EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou se xxxx xxxxxxx XX xx VII směrnice Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

s xxxxxxx xx směrnici Rady 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), x xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z významných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rajčete (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, která mají xxx přijata x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx výskytu x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx x při zjištění xxxxxxx xx zabránilo xxxx rozšíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Od xx xxxx xxxxx k xxxxxxxxxx pokroku v poznatcích x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx zjišťování x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx tohoto xxxxxx se jeví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx x postupy xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xx zapracována xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx technických xxxxx současných xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx a xxxx.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxx ochranných xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx zajištěno xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, prvky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx označených xxxx xxxxxxxx x x xxxxx vymezených oblastí. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx předpisy xxx xxxxx, x xxxxxxx xx význam xxxx xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx organismu.

(8)	Opatření stanovená xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx s touto xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Komisi xxxxx těchto předpisů x srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x touto směrnicí.

Tyto xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 14. xxxxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

člen Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, s. 1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx hniloby v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících příznaky.
	3.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody pro xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění a identifikaci X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx výronu xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX test)
			6.1	Metody xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx ELISA
			b)	DASI XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční a enzymatický xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné půdy xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. solanacearum
		Dodatek 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy
		Dodatek 5		Xxxxxxxxx xxxxxx kontaminace xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx testovaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, které se xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx odpadu a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajišťovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a musí být xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx selektivní xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující k tomu, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 buněk/ml resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

ODDÍL II

PODROBNÉ XXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX SOLANACEARUM X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX JINÝCH XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. V raných xxxxxx vadnutí zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx hnědý a mléčný xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x&xxxx;xxxxxxx svazků táhnou xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx a podélně xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx žlutého xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, xx xxxxxxx po několika xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Později xx xxxxx zbarvení stává xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx vytékat bakteriální xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx půdy. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx postižená místa, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2 Příznaky x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx kolem 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx pro patogena (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx není xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, která xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx spodní části xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxx platných xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nilskou xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), testy XXXXX (viz oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx rostliny bramboru, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx je v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připravte případně xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx inkubovat 2–6 xxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, často s charakteristickými xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx krémově bílé.

—	U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující výskyt X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz

—	Validace xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx být xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xxxxxxxx, Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

a)	Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx vhodné desinfekční xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Nechte xxxxx xxxxxxxx na vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (není xxxx vyžadován) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích příliš xxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxx proveden xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx xxxx xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxxxxx v chladu (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny hlízy xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx nejdéle 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační třepačce (50–100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X nebo 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo drcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx každý xxxxxx použili čerstvě xxxxxxxxxxx nože (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX na nádobách xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. U testu XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedno použití x&xxxx;xxxxxxx zkumavek xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxxxx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), filtr xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4 Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním, 7 000 g po xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. solanacearum, 500&xxxx;µx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To xxxxx xxx xxxxxxx IF x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx použít xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx by xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx nádoby xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx xxxxxx dlouhý 1&xxxx;xx z paty každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx země.

Rostliny z pole xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx odeberte xxxxxxxxxxxx postranní výhonek x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx uříznutým xxxx nad xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx každého stonku xxxx nad xxxxxx xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě xxxxxxxx 1–2 xx díly xx&xxxx;xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx o počtu nejméně 10 xxxxxxx na 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, ačkoli xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří plevelné xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Pelargonium xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Cerastium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Tussilago xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxx: X této fázi xx možné provést xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (zbarvení cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx stonku x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte části xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uložte xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má trvat 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xxx provést filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxx stejné xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhý díl xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) pro případné xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx a rovněž může xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx zmínit, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Zatímco níže xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx v odpadní xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx citlivosti testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při použití x&xxxx;xxxxxxxxx mapování v odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu účinky xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx toku, xxxxxx xx vyhnuli xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx zpracování a odpadní xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx místo, z nichž xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí vzorky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx nejméně 3 vzorkovací xxxxx na každé 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) a testujte xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro velké xxxxxx vody, které xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků odpadní xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx zpracování xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x&xxxx;xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx třeba xxxx v úvahu omezenou xxxxxxxxx tohoto testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx mělo xxxxx standardními principy xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7 m). Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvyšte xxxxx xxxxxxxx xxxx na 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Před xxxxxxxxxx uchovejte xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2 Rozptylte xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxxxx xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Ponořte xxx xxxxxx do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX nebo XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB negativním xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx rychle xxx plamenem, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx mikroskopická xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx nilskou modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx opláchněte xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× s použitím xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, zda xx xxxxxx xx XXX granulích jasně xxxxxxxx fluorescence. Xxxx xxxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3 % xxxxxxxx súdánské xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu a inkubujte 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a krátce opláchněte xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx krátce do xxxxxx a vysajte xxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr mikroskopem x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) se řiďte xxxxxxxxxxx výrobce. Jinak xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky a bakteriálního xxxxx (přibližně 5&xxxx;µx xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx se x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 sekund xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živnou xxxx, např. XXXX (xx znění Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx vzorek otestován xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx citlivost detekce xxxxx metodou xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx však použitelná x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 do –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k testování.

U každé xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vhodnou xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3 dnech xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, zcela xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx částečně xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu, xxxxxx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx (pH 6–8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx identifikaci xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx R. solanacearum xxxx být xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx izolace xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx xxxxxx do 10&xxxx;xx obohaceného bujónu (xxxxxxx 2), který xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 µl v 1,0 ml xxxxxxxxx živné xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx zacházejte xxxx způsobem jako xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx FISH. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test a je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx protilátek R. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Doporučuje xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovních xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku odstraněn xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxx vzorky xxxxxxxx xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx možností xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

5.1 Připravte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího okénka xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety v ředění 1/100 do prvního xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének v řadě. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx pelety:

Připravte desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx množství (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95&xxxx;% etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx xxxxxxx, fixovaná xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

5.3 Postup XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx mít 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) a 5.3.i)

	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx navlhčený xxxx papír. Pokryjte xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx počet typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx infikovaný a je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx a je pozitivní, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx R. solanacearum xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx PCR xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxx bez zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx v dodatku 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Tris-HCl (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X na 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl chloroformu x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut xxx teplotě 4 °C, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx byl xxxxxx ve směsi XXX místo xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx optimalizovaný program XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx směsi xxxxxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx vhodný XXX marker, např. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní kontroly. Xxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx lze také xxxxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní kontroly X. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx získán xxxxx xx dvou amplikonů.

V xxxxxxx, že očekávaný xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx IF xxxx. Xxxx xx FISH xxxx provede xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými extrakty, xxx je možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte alikvotní xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a rozpusťte peletu xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx a inkubujte 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení.

7.1.4 Odstřeďujte 7 minut xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající xxxxxx vzorku (49&xxxx;µx) xxxx být xxxxxx xxx teplotě –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, že je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a v suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného boxu xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45 °C po xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx necháte xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4 Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) na xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx o teplotě 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte nadbytek xxxxxx inkubací xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx krátce do XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační papír. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx R. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy všechna xxxxxxx xx várce xxxxxxx pozitivní xxxxx x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx z bramborových hlíz x&xxxx;xxxxx ze stonkových xxxxxx bramboru dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xx xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx xxxxxxx než x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8. Testy XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx kromě testů XX, PCR xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je obohacení x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk na 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovním xxxxxx, které je xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A a B). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test ELISA (Xxxxxxxx Smith xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a promíchejte.

3)	Nakapejte 100&xxxx;µx do každé xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx při teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx poslední xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5 minut.

5)	Připravte vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx komerčních protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx je xxxx předtím (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Nechte inkubovat 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx každé xxxxx. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného alkalickou xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx x-XXX/xx alkalické xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže průměrná xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) z jamek xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX u negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxx extraktu xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX ve xxxxx negativních kontrolních xxxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxxxxxx hodnot x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorcích xxxxxxx, že xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx extrakty, které xxxx xxxxxxxx v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx jsou xxxx xxxxxxx a vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx méně než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx a první xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

9.3 Stejnou xxxxxxxxx nainokulujte 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a peletovým pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx rostliny od xxxxxxxxx xxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx vadnutí z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx přísnou xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxx pozornost tomu, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx škůdců, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx test IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny, který xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx kultury x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx mohou xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je negativní, xxxxxxxx rostliny nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx R. solanacearum.

B. IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrňte xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3 Použijte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx odpovídá titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx ELISA

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx metody xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní kontroly.

4. Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx suspense v uzavřených xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Seal et al. (1993); Pastrik x&xxxx;Xxxxx (2000); Pastrik xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentů jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 buněk xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými pro X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx kyselin (FAP)

6.1 Pěstujte xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx kmeny (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří hexosových xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx po žlutou x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx rozšířen)	Biovar 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s využitím xxxxxxx XXX, BOX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3 Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx k diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X a 2T) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx et al., 1989) a sekvenováním 16S xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx a k potvrzení xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k testování x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete nebo xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (viz xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx až 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s přiměřeným xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx

a) živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx tlakem xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Sacharózopeptonový xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Difco)	5,0 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4.7H2O	0,25 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Ochlaďte xx 50&xxxx;°X a přidejte xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx na litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht, 1994 xx znění Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilizovaný xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Sigma)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx reagencí xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. solanacearum.

Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to však xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx se xxxxx tvořit x&xxxx;1–2 xxx déle x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx Bacto-Agar.

3.	Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu a spotřebujte xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Sacharóza	10 g
Proteázový xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zásobní roztok xxxx pro živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x&xxxx;xxx xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx rostlin (NCPPB), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3.	Francouzská xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), Ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kultur XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	XXXX 4585, 550, EURS21	Turecko	2
NCPPB 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Francie	2
NCPPB 4158	39	XXXX 4608, Port 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	B3B	Německo	2
NCPPB 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	CFBP 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, X568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, SEQ225	Peru	3
NCPPB 3997	47	XXXX 4614, R280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	CFBP 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kmenů xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx z původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2 Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx (4)
NCPPB 4163	52	CFBP 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5)
NCPPB 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 PD 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Burkholderia caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Burkholderia xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) (5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 IPO X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Aureobacterium xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx standardní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx možné xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx NCPPB.

Mražené xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru k negativní xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 103 xx 104 a 104 až 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických x&xxxx;XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx standardy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx rasy 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx půdě x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX fosfátovém xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 cfu xx 1 ml. Obvykle xx jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pěti mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použito xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx 1,5 ml xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro účely xxxxx XXX proveďte xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx testů XX a FISH proveďte xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX, organismus X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a u žádných xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx uchovány xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterií x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx třepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx složky:

	Účel	Množství (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx prostředek (7)	0,5 g
Silikonový xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx odstředěním.

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica) xxxx xxxxxxxx na xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44)	2,0 g
10 % Tween 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx mléko	0,5 g
Destilovaná voda	doplnit xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx upravíme xX xx 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml roztoku.

4. Pufry xxx xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃	1,59 g
NaHCO₃	2,93 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X PBS	50 ml
10 % Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Diethanolamin	100 ml
Destilovaná xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hodnotu xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx na sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer OLI-1	5′-GGG XXX AGC XXX XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx OLI-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 cyklus:	i)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 sekund xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Pastrika x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1	5′-xxx xxx acg xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx xxx aca xxx xxx ttg xx -3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer AmpliTaq x&xxxx;xxxx mohou xxx xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx I po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx fragmenty specifické xxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 bp.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx RS-1-R	5′-CCC XXX XXX XXX AGA XXX X-3′
Xxxxx xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX ACG XXX G-3′
Reverzní xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG ACC XXX TAT XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly PCR 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µM
Taq xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

3.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. solanacearum vytvářejí xxxxxxxx polymorfizsmus délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x&xxxx;xxxxxxx Xxx I nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AAC GAA XXX XXX ATG XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3′
Xxxxxxxx primer Xx-3-X	5′-XXX XXX GCA XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (12)	0,2 µl	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	1 µl	0,4 µX
Xxxxxx Rs-3-R (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 sekund xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. solanacearum xxxxxx primerů Rs-1-F x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bsm X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Produkty XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	50 ml

5.2 Nanášecí pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), xX 8,0

Tris	48,40 g
Ledová xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxx xx 1X.

Rovněž xxxxxxxx na trhu (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované reagencie xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLI-1-CY3 5′-ggc agg xxx caa gct xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct gcc xxx cgt xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX JEDOVATÝ. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (PB; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a případně xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE MĚŘIČ XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací a autoklávováním)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 ng/μl
Sonda XXX-1 xxxx OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx podložní xxxxxxx (xxxxxxxxxx dva xxxxx xxxxxx xxxxxxx) se xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX A UČIŇTE XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Doporučená xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μl)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Pozn.: Xxxxxxxxxxx všechny roztoky xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Přesaďte xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx pěstovány xx skleníku s následujícími xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne	14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

LITERATURA

1.	Amann, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of xxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Le Roux, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx specify xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx potato tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Englebrecht, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx International Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx De Lindo, X. 1990. Variation xx xxxxxxx metabolism xx biovars of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X detection method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx some xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, J.D. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Applied Microbiology 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. The relationship xx xxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Klement X.; Rudolph, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, M.T., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx molecular xxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx et al., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Louws, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx and xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Fulbright, D.W., Xxxxxxxx, C.T. and Xx Bruijn, F.J. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (formerly Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Phytopathology 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X ribosomal xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Laboratory guide xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Young, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, M., Hayward, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx syzygii, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16S xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Der Wolf, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Nijhuis, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 in Western Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Ecological Aspects. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, D.E. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx automated xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx TaqMan xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y) xxxxxxxxx(x) xx uvedeném rostlinném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx metodou xx xxxxx xxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx screeningový(é) xxxx(x), xxxx. imunofluorescenční sklíčka a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jinou xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného materiálu xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného výluhem x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx je xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu.

PŘÍLOHA IV

Prvky xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx nichž se xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, x&xxxx;xxxxxxx byla xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, xxxxx pocházejí xx xxxxxxxx zdroje xxxx xxxxxxxx rajčat, x&xxxx;xxxxxxx byla zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx nebo rajčete, xx které xxxx xxxxxxx úřední xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx produkce, xx kterých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na xxxxx xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

—	na nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx používá povrchová xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxx zamořená organismem xxxx u nichž xxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx zamoření xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx zaplavila xxxx xxxx místo (místa) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx být xxxxxxxxxx při stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx v místě produkce, xxxxx xxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx zamořený xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx pracovní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx společně xxx přímo nebo xxxx společného dodavatele,

—

uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx odrážky xxxx přítomný x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, kdy xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) byl xxxxxxxx na xxxxx xxxxx produkce xxxxx xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx rostlinným materiálem x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxxxxx kontejnery, skladovací xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	veškerý xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx přišel xx styku x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx dezinfekcí,

—

jako výsledek xxxxxxx a testování podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), v případě brambor xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx sesterským xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx ty rostliny, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) prohlášen xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx zamořených x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx, kde se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zaplavených xxxxxxxxxx xxxxx, u které xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, xxx xxxx xxx zohledněny xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx iv)

—	blízkost k jiným xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx pěstuje xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx partií xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx produkce, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx voda, jestliže xx nebo bylo xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (označených) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv), kde xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxx jako zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii):

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, na xxxxx xx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) by xxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx(x) xxx zaplaveno(a),

—	každá xxxxxxxxxx zavodňovací nádrž, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx mají spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx toku x&xxxx;xxxxxxx xxxx prohlášené za xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec čl. 5 odst. 2, xxxxxxxx:

—

xxxxx poté, xx xx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) a případně kategorii xxxxxxx;

—	x rajčat xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx požadavky na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x jiných členských xxxxxxx), ihned xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx odrůdy xxxx xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx a adresu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

d)	velikost xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a kopii xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxx xxxxxxxxx toto:

po xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx případu:

a)	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx provedeného xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx zdroje a možného xxxxxxxxx zamoření včetně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vymezeného xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx a u brambor xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti o určení xxxxxxx zdroje, xxxxxx xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx zásilku xxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 odst. 1 bodu ii) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, xxx. X.2.2 směrnice 2000/29/ES;

h)	jiné xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx týkají potvrzeného xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx případně xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	uložení xx xxxxxx schválené skládce xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, např. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx by xxxxx být xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zemědělské půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx s přímým a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx schválenými xxxxxxxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx neexistuje xxxxx xxxxxxxxxxx riziko šíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx a jejich odůvodnění xx oznamují Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx daného xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx vzájemném informování xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektu xxxxxxxxx xxxxx, v němž se xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, již xxxxxxxx xxx přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx místě x&xxxx;xxxxxxx zařízením pro xxxxxxxxx xxxxxx. S bramborami xxxxxxxx k pěstování xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx jen odděleně x&xxxx;xx očistě x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx jako konzumní xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx a okamžitou dodávku xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením xxx xxxxxxxxx xxxxxx a systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx tohoto xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx včetně xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx organismu, a s podmínkou xxxxxxx souhlasu příslušným xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx provádějí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členských států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx v čl. 6 odst. 4, xxxxx xxxxxxx členské xxxxx v zóně vymezené xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx iv) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx):

xx xxxx xxxx na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx xx), tak:

během xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx a rajčat, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxx organismu,

—	plodiny, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxxxx brambor,

—	v xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po sklizňovém xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx pole xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších dvou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx riziko xxxxxxx xxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx prohlídek xxxxxxxxxxx xxxxxxx dva xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XX;

xx xxxxx ostatní xxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx příslušné xxxxxx xx přesvědčily, že xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxx xxxxxxxx vyloučeno:

—

v pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx nebudou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx pěstovat xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, pouze xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx pěstitelském roce, xxxxx následuje xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx pouze xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 a to xxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxx xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než která xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx brambory xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx brambor buď xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	x případě rajčat xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ze xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx xx produkci xxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském xxxx podle předchozích xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx období xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx a u každého bramborového xxxx xx úředně xxxxxxx sklizené hlízy xxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce:

—	veškerá xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx uvedeno v bodu 3,

—	xxxxx xxxxxxxx patřičné xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx prevence xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx s chráněnou produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx je xxxxx xxxxx vyměnit xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx, rostliny xxxxxxxx xxxx osivo xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a osiva xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx dané xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vybavení, x&xxxx;xxxxx xxxxx následně xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx z testovaných xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo, pokud xxxx xxxxxxxx rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vypěstovaných xxx úřední xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené zóně, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx zajistit, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxx xxxxxxx vybavení x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

ihned x&xxxx;xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx se x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, spolu xx xxxxxxxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx brambor xxxx rajčat,

—

vyžadují, xxx x&xxxx;xxxx zóně xxxx xxx všechny kultury xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx vypěstovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pěstování xxxxxxx xxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin rajčete xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášena xx zamořenou podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) nebo je xxxxxxxxxx za jeden xx xxxxxx možného xxxxxx organismu podle xxxxxxx V bodu 2:

—	xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx průzkum, včetně xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx příslušných xxxxx stanovených v příloze II xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx a jiné xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx používání xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu a jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxx. Xxxxx zákaz xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx výsledků xxxxxxxxx z řečeného každoročního xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) odvoláno, xxxxxxxx xx příslušné xxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxx není nadále xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx zákaz, xxxx xxx povoleno, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny výpusti xxxxxxxx xxxxxx, zavedou xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx kterých xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx obnovu xxxxx porostů xxxxxxxxx xxxxxxx v rámci přiměřeného xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx přílohy VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx jakékoli xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) a jiný xxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se odstraní xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxx organismu xx xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx zemědělské xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xx skládku za xxxxxxxx xxxxxxxx izolace, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxx odpadů,

nebo

—	spálením, nebo

—	jinými xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xxxx xxx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx účelem xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx odstraněny xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60&xxxx;°X uvnitř objemu xx dobu xxxxxxx 30 minut před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx jiným xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx xxxx xxxxxxx zdroji, xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx způsobu xxxxxxxx xx oznamují ostatním xxxxxxxx státům x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této příloze xx xxxxxxx také xx xxxxx spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Lelliott x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4) Potencionální xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (IF x/xxxx ELISA) s polyklonálním xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx očekávaná xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (viz xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx metody.

(8) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Polymerace.

Perkin Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx rovněž xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx koncentracích.

(10) Metoda byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx pupkových xxxxx xxxx bramboru xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx extrakční xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX xxxx vyžadovat xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.