Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. původce kroužkovitosti - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) kromě xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx k určení xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx pozemku, v xxxxxxx anebo x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx z důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx považují klonově xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx osiva,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České republiky x xxxxxxx podle §8 xxxx. 2,

b) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx v karanténním xxxxx vymezeném xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx určené x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, které xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. a) x x), odstavci 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) laboratorním testováním xxxxxx vody, pěstebního xxxxxxxxx, pevných odpadů xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, původ, složení x xxxx odběru xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 až 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x způsob předávání xxxxxxxxx o odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x x xxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx zjištění x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx bude xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx vzorky xxxxx odebírány x xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx odkladu právnické xxxx xxxxxxx osobě, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx na xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx jednou xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou ročně xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx podezření z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového testu xxxxx přílohy č. 1 oddílu X číslo 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x rámci odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 zákona x zvláštního xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx xxx přesunem xxxxx ostatních partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, sdělí Ústav xxxxxxxxxx úřední rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx podrobnosti týkající xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít xxxxx x Xxxxx republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx podle odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx do xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx xxx vzorek xxxxxxx, x místo xxxx xxxxx produkce xxxxxx xxxx, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx byly zamořené xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx nákazy v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví v xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování x xxxxxx brambor x x ohledem xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx odebraných vzorků xxxxxxxxxxx vod a xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x čeledi lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 ve vhodných xxxxxxxxx s cílem xxxxx rozsah zamoření,

b) xxxxxx v xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) a bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx karanténního xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Pokud xxxx členský stát xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 písm. x) x odstavce 4.

§6

Testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově příbuzných x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx ke stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx potřeby xxxxxx další xxxxxxxx x objekty xx xxxxxxxx, rozšíří xxxxxx xxxxxxx zamoření a xxxx xxxxxx karanténní xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Opatření xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx v souladu x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx sázena x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx s xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx rostlin podle §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x dezinfekci xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených xxxxx §5 odst. 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a o xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx splnění x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 odst. 1 xxxxxx zakázáno s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 zákona, pokud xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx České republiky x xxxxxxx na xxx, xxxx být xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky všech xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vzorcích xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx patogenity.

1. Použití xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogenu x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x typickými příznaky xxxxxxxxxx suspenzí na xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které rostou xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Pokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx typické, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x nichž xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxx výsledek pouze xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx pozitivní, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx v xxxxx xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx přímou izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vyčistit x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x rostlin xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx tuto metodu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x případě potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX test xx xxxxxx v xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx v oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx konci xxxxxx. Kromě toho xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx často i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků jsou xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na pupkovém xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx identifikovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část prstence, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx a mohou xx postupně šířit xx xxxx xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se objevují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx době se x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx xxxx hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx vhodně xxxxxx i xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt lze xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Opatrně xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Na minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 hodin nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx konce zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx příznaky se xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x uchovávají xx x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno použití, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to není xxxxx, uchovávají xx x nádobě bez xxxxxxx pufru, x xxxxxx po dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xxxx xxx použita xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx PCR test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx DNA na xxxxxx xxxx mlecí xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx xx jedno použití x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx maximálně 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje se xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije se 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µl pro Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx zbývající xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo při xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolami x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí i xxx sklíčka na XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění latentních xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého dezinfikovaného xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a shromažďují x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx xx nutné další xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá se xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti titru xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx dobu 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x a resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx není nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí se xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx okénky, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Sklíčka xx xxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx s relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx při pokojové xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx měl xxx titr 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x IF pufru. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nejsou x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx inkubují xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech podložních xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru IF Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx xx setřesou ze xxxxxxx x tato xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx nelze brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou velikostí x morfologií v xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx buněk s xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní u xxxxxx, kde je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x vzorek xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx možno proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s extraktem, xxxxx byl xxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X PB x 50 µl 96 % etanolu. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µl 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Kápne se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µx (v 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) může xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním, xxxxx xx stejné množství 0,01 X PB x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možnost xxxxxx přerušit a xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx pufru (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vody, xxxxx xxxxxx, a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx se při xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx na 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx na sklíčku / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx do předehřáté xxxxx komory x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx filtrační papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, se pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat nebo xxx xxxxx než x pozitivního kontrolního xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx berou xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou přítomné xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx typických buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx je negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx DNA a XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x xxxx xxx xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk na 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty ze xxxxxx by měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx použití PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxx se do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x teplotě 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x inkubuje xx při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx být stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx při 4 °X xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Přidá xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °X), krátce xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xx xxxx po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní se x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx zachová x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx se nechá xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní xxxx (XXX) x xxxxx xxxx nejméně 20 minut při xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX se xxxxxxx 5 µl supernatantu xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x kontroly pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx extraktu DNA xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do směsi XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx se amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované reakční xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Xxxxxxx se xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx při optimální xxxxxxx x době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a pozoruje xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn v xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx interními xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným vzorkem).

PCR xxxx je pozitivní, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale z xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx více negativních xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx ve xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx xxxxx x 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx se xxxx xxxxxx a blok xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx bloku.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx podélný xxxx mírně úhlopříčný xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 cm x hluboký xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx špičky čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx linky xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x řezem xx xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx děložními lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se inokuluje 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a kde xx xx xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx infikovaných hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře na xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke kontaminaci. Xx nezbytné, aby xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx jasně xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; čím xxxx xxxx xxxxxx xx objevení se xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx listů x xxxx krátce před xx. Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx k xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku vejcoplodého xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx test xX xxxx PCR xx xxxxx z xxxxx x xxxxxxx xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx i xx xxxxxxxx inkubační doby xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx test IF/PCR xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 xx x xxxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx selektivního média x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz xxxxxxxx nebo částí xxxxxx a x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x testu XX/XXX složených vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové pelety xxxx šťávy x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx desetinásobné ředění x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx bramborové pelety xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, že xxxxxxxx xx obvykle x infikovaných pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x každého vzorku, x xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) a xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx v xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání všech xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx XXX médiu; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx smetanově bílé xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx okraji x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx pro další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Identifikace

Čisté kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx se měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx růstu, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx provádět x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Redukce nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny z:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

d) Pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx uložit xxx teplotě -16 xx -24 °C xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodné postupy XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Li x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Pastrik x Rainey, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx velikosti a xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 hodin xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A je xxx tyto bakterie xxxxxxxxx kyselina, která xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx z 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x přemokření xxxx vyschnutí. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx během 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky infekce, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením nebo xxxxxxxxx na MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX x suspenduje xx v 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z pupkových xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, že xx prosta C. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 µl xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx extrakce DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx provedou kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento pufr xx používá pro xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx IF (10 mM fosfátový xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx

2.2. IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx na IF xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x jednom pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha jednoho xxxx xx xxxxxxx x xxxx jamkami x

x = plocha xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx růstová média

Živný xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný agar (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktem x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °C po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, pH xx xxxxxx xx 7,2. Po autoklávování (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, amphotericin B 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx na 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zásobních xxxxxxx následovně: nalidixic xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X sulphate x destilované vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx gtt xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x DNA C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový objem	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Koncentrace primerů XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace DNA xxxxxxx)

10 cyklů ii) 1 minuta při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA matrice)

vi) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx modelů xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx xxxxx cyklů xx), xxx), iv), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z DNA X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx ggc gca xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °C x přidá se 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX a x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená množství xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx xx měl xxxxxxxx xx skleníku xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná voda 300 ml

Pevné látky xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, vysuší se xx xxxxxxx a xxxxxx xx zahřátím.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové violeti x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx se Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx se xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx použít xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Publ XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. N., 1981. Determinative methods xx light xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, R. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative bacteria. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx using xxxxx xxxx fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, R. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Billing a X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx rot (Corynebacterium xxxxx onicum (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Hanus, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -H. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx host XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx tubers xx X1X-XXX and xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx identification of xxxxx pathogenic bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX profiling xxxxx xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Janse, X. D. a X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Microbiol. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx vody a xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, schválená xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx testovaných x kontrolních materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím zařízením xx odstraňování odpadů x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní X. solanacearum jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní izolace) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxx je podezření xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx cévních xxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx nebo extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx charakteristika je xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových testů (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není dostačující x xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx dva testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx vzorek považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou popsány x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, je třeba xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx provést test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. solanacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx považován za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje se xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx IF xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA jsou xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku xxxx xxxx rostliny se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím xxxxxxxx. X cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx bakteriální xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx uříznutého stonku xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od xxxxxxxxx xxxxx hlízy x x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální sliz, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx povadlý vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo dní xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx rostliny, které xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx může xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Je xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx od xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx řezu stonkem xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx má xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X xxxx cévních xxxxxx xxxxx vytékat bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx modří A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx test XX (viz xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Rozetře se xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°C.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °C po xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Použijí se xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx PCR test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx proveden xxxx XXX nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) a xxxxx xx uchovávají x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx anebo utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx chlóru). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, uchovávají se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x nádoby. Xxx testu PCR xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo v xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx a 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx extraktu, zajistí xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x vzorky X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí pro xxxxxxx IF a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiných hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x předpěstírny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxx spojením x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahradnickými xxxxxxx xx odebere 1 xx dlouhý xxx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx o počtu xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a podzimu, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx hostitelské rostliny xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx cannabinum, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx xx xx stranou atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Potom xx zpracují xxxxx xxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx maceračním sáčku (xxxx. Stomacher nebo Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží xx xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx nebo xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xx provést filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný vzorkový xxxxxxx se xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx skladuje x 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx je popsán x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může selhat x důvodu konkurence xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx velká xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx může xxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ buněk/litr xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x odpadní vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v úvahu xxx hodnocení spolehlivosti x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx uvědomit xxxx omezení při xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx nejspolehlivější x období xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx x tím x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 cm xxx xxxxxxxx x 2 x od břehu. Xxx vzorkování odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx se odeberou xxxxxx z xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx rovněž přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 g xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po xxxx 15 minut), pokud xxxxx xxx teplotě 4-10 °C, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx populace konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx hnědé hniloby x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx v oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x tomto oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být rovněž xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu z xxxxxxx vody. Je xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x xxxx xxxx kalu xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx nízký stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by xx xxxx řídit standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °C. Xxx ze zpracování xxxxxxx a kanalizace xx navzorkuje shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx nebo xxxx xx rozptýlí rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx země. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx vodou. Sleduje xx, xxx xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x známém XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx nechají uschnout x spodní povrch xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx buď xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx černí a xxxxxxx se mikroskopické xxxxxxxxxx podle níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným roztokem xxxxxx modři a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx octové x xxxxx se inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Krátce xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Přebytečná xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx obarvený roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx xx zvětšením 600x až 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Pozoruje xx, zda xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx jasně oranžová xxxxxxxxxxxx. Také xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx světle, xxx xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% etanolu a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx x xxxxxx se přebytečná xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xylolu x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je zdraví xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x digestoři.

d) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx v digestoři.

e) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx zbarvenými stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, např. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx postupuje podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx postup následující:

a) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních xxxxxxxx xx jemném míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx test x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx na živné xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by být xxxxxx otestován znovu xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleně xx xxxxxx x testování.

U xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx kultivaci patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µl extraktu xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum na xxxxx půdě SMSA xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x po 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx středu x vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx atypické kolonie X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx červené a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx rozetřou xxxx xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném médiu xxx teplotě -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 dnech nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx vzorků a xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx vzorku xx 10 ml obohaceného xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx být použit xxxxx podíl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 hodin při xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX se xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx výsledků xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se test XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxx test xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použit xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx se určit xxxx pro každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx kterém dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx připravených extraktech xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn přidáním 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx tento xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx okénka je xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je potřeba, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx stavu v xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx se sada xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx sklíčka na xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Setřesou se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se pečlivě xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx opláchne x xxxxx jako předtím (3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x xxxxx xxxxxx. X vzorků x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí být xxx porovnání x xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx x vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x sice izolace xxxx IF. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx optimalizační xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření x zabránění kontaminace xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx PCR by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx k přenosu XXX.

XXX test by xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx předtím xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx by být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by měly xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx pro xxxxx test, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx enzymových reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Tris-HCI (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze vzorku x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X na 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a promíchá, xx se viskozita xxxxx a směs xx stane homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 min.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx resuspenduje x 100 µx xxxxxxxx XX a xxxxx xx stát při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx pro XXX podle schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx PCR a xxxxx se týž xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza produktu XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, za předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, jestliže xx xxxxxx očekávaný amplikon xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve vodě, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx očekávaný xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx nebo více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx x dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx možné jej xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x tomto xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Wullingse et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být uložen xxx teplotě - 20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 PB (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx se buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 45 °C po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Použije xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě středová xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Přiloží xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx ně xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx zahřáté vlhké xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x xxxxx.

5. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 ml xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Sejmou xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při teplotě 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (např. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx a celé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx zbarvení odchylné. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí mikroskopu.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx sklíčka xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx a při xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx červeně fluoreskující xxxxx s velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity protilátky x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je blízké xxxx stejné jakou xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx použijí alikvótní xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx et xx., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C na 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx boxu xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X nebo 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °C.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění protilátek xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné koncentrace, xxx je xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µl xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx absorbance xxx 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90minutových intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. solanacearum v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µl do xxxxx jamky a xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou fosfatázou x PBS. Přidá xx 190 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx teplotě 37 °X.

7) Jamky xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x temnu xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x jamek se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní hodnoty XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx protilátek.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (přípravu xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo kultivaru x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23X). Vzorek xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx přidrží xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se utěsní xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx negativní kontrolní xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx relativní vlhkosti x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx být drženy xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, protože xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku ze xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx pozitivní, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů se xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx suspense x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Opina xx xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) s xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Test XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx profil podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Ralstonia sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje charakteristika xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx lišící se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově zelené xx žlutou a xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx dílčích xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx lze dosáhnout xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx primerů XXX, BOX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Cook xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx et al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur k xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx vadnutí mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx suspense se xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx tlakem při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí se xxxxxx a sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx SMSA (Englebrecht 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx získala stanovená xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 U (přibližně 25 mg)/l

Chloramfenikol (Signa X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx mohou tvořit x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a skladují xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx xx měly xxx před použitím xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Živná xxxx XXXX (Elphinstone xx xx., 1996)

Provede xx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx se na 50 °C. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxx působení (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx x lze xx xxxxxx z těchto xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Ústřední xxxxxxx xxxxxxxxx York, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, že xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX testů. Protože xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ buňkami xx 1 ml k xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se v 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx se xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx optické hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz z xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx slupkou, x xxxxx se ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx pelety. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Mikrozkumavky musí xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. solanacearum v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx zjištěn x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx extraktů z xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx podložních sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxx xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =C x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční směs XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx při teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx aca xxx gtc xxx xx -3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx AmpliTaq x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: v) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX XXX AGA XXX T-3'

Přímý primer XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX GAA XXX XXX GAA G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX ACC TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °C (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX GAA XXX XXX ATG CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA GAC X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX ACG GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl optimalizován xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Bsm I xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx tag xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx gcc tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx se pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x skladuje xx chráněný xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného výsevního xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxxxx solanacearum: detection xx restriction xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx tuber extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification of x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Tn: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx medium and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx analysis. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx colony xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Lelliott, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Delme et xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx campestris pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, N., X. Tavner, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Pastrik, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X ribosomal intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, A., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx antibodies to Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx reaction. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, L.C., Holderness, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Taghavi, M., Xxxxxxx, A.C., Xxx, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx disease bacterium xx banana based xx 16S rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Elphinstone, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx assay. Applied xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, J.D. Janse xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx of X. solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.