EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/XX

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx přílohy XX xx XXX směrnice Xxxx 98/57/ES x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,

s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. (1), a zejména xx xxxxxx 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x významných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (dále xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 98/57/XX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x rozšíření x xxx zjištění xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od té xxxx xxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x kromě xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx vyžadují přezkoumání xxxxxxxx technických ustanovení xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x postupy xxxxxxxxxx a identifikace, xx xxxxxxxxxxx moderní xxxxxxxx xxxxxx fluorescenční xxxxxxxxxxx (FISH). Xxxxxx xxxx zahrnuta xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (PCR) i xxxxxxxx různých technických xxxxx xxxxxxxxxx postupů xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx, xx xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx o xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx zajištěno vysledování xxxxxxxxx, prvky xxxxxxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, která xx xxxxx provést x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx některé xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx organismu.

(8)	Opatření xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX směrnice 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x srovnávací tabulku xxxx xxxxxx předpisy x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx směrnici xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx určena členským xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX TESTU XXX XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené schéma xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx hniloby a bakteriálního xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vzorcích hlíz xxxxxxxx nevykazujících příznaky.
	3.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx na xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx řetězové xxxxxx (XXX test)
			6.1	Metody xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (XXXX test)
		8.	Testy xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx podílející se xx optimalizaci a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		A)	Komerčně xxxxxxxx standardizovaný kontrolní xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Pufry xxx testovací postupy
		Dodatek 5		Xxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Validovaná xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx podmínky xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadu a za xxxxxxxx příslušných povolení xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx kontaminace xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů provedených xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) a musí se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx selektivní xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx a dále, v případě xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační testy xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

ODDÍL II

PODROBNÉ XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx teplotách během xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx k zotavení. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, ale xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx také x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx a mléčný xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx překrojit napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná podle xxxxxxx žlutého xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx může rozšířit xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce xxxxxxx vně od pupkového xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx postižená xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx sekundární rozvoj xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2 Příznaky u rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx nasycené vzdušné xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů a vadnutí xx xxxxx straně xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °C) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx možné pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx cévního xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx vodivá xxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí rostliny X. xxxxxxxxx, která xx xxxxxx a kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to i při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testů:

2.1 Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx A nebo súdánskou xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx vrstvu xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx z cévních vláken xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx validované selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx inkubovat 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s charakteristickými xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, které jsou xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x&xxxx;xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou popsány x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné metody xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx hlíz bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů před xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden PCR xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup mytí xx vhodný (není xxxx vyžadován) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích příliš xxxxxx xxxx jestliže xx být proveden xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx viditelné xxxxxx xxxxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, mělo by xxx provedeno vizuální xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx konci Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xx měly xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx xxx hlízy xxxxxxxx v chladu (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny hlízy xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx III.

1.1.2 Uložte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx nádob xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx znovu používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány prostředky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4 hodiny xxx teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx rozlití během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx pro xxxxx xxxxxx použili čerstvě xxxxxxxxxxx nože (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Xxx xxxxx XXX zabraňte přenosu XXX na nádobách nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. U testu XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), filtr omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx by se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Použijte 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx vířením x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, aby všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxxx odděleně, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx sklíčka XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských rostlin

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Provádí-li se xxxxxxx, xxx by xxx založen xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1–2 xx xxxxxx kousky stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice z předpěstírny: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonkem. Odeberte xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin rostoucích xx vodě xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx na 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, které mohou xxxxxx populace R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx hastata, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxx: X této fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení cév xxxx bakteriální sliz). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte části xxxxxx 70&xxxx;% etanolem x&xxxx;xxxxx xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx drcením xxxxx v pevném maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, xxx lze xxx xxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxxxx popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx díl xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) nebo –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2 Testování

Postupové diagramy x&xxxx;xxxxxx testů a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx ve vzorcích povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxx může xxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx vody. Je xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx liší x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu se xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx po provedení xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx bráno x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx se xxxx xxxxxx používá xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a v odpadní vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx dešťů a geografii xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx výskyt patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx vody x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorky vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx pod xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Doporučená velikost xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xxxx obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx vodního toku x&xxxx;xxxxxxxxx, že přítoky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx vzorky při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X, slijte xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx metoda je xxxxxx pro xxxxx xxxxxx vody, které xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků xxxxxxx xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx xxxx, xxx může být xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx zpracování brambor xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Ralstonia solanacearum, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx v přirozeně infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x&xxxx;xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Nejspolehlivějším testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx použití xxxx xxxxxx unikne xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx jeden xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx každý xxxxxx dobře xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 ml xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx může napomoci xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování udržujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, zda xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX nebo SPA (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

b)	Odstraňte barvicí xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 minutu xxx pokojové xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx vodu xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx kapkou xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx xxxxx imersí xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× s použitím xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, xxx xx xxxxxx xx XXX granulích jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a)	Zakápněte xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx súdánské černi X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx při pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým papírem x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX granulí x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx buněk.

3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (viz xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, např. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx schopných xx xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx velkou xxxxxxxxx. Xxxx, kolonie R. xxxxxxxxxxxx mohou mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lze xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vysoká. Xxxxxx xx však použitelná x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu xxx teplotě xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx být xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vhodnou xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx ředění.

4.1.2 Nechte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx živné xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx rozetřete xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx půdu, abyste xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo dlouhodobě xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxxxxx k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. solanacearum.

4.2 Obohacovací xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Wilbrink (viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx také obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx izolace organismu X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx k rozvoji populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro test XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx bujónu (xxxxxxx 2), který xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx živné xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx ELISA xxxx XXX dobře xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx ve xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Doporučuje xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při testování xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX nejméně 1:2&xxxx;000. Během testování xx xxxx být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx měl být xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C v glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx vzorky xxxxxxxx xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx se xxxx podle možností xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž způsobem xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °C), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx potřeba, fixovaná xxxxxxx je možné xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx testováním.

5.3 Postup XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.i): Připravte xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx ředění antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx okénku musí xxx nejméně stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní sklíčka xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjte xxxxxxxxx xx dobu 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

5.3.4 Umístěte xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx kolmých průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5 Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový test x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza úplná.

Využití xxxx metody v celém xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Předběžné testování xxxxx metodou xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. solanacearum xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxx xxxxxx s interní kontrolou.

Používejte xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx měl zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx kterých byla xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx viz dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx&xxxx;xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem jako xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx enzymových reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx účely použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx v dodatku 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X na 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx xx 5 min. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx lysozymu (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxx Easy XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud vzorek xxxxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx stane homogenní.

8.	Pro xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 minut.

16.	Skladujte při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx použití xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx efektivní.

6.2. PCR

6.2.1 Připravte testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX v prostředí, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25 µl XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx zdroj XXX jako xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx vzorku.

6.2.5 Umístěte XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12 µl směsi xxxxxxxxxxxxx DNA z každého xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Použijte vhodný XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 minut xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx je xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx pozitivní kontroly X. solanacearum v bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx vyšetřovací test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. solanacearum xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolními xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a rozpusťte xxxxxx xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx a inkubujte 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7 minut xxx 7 000 g, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx použijete 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx sklíčku XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx a v suchu xxx xxxxxxxx teplotě.

7.2. Hybridizace

7.2.1 Dehydratujte xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) na 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, přičemž dvě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sklíčka (24 × 24 mm) na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4 okénka, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx ve vodní xxxxx o teplotě 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x hybmixem xxx xxxxxxx 45 °C

7.2.8 Přemístěte xxxxx sklíček xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx krátce xx XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Napipetujte 5–10 μx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60 mm).

7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× pod olejovou xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx test opakován. Xx xxxx nastat x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx okénka sklíčka) xx xxxxx sklíčka.

7.3.4 Specifičnost xxxxx FISH s sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a ke xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx častěji xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxx použití rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech pozitivních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;× 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX nebo XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX je obohacení x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních protilátek xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx testování suspense xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx u titru komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a suspenzi xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx destičce od xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx používají pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C na 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx může x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte stejné xxxxxxxx dvojnásobně silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx přes xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek. Xxxxxxx xxxxx třikrát xxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx protilátek proti X. solanacearum v blokačním xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 µl xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx teplotě 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx předtím (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx fosfatázy (xxxxxxx 4) xx každé xxxxx. Nechte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx nebo 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do dvou xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 2&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Připravte xxxxxx 1&xxxx;xx x-XXX/xx alkalické xxxxxxxxx v substrátovém xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z jamek se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX u negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX z jamek xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX v negativním extraktu xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxx menší xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorku x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx úspěšně použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx fázi třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx do xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx stonky xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx děložní xxxxx a první xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx asi 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx řez xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, držte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx skleníku xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorků xx xxxx inkubace xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx činnostech xxxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo k vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledejte xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte všechny xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx být x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx přítomny xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx při 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml v pufru XX (dodatek 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr XX xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx ELISA

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx metody xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1 Připravte xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (dodatek 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxxxxx x&xxxx;xxxx kultury xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx vody (XXX = ultra xxxx water).

4.2 Ohřívejte 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím bloku xxxx xxxxxx vodní xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx et al. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Opina et al. (1997), Weller xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX a absence 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx biovarů xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx biovaru je xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy s čistou xxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Je-li xxxxx xxxx rozdělena na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), zbarvení xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx žlutou x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2A (světově xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum a k potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete nebo xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat xx 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx xx typické xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx se po xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze stonku xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Proveďte xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno xx selektivní živné xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 hodin xxx teplotě 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxx do xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Veneto Xxxxx Periferica per x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Direcção-Geral xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University of Xxxxxxxxxxxx Sciences	Uppsala	Švédsko

Dodatek 2

Živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx konečnou koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma B-0125)	1 250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Sigma X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	50 mg/l

Pozn.:

1.	Použití xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xx xxxx xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx déle a červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx a skladujte xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1 měsíce.

Misky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte přílišnému xxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx šarže živné xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx půdu SMSA, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Sacharóza	10 g
Proteázový xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na 50 °C.

Přidejte xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx buď x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká laboratoř Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3.	Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, EURS55	Belgie	2
NCPPB 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, CIP312	Peru	2T
NCPPB 3989	45	XXXX 4613, R568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	CFBP 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, HEmps2	Čína	5

Pozn.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

Kód NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	CFBP 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx cepacia &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4)
NCPPB 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Ralstonia xx. (4)
NCPPB 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Burkholderia xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Burkholderia plantarii &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Banana Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx anthropi &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	CFBP 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) (5)
NCPPB 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx 103 xx 104 x&xxxx;104 až 106 xxxxx biovaru 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx serologických x&xxxx;XXX xxxxx. Protože životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1 ml k pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testů.

B. Příprava xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx pletiv XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48hodinovou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) na SMSA xxxxx xxxx a suspendujte x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, abyste získali xxxxxxxx xxxxxxx přibližně 2&xxxx;× 108 cfu xx 1 ml. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx víte, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxx xxxx uvedeným xxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pěti mikrozkumavkách.

Těchto xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xxxx použito xxxx xxxxxxxxx pozitivní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxxxxxxx řádně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx díly 100 µl xx xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx téhož xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum v kontrolních xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx účely xxxxx XXX proveďte xxxxxxxx DNA z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx série testovacích xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX, organismus X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx detekován xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterií x&xxxx;xxxxxxxxxxx pletiv xxxxxxxxxxxx xxxx třepáním.

Na2HPO4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX a sterilizujte v autoklávu xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředek DC	Odpěňovací xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (PVP-40)	Váže xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění extraktů x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx konců xxxx bramboru po xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pelety odstředěním.

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 minut.

2.2 Pufr XX-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx tekutina/roztok na xxxxxxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Vectashield® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

NaCl	80,0 g
KH₂PO₄	2,0 g
Na₂HPO₄.12H₂O	29,0 g
KCl	2,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100 ml

3.5 Roztok pro xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx upravíme xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidejte 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5&xxxx;xx xxxxxxxx fosfatázového substrátu (Xxxxx) v 15 ml xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxx XXXX ELISA

4.1 Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Stanovení xxxxxxxxxxx XX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

Xxxxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx pole xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (liší xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluorescenčních buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxx xxxxxx xxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx panelu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20mM)	0,25 µl	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx při 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací z R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer Xx-1	5′-xxx cga xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx primer Xx-2	5′-xxx xxx xxx aca xxx xxx xxx xx -3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum DNA = 553 bp.

2.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální koncentrace
Sterilní XXX	16,025&xxxx;µx
10X pufr PCR (9)	2,5 µl	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx být xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Použití jiných xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F	5′-ACT XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX AGT XXX XXX XXX XXX T-3′
Přímý xxxxxx XX-5-X	5′-XXX TTA XXX XXX TTG ACG XXX G-3′
Reverzní primerNS-6-R	5′-GCA XXX XXX XXX XXX TAT TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly PCR 18X rRNA = 310 bp (sada xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX GAG ATG XXX XX-3′
Xxxxxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX AGT CAC XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx primer Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3′

Očekávaná velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	12,925 µl
10X pufr XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (frakce V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Primer Xx-1-X (10 µM)	2 µl	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	1 µl	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx obě reakce xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx program xxx optimalizován pro xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

4.4 Restrikční xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx (redestilovaná)	50 ml

5.2 Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), xX 8,0

Tris	48,40 g
Ledová xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Rovněž xxxxxxxx xx trhu (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx reagencie xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx gct xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct gcc xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx ultračisté vody (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Paraformaldehyd xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX a míchání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx pH xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX; xX 7,0) a 5 kapek 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx na 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (SDS)	0,01 %
Formamid	30 %,
Sonda XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx xxxxxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi.

Počet xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx OLI-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx teplotě –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx lilku (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přesaďte xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx být xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, R.I., X. Krumholz xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, phylogenetic xxx xxxxxxxxxxxxx studies in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/EC xx 20 July 1998 xx xxx control of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx et al. Xxxxxxxx Journal xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Roux, X. Xxxx, P. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx that xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, X., Xxxxxx, J.K. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx potato xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx International Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal of Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Ushijima, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX technique. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx on its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium medium. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx bacterial diseases xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Specific genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx and xxxxxxx xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx structure by xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Krishnapillai, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. and Xxxxx, X. 2000. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Schaad, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Young, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Xxxxxxxxxx, M. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx solanacearum) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Analysiss xx the phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx blood disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Feuillade, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx automated xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx situ hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx organismu, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) xxxxxxxxx(x) xx uvedeném xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) pozitivně x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx vyvrácení xxxxxxxx(x) uvedenou xxxxxxx xx xxxxx čeká, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx použít jinou xxxxxx testování/Zadržení xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx škodlivého xxxxxxxxx xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx od oznámení xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu i) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxx xxxx klonově xxxxxxxx rostlinám xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, které pocházejí xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rostliny xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx vzrostlé rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx byla xxxxxxx úřední xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx produkce, xx kterých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx bramboru nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx nebo prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx z jakéhokoli xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem nebo xx podezření na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx k zavlažování nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx ze zdroje, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx s místy produkce, xxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx jsou nebo xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx zamoření organismem xxxx xx podezření xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx použitá xxx xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxx xxxx xxxxx (xxxx) produkce xxxx xxxxx zaplavila xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xxx) a čl. 5 odst. 1 písm. c) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený rostlinný xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) prohlášeno za xxxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkční vazbou xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx xx zamořený xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx takových xxxx, xx kterých xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx používají společně xxx přímo xxxx xxxx společného xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx odrážky xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx za zamořený xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx) xxx xxxxxxxx xx tomto xxxxx produkce podle xxxxx odrážky,

—	prostory, ve xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx kontejnery, skladovací xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a všechny ostatní xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx do xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	veškerý xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx byl skladován x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx jejich očistou xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx výsledek xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx k uvedenému xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. v případě xxxxxx xx rostliny, xxxxx vyrostly xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) prohlášen xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx s negativním výsledkem, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx klonové xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx uvedeného x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce,

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovaný xx xxxxxx xxxxxxxxxxx povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, jež xxxx být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx možného xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), zahrnují:

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx, xxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx voda, xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx odtoku xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bod ii),

ii)

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), kde xxxx povrchová voda xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, na xxxxx xx uvedený rostlinný xxxxxxxx xxxxxxx v bezprostřední xxxxxxxxx povrchové xxxx xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxx které(á) xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx toku x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx,

—	xxxxx rostoucím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) a případně xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx jméno xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx stát, xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx rostlinolékařského xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského pasu, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx obsahovat xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (zdrojích) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vymezeného xxxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a v případě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, která xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx zásilku xxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx předepsaná x&xxxx;xx.&xxxx;13 odst. 1 bodu xx) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), jak xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx jako xxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx na xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. průsakem xx zemědělské půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s přímým a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx a dezinfikování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních prostředků,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedenými možnostmi xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx schválenými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx VII této xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (států), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členského xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx použity xxxx xxxxxxxx brambory určené xx spotřebě, xxx xxxxxxxx pro přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bez xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx k pěstování lze xx stejném xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx a dezinfekci, nebo

—	budou xxxxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx určené xxx xxxxxxxxxx zpracování a pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx dodávku xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením xxx xxxxxxxxx odpadu a systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jinými xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pokud nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx tohoto xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx úředním subjektem,

ii)

jiné xxxxxxxxx partie xxxxxx xxxxxx a listové xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx jinými způsoby xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx šíření xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx opatření xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx v čl. 6 odst. 4, xxxxx xxxxxxx členské xxxxx v zóně xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx byla xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx):

xx poli xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx ii), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx prohlášení místa xxxxxxxx za zamořené:

—	budou xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a rajčat, i jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu xxxxxx rostlin plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bramboru xxxx osivo xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Brassica, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxx přežití xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x prvním sklizňovém xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xx xxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor je xxxxxxxx pouze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a po xxxxxxxxxx xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx brambory, xxxx xxxxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx opatření, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

v xxxxxxx xxxxx letech xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx jeho xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nehostitelských xxxxxxx v dalších xxxx xxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxxxxx xxxxx riziko xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx období xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx na xxxx xxxxxx xxxxxxxx žádné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx jiné planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx brambor xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx bramborové xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx postupem xxxxx přílohy XX;

xx xxxxx xxxxxxx polích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vyloučeno:

—

v pěstitelském xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx rostliny bramboru xxxx xxxxx nebo xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx prohlášeného xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx produkce, než xxxxx jsou uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx buď xx xxxxx nebo xx produkci xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx a vypěstovaných xxx úřední xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx prohlášení xxxxx xxxxxxxx za zamořené,

—	v xxxxxxx xxxxxxxx budou xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx brambory xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx brambor buď xx produkci sadbových xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx buďto na xxxxxxxx sadby xxxxxxx xxxx xx produkci xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx prohlídky xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx sklizené hlízy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu ii) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce:

—	veškerá xxxxxxx xxxxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxxx metod, xxx xx xxxxxxx v bodu 3,

—	xxxxx zavedeny xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx xxxxxx těchto xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx organismu;

na xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx pěstovány xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx ani xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, včetně, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx změny xxxxxxxxxxx xxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx brambor, bude xxxxxxx úředně certifikované xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx z testovaných xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 2000/29/XX xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx z osiva xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx úřední kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx programů xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx ihned xx xxxxxxxxxx zamoření budou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx do produkce xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxx pěstitelské xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx prohlášení o zamoření:

ba)

jestliže xxxx vymezená xxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx, xx kterých se xxxxxxx, xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, které smluvně xxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx zóně xxxx xxx xxxxxxx kultury xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx brambory, které xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou manipulaci xx sklizenými sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx podnicích v zóně xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx manipulací xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx úřední xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx uvedené xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx byla xxxxxxxxx voda prohlášena xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xx) nebo je xxxxxxxxxx xx jeden xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V bodu 2:

—	xxxxxxx xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx a případných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vodních zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stanovených v příloze II xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a jiné xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášené za xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx přezkoumán xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx příslušné xxxxxx xxxxxxxxx, že povrchová xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx jsou použity xxxxxx xxxxxxxxx technologie, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx pevného xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx sadbových xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx VI xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, aby bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxxxxx xxxxxxx a bramborových xxxxxx a rajčat) a jiný xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se odstraní xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, xxx xx xxxxx být xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Odpad musí xxx přemístěn přímo xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxx odpadů,

nebo

—	spálením, nebo

—	jinými xxxxxxxxxx, pokud prokazatelně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx obsahující xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx účelem xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx xxx odstraněny xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx objemu xx dobu xxxxxxx 30 minut xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx jiným úředně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx by xxxxx xxxxxx do styku xx zemědělskou půdou xxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx xxxxx spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx standardní referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx OLI-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx testů, xxx xxxxxx xxxx pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Research XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(11) Koncentrace xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx bramboru xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX může xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.