Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Smith) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx výskytu a xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx a

c) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jejich xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely této xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx xxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx zamořením původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx které xx xxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxxxx z důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx považují xxxxxxx xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx osiva,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sesterským klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx každoročně x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze členských xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) všechny xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) z porostů xxxx xx skládek, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx dužninou xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků hlíz xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete ve xxxxxxx dobu s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 písm. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x způsob předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx produkce xxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx a v xxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx výskytu xxxxx na míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x této xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx anebo je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx trh xxxx xx xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění průzkumu xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx státům a Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby mezi xxxxxxxxx státy. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx podezření z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx a v xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx dohledem způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ zajistí provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podezřelého výskytu x v xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxx zásilek, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, které xxxx xxxxxxxxx opatření pod xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx s xxxxx xxxxxx šíření předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx členského xxxxx xxxx x xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít xxxxx x Xxxxx republice xxxx které xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx v xxxxxxx x §76 odst. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx byl vzorek xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx produkce xxxxxx těch, kde xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví v xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným předmětem xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle písmene x) a možného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx zařízení xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx vod a xxxxxxxxx hostitelských rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx základě označení xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx x bezpečnostní xxxx podle odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem z Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, které xxxx označeny xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x rozsahu možného xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další předměty x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), b) x x).

§7

Opatření proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Ústavu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x pokud není xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) nebo xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x předměty xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x bezpečnostní xxxx, vymezených xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 písm. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx uvedená x odstavci 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 odst. 4 písm. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx splnění a xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby je x souladu x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, xxxxx xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen výskyt xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx základního rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se zaměřením xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx žádná klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním uplynulém xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx č. 1 x vyhlášce č. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx metody, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF test xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx hlízy x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx diagnostickém médiu x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí na xxxxx xxxx komplikovaná, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx xxxxxx podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx z nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v případě xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, další xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX xxxxx nebo XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkové xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety nebo xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx a x případě xxxxxxx xx provede test xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx použitím xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud je xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddílu 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x oddílu 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx se izolační xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé identifikace xxxxxxx kultur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx toho xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x příznaky jiných xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx a zpočátku xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx v infikovaných xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, listy x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Často xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x okolí cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx x xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx vystupují x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx celý prstenec. X postupem infekce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx od xxxxxxx korové části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx se x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx kůra hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 hlíz xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx vzorcích xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš zeminy x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx PCR xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx stranou x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální vyšetření xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx korkovatět po xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x uchovávají se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx ukončení všech xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno použití, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx okamžitě, xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxxxx se x nádobě xxx xxxxxxx pufru, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x rotační třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx vzorek xxxx být použita xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx zamezit xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx mlecí xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X a xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje se xxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl pro xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se se xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolami x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup je xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx odstraní xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší savým xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x uzavřené sterilní xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx zpracují jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx se zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxx xx části xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), pokud xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx být jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lF testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být další xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky proti xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx homologického kmene xxxxxxx kroužkovitosti x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx titru. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x a resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným ve xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx se použijí xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx test xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x řadě. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako duplikát xxxx pro druhý xxxxxx xxxxx obrázku 1.

x) Pro jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx roztoku xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx při teplotě 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X první xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titr (2T).

b) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx na test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní sklíčka xx uspořádají na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx být nejméně xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x pufru IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v pufru XX. Je třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou kontaminaci, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx na vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx musí xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou ze xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X fosfátového pufru x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx do každého xxxxxx x přiloží xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx nebo vodní xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx díky kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx bramboru a xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale je xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx se xxxx xxx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. v 50 µl 0,01 X XX a 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, a to xxxxxxxx x zředěný 1:100 x použitím 10 µl (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x x xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) v 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx sklíčka xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá místo xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 xX CaCl₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky se xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx alespoň 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx a předinkubuje xx xx dobu 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx horkou xxxxxx xxx teplotě 45 °X x do xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka se xxxxxx do předehřáté xxxxx komory x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka se xxxxxx krátce xx XXX x položí xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx jamky x xxxx sklíčko se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx ihned x mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x pod xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx x XX testu.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx jsou přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx metody x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají se xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x interní kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX test by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli došlo x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx a koncentrující xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx optimalizována pro xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µl extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) a inkubuje xx xxx xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx se promíchá xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx být stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl chloroformu x míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °X), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x inkubuje se xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při teplotě -20 °X xx xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx použije 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx prokázalo, xx jsou při xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx vzorku DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a provede xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Trisacetát-EDTA (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V xx xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem a xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX očekávané velikosti xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx byl zjištěn xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným z xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx využití resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro květináče x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx polystyrénu x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx délky). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx xxxxx fixovat xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx list xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x xxxxx xx xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx děložními lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx to xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených policích, xxxxx xxx nedostatku xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x růstové xxxxxx xxxx chráněny xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx vadnutí listů, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx jasně xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx, tím je xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx citlivější xxxx nízkým koncentracím xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx před xx. Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Může xx také připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxx částí xxxxxxx zvadlých listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx se xxxx xX nebo XXX xx šťávě x xxxxx a xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx také připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test IF/PCR xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx být xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx a z xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx nevykazují příznaky xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx selektivního xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx testuje xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx šťávy x xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx obvykle nepodaří xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx nebo XXX-88 médium (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx všech xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx počítáním po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx x identifikace xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx x následujících xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu a xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx se provede xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx bílé xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě tekuté, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté kultury xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx se xxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx měla xxxxxxxxx při 21 °X a po xxxxx xxxxx by xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xxxxx x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx xx může lýza xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx použití.

c) Xxx amplifikaci Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, pokud xxxx amplikony PCR xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

c) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx rody jako Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxx. x rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx z 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a vhodného xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx k přemokření xxxx vyschnutí. U xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky infekce, xx se xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx při teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx po 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx kultura považována xx patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozdrtí x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na XXXX x YPGA, inkubuje xx po xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx virulentního xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx nekontaminované mikrozkumavky xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x objemu 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX test se xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH testy xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX musí xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x mytí sklíček. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx IF xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení koncentrace xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x jednom pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar obsahující 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx sterilizace v xxxxxxxxx při 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým extraktem x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po autoklávování (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) a ochlazení xx 50 X xx přidají antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X sulphate x destilované vodě. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx s xxxxxxx XXX kontrolou (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx tgg pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx tca xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx objem	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq nebo Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx části xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx izolace DNA xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta při xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx při teplotě 4 °C

Poznámka:

Tento program xx optimalizován xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být nutná xxxxxxxxxx kroků cyklů xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky fragmentu x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 minut. Fragmenty xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx upraví xxxxxx XXx nebo NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx se xxxxxxxx před prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx množství xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití xx xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °C.

Vhodné odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví se xxxxxxx, vysuší se xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx působit xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx xxx xxxxxxx vodou x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu tak xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztokem x xxxxx se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx diagnosis of xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx of xxxxxx tubers. Commission xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Publ XXX 11 288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Leifson, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx development xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Rudolph, K x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for the xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx onicum (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx stocks. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers from XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx for specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Russell, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. a X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic bacteria xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx potato tubers xx X1X-XXX and xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X guide to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive sequence-derived XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx primer for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted probes. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx vody a xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených na xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx vykazujících příznaky xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x rostliny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx živné xxxx x x případě xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Popis příznaků xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Test xx výtok slizu xx xxxxxx cévních xxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA bakteriálního xxxxx suspendovaného xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx při pokročilých xxxxxx infekce x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx izolace opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx negativní, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další testy xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx stejné pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Typická morfologie xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx podezření, xx se jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. V xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x objevují xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny se xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx je možné xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx do xxxx xx z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších fázích xx xxxxxxx rozšíří xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx který se xxxxxxxxx částice půdy. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx cévního xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Za méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx může xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C nebo xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx jsou příznaky xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx ve xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx cévních svazků xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx na výtok xxxxx ze stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), test FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, XXXX nebo XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) inkubuje xx 2-6 dní při xxxxxxx 28°C.

- Xx xxxxxxxxxxx živné půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx zcela temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx uvedených zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx patogenní XXX) x mycí xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx v případě, xxxx xx ve xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí čistého x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x podezřelými příznaky xxxxx hniloby xx xxxx stranou a xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx dobu nejméně 2 dnů při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) a xxxxx se uchovávají x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Všechny xxxxx včetně hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, uchovávají se x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x rotační třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx nebo Bioreba, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx zabránit xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí odstřeďováním, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10 000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx se supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx a 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx přeprava v xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx nezbytně nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx jsou v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze vhodně xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 cm x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx nebo skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx x každého xxxxxxx.

Xxxx hostitelské rostliny: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx pozdního jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx oleracea. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech a/nebo xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx díl xxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx zpracují xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx části dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního pufru (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, xxxxx se xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx pokojové teplotě (18-25 °X) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, které xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný vzorkový xxxxxxx se xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Jeden xxx xx xxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C x druhý xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx další testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy a xxxxxx testů a xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace zvětšuje xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx, xx velká saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx citlivost detekce xx však xxxx x závislosti xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx obecně mnohem xxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, citlivost xxxxxxx x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx mělo xxx xxxxx x úvahu xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x případě získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x období xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx době xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx xx odeberou xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx se odeberou xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro každé xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx na xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx obsahují xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x vzorků xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií inhibuje xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový diagram x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx populace na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx schéma xxxxxxx x tomto oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx zpracování xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx vody. Xx xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx dostatečně citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx je xxxxx vzít x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x xxxx sledování, xxx xxxx infikována, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx by xx xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze zpracování xxxxxxx x kanalizace xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Před testováním xx každý vzorek xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx detekci x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x detekční testy

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze stonku

Přítomnost X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury na xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx se pozitivní xxxxxxxxx roztěr kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx uschnout x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle níže xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx modři a xxxxxxx xx inkubovat 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým papírem.

c) Xxxxxx xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x až 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx xx xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx granule intracelulární x zda je xxxxxxxxxx buněk typická xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx B v 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx x vysají xx xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx nebo x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx částicemi. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx označené protilátky x bakteriálního slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) na xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x pozitivních vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx na živné xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná i xxx extrakty, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci patogenu. Xxxxxxxxx materiál se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µl extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx pro každé xxxxxx.

2. Misky se xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx půdě SMSA xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx x po 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx ve xxxxxx x vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx malé, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx fluidní, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., aby se xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx sterilní vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže po 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx vzorků a xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může být xxxxxxx R. solanacearum x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorku do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx s uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před zahájením xxxxx ELISA xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými postupy xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx test xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použit xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Jestliže xx to nutné, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při teplotě - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °C) by xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola na xxxxxxx podložním sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování xxxxxx x následujících postupů:

i) Xxx pelety x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u většího xxxxxx xx množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 do prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx okénka 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx větší v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx by měla xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx v pufru XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

6. Setřesou xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx epifluorescenčním mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. X vzorků s xxxxxxx nebo malým xxxxxx buněk xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx stejná nebo xxxxx. Buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx vzorky, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx resuspendované pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizační xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí se xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx PCR xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA ze xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx PCR použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, připravují xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace DNA

Používají xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx k dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x mikrozkumavka se xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx xx 5 xxx. xx ledu.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx roztoku Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxx. při teplotě 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 ml 100 % etanolu (- 20 °X), krátce xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx na xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx z pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx překlápěním mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx nebo x XXX odparce.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x nechá xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx při teplotě - 20 °C xx do použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx desetinásobné ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx PCR a xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx PCR místo xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza produktu XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx směsi amplifikované XXX z každého xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx zdokumentuje.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x čase xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x porovnává xx x neštěpenou x xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx protokolech PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX test. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx test a xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ buněk X xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °C nebo - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při teplotě 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Použije se 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx obr. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě středová xxxxxx (3 a 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 okénka, x xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx při teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx sklíčka se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat dalších 15 minut.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem vhodným xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma průměry x xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo buněk, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx v xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx kontaminace pufru xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že u xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx méně častěji xxx x xxxxx XX.

5. X úvahu xx berou pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx FISH xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx protilátek podle xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx by xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na každé xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx být xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx jako test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °X na 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx boxu xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx vylijí z xxxxx. Jamky xx xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx nechá x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x odečítá xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou jamek xx xxxxx destičce. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

5) Jamky xx třikrát dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx každé jamky x nechá xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx dobře vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx každé xxxxx x xxxxxxxx xx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx dvojnásobek OH x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se substrátem) x xxxx větší xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx hodnoty OH xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze očekávat xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx lilek (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx nad děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx začne v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby nedošlo x vzájemné kontaminaci. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxxx přenést bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx kultury x podezřením na X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx izolovány x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum použitím xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx test O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx pozitivní, jestliže xxxx IF kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx jiný sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví se xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx bloku nebo xxxxxx vodní lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx postupy XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jedné x následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně provést xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na sterilní xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx žlutou a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx délkového polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx et xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx relativní xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx této xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx se xxxxxxxx x suspenduje x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X se xxxxxxxxx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 g

D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 minut.

Ochladí se xx 50 °X x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí se xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx získala xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V takovém xxxxxxx bude xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 dny xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx na 2 500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx konkurenčních bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx médium (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 až 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °C. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx x lze xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx sekce xxxxxxx rostlin (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx buňky je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx vhodné jako xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx odrůdy s xxxxx xxxxxxx, o xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce výše xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx pelety. Přenese xx 100 µx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx v dalších xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x XXXX xxxxx xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR musí xxx X. solanacearum xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx po xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový pufr, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi a xxxxxx extraktů z xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky, zkontroluje xX x sterilizuje x autoklávu při 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x sterilizuje v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX testy k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx jsou komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH CO₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a nastaví xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou HCl.

Dodatek 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx x xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx protokoly a xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištěni xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 minuty při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx gcg xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Ps-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou xxx xxxxxx použity ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x templátovou DNA)

iv) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají velikost 457 xx x 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX GAG ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX AGT XXX GGC AGA XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX XXX TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 cyklus: i) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx syntéza)

vi) nechá xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací x XXX R. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx biovar X. solanacearum (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Bsm X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační době 30 minut při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (pH 7,4)

XXXX (sterilizovaný přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Hybridizační roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Vysejí xx semena xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 July 1998 xx the control xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Boudazin, G., X.X. Le Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes tkat xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Modification xx x semi-selective medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. and Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx ofYseudomonas solanacearum. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx medium and x PCR technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx on its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of pathogenicity xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Lelliott, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial diseases xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx and molecular xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (eds). Klewer Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA sequencing: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. and Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, xxx xxx xxxxx disease xxxxxxxxx xx banana based xx 16S xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 in Xxxxxxx Europe xx xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Prior, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (eds.) Xxxxxxxxx wilt disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection of X. solanacearum, which xxxxxx xxxxx rot xx potato, by xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.