xxxxxxx xxxx odeberte vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3 Je-li xxxxxxx, může být xxxxxxxxx koncentrace bakteriální xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 ml peletového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx vody, které xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje detekci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

2. Metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx detekční xxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx při sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx třeba xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx infikována, ale x&xxxx;xxx xxxxxxx této xxxxxx unikne xxxxx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7 m). Je-li xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1 kg x&xxxx;xxxx reprezentujících celkový xxxxx testovaného kalu. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10–20 g sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. SOLANACEARUM

A. DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. solanacearum xx stoncích vadnoucích xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx země. Xxxxxxx xxx xxxxxx do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte roztěr xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx preparáty xxx xxxxxxx xxxxx xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx mikroskopická xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx roztokem nilské xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1 000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx v procházejícím normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zda xx morfologie buněk xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a krátce opláchněte xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx nezbytná bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx roztokem safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx modročerné zbarvení XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo v extraktech x&xxxx;xxxxxx s příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky suspense xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx se x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 sekund xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte řádně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, kolonie R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx morfologii, jestliže Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx konkurenci nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx lze xxxxxxxx, xx citlivost detekce xxxxx metodou bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu xxx teplotě od –68 do –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx se vyhnuli xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 misku xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx živné xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx očkujte metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6–8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxxx nebo dlouhodobě xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X xxxx lyofilizované.

4.1.5 Proveďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx xxxxxx xxxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100 µl v 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde k optimální xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají všechna xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovních xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C v glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx xxxxx referenčním xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx s průměrem nejméně 6&xxxx;xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test vzorků.

5.1 Připravte xxxxxxx k testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6 mm – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx pelety:

Připravte desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx teplotě nebo xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava sklíčka xx test podle xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xx xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte pufrem XX. Umyjte xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx kapiček, které xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Množství konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Zkoumejte xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. solanacearum.

5.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx odhadněte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx povinně xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza úplná.

Využití xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. solanacearum xx 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx laboranty v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx xxxx XXX extrahovanou z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx vzorků xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla optimalizována xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx lyzátového pufru (100 mM XxXx, 10 mM Xxxx-XXx (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx termobloku nebo xxxxx xxxxx s teplotou 95&xxxx;°X xx 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx lysozymu (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx roztoku Xxxx DNA® A (Invitrogen), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po dobu 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx použití xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx se prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v prostředí, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx možno, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12 µl směsi xxxxxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx u žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x&xxxx;xxxxxx xxxxx primerů XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx podezření xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx pozitivní kontroly X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx výsledky. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxx suspenzi obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml X. solanacearum biovar 2 (např. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Připravte samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolními xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, je xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2 Napipetujte 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx na 7 000 g.

7.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7 000 g, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx přidání 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, odstraňte etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Krycí xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X) a fixujte nad xxxxxxxx.

X této fázi xx možné xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx a v suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx etanolové xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx komoru přikrytím xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx nebo filtračním xxxxxxx nasáklým hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx necháte xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4 Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4 okénka, x&xxxx;xx xxx, aby xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Umístěte xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx ve vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45 °C.

7.2.6 Sejměte xxxxx xxxxxxx a umístěte xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Napipetujte 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx každého xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx odchylné. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, pozorujte nejméně 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx nastat x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxx xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx z bramborových xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx než x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx XXXX testu xxxx platné, xxxxx xxxx při použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky pozorovány xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxx. Nutné je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně než 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. solanacearum, jestliže xxxx xxxx typické xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8. Testy ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx testu, xxx může se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní a suspenzi xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx v solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A a B). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX R. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx může x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx přes xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx roztok x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5 minut.

5)	Připravte vhodné xxxxxx protilátek proti X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 µl xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx nebo 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190&xxxx;µx xxxxxxxx ze vzorku xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxxx rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) a přidejte 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Připravte roztok 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx v substrátovém xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Inkubujte v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) z jamek xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx xxx dvojnásobek XX u negativního kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné hodnoty XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx OH ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou menší xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx test nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx tvořících kolonie X. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx rostlin citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou citlivostí xxxxx testovací laboratoře) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů u každého xxxxxx. Podrobnosti pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx kultivary x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx rozvinu třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx jsou méně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx se xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

Rozdělte 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx méně než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx a první list.

Sterilním xxxxxxxxx udělejte příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

9.3 Stejnou xxxxxxxxx nainokulujte 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, abyste xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z různých vzorků xx xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx činnostech věnujte xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxxx a/nebo krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6 Jestliže xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s podezřením xx X. solanacearum (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

B. IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v pufru XX (dodatek 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3 Použijte XX metodu (oddíl VI.A.5).

2.4 Test XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr IF xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1 Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 ml x&xxxx;1X XXX (dodatek 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX je pozitivní, xxxxxxxx hodnota xxxxxxxx xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk xx 1&xxxx;xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx v uzavřených xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Pastrik x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Weller et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200 µl xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s využitím primerů XXX, BOX x&xxxx;XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Van xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x&xxxx;2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Cook et al., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx xx typické xxxxxxx mělo nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se po xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx xx selektivní xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx per x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx de Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
Instituto Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 minut.

Sacharózopeptonový xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Ochlaďte na 50&xxxx;°X a přidejte xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Englebrecht, 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50 °C x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, abyste získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx P1004)	600 000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Sigma X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5 mg)/l
2,3,5-trifenyltetrazolium xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx případě xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, ale xxxx to xxxx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx déle x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx Bacto-Agar.

3.	Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx a skladujte roztoky xxxxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X v temnu a spotřebujte xx 1 měsíce.

Misky s médiem xx měly xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx přílišnému xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 28 °C objeví xxxxxxx kolonie.

c) Validované xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx přípravu xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx půdu XXXX, xxx vynechte Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx pro živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), Ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Pr 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	CFBP 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Port 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	B3B	Německo	2
NCPPB 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, GONg7	Kostarika	1
NCPPB 4028	43	XXXX 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, X568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	CFBP 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	CFBP 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx zaručena xxxxx v případě, že xxxxxxxxx z původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2 Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

Kód NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	CFBP 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx cepacia (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Burkholderia xxxxxxx (4)
NCPPB 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Burkholderia plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Banana Xxxxx Xxxxxxx Bacterium &xxxx;(4) (5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 XXX X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx anthropi (4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	CFBP 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx je možné xxxxxx ze xxxxxx xxxxxx NCPPB.

Mražené sušené xxxxxx bramborového extraktu xx 200 zdravých xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 x&xxxx;104 až 106 buněk xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 buňkami xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx sérologických testů.

B. Příprava xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx pletiv PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2&xxxx;(xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx půdě a suspendujte x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 cfu xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy s bílou xxxxxxx, o které xxxx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx uvedeným xxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx X. solanacearum xx první xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx pozitivní vzorky. Xxxxx nekontaminované mikrozkumavky xxxxx použity xxxx xxxxxxxxx negativní vzorky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100 µl xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx téhož xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx testovacích xxxxxx.

Xxx účely testů XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx patogenity xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx testů XX, XXXX x&xxxx;XXX, organismus X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxxxx xxx uchovány xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterií x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx prostředek (7)	0,5 g
Silikonový xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (PVP-40)	Váže xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx extraktů x&xxxx;xxxxxxxx pupkových xxxxx xxxx bramboru xx xxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

2.2 Pufr XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Tween 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx testu ELISA

3.1 Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃	6,36 g
NaHCO₃	11,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné jako xxxxxxxxxxx přidat siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

NaCl	80,0 g
KH₂PO₄	2,0 g
Na₂HPO₄.12H₂O	29,0 g
KCl	2,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

3.3 PBS-Tween

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (musí xxx čerstvě připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44)	2,0 g
10 % Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx mléko	0,5 g
Destilovaná xxxx	xxxxxxx xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx HCl xxxxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx a zkontrolujte xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX a FISH pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (liší xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxx okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování by xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. solanacearum na 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx ukázat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx panelu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX GCC XXX XXX AGG XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx dNTP (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx OLI-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5U/µl) (8)	0,1 µl	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 sekund xxx 94&xxxx;°X (denaturace templátové XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	10 xxxxx xxx 72 °C (závěrečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2	5′-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s enzymem Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 bp.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Pastrik xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX AAC XXX XXX XXX XXX CAT XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3′
Přímý xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX XXX ACG XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza kopie)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací z DNA X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfizsmus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum:

s Rs-1-F/Rs-1-R = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (frakce V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Primer Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický proces xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bsm X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	50 ml

5.2 Nanášecí pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), pH 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxx xx 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx trhu (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované xxxxxxxxx xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx OLI-1-CY3 5′-ggc xxx xxx xxx xxx xxx ccc-3′

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct xxx xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, KTERÝ XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx ultračisté xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxx míchačce.

ii)	Upravte pH xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1N XXx. Zkontrolujte xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný před xxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx filtrací x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx podložní xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx dvakrát) se xxxxxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, A PROTO POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx čistá voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda XXX 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Sonda XXX-1 xxxx OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx množství (μl)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Pozn.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx oligosondami x&xxxx;xxxxx při teplotě –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx lilku (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx listy (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx s následujícími xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx nebo delší
Teplota	denní: 21 až 24&xxxx;°X xxxxx: 14 až 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

LITERATURA

1.	Amann, R.I., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx studies xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. Xxxxxxxx Journal xx xxx European Communities X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, G., X.X. Le Roux, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Sequeira, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection of xxxxxxxxxxx fragment length xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, J., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Modification of x semi-selective xxxxxx xxx xxx isolation xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx biovars xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx and specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12.	Janse, X.X. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx diseases xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16.	Lopez, X.X., Xxxxxx, M.T., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx xxxxxxxxx detection xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx et xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx with repetitive xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx and Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., F. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxx. 1997. X novel xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx chain reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx analysis xxx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Laboratory guide xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, J.P.W. Xxxxx, xxx M.J. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of oligonucleotide xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, J.J., Offord, X.X., Holderness, M. and Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 in Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx organismu, kdy xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) xxxxxxxxx(x) xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx vzorkované xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. imunofluorescenční sklíčka a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx ukončen.

Uschování xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného materiálu xxxxxxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxx nebo xxxxxxx, xxx xx to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx se xxxxxxx rostoucí nebo xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx byla xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx kontrola x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx organismu,

—	na xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx bylo xxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx produkce, xxx dochází xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx používá povrchová xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx podezření xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx existuje xxxxxxxxx xx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx nebo xxxxx (xxxx) xxxxxxxx nebo xxxxx zaplavila xxxx xxxx xxxxx (místa) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (místa) produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xx kterých xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx používají společně xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx materiál pěstovaný x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx produkce xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, ve xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx kontejnery, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a všechny xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	veškerý xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byl skladován x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx očistou xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx výsledek xxxxxxx a testování xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx rodičovským klonovým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx rostlinnému xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx ty xxxxxxxx, xxxxx vyrostly ze xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx pravděpodobným. Xxxx xxx provedena xxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonálně xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, kde xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx voda, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, u které se xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx možného xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xxx), zahrnují:

v případech xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx k jiným xxxxxx xxxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál,

—	společnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxx, xxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx nebo bylo xxxxxx odtoku xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) produkce, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx iv), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, na nichž xx uvedený rostlinný xxxxxxxx pěstuje x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) by xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací xxxxx, xxxxx xx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx zamořenou,

—

vodní xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx a průtoku xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx poté, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x brambor:

a)	jméno odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x rajčat xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx xxxx, xx kterém xx xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx riziko xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx odrůdy dané xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx a adresu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx doručení partie xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx partie brambor xxxx rajčat;

e)	kopii xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx toto:

po xxxxxxxxx xxxxx šetření x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx potvrzení xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx zdroji (zdrojích) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx partií x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx o vymezení xxxx, včetně xxxxx xxxx produkce, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, včetně xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx každou xxxxxxx xxxx partii xxxxxxx xxxxxxx označenou xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx ii) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx k přepravě, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx X, odd. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxx potvrzeného xxxxxxx (ohnisek), xxx xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená v čl. 6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx následující:

—	použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné úpravě, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do životního xxxxxxxxx, např. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx kontaktem s vodními xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zemědělské půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx s přímým x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a se xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx a jejich odůvodnění xx oznamují Komisi x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedenými možnostmi xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx schválenými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx použití nebo xxxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx členského xxxxx (států), xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx souhlasem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení k odstraňování xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx odrážce, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—

xxxxx použity jako xxxxxxxx xxxxxxxx určené xx xxxxxxxx, již xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením xxx xxxxxxxxx odpadu. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx k pěstování lze xx xxxxxxx místě xxxxxxxxxxx jen odděleně x&xxxx;xx očistě x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx dodávku xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jinými xxxxxxx použití nebo xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení xxxxxxxx xxxxxxxxxx úředním xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx partie včetně xxxxxx a listové tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a s podmínkou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx v čl. 6 odst. 4, xxxxx přijmou xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na xxxx xxxx na jednotce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), tak:

během xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a rajčat, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin organismu xxxxxx rostlin plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x prvním sklizňovém xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx plevelů z čeledi xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující pěstitelské xxxx před pěstováním

—	v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx bramborové xxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx roky, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx roce prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx třech xxxxxx xxx xxxxxxxxx pole xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx stálé xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx nebo intenzivní xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx porostů trav x&xxxx;xxxxxxxxx pěstováním xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších dvou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx riziko xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x případě brambor xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx rostliny rajčete, xxxxx testovány xxxxxxxx xxxxx přílohy XX;

xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx produkce prohlášeného xx xxxxxxxx a s podmínkou, xx xxxxxxxxx orgány xx přesvědčily, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx označeném xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bramborové hlízy xxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx bramborových xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx pěstovat xxxxxxxx xxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx následuje xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx buď xx sadbu xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx ze semen, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx jsou rozmnožovány xxxxxxxxxxx, pěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx pouze úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pěstované xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a jiných xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx období xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx postupem podle xxxxxxx II;

ihned xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a skladovací zařízení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xxxxxx organismu;

na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nebo osivo xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a osiva xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontrolovaná opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého hostitelského xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx dané xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx xxxx xxxxxx xx příslušných orgánů,

—	pro xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx brambor xxxx xxxx-xxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů,

—	u xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxx produkce xxxxxxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxx rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vypěstovaných xxx xxxxxx kontrolou,

—	budou xxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx budou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikována xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

ihned a nejméně xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx prohlášení o zamoření:

ba)

jestliže xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx kterých se xxxxxxx, skladují hlízy xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, spolu xx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx stroje xxx xxxxx xxxxxxxx brambor xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx xxxx byla xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx vypěstovaná pod xxxxxx kontrolou x&xxxx;xxx xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx vypěstovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx zařazených xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx po sklizni xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx v zóně xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) nebo xx xxxxxxxxxx xx jeden xx zdrojů možného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

provádí xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle příslušných xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a jiné případy,

—

zavedou xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx zákazu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx. Tento xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a prohlášení (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx orgány xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx nadále xxxxxxxx. Použití xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxxxxx jsou použity xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny výpusti xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ve kterých xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v rámci xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx přílohy VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx odpad související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, kamenů a jiných xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxx organismu xx xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx zemědělské půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, jež xx xxxxx být používány xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx musí xxx přemístěn přímo xx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx izolace, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx musí xxx oznámena Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům,

ii)

tekutý xxxxx: před xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx dobu alespoň 30 xxxxx před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx jiným úředně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx zdroji, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx způsobu ošetření xx oznamují xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Komisi.

Možnosti xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx také xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4) Potencionální xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (IF x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx podobnou velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx primerů XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx znám pouze x&xxxx;xxxxxx v Indonésii.

(7) Pro xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Research XXX 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Polymerace.

Perkin Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Taq xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Použití xxxxxxxxx xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxx izolace XXX může xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.