Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx x. 326/2004 Sb., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx unie¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., původci bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx výskytu a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx semen bramboru, x ostatní xxxxxxxx x čeledi lilkovitých (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx jedlé (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx území nebo x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx x x určení xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx jejich xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx pozemku, v xxxxxxx anebo v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie hostitelské xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx v témže xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, které x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie bramboru xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. c).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx vymezeném podle §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxx brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje používané x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx v případě xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x b), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v porostech xxxx ve skládkách, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx laboratorním testováním xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx odpadů xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace v xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, složení x xxxx odběru xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Ústav xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x souladu x §10 odst. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx osobě, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx anebo je xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx ji pěstuje xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx A ostatním xxxxxxxx státům x Xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou ročně xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, a xx x případě xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ množeném xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx oznámení o xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající se xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx vizuálních příznaků xxxxxxxx těmito škodlivými xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxx screeningového testu xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x oddílu II, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx nebo pod xxxxx xxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, s xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona xx účelem zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx opatření xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx.

(4) Při podezření xx nebezpečí zamoření xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, v případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx původem x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx jiném členském xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx o podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx původ x České republice xxxx xxxxx může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé hniloby, Xxxxx x souladu x §76 odst. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a ke xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx trh a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx těch, xxx xx možná xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx zamořeným předmětem xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle písmene x) x možného xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor a x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx být ohroženo xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx vod a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem xxxxx xxxxxx zamoření,

b) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx písmene x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, za zamořenou,

c) xxxxxx karanténní území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx v xxxxxxx s ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx x bezpečnostní xxxx podle odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx odstavců 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx zásady xxx xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx zóny, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 písm. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx zajistí laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx klonově příbuzných x partiím, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), v každém xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx míru rizika xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) x x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxx x souladu x §11 odst. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x pod dohledem Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje rozpoznatelné xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxx splněny požadavky xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, xx po xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 písm. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř karanténního xxxxx a v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx splnění a xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx x xxxxxxx s §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření při xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 a x souladu x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx k xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx diagramy popisují xxxxx xxxxxxx, které xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx být proveden xxxxx screeningový test. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny bramboru x podezřením x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace patogena x xxxxxxxxxxx materiálu x typickými příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx není komplikovaná, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx infekce se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx z nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že čistá xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx výsledek pouze xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé sérii xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx vždy použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX média nebo XXX-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx během 3-10 xxx po xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Pokud xx kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo biotesty xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie jsou xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx je popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx v oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Kultivace nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test dalších xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v oddílu 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy x často xxx xx na konci xxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x příznaky jiných xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje xxxxx. Mladé infikované xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx oranžové mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné snímky xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x stav, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév sloupky xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx hlízách xxxx x tomto xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx prstenec. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx korové xxxxx. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných hnilob xxxxxxxx. Xxxxx jsou x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na vzorcích xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x případě, xx je ve xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx xx xx provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx vodivého pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Na minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx po xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x uchovávají xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx všech xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx jsou xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx konce okamžitě, xxxxx to není xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků a xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx.:

x) výkrojky se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Je xxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakce. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má být xxxxxx PCR xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se supernatant. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g po xxxx 15 minut (xxxx 10 000 g xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx pro xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, 500 µl pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx zbývající xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx na XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx země.

Části stonků xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx při teplotě xxxxx než 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxxx xxxx nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx při teplotě -68 až -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test používán xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být další xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx měly xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx titru xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým kmenem xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test se xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx podle obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx boxu po xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. a):

Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) protilátky x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají na xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx xxxxx podložních xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Je třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na vlhkém xxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, musí být xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx kmenem ve xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x typickou xxxxxxxxx x morfologií x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém poli x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Test FISH

PRINCIP

Když xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx provede jako xxxxx screeningový test x xx pozitivní, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx uchován x glycerolu při xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx přes xxx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Pro xxxx použití xx xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % xxxxxxx. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µl 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním, přidá xx stejné množství 0,01 X PB x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx nechají uschnout xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možnost xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg lyzozymu (Xxxxx X-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Tris-HCI, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx skladovat, xxx měl xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx ponoří xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx místo xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx a předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se umístí xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, aby xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x xxxx při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Ultra xxxx water = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x 833 ml XXX). Xxxxx z xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx jamky a xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx prohlížejí ihned x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx fluorescenčně červené. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být zopakován, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx testovacích sklíček (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují slabou xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX testu. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí xxxxxx xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Pokud xx XXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx rozsahu jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x interní kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx následující negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx prostředí xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx popsané pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x xxxxxx enzymatických xxxxxx a koncentrující xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCl, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °C na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx se promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (-20 °C), krátce xx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní se x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x promíchá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx se zachová x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx vzduchu xxxx v DNA xxxxx xxx.

15. Peleta xx resuspendujte x 100 µl sterilní xxxx (XXX) x xxxxx stát nejméně 20 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx při xxxxxxx -20 °X až xx xxxxxxxxxx při XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx směsi XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a provede xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx nejméně 12 µx amplifikované reakční xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Trisacetát-EDTA (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) po dobu 30-45 minut, za xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx zdokumentuje.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované DNA xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx se s xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx požaduje), za xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lze dosáhnout xxxx opakováním testu x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR i xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx připraveného extraktu xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků by xxxx být vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x níže uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají se xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 listů xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx se zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx pro xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je vhodný xxxx xxxxxxxx polystyrénu x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky x 15 xx xxxxx). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fólie. Rostlinu xx xxxxx fixovat xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x nanese xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx xx napipetuje mezi xxxxxxx lístky x xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx xxxxx v místě xxxxx suspendované pelety.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxxx xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23 X). Peleta xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx možné x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako negativní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny nechají xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx dobu xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx tak, xxx nedošlo k xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují se xxxxxxxx xxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx nedostatku xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Původce kroužkovitosti xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx objevení xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx rostliny, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx přítomných x xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. foveata, jakož x velké koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx listů x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx se test xX nebo XXX xx šťávě x xxxxx x xxxxxxx xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx identifikují x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test pozitivní, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx podle oddílu 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické bakterie, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx části xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx se provádí xx všech hlíz xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx a z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x testu XX/XXX složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx vyloučilo nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx kontroly odděleně xx xxxxxx, které xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx náročným růstovým xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx použití pomůcek xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x temnu xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx všech xxxxxxx podobných Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx provádějí po xxxxx xxxxx, s xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx x identifikace xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx x následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- živný xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °C xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxx x xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, konvexně xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x rovnými xxxxxx x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se zahrne xxx každý xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fenotypícké xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21 °X a xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo k xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo slabá

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx buněk x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx může lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Boer, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony PCR xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx v UPW.

b) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li dosaženy xxxxxx xxxxxx kultury x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx vyskytuje xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx teplotě 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat typické xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx infekce, xx xx měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se na xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro de Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx virulentního kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx PD 406) xx základním xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. subsp. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se protřepat. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 až-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené sterilizované xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x extrakci bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a provede xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro použití xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx S = plocha xxxxxxx xxxx na sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx X. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx média

Živný xxxx (Nutrient xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X xx dobu 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °C xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, pH xx xxxxxx na 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx xxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin B 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: nalidixic xxxx x 0,01 X XxXX, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx výsledky se xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx tga xxx xxx xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx ata xxx xxx xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (sada NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx byly xxxxxxxxxx xx použití Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq nebo Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X x NS-8-R xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 minuta při xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx modelů xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx), xx), x), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu x enzymem Bgl XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx gca xxx xxx tgc xxx -3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x sterilizuje xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx xx měl xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx vejcoplodého "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxx x xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx se zahřátím.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx omyje xxx tekoucí vodou.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx roztokem a xxxxx xx působit xx dobu jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 EN, 21 xx.

2. Bradbury, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx of xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, X., 1953. The taxonomic xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx carbohydrates by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fattyacid analysis. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Lelliott, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for the xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., W. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -H. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx potato xxxxxx xx B1O-PCR xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X study xx xxxx reproductibility between xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. a X. D. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx causes brown xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry musí xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění úrovní X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, existuje podezření xx infekci R. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, izolaci xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Popis xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické aglutinační xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx extraktů x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx v oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx snadno izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx alespoň ze xxxx screeningových xxxxx (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx vzorek považován xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použit x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 3.1.1.

3) Pokud jsou xxxxxxx dva testy xxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx další xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx popsán x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx testech získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx stejného vzorku, xxxxxxxx provést test x dalšími vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test patogenity xx popsán v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku provedení xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx různých biologických xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, považuje se xxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx popsány v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx se rozpozná xxxxxxxx listů xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx fázích vadnutí xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx vymáčknout. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx z xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. V rané xxxx xx infekce xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx rozšířit xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx rozšíří xxx xx pupkového xxxxx hlízy x x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx který se xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx slupce xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx rostliny xxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, které xxxx dokladem odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx hostitelů

Rostliny Solanum xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °C xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx má stonky x kořeny ve xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx vytékat bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx dostačující. Použije xx jeden xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách R. xxxxxxxxxxxx jsou zviditelněny xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx súdánskou xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (viz oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 il xxxxxxxx x roztoku na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, často s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Aviruletní formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu výsledků. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx rovněž použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x obsahem chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx test XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx se odstraní xxxxxx na pupkovém xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Množství xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx na xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Všechny xxxxx včetně xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx měly být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx se xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x případě, xx xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, uchovávají se x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °C) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Thurax) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx se použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx v xxxxxx přístroji. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx vířením x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx platí pro xxxxxxx IF x xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx lze vhodně xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, měl by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx nebo skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx se nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx díl x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx celý xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x příznaky xx xx stranou xxxxxxxx xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx rotační třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží se xxxxx xxxxxx x xxxxxx nejdéle xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx provést filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) nebo -68 až -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy a xxxxxx testů a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby xx xxxx

4.1 Postupový diagram xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická morfologie xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Test patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx však xxxx x závislosti na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxx hodnocení spolehlivosti x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x tomu, xx xx toto schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v povrchové xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx x geografie xxxxxxx toku xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx odebírají v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odeberou xxxxxx xxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx a 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx odeberou xxxxxx z xxxxx xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 km vodního xxxx a vzorkují xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se přepravují x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x po xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx obsahují xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx u xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x popis testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx test xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou popsány x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x tomto xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx patogenu ve xxxxxxxx xxxx, ale xxxx být xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x její sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvýší se xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °C. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx reprezentujících xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Před testováním xx každý xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx jsou x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx na výtok xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx zakápne 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx se inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 nm xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x až 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx xx xxxxxx na PHB xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx B v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, je třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 vteřin inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx zbarvenými stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx postup následující:

a) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx živnou xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx přeplněny xxxx jsou rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření na xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx otestován znovu xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná x xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X vyloučení možné xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené xxxxx selektivní xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx kultivaci xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Misky se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje xxxxxx xxxx x pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x vnitřními xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy se xx xxxxx xxxxx xxxxx atypické xxxxxxx X. solanacearum. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., aby se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx sterilní xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 dnech nejsou xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, že nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx vzorků x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. solanacearum x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx xxxx dojít x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C x xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx s uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx ELISA xxxx XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek IF xxxxx xx pozitivní, xxxx být jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx na vzorcích xxxxxxxxxx při teplotě - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Glycerol xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl je xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 mm - x většího xxxxxx xx množství xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx zředění. První xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Obrázek 2. Příprava sklíčka xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Je xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná vlhkost xxxxxx osušením.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx olejovou nebo xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx ve dvou xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou se x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx test PCR xxxx xxxxxx screeningový xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní části xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x virulentního xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx PCR xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by měly xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx substrátů vzorků xxxx x dispozici xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda byla xxxxxxxxxxxxxx pro použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku xxxx vodní xxxxx x teplotou 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x vytvoření mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. při teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se převede xx nové Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx teplotě nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx - 20 °C xx do xxxxxxx xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx test PCR.

b) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx DNA, např. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx testované vzorky x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx extraktu XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX reakce podle xxxxxxxxx PCR (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze reakční xxxx PCR x xxxxx xx xxx xxxxx UM xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

5. PCR mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx x 3 µx nanášecího pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx zacházení x xxxxx mutagenem.

3. V xxxxxxxxx x UV (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx zdokumentuje.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x čase shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx, za předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného vzorku xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, jestliže je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x interními xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX test. Když xx FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx připraví suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) ze 3-5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx uvedeno x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xx xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x odstřeďuje se xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) a fixují xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dna vzduchotěsného xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x hybridizační xxxx xxx teplotě 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx pod ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx proběhnout proces xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Připraví se 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx a 666 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 ml xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA nebo xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx se zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Použitím filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx pozorovány žádné xxxx xxxx buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx být test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna sklíčka xx várce ukazují xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. X úvahu xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx použití FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx pozorovány ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x nejsou pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou pozorovány xxxxx červeně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx test kromě xxxxx IF, XXX xxxx FISH xxx xxxx relativně xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, ale může xx rovněž setkat x nezdarem kvůli xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx titru xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx komerční formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx vzájemného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (PBS) xx použijí jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Pro srovnání xxxxxxxx na každé xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx odděleny xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 minuty xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x při teplotě 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx vylije x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx předtím (bod 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx z jamek x xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Nechá xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx vzorku xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx jamky a xxxxx xxxx 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µl xx každé xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Jamky se xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se odečítá x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx menší xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, že xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx lze očekávat xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Nebo se xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x vyvíjejí se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx pomocí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Vzorek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží mezi xxxxx prsty x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic vodní xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx zabránilo xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx oddělených místech xxxxxxxx nebo vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorků xx xxxx inkubace drženy xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx hnojení, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx zvláštní pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají se xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 cm z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, provedou se xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x xxxxxx xxxxxxx xxxxx izolovány x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx následujících xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické identifikační xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Klement xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití citrátů +

Xxxx při 40 °X -

Růst v 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x pufru IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví se xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z této xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = ultra xxxx water).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X do xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (xxxx. Xxxx et al. (1993); Pastrik x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x UM.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) s xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při teplotě 28 ^oC.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného testu xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx x čistou xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx živná půda xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární identifikace xxxxx komplexu R. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR x využitím xxxxxxx XXX, XXX a XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxx xxx Wolf xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Pastrik et xx, 2002; viz dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx patogenity)

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxx test patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny při xxxxxxx 25-28 °C x vysoké relativní xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx P1004) 600 000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx než výše xxxxxxxxx reagenci může xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může to xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou tvořit x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x musí se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut a xxxxxxx se xx 50 °X. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx kultur sekce xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

b) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx v testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv PCR/IF x FISH

Kultivuje se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) na XXXX xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µx xxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x FISH xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx z negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH a xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx substrát xxxxxxxxx fosfatázy, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - plocha pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx nemělo vykazovat xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC TTG XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 minuty xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-agt cga xxx gca xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx aca xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx mohou být xxxxxx použity xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund při 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x xx).

2.4. Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní PCR x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX GAG ATG XXX TA-3'

Reverzní primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX GAA TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) a xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX specifický xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza kopie)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx acc ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx proužkem a x případě xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx chráněný před xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Pro xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx skleníku za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka dne, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx for determinative, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Boudazin, X., X.X. Xx Roux, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Design xx division xxxxxxxx xxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx application xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx virulence xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Modification xx x semi-selective medium xxx xxx isolation xxx quantification of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, U. and Xx Lindo, L. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Fujii, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X detection xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx a tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, J., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Selective enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Delme xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Holloway, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx strain-specific DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. J. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Pastrik, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, A., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx fatty-acid profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Fegan, M. 1996. Analysiss xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16S xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using an xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, J.D. Janse xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.