Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jejich xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx opatření s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Davis xx xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x nichž byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxx xxxxx nebo x určité partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx anebo x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 odst. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 1 zákona z xxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx se xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie, které xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, v případě xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx členských států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) všechny xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx určené x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje používané x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. a) x b), odstavci 3 a x xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx uvedeném x odstavci 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin bramboru x xxxx dužninou xxxx, v xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx v odstavci 2 písm. c) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení původcem xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, původ, složení x xxxx odběru xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x způsob předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx výskytu xxxxx na míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx ústavu zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se provádí xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx dohledu této xxxxxx, že xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx na xxx xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx členským státům x Xxxxxx, a xx v případě xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. června. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx x výsledcích xxxxxxxx, týkající se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo xxx xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podezřelého výskytu x x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx ostatních partií xxxxxxxxxxxxx rostlin na xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x mimo xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, v případě xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx příslušného členského xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx o xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, které xxxx mít původ x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona a x přihlédnutím x xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, zásilku, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx produkce xxxxxx xxxx, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány a xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx základě klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx pěstitelské vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, označeným xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx základě označení xxxxxxxxxx předmětů nebo xxxxxxx podle písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx v souladu x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx ze zařízení xx zpracování a xxxxxx xxxxxxx x x ohledem xx xxxxxxxxxxx rostliny z xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx vod x xxxxxxxxx hostitelských rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 ve vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx rozsah zamoření,

b) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx písmene a) xxxxxxxxxx vodu, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní území xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx vody za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě odstavce 2 písm. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx karanténní xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) a xxx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), odstavce 2 písm. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x partiím, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další předměty x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), x) x x).

§7

Opatření proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby a xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx v xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx podrobí očistě x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, xx po xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 písm. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 x x případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx odborně odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx zóně sděluje Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x souladu s §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx výskytu ani xxxxxxxxx riziko jejich xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx sklizňovém roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v případech, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxxxxxx k množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním uplynulém xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška nabývá xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (TF nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx bramboru x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx přerůst nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x nichž xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody extrakce x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx pozitivní, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Test imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x protokoly (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx x mnoha xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za použití XXXX média nebo XXX-88 média a xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx získat xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je popsána x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx použitím xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx alespoň dva xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, že je xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF test xx popsán v xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou selhat x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx odlišné od xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x infikovaných xxxxxxx je omezený. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné snímky xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx nebo průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména blízko xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx pupkovém xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit xx xxxxxxx korové xxxxx. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx objevují xx povrchu hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx se x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx maskovat x xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx jsou na xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Níže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx možné patogenní XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx či xxxxxxxx na brambory xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx x uchovávají xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nádobách xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx teplotě nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx xxxxx vzorek xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se omyje xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X a odstraní xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Použije xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo při xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně nutné, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx x xxx sklíčka xx XX testy x xxxxxxx testy.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx odstraní xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx a shromažďují x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx maceračním sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, je pro xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test používán xxxx hlavní vyšetřovací xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx každou novou xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx stanoven jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx kroužkovitosti x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může být xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným odstředěním xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se provede xxxxxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x průměru 6 mm je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx okének. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Vysuší se xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), nad xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Postup IF xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x ostatních xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Umyjí xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou kontaminaci, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, kterým xx stanovuje titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou ze xxxxxxx a xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx obarvené x xxxxxxx titru protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně fluoreskující xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou morfologií x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x morfologií v xxxxx xxxx pracovním xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, kde je xxxxx typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx specifické pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx uchován x glycerolu při xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx se přes xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx použití se xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X PB a 50 µl 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx protřepáním x xxxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje se xx dobu 8 xxxxx xx 7 000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx se 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx lyzozymu obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX EDTA, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2 mM CaCl₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 ml XXX). Xxxxx z nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se umístí xx xxxxxx sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x kádince s 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x pravých xxxxxx a xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají se xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx všech laboratořích xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných pelet, x nimž byl xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk xx 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, připraví xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx prostředí xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lýzového xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [pH 8,0]) do mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °C na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 xx lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, pH 8,0) a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy DNAR xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx se promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx při xxxxxxx 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Invitrogen)a xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx se stane xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 minut.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g po xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx etanol.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X až xx upotřebení při XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xx použije 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx prokázalo, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx jeden desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx směsi XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V xx xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) po dobu 30-45 minut, xx xxxxxxx vhodných bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx PCR o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx se zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx při optimální xxxxxxx a xxxx x xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx zjištěn v xxxxx xxxxxx, ale xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je pozitivní, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx reakce došlo, xxxxx nebyl získán xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného extraktu xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny ve xxxx 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx zajistilo xxxxx využití resuspendované xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x xxxxxxx 10 xx xx vhodný xxxx xxxxxxxx polystyrénu x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky a 15 xx xxxxx). Xxx každý testovaný xxxxxx se xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx fólie. Rostlinu xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx listem podélný xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx rostliny lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxxx pravý xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, přičemž x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se zakryje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx den xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se inokuluje 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x kde xx xx xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx v karanténě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °C x optimální xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx nedostatku xxxxx se zajistí xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá místa xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická pletiva xxxxxx často xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx období xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx a X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, měla xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX nebo PCR xx xxxxx z xxxxx a xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (viz xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury podezřelé x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx se patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx po 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx podle oddílu 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho izolovat x pletiv projevujících xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety z xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se provádí xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale u xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx v testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x kontrolními miskami x počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, s xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého a/nebo xxxxxxxxx identifikaci xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média příliš xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx rozetřou xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- kvasničný xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy slonoviny, xxxxx žluté, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx okraji x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se zkouška xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21 °X a po xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx po dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus. Nutriční x fyziologické testy xx musí xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí provádět x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba indolu -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk/ml v xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Provede xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, jestliže xX xxxx kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx při teplotě 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx a xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x UPW.

b) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce kultury x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 hodin xxx teplotě 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx A xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test patogenity

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x 3-denních xxxxxx testované izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx teplotě 18-24 °X při dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx se xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx patogenní formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace se xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx rozetřením nebo xxxxxxxxx xx MTNA x XXXX, inkubuje xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx se xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX a suspenduje xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx prostřednictvím xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u které xx jisté, xx xx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX testy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR xxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se používá x mytí xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, pH 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x kultivaci C. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco bakto xxxxx xxxx obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními solemi (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí, xX xx xxxxxx na 7,2. Po autoklávování (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x ochlazení xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X zásobě xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx se xX na 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se rozpustí xxx xxxxxxxx zásobních xxxxxxx následovně: nalidixic xxxx v 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost základního xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x interní XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx gca ata xxx xxx ctg xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx acg ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx xx použití Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq nebo Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky pro XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 minuta při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx optimalizován pro xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných modelů xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx cyklů xx), xxx), iv), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x DNA X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím se xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx xX a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH S XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) je třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx melongena) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid draselný 2 g

Destilovaná xxxx 300 ml

Pevné látky xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí vodou.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem a xxxxx xx xxxxxxx xx dobu jedné xxxxxx.

5. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxxxx za jemného xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx safraninovým roztokem x xxxxx se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx fialově modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx detection xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Corynebacterium sepedonicum xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx of xxxxxxx for general xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, F., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx development xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, K x X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx J. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., X. x X., W. Hanus, 1997. Xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx differentiation xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, K.-H., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X guide xx xxx identification of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Environ. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx dalších hostitelských xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění úrovní X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Pokud xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx živné půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Popis příznaků xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy usnadňují xxxxxxxxxx diagnózu, ale xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx extraktů x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky metodou xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx provede xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx kolonií, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x tomu, xxx xxx xxxxxx považován xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku nezbytný xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx izolační testy xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx provést xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy založené xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň jeden xxxxxxxxxxxx test. Je-li xxxx negativní, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx popsán x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx je podezření, xx se xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x noci xxxxxxx x zotavení. V xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x končí kolapsem x uhynutím rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx do vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je třeba xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konce x xxxxxxx přes pupkový xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx bakteriální sliz. Xxxxxxx se cévní xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x oček může xxxxxxx bakteriální xxxx, xx který xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá místa xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx cévního pletiva. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx je obvyklý xxxxxxxxxx rozvoj měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx povadlý vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °C, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Je xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Za normálních xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx ve xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx cévních xxxxxx xxxxx vytékat bakterie xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a xx x při absenci xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Použije xx jeden xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Jiné testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup při xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 il xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. solanacearum biovar 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum perlově xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela krémově xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx média a xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, které xxxx zcela temně xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx metody pro xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx až 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nože xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx aby bylo xxxxxxxxx vodivé pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx hniloby se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny příznaky xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx pupkovém xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx se uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými příznaky xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx nepoužitých xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; v xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Zalijí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace vzorků. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 minut při xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) při teplotě 4-10 °C a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx IF a xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x paty každého xxxxxx hned nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx stonku xxx vodou nebo xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx pozdního jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx rok x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Datura xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx spp. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx díl xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned vysuší xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °C xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx se xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx dekantuje supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx se rozdělí xx dva stejné xxxx. Jeden xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx díl xx xxxxxxxx v 10-25% (v/v) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx IF (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Koncentrace zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a doporučuje xx jen tehdy, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx popsané v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx však liší x závislosti xx xxxxxxxxx. Citlivost testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vodě xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. Z tohoto xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Omezení xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx úspěšně k xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x různé době xxxxx výše uvedených xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem silných xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odeberou xxxxxx xxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx se odeberou xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx se přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 x xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx kapalina nad xxxxxxxxxx x resuspenduje xx peleta x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx promytím filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx filtrátu. Tato xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vody xx zpracování brambor xxxx u vzorků xxxxxxx vody, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx v oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

(6) Kultivace může xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx populace xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x tomto xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x půdě xxxx kalu xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx není xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by xx xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx sběrných xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Před testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx nebo kalu xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx dodatku.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx vodou. Sleduje xx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx protáhne nad xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx černí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx modři a xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu se xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

f) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x až 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x zda xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx x nechají 10 vteřin inkubovat xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx olejovou xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx zbarvení XXX xxxxxxx v xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx zbarvenými xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxxxx z pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx postupuje xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, provede xx předběžný xxxx x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx jsou přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X vyloučení možné xxxxxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx by xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx vzorek (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Nanese se 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx x po 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx krvavě červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx tomto médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx malé, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx krátkodobě xx sterilní vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 dnech nejsou xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx izolovány podezřelé xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx může xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X obohacovacího xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx vzorku do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 až 30 °C x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, které umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx vzorky xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum x důvodu vysoké xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx jakýmkoli odstřeďováním xxxx jinými postupy xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu IF xxxx hlavního screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx test xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzorků. Jestliže xx to nutné, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx suspendovaným v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °C) xx xx xxxx podle xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx pro tento xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, pokud xxxxx x 10 xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx x ředění 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při teplotě 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx skladovat ve xxxxxxxxx stavu x xxxxxx boxu po xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx měla xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.i)

Obrázek 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx savý papír. Xxxxx testovací xxxxxx xx pokryje kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx se xxxxxxxx xx vlhkém papíře xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná vlhkost xxxxxx osušením.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství konjugátu xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx papíru po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Setřesou xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 ul 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx a přiloží xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x kolem obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může stát, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx PCR by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx k přenosu XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx vzorku, který xxx předtím testován xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx XXX použít xxxx DNA extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace DNA

Používají xx xxxx popsané xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se provede xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx substrátů vzorků xxxx k dispozici xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x koncentrující xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx lázně x teplotou 95 °X na 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X po dobu 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxx. xxx teplotě 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx nové Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se na xxxx xx xxxx 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15 000 x po dobu 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX odparce.

15. Xxxxxx xx resuspenduje x 100 µl xxxxxxxx XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx test XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít multiplexní xxxxxxxx PCR, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze reakční xxxx XXX a xxxxx se týž xxxxx XX xxxx xxx ten, xxxxx xxx použit ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx vhodný XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje pravost xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální teplotě x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX světlem xx obarvení ethidiumbromidem x porovnává xx x neštěpenou a xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx není xxxxxxxxxxxx x žádného xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx také získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou primerů XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx výsledky. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx žádný ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxx více xxxxxx negativních kontrol, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx izolace nebo XX test. Když xx XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx by xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s čerstvě xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (PB) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx uvedeno v dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Wullingse xx xx. (1998).

1 Připraví xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7 000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu opakovat, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (nebo x sušičce xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) a xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx je xxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x postupné etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Použije se 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 a 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Přiloží se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 okénka, x xx tak, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxxx při xxxxxxx 45 °C v xxxxx.

5. Připraví xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x hybmix (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx vody x xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx a 958 ml vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka a xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx inkubovat dalších 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx papír. Odstraní xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Napipetuje xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx a xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Buňky xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, kde xxxxxx pozorovány žádné xxxx xxxx buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx kontaminace pufru xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x sebou nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx morfologií x ke křížové xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx u testu XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx FISH xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, ale může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovním xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx použijí xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx ELISA (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí na 100 °X xx 4 minuty ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx boxu může x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx vylijí x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx nechá v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx protilátek se xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx xx každé xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx x jamek x xxxxx se vymyjí xxxx předtím (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x jamek x jamky xx xxxxxx jako předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Nechá xx inkubovat v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 až 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µl xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x temnu xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA

Test ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (OH) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx větší xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx než dvojnásobek XX v xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x negativních kontrolních xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přidaný xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx stonky xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x podkožní jehlou (xx méně xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx děložními xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 ml, připravenou xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x karanténním xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny x xxxxxxx xxxxxx po xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, protože xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku ze xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků biotestu

Platné xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací rostliny xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x těchto rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní rostliny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx provedený test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Lelliott x Xxxxx (1987), Klement xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx při 40 °X -

Xxxx v 1% NaCl +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx z této xxxxxxx je nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 minuty. Vzorky xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Pastrik x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx velikost x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx délky fragmentů xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x následujících metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx hexosových xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Viz Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx der Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 a 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx patogenity)

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx této xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 xx xxx místem inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x suspenduje v xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 mM fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx suspense se xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky x sterilují xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx P1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa B-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx než výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X takovém xxxxxxx bude xxxx X. solanacearum pomalejší, xxx může xx xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x může omezit xxxxxxxx konkurenčních bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x musí xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx šarže živné xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 až 5 dnech při xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 minut x xxxxxxx xx xx 50 °C. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx půdu SMSA.

Dodatek 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx materiál xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx působení (xxxxxxx 2). Všechny kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx z těchto xxxxxx:

1. Národní sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Ústřední xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT sérologicky xxxx geneticky příbuzných xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx extraktu ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ buňkami xx 1 xx x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx pletiv PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx kultura virulentního xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx se v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx. Xxxxxxx xx xx dosáhne jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se ví, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují se xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v dalších xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx řádně označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx provede xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx zjištěn v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se používá xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx pro XX xxxx

Xxxx xxx IF (10 mM fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx v glycerolu, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok na xxxxxx sklíček xx XX xxxxx k xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx a xxxxxxxxxxxxxx XXx se upraví xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x destilovanou vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx a xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = c x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 nebo 1,25),

X = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =C x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 minuty xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II po xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx gca xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x reakci	Konečná koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx AmpliTaq x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Taq X po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 bp x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX GAA XXX XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX ACC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 minut při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), iii) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX ACG GCA XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Protokol XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

b) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Před xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx tcc xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx proužkem a x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 nebo XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µx hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX POUŽÍVAT XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx semena rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 dní) xx xxxxxxx do pasterizovaného xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x rajčete xx xx měly pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 hodin nebo xxxxxxxxx délka dne, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 July 1998 xx the control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx and application xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: detection xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx virulence xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, J.G., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. and Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx and molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Delme xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Pseudomonas pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx repetitive sequences xxx PCR. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Stephens, C.T. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, E. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx cham reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, A., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, A.C., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana based xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Feuillade, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xxxxxxx using an xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.