EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

ze xxx 14. července 2006,

xxxxxx se xxxx xxxxxxx XX xx XXX směrnice Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx společenství,

s xxxxxxx xx směrnici Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 x ochraně xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. (1), x zejména xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx x při zjištění xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx rozšíření x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx té xxxx došlo x xxxxxxxxxx xxxxxxx v poznatcích x xxxxxxxx x x postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx ochraně xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx se xxxx xxxx xxxxxxxx přezkoumat x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx x postupy xxxxxxxxxx x identifikace, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx postupů xxx zjištění x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx x půdě.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx pro xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu x xxxxxxxxxxx zamořených oblastí, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx předpisy xxx xxxxx, s ohledem xx xxxxxx této xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx směrnicí xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského xxxxxx.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1. Členské xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x zveřejní xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Komisi xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, s. 1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx hostitelských rostlin,

ii)	zjištění Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového diagramu
	1.	Detekční xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky.
	3.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx bramboru a v rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx zjištění a identifikaci X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum v půdě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování na xxxxx půdy
			4.2	Postup obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (IF test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX test)
			6.1	Metody xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx produktu XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. solanacearum
		Dodatek 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Xxxxx xxx testovací xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, bude nutné xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, pečlivé xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx potvrzeno (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Jestliže xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx a v případě pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového testu xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx testů.

3. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX ROSTLINÁCH S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX NEBO XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx listů směrem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx k zotavení. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx také x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx a podélně xxxx xxxxxxx konec. X&xxxx;xxxx fázi xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx žlutého až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx hnědým x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx od pupkového xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx místa, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx pletiva. V pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2 Příznaky x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx dolů a vadnutí xx jedné straně xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx méně xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx nevadne, xxx xx stonku se xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx jsou dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. dulcamara, xxxxx xx stonky x&xxxx;xxxxxx xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x&xxxx;xx i při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx výtok slizu xx stonku

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v buňkách X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3 Sérologické xxxxxxxxxxx testy

(Viz oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx oddíl VI.A.7), xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte řadu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µl suspenze x&xxxx;xxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, nepravidelné a fluidní xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx bílé.

—	U Xxxxxxxxx tetrazolového média x&xxxx;xxxxx SMSA jsou xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Avirulentní formy X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx k dispozici xxxxx množství xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů před xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx vhodné desinfekční xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxx proveden xxxx XXX xxxx xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, tak aby xxxx viditelné vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx výkrojky vodivých xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky omezte xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx při pokojové xxxxxxx, xxx mohlo xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10 °C) xx xxxxxxx karanténních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx to možné, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx nejdéle 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě nižší xxx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

homogenizujte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx přenosu XXX na nádobách xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx drcení v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Je-li xxxxxx zakalený, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx odstřeďováním (xxxxxx 180 g po dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx supernatant, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Použijte 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte sterilní xxxxxxxx na konečnou xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) k 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx teplotě –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během testování xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

1.1.6 Je xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx sklíčka XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxxxxxx kousek dlouhý 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny uříznutým xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonkem. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx odeberte 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx odeberte 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx rok u víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, S. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Urtica dioica.

Pozn: X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx jakýkoli xxx xxxxxx s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxx zpracujte xxxxx stonku xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx chlazené, xxxx

xxxxx zpracujte drcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx maceračním xxxxx (např. Xxxxxxxxx xxxx Bioreba) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního pufru (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx na 24 hodin.

2.1.3 Po usazení, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Jeden díl xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx případné xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx oddíle xx použitelné k detekci xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx nutné xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx liší x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx než v povrchové xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx citlivosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx se xxxx xxxxxx používá xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a v odpadní xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy teplota xxxx překračuje 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx odeberte xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Doporučená velikost xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx upřednostňována menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx rovněž podrobeny xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím xxxxxx x&xxxx;5–10 ml peletového xxxxx a zachycením xxxxxxxx. Xxxx metoda je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx odpadní xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1. Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

2. Metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu xx vzorcích xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody nejsou xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx v úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

2.1 Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro vzorkování xxxxxx. Xx jeden xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx půdy xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (nebo x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvyšte počet xxxxxxxx xxxx xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx ze zpracování xxxxxxx a kanalizace navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx každý xxxxxx dobře xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx kalu xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx udržujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxx slizu ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx se xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX nebo SPA (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx XXX negativním xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx fixovali.

4.	Obarvěte preparáty xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx kapkou xxxx a přiložte krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450&xxxx;xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600× xx 1 000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou nebo xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, xxx xx xxxxxx xx XXX granulích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx v procházejícím normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zda xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxxxx a vysajte xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX granulí v buňkách X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace buněk X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx latexovými částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx řiďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx suspense xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx předběžný xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx schopných xx xxxxx xxxx růst xxxxxxxx velkou pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx přítomny antagonistické xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx konkurenci nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou xxxx xxxxx vysoká. Metoda xx xxxx použitelná x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx xx vyhnuli xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X každé xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné půdy xx xxxx xxx xxxx xxxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx testování xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx vhodnou xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µl extraktu xxxxxx na 1&xxxx;xxxxx xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx stav a pak xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx s vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx na xxxxx médiu tvoří xxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, zcela xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx částečně fluidní, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx vodě (pH 6–8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (viz xxxxx&xxxx;XX.X) a test xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx média.

Test očkování xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, xx předpokladu, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx bakteriemi x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx i ke zředění xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx(1:100). Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx izolace xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, protože xxxx xxxxx k rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx bujónu (xxxxxxx 2), který xx xxxxxx xxxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx živné xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX nebo XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx bujónem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxx postupy zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx v dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx hlavní x&xxxx;xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, PCR xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají všechna xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx je xx nutné, může xxx úspěšně proveden xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx xxxxx referenčním xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) by se xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž způsobem xxxx test vzorků.

5.1 Připravte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx napipetujte xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx použita jako xxxxxxxx nebo pro xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro každé xxxxxx do řady xxxxxx. Druhá řada xxxx být xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky xxx xxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 minut xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx v suchém xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

5.3 Postup XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx mít 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) a 5.3.i)

	Ředění resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papír. Pokryjte xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, řiďte xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx sklíčka. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní imersí xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Zkoumejte xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5 Interpretace výsledků xxxxx IF:

Při zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx PCR jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx schválená xxxxxxx a protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) by xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxxxx také XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx v dodatku 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx pufru (100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl roztoku Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X po dobu 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchejte xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) a promíchejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX pro test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, by se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX podle schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vzorku xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx zdroj XXX jako xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) při 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 minut xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX je negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxx xxxxxx opakováním testu x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Pozn.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx pozitivní kontroly X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk R. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl být xxxxx možno proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 ml X. solanacearum xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolními xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného referenčního xxxxx R. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2 Napipetujte 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200&xxxx;µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení.

7.1.4 Odstřeďujte 7&xxxx;xxxxx xxx 7 000 g, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx použijete 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě –20&xxxx;°X xx přidání 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx a přidejte stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	okénko 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	okénko 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Krycí sklíčko 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) a fixujte xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a pokračovat x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

7.2. Hybridizace

7.2.1 Dehydratujte xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx ohřejte xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4 Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4 okénka, x&xxxx;xx xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx&xxxx;xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x hybmixem xxx xxxxxxx 45 °C

7.2.8 Přemístěte xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a nechte inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx je xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetujte 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko zakryjte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční mikroskopii xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× pod olejovou xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxx xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka sklíčka) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xx xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx častěji xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx FISH testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet typických xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, které xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;× 103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8. Testy ELISA

Princip

Testy XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX nebo XXXX pro xxxx xxxxxxxxx nízkou citlivost. Xxx použití XXX XXXXX xx obohacení x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních protilátek xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx s nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx validovaný zdroj xxxxxxxxxx R. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického kmene X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx druhotných konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 buněk xx 1 ml xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé destičce xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx používají xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Smith xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °C xx 4&xxxx;xxxxxx xx vodní xxxxx nebo topném xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx přes xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx jamky xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx proti X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx do každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Přidejte 100 µl xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx předtím (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pufru xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do každé xxxxx. Nechte inkubovat xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Připravte xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx stát 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °C.

5)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml alkalické xxxxxxxxx v substrátovém xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z jamek xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání protilátek.

9. Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx rostlin citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx s podkožní jehlou (xx xxxx xxx 23X). Rozdělte vzorek xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2 Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty a pipetou xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi děložní xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx příčný xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx přibližně 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z injekční stříkačky.

9.3 Stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx suspenzí 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve zcela xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte přísnou xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx činnostech xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx je negativní, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

B. IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech.

Zahrňte xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx aktivita	+
Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx při 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx antiséra (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3 Použijte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je pozitivní, xxxxxxxx xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx metody xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X PBS (dodatek 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx ELISA získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx poloviční x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní kontroly.

4. Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx při 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx být xxxxxxxx při teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Weller et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx velikost x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk na 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6. Analýza xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX a absence 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx schopnosti využití x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří hexosových xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx lze úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200 µl xx 1&xxxx;xxxxx), zbarvení xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými technikami, xxxx xxx xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2 Repetitivní xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3 Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (viz xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx inkubovat až 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké relativní xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době příznaky, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx z rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Proveďte izolaci xx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud možno xx xxxxxxxxxx živné xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx per x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Direcção-Geral xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
Instituto Xxxxxxxxxx xx Investigaciones Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx a sterilujte v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx)	5 mg/l
Polymixin-B-sulfát (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	50 mg/l

Pozn.:

1.	Použití xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, ale xxxx xx xxxx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx xxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx měly být xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx měla xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx vynechte Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Wilbrink (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx materiál buď x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (tabulka 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné a lze xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká laboratoř Xxxx, UK.

2.	Sbírka kultur xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Wageningen, Nizozemsko.

3.	Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), Ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kultur XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx původu	Biovar
NCPPB 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	CFBP 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	XXXX 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, CFBP 3857	Xxxxxxxxxx	2
XXXXX 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	CFBP 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	XXXX 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	CFBP 4613, X568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, SEQ225	Peru	3
NCPPB 3997	47	XXXX 4614, X280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	CFBP 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx (4)
NCPPB 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Ralstonia xx. (4)
NCPPB 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Burkholderia xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Burkholderia xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Banana Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 XXX X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 IPO X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	CFBP 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Flavobacterium xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx standardní kontrolní xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx ze sbírky xxxxxx NCPPB.

Mražené sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 až 104 x&xxxx;104 až 106 xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) jako pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx jako xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX fosfátovém xxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx hustotu přibližně 2&xxxx;× 108 xxx xx 1&xxxx;xx. Obvykle xx jí xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx dřeň z pupkových xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které víte, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracujte xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100 µl xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xxxxx použity xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx organismu X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx potvrzeny xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX proveďte xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Co xx xxxx xxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx nejméně x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx sterilizované pufry xxxxx xxx xxxxxxxx xx jeden xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely extrakce

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx pomocné xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Xxxxxx	xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx extraktů x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx na xxxxxxxx sklíčko ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Leica) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné jako xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (musí xxx xxxxxxx připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	xxxxxxx xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1 l destilovanou xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX ELISA

4.1 Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pH 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Diethanolamin	100 ml
Destilovaná xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Stanovení xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

Xxxxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxx okénku
a	F	=	faktor xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenů (xxx xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX XXX XXX XXX CCT XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx X-2	5′-XXX XXX XXX GCC TCC XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 288 bp

1.2 Reakční xxxx PCR

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	17,65 µl
10X pufr XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5U/µl) (8)	0,1 µl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx při 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 sekund xxx 94&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 minut xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx ttc aca xxx xxx xxx xx -3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Taq polymerasa (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Elmer AmpliTaq x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut při 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 sekund xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx kopie)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3′
Přímý xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX XXX ACG XXX X-3′
Xxxxxxxx primerNS-6-R	5′-GCA XXX XXX XXX XXX XXX TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr XXX&xxxx;(10) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx kopie)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AAC XXX XXX GAG XXX XXX TA-3′
Reverzní primer Xx-1-X	5′-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X	5′-XXX XXX GCA XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum:

s Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	12,925 µl
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5U/µl) (12)	0,2 µl	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx reakce xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (hybridizace primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -XXXX (XXX), pH 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxx xx 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Invitrogen xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx agg xxx xxx gct xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx xxx xxx cgt xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: USTALOVAČ XX PARAFORMALDEHYD, KTERÝ XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx ultračisté vody (XXX) na zhruba 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxxxx 5 kapek 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 přidáním 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx papírky a případně xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx roztok xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Hybmix

NaCl	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx sodný (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 ng/μl
Sonda XXX-1 nebo OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx) se xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx čistá voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx světlocitlivými oligosondami x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přesaďte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx být xxxx naočkováním pěstovány xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 hodin xxxx přirozená xxxxx xxx nebo xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 až 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

LITERATURA

1.	Amann, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx studies xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European isolates. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 105; 373-380.

Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses a Xxxxxxxx Monoclonal Antibody xxx xxxxxxxxx Detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xx xxxxxx tuber xxxxxxxx. EPPO Bulletin 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx isolation xxx quantification of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. In: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, A.C., El-Nashaar, X.X., Nydegger, X. xxx De Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X detection method xxx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13.	Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx diseases xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Gorris, M.T., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enrichment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular detection xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx al., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Fulbright, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Bruijn, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Krishnapillai, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Timmis. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (formerly Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. and Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx chain reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Sequence xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR amplification xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx internal xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. and Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Young, xxx X.X. Daniels. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, Pseudomonas xxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 in Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, L.I., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx on 16S xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Der Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Western Xxxxxx as determined xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. In: Xxxxx, P., Allen, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) pp. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Smith, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx automated xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Wullings, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which causes xxxxx xxx of xxxxxx, by fluorescent xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx případech podezření x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y) xxxxxxxxx(x) xx uvedeném rostlinném xxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v příloze II xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx ještě xxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx hlízy, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady dokud xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx zcela xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx v případě xxxxxxx použít xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx nebo rostlin, xxx je to xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx organismu.

PŘÍLOHA IV

Prvky xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu i) x&xxxx;xxxxxxxxx případech zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx pocházejí xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx rajčat, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete, xx které xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx v místech produkce, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v sousedství zamořených xxxx produkce, xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx zařízení a vybavení xxxxx nebo prostřednictvím xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na nichž xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem nebo xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx zdroje, xxxxx se používá xxxxxxxx s místy xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx x&xxxx;xxxxx existuje xxxxxxxxx na zamoření xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, u které se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xx zamoření organismem,

ii)	povrchová xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxx xxxx místa (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx zaplavila pole xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx při stanovení xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který byl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, na kterých xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx používají xxxxxxxx xxx přímo xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (místech) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx v takovém xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx období, xxx xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx za zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) byl xxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxxxx podle xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem x&xxxx;xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx výše,

—

veškeré xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo jejich xxxxx a všechny ostatní xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx zamořený podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx byl xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx s předměty xxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx a testování xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx brambor xx xxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, resp. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx vyrostly xx xxxxxxxx osiva jako xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx byl xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx klonové xxxxx xxxx pravděpodobným. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného rostlinného xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx voda, xxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx zamoření.

Prvky, xxx xxxx být xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx)

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

—

místa xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného materiálu xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx xxxx bylo xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

ii)

v xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx):

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, na xxxxx xx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) by xxxxx povrchovou xxxxx xxxxx(x) být xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nádrž, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vodou prohlášenou xx zamořenou, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx které odkazuje xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, sadbové, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx jsou xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, členský xxxx, xx kterém se xxxxxx potvrdil, xxxxx xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx členských xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx státům) potřebné xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx odrůdy xxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx a adresu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu, xxxx případně xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a kopii xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx oznámení, xx které xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx potvrzení xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (zdrojích) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx produkce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, včetně počtu xxxx produkce, xxxxx xxxxxx označena jako xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx zdroje, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a rozsahu xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/ES x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx uvedeného x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, odd. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx informace, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx případně xxxxxxxxxx Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	uložení na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. průsakem xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx schválenými zařízeními xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx neexistuje žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx odpad související x&xxxx;xxxx uvedenými xxxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 6 odst. 2 pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx příslušného xxxxxxxx subjektu členského xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx určené xx spotřebě, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx a použití xxx xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx. S bramborami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx stejném xxxxx xxxxxxxxxxx xxx odděleně x&xxxx;xx očistě x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx dodávku xx zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením pro xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx některými xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx způsoby xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu příslušným xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx metody xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx očistu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx žádné zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx příslušných úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx vymezené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) xxxx iii), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx byla místa xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na xxxx xxxx xx jednotce x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx zamořené:

—	budou xxxxxxx opatření x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

nebudou xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s uvážením xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Brassica, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně hrozí xxxxxx xxxxxxx organismu,

—	plodiny, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, že xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx xxxxx úředních xxxxxxxxx provedených xxxxxxx xxx následující pěstitelské xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx pouze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat xxxxx xxxxxxxx bramborové xxxxx xx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx postupem xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a po příslušném xxxxxxxx xxxxx, který xxxx činit xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx pěstovat xxxxxxx brambory, bude xxxxxxxxx xxxxxx šetření xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během xxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxx rostoucích rostlin xxxxxxxx a rajčete i jiných xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx pěstování xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx stálé xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pěstování xxxxxxxxx xxxxxxx trav x&xxxx;xxxxxxxxx pěstováním xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších dvou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo šíření xxxxxxxxx,

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, které následuje xx xxxxxx specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xx poli xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx nebo rajčete xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých během xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x případě xxxxxxx xxxx povolena produkce xxxxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxx, xxxxx testovány postupem xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx xxxxxxx polích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a s podmínkou, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx spojené s planě xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx bramboru xxxx osivo xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mohou být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx pěstovat rostliny xxxxxxx ze xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, pouze xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx pěstitelském xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx prohlášeného xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx bramboru budou xxxxxxxxx pouze xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx testované xx xxxxxxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na jiných xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx buď xx sadbu xxxx xx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx jsou rozmnožovány xxxxxxxxxxx, pěstované z rostlin xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx a vypěstovaných xxx úřední xxxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než která xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx produkci xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx pěstitelském roce xx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx sadbové brambory xxxxxxxxx pod úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xx produkci sadbových xxxxxxx nebo konzumních xxxxxxx,

—	x případě rajčat xxxxx xxx pěstovány xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxx ze semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx úředním dohledem x&xxxx;xxxx uvedených xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx sadby xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x každém pěstitelském xxxx xxxxx předchozích xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a u každého bramborového xxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II;

ihned xx xxxxxxxxxx místa produkce xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodu 3,

—	xxxxx zavedeny xxxxxxxx xxxxxx kontroly nad xxxxxxxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx šíření organismu;

na xxxxxxxx s chráněnou produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx), xxx xx xxxxx xxxxx vyměnit xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx pěstovány xxxxx xxxxx xxxxxxxx, rostliny xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin zavedena xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, včetně, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx xx příslušných orgánů,

—	pro xxxxxxxx brambor, bude xxxxxxx úředně certifikované xxxxx xxxxxxx xxxx xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx z testovaných xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx produkce xxxxxxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX nebo, xxxxx xxxx rostliny rajčat xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx z osiva xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené zóně, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodných xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx tři pěstitelské xxxx, které xxxxxxxxx xx prohlášení o zamoření:

ba)

jestliže xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx, xx kterých se xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xx s nimi xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, které xxxxxxx xxxxxxxxx stroje pro xxxxx xxxxxxxx brambor xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx používána xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou a aby xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iii), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou xxxxxxxxxx xx sklizenými sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx a případně xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pěstování xxxxxxx xxxxxxx pouze z osiva, xxxxx odpovídá xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, nebo, xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže byla xxxxxxxxx voda prohlášena xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxx je xxxxxxxxxx za xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx organismu xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—	provádí xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx průzkum, xxxxxx xxxxxx vzorků xxxxxxxxx xxxx a případných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx z čeledi lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx a jiné případy,

—

zavedou xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášené za xxxxxxxxx pro zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xxx je xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx xxx přezkoumán xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx každoročního xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (o xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx orgány xxxxxxxxx, xx povrchová xxxx xxxx nadále xxxxxxxx. Použití xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx šíření,

—	jestliže xxxx xxxxxxxx výpusti xxxxxxxx xxxxxx, zavedou xx xxxxxx xxxxxxxx xxx likvidací xxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx kterých xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně xxxxxxxxx xxxxxx odstraňování odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx odpad související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx uložením na xxxxxx schválené xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxx půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx by xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx zemědělské xxxx. Odpad musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx oznámena Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: před xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx suspendované xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx účelem odstranění xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60&xxxx;°X xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx před xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx jiným xxxxxx xxxxxxxxx a kontrolovaným způsobem, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko, xx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou xxxxx xxxx xxxxxxx zdroji, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx způsobu xxxxxxxx xx oznamují xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Komisi.

Možnosti xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx odpad xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a zpracováním xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Lelliott x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3) Použijte xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx dodatek 6).

(6) Pravděpodobnost xxxxxxx reakce ve xxxxxxx testů, ale xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx metody.

(8) Metoda xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx třepáním nebo xxxxxx xxxxx izolace XXX xxxx vyžadovat xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.