Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 zákona x. 326/2004 Sb., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (dále xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru, a Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely této xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce kroužkovitosti - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k určení xxxxxxx šíření xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin označené xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném podle §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Zjišťování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) všechny xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxx brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx určené x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx potvrzení jeho xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx k závlaze xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), odstavci 3 a x xxxxxxxx 4 písm. x) z porostů xxxx xx skládek, x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v odstavci 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx napadení původcem xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 až 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx Ústav xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx produkce brambor x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx míře xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx a xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X průzkumu prováděnému xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx osobě, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx anebo je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx trh xxxx xx xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx členským státům x Komisi, x xx x případě xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx vztahují vždy x xxxxxxxx předchozího xxxx. Podrobnosti tohoto xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x v xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx dohledem způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x v souladu x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx ostatních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiného členského xxxxx xxxx v xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx podezření x bude s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx původ x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx a ke xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož byl xxxxxx odebrán, x xxxxx přišly xx xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx těch, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx podle §6 x stanoví x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x zalévání xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx předmětem xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx písmene a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx zařízení xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, z xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx členským státům x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. b), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem z Xxxxx republiky x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x vymezí karanténní xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx zóny, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x partiím, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), v každém xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx v rozsahu xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx možného xxxxxxxx s cílem xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Ústav x případě potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty za xxxxxxxx, rozšíří rozsah xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx vymezí karanténní xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), b) a x).

§7

Xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) partie hostitelských xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Ústav xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x že xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. b), xx buď xxxxx xxxx podrobí očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod uvedených x příloze č. 6 s xxx, že xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 2 písm. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bodě 4 přílohy č. 4 x x případě výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx zóně sděluje Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x registračním xxxxxx dotčených povinných xxxx, registrovaných podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xx x souladu s §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx jejich přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, pokud xxx nebudou narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx podrobí

a) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx xxx x xxxxxxxxx uplynulém sklizňovém xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se zaměřením xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů a xx podmínek příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti v xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx médiu x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx podařit. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx být izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogena, a xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx další test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se vhodná xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto může xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx patogena lze xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx selektivního obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (viz oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx izolační testy xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x případě potřeby xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, u xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxx skryté xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx okraje xxxxx. Mladé infikované xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, listy a xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez měknutí x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména blízko xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx nepatrně tmavší xxxxxxxx než obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx hlízách xxxx v xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx celý prstenec. X postupem xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx xxxx xx x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx kůra hnije x prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx poškození xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné jsou x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz na 1 test. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Níže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se omyjí. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xx provádět PCR xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nožem či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Opatrně xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx vodivého pletiva x pupkových xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po dobu xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx po xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých nádobách xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí x xxxxxxxxxx výkrojků a xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jednorázovém maceračním xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx supernatant, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xxx teplotě -16 až -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx během testování xxxxxxxxxx při teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx nezbytně nutné, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx předešlo kontaminaci. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění latentních xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx o velikosti 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx xxxxxxxx jedním x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx se části xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, používá se xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx méně citlivé.

Používají xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx suspenze obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx mít XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx titru. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených vzorkových xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Glycerol xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx není xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x homologickým kmenem xxxx s xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí se xxxxxxxxxxxxx sklíčka s xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx řadu lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx roztoku xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší se xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. V xxxxx xxxxx by xxx xxx titr 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) protilátky x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Každé xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x tato xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou xx xxxxxxx x tato xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční krycí xxxxxxxx xx každého xxxxxx a přiloží xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx x žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx kmenem ve xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x xxxxxxxx kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx zjištění jasně xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx u xxxxxx, kde je xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (např. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 M fosfátového xxxxx (XX) z 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx se fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX x 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µl) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx odstředěním, xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 X XX x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl by xx pouze jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky se xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po dobu 1 xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx hybridizační roztok (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx horkou xxxxxx xxx teplotě 45 °X x do xxxxxxx ze 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 krycími sklíčky (24 x 24 xx) xxx, aby xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a podložní xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx vhodným xxx epifluorescenční mikroskopii xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx a kolem xxxxxx. U xxxxxx, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního kontrolního xxxxx. Buňky, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx než x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace výsledku xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx je negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, aby xx zabránilo kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test xx xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX a XXX) xx xx xxxx vždy zacházet xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli došlo x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx měl xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 ml Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx testovány.

Extrakty ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory PCR x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [pH 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx extraktu xx xxxxxx a xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy XXXX xxxxxx B (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx fáze xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °C), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 minut.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx zachová x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě -20 °X až xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví se xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx extraktu DNA xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, která byla xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg na x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (krátké xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx zdokumentuje.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a pozoruje xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace výsledku XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být amplifikován x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x jedné xxxx více negativních xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx vzorku x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx uchovávány x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx konfirmační test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx jednou x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené postupy xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky a 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx se xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx xxxxx gumovým xxxxxx kolem bloku.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx podélný xxxx mírně xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek rostliny xxxxxx xxxxx prsty xx napipetuje mezi xxxxxxx lístky a xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx zářez (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx možné x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při nedostatku xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx musí být xxxxxxxx pro různé xxxxxx inkubovány blízko xxxx, oddělí xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx chráněny xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx dnech se xxxxxxxxx rostliny vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová nebo xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé pletivo xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx období xx objevení xx xxxxxxxx, tím xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx bakterií xxxx xxx přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx listů a xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test IF/PCR xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx inokulace. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx podle oddílu 8. Čisté kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx xxxxx xx izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx části xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo částí xxxxxx a z xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění suspenze 106 cfu xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (např. XXXXX 4053 nebo XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx odděleně xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx testovány.

Pro xxxxxx xxxx připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx testuje xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xx obvykle x infikovaných pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10 000 na XXXX xxxxxx nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními miskami x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx po xxxxx dnech, s xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci by xx xxxx xxxxxxxx xx YGM médiu; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, než xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fenotypícké xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx se měla xxxxxxxxx při 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x fyziologické xxxxx xx xxxx provádět xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst v 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx slabá

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, jestliže xX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx ve xxxxxxxx vodě (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx teplotě 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Pastrik x Rainey, 1999; Xxxxxx x kol., 1999).

x) Identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx kontrolní kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Kultura se xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter a Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z těchto xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx A je xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx pohybuje kolem 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x kol., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x přemokření xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx kultur xx xxxx během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx infekce, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx se ze xxxxxxxx rozetřením nebo xxxxxxxxx na XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °C x sleduje se xxxxx kolonií typických xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Plant Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx v 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx zpracují xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x xxxxx xxx xxxxxxx v žádné x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze skladovat xx dobu až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových částí xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx pro IF (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min

2.2. IF-pufr-Tween

Tento xxxx se používá x xxxx sklíček. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení koncentrace xX a XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Vypočítá xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického sklíčka (X).

X = c x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx média

Živný xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx xxxx obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx sterilizace v xxxxxxxxx při 121 X po xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, pH xx upraví na 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Sigma) x nalidixic acid (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) v 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3 měsíce. Po xxxxxxx antibiotik je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx skladování v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X sulphate (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx vybraných kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx pa xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx ggt ctg xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx PCR kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a NS-8-R xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 písm. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx nutná nová xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů v) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA matrice)

vi) 30 sekund při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován pro xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx modelů xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx z fragmentu xxxxxxxxxxxx pro C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx tcc xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx pH a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je ochraňovat xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxxxxxx xx autoklávováním při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku vejcoplodého (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Semenáčky x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx xx xxx xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx amonného v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky se xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx x uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx se xx vzduchu x xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu tak xxxxxx, pokud se xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx safraninovým xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx vodou a xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Commission xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2. Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx of bacteria xxxx plants. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xxxx diseased potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx the EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx oxidase xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, K x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. A., X. Billing x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX intergenic spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., W. a X., W. Xxxxx, 1997. Specific detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx tubers xx B1O-PCR and xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Skerman, X. X. X., 1967. X xxxxx to xxx identification xx xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx and Wilkins Xxxxxxx, Baltimore.

22. Smith, X. X.; Hemiesy, X; Stead, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling using xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx primer for xxxxx identification xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. H. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx hybridization with 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Environ. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx bramboru x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx vody x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci R. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden druhý xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx bramboru, rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx živné xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx pletiva vykazujícího xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz v xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx test xx negativní, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň ze xxxx screeningových testů (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek pouze x xxxxxxx screeningového xxxxx není xxxxxxxxxxx x tomu, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli postup xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx dva testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se nejméně xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo další xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx nutné.

4) Test XX je popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx popsány x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

11) Kultivace nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx podezřelých xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo rostlin xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Provede xx alespoň jeden xxxxxxxxxxxx test. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. V případě, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Selektivní izolační xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Testy PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé identifikace xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx podezření, xx xx xxxxx x X. solanacearum, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x vrcholu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, přičemž x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx listy zelené, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x končí xxxxxxxx x uhynutím rostliny. X cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx bakteriální xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx vody xx z xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je třeba xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx xx pupkového xxxxx hlízy a x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx důsledek vnitřního xxxxxxx cévního xxxxxxx. X pokročilejších fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj měkkých xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxx než 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx může xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx a S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °C xxxx xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx S. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx příčném řezu xxxxxx xxxxx stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to x při absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A xxxx súdánskou xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. SMSA, viz dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx zřeďovacích roztěrů. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 xxx při xxxxxxx 28°C.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx zcela xxxxxxx xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. solanacearum tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištěni původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při teplotě 2-30 °X po xxxx až 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx vhodný xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky vodivých xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx stranou x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx s podezřelými xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x případě, xx xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx konců se xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) homogenizují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace vzorků. Xx xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a xxxxxx. Xxx testu PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx nebo v xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx zkumavek xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx dekantuje. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx omyje přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x paty xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx odebere nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxx spojením x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahradnickými nůžkami xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x paty každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Silene xxxx. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx rotační třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhý díl xx xxxxxxxx v 10-25% (v/v) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx oddíl 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Metody xxxxxxxxxxx patogenu jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího testu XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx velká xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ovlivní spolehlivost xxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx však xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Citlivost xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, citlivost xxxxxxx x odpadní xxxx xx zpracování brambor x odpadní xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx snížení saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx si xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x období pozdního xxxx, léta a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x různé xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a xxx x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se odeberou xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud možno 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx následujících xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx dílčí vzorky xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru a xxxxxxxxxx filtrátu. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle nedoporučuje x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x popis testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx xxx detekci x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx v xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx popsáni x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx schéma xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, ale xxxx xxx rovněž xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu z xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx xxxx kalu je xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx by se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 míst xx ploše 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvýší se xxxxx sběrných xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze zpracování xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Před testováním xx každý xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx dodatku.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx na výtok xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx půdě YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle níže xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Obě sklíčka xx zakápnou 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx inkubovat 1 minutu při xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx. Přebytečná xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu se xxxxxxx xxxxxx xxxx x přiloží se xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Zakápnou xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx a xxxxxxxx se 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx x xxxxxx se přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx do xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, odsaje xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx olejovou xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá se xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx v xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x příznaky xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx postupuje xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Pozoruje xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, provede xx předběžný test x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx růst vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě přípravených xxxxxxxx ze vzorků xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx nově připravené xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxx jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve středu x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx červené x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx rozetřou nebo xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx universální xxxxxx xxxx., xxx se xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při pokojové xxxxxxx x temnu xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 dnech nejsou xxxxxxxxxxx žádné bakterie xxxx nejsou nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx být neúspěšné x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Z xxxxxx xxxxxx může být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx výsledků obohacením xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx nutné provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde x optimální reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx lF nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B, a xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 až 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx pro tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx standardní množství (15 µx xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx duplikát nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety v xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx stavu x xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryje kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se inkubují xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x následně x xxxxx IF. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °C).

6. Setřesou xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se testovací xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace výsledků xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx test XXX xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx postupového diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum na 1 ml přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx optimalizační xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx bezpečnostní opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce DNA x PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterií x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx z virulentního xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx se provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX ve vzorku. Xxxxxxxxxxx metoda byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x teplotou 95 °X na 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X po dobu 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx nezačne být xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx homogenní.

8. Xxx oddělení xxxx x vytvoření xxxxxxxx xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g xx dobu 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx převede xx nové Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx na xxxx po xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx xxx 15 000 x po dobu 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °C x odstraní xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx překlápěním mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx a odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní XX x nechá xx stát xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx - 20 °C xx do použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX se xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné metody xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly xxx XXX podle schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx ve xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX obarvením x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx zacházení x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje inhibici xxxxxx, jestliže není xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx získán z xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace nebo XX test. Když xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx by měl xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk na 1 ml R. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (PB) ze 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno v dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx dobu 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx ve 200 µl fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x sušičce xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší se xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) se nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx pod xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 ml vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x celé xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých úhlech x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. solanacearum v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx než u xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou fluorescenci, xx neberou v xxxxx.

3. Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka sklíčka) xx krytu sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou nese xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. V úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx FISH

i) Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx použití FITC xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, které obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou pozorovány xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze jako xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX ELISA xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx určení titru xxx každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx protilátky x pracovním xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx otestován jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x solném roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A a X). Pro srovnání xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x PBS X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °X na 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx boxu xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik nespecifických xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x nechá se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx jako předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx absorbance při 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx jamky. Nechá xx inkubovat při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx jamky x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je menší xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou větší xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx xx xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx než dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty OH xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx protilátek.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu ze xxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx lze xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx vzorku. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Nebo se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx výrazné x vyvíjejí se xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Vzorek se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace zářezem

Rostlina xx přidrží xxxx xxxxx prsty x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx děložními xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx příčný řez xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx se utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx negativní kontrolní xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx xxxx x karanténním zařízení 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °C a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx po xxxx inkubace drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx zvláštní pozornost xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 týdnů xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx na X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu jsou xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Lelliott a Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx viz Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Test IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx vodní lázni xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné postupy XXX k amplifikaci xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky fragmentů xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x UM.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x následujících metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum tvoří xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward et xx., 1990). Živná xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx se mění xxxxx 72 hodin xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx rozlišení dílčích xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx patří:

1. Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční PCR x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX a XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxx der Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Pastrik xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) R. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Cook et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pozitivní kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje se 5 xx 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx inkubovat xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx relativní xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx této xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 U (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Použití xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 dny xxxx a červené xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x xxxx xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Misky x xxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx povrchové kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx by měla xxx podrobena kontrole xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 až 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx se xx 50 °C. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx jako xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx působení (tabulka 2). Všechny xxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx z těchto xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlin (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx geneticky příbuzných xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 zdravých hlíz xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx půdě x xxxxxxxxxx se x 10 mM fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x pupkových xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se ví, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx se desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně označeny.

Připraví xx alikvotní části x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx testem XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x FISH testy xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho roku.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový pufr, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx bramborových hlíz xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx pro IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx sodného pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx a xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX na 9,8.

Doplní xx xx 1 x destilovanou xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx xxxxxxx pH 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX AGC TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX GCC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 sekund xxx 68 °C (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx II xx xxxxxxxx při teplotě 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx gca xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund při 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx mají velikost 457 xx a 96 xx.

3. Protokol xxx multiplexní PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX ACC TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx pro biovar X. solanacearum (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX AGT CAC XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX specifický pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx tag xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx gcc tcc xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx při teplotě 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního roztoku xxxxx výpočtů v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) xx xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x rajčete by xx xxxx xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku vejcoplodého: "Xxxxx Beauty"

Vhodná odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx determinative, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx the control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Cook, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx virulence xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Variation xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx medium and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx colony xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Delme xx xx., (eds). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx repetitive sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx genomic structure xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, J.-F Wang, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Hayward, X. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. solanacearum xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region with xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas sy xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx fatty-acid profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx disease bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, J. (eds.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.