Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 zákona x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "zákon") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx příslušné předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro xxxxx xxxx xxxxxxxx se rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Davis xx xx. sepedonicus (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi et xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - brambor (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) kromě xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx považují klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx vegetativním množením x jediné rodičovské xxxxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x ní bezprostředně xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx průzkum výskytu xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx republiky x rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Evropské xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx vymezeném xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx včetně doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v odstavci 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx skládek, x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. a) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin bramboru x xxxx xxxxxxxx xxxx, x porostech xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx také laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx vody, pěstebního xxxxxxxxx, pevných odpadů xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x statistických xxxxx a biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx produkce xxxxxxx x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx xx výskytu xxxxx na míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx ve Věstníku Xxxxxxxxxx kontrolního a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx ji pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx x výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při zjištění xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx se v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem ověřené xxxxxxxx vizuálních příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby Ústav x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x xx způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 a xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby odborné xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx nad přesunem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a v xxxxxxxxx spojených s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x jiného xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx mít xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx partii, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož xxx xxxxxx odebrán, a xxxxx přišly do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány a xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx předmětem xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x pozitivními výsledky xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx původem z Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx učiněném obdobně xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx však všechny xxxxxxx příbuzné partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x rozsahu možného xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx potřeby xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx v souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 odst. 1 xxxx. b) smí xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a že xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx není xxxx partie na xxxxxxx výsledku testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx xxx zničí xxxx xxxxxxx očistě x dezinfekci xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 písm. c), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 a x případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 odst. 4 písm. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx splnění x xx uplynutí doby xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, pokud xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, musí xxx xxxxxxxx laboratornímu testování, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx v posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru v xxxxxxxxx potvrzené klonové xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx hniloby nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x vyhlášce č. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx hlízy x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx médiu x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x rostlinného xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx infekce xx xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx rostou xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační zkouška xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, aby xxx xxxxxx považován za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx na negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, další xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx PCR činidla x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx kultivační metoda xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách lilku xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx biotesty xxxxx selhat x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační testy xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy ze xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x případě potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test pozitivní, xx pro ověření xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x typická xxxxxxxxxx kolonie jsou xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx v oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v oddílu 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxx skryté xxxx xx zamění x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx často i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x xxxxx pouze menší. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně tmavší xxxxxxxx než obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy vystupují x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx vyskytovat xxx blízko pupkové xxxxx x xxxxx xx postupně šířit xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, často s xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx xx x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx na vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx chlóru, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx v případě, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx PCR xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx xx brambory xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx s podezřelými xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x uchovávají xx x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx konce okamžitě, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě bez xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx saprofytů v xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se zpracují xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx rozdrcením v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx xxxxx vzorek xxxx xxx použita xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má být xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití x použití xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X a xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl pro xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µl pro xxxxxxxxxx účely. Přidá xx sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný transport xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx se se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí i xxx sklíčka xx XX testy a xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o velikosti 1-2 cm xx xxxxxx strany každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části se xxxxxxxx rozdrtí v xxxxxx maceračním sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Pokud xx xxxx možné, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze ji xxxxxxxxx filtrací a/nebo xxxxxxxxxxx podle popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt se xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx s 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x jeho xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat titr xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Během xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx ředěni (XX) x blízkosti xxxxx xxxx na titru. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx při 7 000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým kmenem xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 okénky x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx test xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x řadě. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x každého roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) a xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici konkrétní xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x tato xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx musí xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxxx a tato xx opláchnou a xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx se okénka xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Berou xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou velikostí x morfologií x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx jako první xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX test x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej úspěšně xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) z 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx bramborového extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx každého vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta v 500 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx se xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X PB a 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x to xxxxxxxx a zředěný 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, že xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit a xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) v 10 xx xxxxx (100 mM Tris-HCI, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vody, xxxxx jednou, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Připraví xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / sklíčcích xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 h x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix a 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx všechna sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx než x XX testu.

5.3.5. X xxxxx se berou xxxxx fluoreskující buňky x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX xxxx. Pokud xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- alikvotní xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx enzymatických xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lýzového pufru (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [pH 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxx se do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku lyzozymu (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml x 10 mM Xxxx XXx, pH 8,0) x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °X), krátce xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x po xxxx 20 minut xxx 4 °X x odstraní xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x promíchá převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx při 4°X, xxxxxx xx zachová x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X xx xx upotřebení xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx použije 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX by xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx vzorku DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx bromidu (0,5 mg xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a pozoruje xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx vzorku, xxx xxx zjištěn ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován x daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosáhnout xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly negativní. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx získán xxxxx z obou xxxxxxxxx.

Xxx mít podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační test.

Pro xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx rozdělí mezi xxxxxxxx lilku jednou x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají se xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Každý xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro xxxxxxxxx x průměru 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx polystyrénu x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx mezi děložními xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký přibližně xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx překryje xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem II

7.3.1. Xx stonek rostliny xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx přibližně 5°), dlouhý 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního napětí xxxxx (turgoru) se xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují těsně xxx děložními lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxx kultury původce xxxxxxxxxxxxxx x kde xx to xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny nechají xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) po dobu xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx tak, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx pozitivní x xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se zajistí xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, oddělí xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx dnech se xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (ztráta xxxxxxx). Zvadlé pletivo xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx trvá období xx objevení se xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx rostliny, proto xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx a xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat populace xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. foveata, jakož x xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Tyto xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena izolace xx použití xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx z xxxxx a izoluje xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx test pozitivní, xxxx xx být xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (selektivních) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx izolovat x pletiv projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx a x xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x testu XX/XXX xxxxxxxxx vzorků (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx být testovány.

Pro xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxx patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx náročným růstovým xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx je obvykle x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen zůstává. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 na XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx počítáním po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x identifikace xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou na xxxxx z následujících xxxxx (složení uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °C xx dobu maximálně 10 dní.

Původce kroužkovitosti xxxxx xxxxxx a xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx bílé xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx mají x průměru 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx použití nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx zahrne xxx každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx referenční xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Zjišťují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx xxxxx by xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx se známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx subkultur živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x kultur z xxxxxxx dextrózového agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR test

a) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxx lýza xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Vzorky xxx potom uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Xxxxx a xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx v UPW.

b) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Kultura se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx podezřelé kultury xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter a Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A je xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x 3-denních xxxxxx testované izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx teplotě 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx infekce, xx xx měly xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx se xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x příznaky infekce xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx na XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Végétaux, Xxxxxxx xx Quarantaine xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, že xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx první rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Mikrozkumavky xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH testy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 mM fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x jednom pozorovacím xxxx (c).

2. Vypočítá xx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 X po xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x ochlazení xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx rozpustí,upraví se xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X sulphate (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X NaOH, cykloheximid x 50% etanolu, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx je 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx xxx ctg xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx ggt tca xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx byly xxxxxxxxxx za použití Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 cyklus: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (prodlužování xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx z XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. sepedonicus xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím se xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx pH x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x skladuje xx xxxxxxxx před prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx xx ochraňovat xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního substrátu.

Lilek xx xx měl xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx vejcoplodého "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové violeti x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový roztok

Jód 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx O 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx zahřátím.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx působit xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx tekoucí vodou x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx papírem.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx roztokem x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the detection xxx xxxxxxxxx xx xxx ring rot xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches of xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. The xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Corynebacterium sepedonicum xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, R. x Leifson, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x J. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx of latent xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x D. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx a X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. A. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx differentiation xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, K.-H., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx their relationship xx the Corynebacteria. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx B1O-PCR and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Beuningen, X. R.; Janse, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x kontrolních materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx administrativním x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, jak je xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x výskytu xxxx xxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx extraktů x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx snadno izolovatelný x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Kultivace může xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx infekce x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx případ.

14) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x tomu, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx dva testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx screeningový test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx screeningových testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Je-li xxxxx xxxx xxxxx xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx FISH je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je třeba xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Provede xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx různých biologických xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx další testy xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx IF xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx později žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx k xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx stává výrazněji xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx parenchymatického xxxxxxx. X pokročilejších fázích xx infekce xxxxxxx xxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx se xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx propadlá xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx cévního xxxxxxx. X pokročilejších fázích xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Za méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx se může xxxxxx větší počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx od xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Za normálních xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x to x při xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx súdánskou černí (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Jiné testy

Dalšími xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Odebere se xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Připraví xx xxxx desetinásobných ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx krvavě červeně xxxxxxxx. Aviruletní formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx hniloby xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx ve xxxxxxxx příliš zeminy xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx test XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx každé hlízy, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x podezřelými příznaky xxxxx hniloby se xxxx stranou a xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx se xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx včetně hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx podle přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x pupkového konce xxxxxxxx. Není-li to xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou se x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx nutné zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x nádoby. Xxx testu XXX xx nutno zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x sáčcích xx xxxxx použití a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °C x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta xx resuspenduje v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx se při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx nezbytně nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí pro xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na smíšené xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx uloží 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx výhonek x xxxxx rostliny uříznutý xxxx xxx xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx x každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odebere 1 xx xxxxxx díl x paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx stonku xxx xxxxx nebo xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx za specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Silene xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení cév xxxx bakteriální sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx stranou xxxxxxxx xx odděleně (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx vysuší xxxxx papírem. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, které má xxxxx 15 xxxxx, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., kde xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. solarcacearum xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx izolace je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce x odpadní xxxx xx zpracování brambor x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X tohoto xxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx xxxxx dojde xx snížení saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx schéma xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta a xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx době xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx a xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se odeberou xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30 cm xxx xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx odeberou xxxxxx x místa xxxxxx odpadní vody. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x vzorkují xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 g xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, které obsahují xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vody xx zpracování brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace může xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, opakují xx testy selektivní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx schéma xxxxxxx x tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx pevného odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x xxxx xxxx kalu xx xxxxx vzít x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x její sledování, xxx xxxx infikována, xxx x xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx by xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx používanými pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze zpracování xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Před testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx kalu xx rozptýlí rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx jsou v xxxxxxxxxx dodatku.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx právě nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx půdě XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx x spodní xxxxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx protáhne nad xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx obarví buď xxxxxxx modří nebo xxxxxxxxx černí a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx se inkubovat 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Krátce se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda se xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx octové a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také se xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zda xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% roztokem xxxxxxxx xxxxx X v 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x vysají xx xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx imersí x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo v xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda xx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxx použitelná i xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx by xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x cílem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Nanese xx 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, nepravidelné a xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx tomto médiu xxxxx atypické kolonie X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx kolonie.

3. Předpokládané xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx sterilní vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx dlouhodobě ve xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, že nedošlo x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx selektivní média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Wilbrink (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x ke zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Z tohoto xxxxxx může xxx xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X obohacovacího xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. U xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx podíl xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx nebo statické xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX se xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se doporučuje xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test XX použit xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu, aby xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx pro každou xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší ředění, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzorků. Xxxxxxxx xx to nutné, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Druhá řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx skladovat ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.i)

Obrázek 2. Příprava sklíčka xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx zakrytá na xxxxxx papíru po xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx každého xxxxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumají se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív se xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x určeném titru xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx odchylná, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou se x úvahu pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace výsledků xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx s typickou xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u vzorků, xxx je xxxxx xxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx hlavní screeningový xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přidaný xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. solanacearum ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX extrahovanou x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx možno xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky (viz dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx enzymových reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx metodami XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx roztoku Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze xx směs odstřeďuje xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx se xx xxxx xx dobu 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx x pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX odparce.

15. Peleta xx resuspenduje x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx při xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX se xxxxxxx xxx test XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx extraktu DNA (1:10 ve sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje interní xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Přidají se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze reakční xxxx PCR a xxxxx se týž xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR mikrozkumavky xx xxxxxx do xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX obarvením x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx dobu 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx vlnové délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx předpokladu, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další testování xxxxx postupového diagramu.

Poznámka:

Používají xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx vzorkového extraktu xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx na 7 000 x.

3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx se a xxxxxxxx 1 hodinu x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7 000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, a xx neředěný a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a přidá xx xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx teplotě 37 °X) a fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup přerušit x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx při teplotě 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx sklíčka (24 x 24 mm) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 okénka, x to xxx, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx po dobu 5 hodin x xxxxxx při xxxxxxx 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Sejmou xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx vzorku inkubací xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a xxxxx xx inkubovat dalších 15 minut.

9. Sklíčka xx krátce ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx na xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx prohlížejí xxx xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx buněčná morfologie x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx obvodu. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx buněk, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli kontaminaci xxxx být test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx buňky z xxxxxx kontaminace pufru xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x atypickou morfologií x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet typických xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX ELISA je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx testu ELISA xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx každou novou xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovním ředění, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx titr protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován xxxx X. solanacearum negativní x suspenze xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx použijí xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx použijí xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X a X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °C xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). U validovaných xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se vylije x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4.).

8) Připraví se xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx z jamek x jamky xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat x xxxxx při pokojové xxxxxxx x odečítá xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví xx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx v uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx jamky. Nechá xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx inkubovat 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µl xx xxxxx jamky x xxxxx xxxx 2 xxxxxx při teplotě 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx každé xxxxx x inkubuje xx x temnu xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx hodnoty OH x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x negativních kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 testovacích xxxxxxx citlivé odrůdy xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx třech xxxxxxx listů x xxxxxxx vzorku. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Black Beauty xxxx kultivary s xxxxxxxxxxx citlivostí), ale xxx rostliny ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx xxxx xxxxxxx x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční stříkačkou

Inokulují xx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Vzorek se xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx začne x xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x karanténním xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °C a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x vzájemné kontaminaci. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx nebo vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, protože by xxxxx přenést bakterie xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx stonků dlouhých 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx mohou xxx x těchto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou infikovány xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého organismu X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Lelliott a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx viz Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Použije xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů se xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx bloku nebo xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx být xxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °C xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx stejnou xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, jestliže xx u kultury x pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^oC.

6.2.6.2. Použijte xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX a absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxx případně xxxxx referenční kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx do živné xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Louws et xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx použít x diferenciaci kmenů xxxxxxxxx do skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 a 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx této xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 cm xxx místem inokulace. Xxxxxxx se xxxxxxxx x suspenduje v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM fosfátového xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí se xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky a xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí se xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx dosažení konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 U (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V takovém xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx může být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone et xx., 1996)

Provede xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx a xxxxxxx se xx 50 °C. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx působení (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x lze je xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx pouze x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx geneticky příbuzných xxxxxxxx x optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

b) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx R. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx v 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx na 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x pupkových konců 200 xxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx slupkou, x xxxxx xx xx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce výše xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx pelety. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe se. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx alikvotní části x 100 N1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx testem XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx pro extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Tento xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx bramborových hlíz xxxx, co byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 mM fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x koncentrovanou XXx xx xxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx okénky a

s - plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CCT GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční směs XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx xxx xxx xx -3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. solanacearum DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x interní kontrolou (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 718 bp (xxxx primerů RS). Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 xxxxx xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx biovar X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Oligonukleotidové primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

b) Protokol XXX specifický xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací XXX R. solanacearum xxxxxx primerů Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 g

Destilovaná (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Ultra xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx proužkem x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo NaOH. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx a autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Sonda EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Pro xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: FORMAMID XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx semena xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x rajčete xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 hodin nebo xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of whole xxxxx for determinative, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx the xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Englebrecht, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Variation xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Llop, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Delme et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Stephens, X.X. xxx De Bruijn, X.X. 1995. Differentiation xx genomic xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Holloway, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx and XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Pastrik, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X ribosomal xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the xxxxx disease xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Europe as xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.