Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství stanoví xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx x. 326/2004 Sb., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. sepedonicus (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx rostliny x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx a plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých (Solanaceae), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x určení xxxxxxx šíření xxxxxxx x x určení xxxxxx území, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx partie; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx považují xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x témže xxxx vegetativním množením x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sesterským klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx xxxxxxxxx států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx odpady x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx x výskytu xxxx potvrzení jeho xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. a) x b), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx skládek, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných odpadů xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, původ, složení x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx tohoto průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Ústav xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby, x přihlédnutím x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx ve Věstníku Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx se provádí xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx xxx xxxx ji pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx v případě xxxxxxxx v rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx a výsledcích xxxxxxxx, týkající se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x produkci xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx vizuálních příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby Xxxxx x rámci odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, ze xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx opatření xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx přesunu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx nebezpečí zamoření xxxxxx hostitelských rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx původem x jiného xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, sdělí Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx tohoto podezření x bude x xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx republiku ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 zákona a x přihlédnutím k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx do xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x xxxxxxx, xx xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx zaměřené na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx s ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx zařízení xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x ohledem xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx při xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem xxxxx rozsah xxxxxxxx,

x) xxxxxx v xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě označení xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. c). Podrobnosti x xxxxx oznámení xxxx důvěrné.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce anebo xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx odstavců 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx karanténní xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, a xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx možného xxxxxxxx s cílem xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx x souladu x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx v bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx splněny xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, v případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) partie hostitelských xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud Ústav xxxxxx ověří, že xxxxxxxxxx rozpoznatelné riziko xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x pokud xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx pravděpodobně zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx xxx zničí xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, xx xx xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených podle §5 odst. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 písm. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x případě výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx opatření uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby xx x souladu x §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, šlechtitelským xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx nebudou narušena xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky x uváděný na xxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx prostým xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx byl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx se zaměřením xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Protože protokoly xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx x rostliny bramboru x podezřením x xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí na xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx rostou xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst nebo xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx médiu. Proto xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Pokud xx izolační zkouška xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x nichž každý xx xxxxxxx na xxxxx biologickém principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a izolační xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více screeningových xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx na negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se vhodná xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx v mnoha xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx během 3-10 dní po xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx opatrnou přípravu xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx používá k xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx inhibitory Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů pozitivní, xxx izolační testy xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - viz oddíl 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více screeningových xxxxx založených na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen zřídkakdy x xxxxx xxx xx na konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky skryté xxxx xx zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx na xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x infikovaných xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné snímky xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx prstenec. X postupem infekce xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx hnije x prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být obtížné, xx-xx nemožné, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky řady xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz na 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální vyšetření xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx vzorku se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že jsou xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx pokojové xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Schnutí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x rotační třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C xxxx po dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx xx být xxxxxx XXX test, xx xxxxx zamezit xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx mlecí xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx jedno použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx supernatant, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx peletového pufru (dodatek 3). Použije se 500 µl xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, 500 µl pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke zbývající xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx a xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x vzorky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx sklíčka xx XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx ji xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx používán xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lF testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat xxxx xxx xxxxxx novou xxxx protilátek. Titr xx stanoven xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1 xx homologického kmene xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx titru xxxx xx titru. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx xx xxxx podle možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx části vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do zbývajících xxxxxx x řadě. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx po xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Podle přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx v IF xxxxx. X xxxxx xxxxx by měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) protilátky x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Každé xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x tato xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x úvahu.

Při podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další testování.

b) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx resuspendované pelety x vzorek xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test FISH

PRINCIP

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx a xx pozitivní, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ buněk Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 denní kultury (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého vzorkového xxxxxxxx do Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx se xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X PB x 50 µx 96 % xxxxxxx. Promíchá xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x to xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx nechají uschnout xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl by xx pouze jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx dobu 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx xx demineralizované vody, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx místo xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 xX Tris-HCl, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % etanolu xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx alespoň 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx na 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx dobu 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do předehřáté xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx se 14 - 18 h x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx water = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x 833 ml XXX). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje ve xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx x podložní xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x nechá se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx krátce do XXX x položí xx filtrační papír. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx filtru pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají se xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, které xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx než x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx se průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Přednostně xx používá xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx by xxxx provádět zkušení xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- reakční xxxx PCR.

Měly xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, připraví xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx prostředí xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx pufru (100 xX XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX EDTA [pH 8,0]) do mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx x teplotě 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku lyzozymu (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx a inkubuje xx xxx teplotě 65 °C po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx B (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx a xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9. Přenese se xxxxx fáze do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při teplotě -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxxx x pro XXX se xxxxxxx 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden desetinný xxxxxx vzorku DNA (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR je xxxxxxxxxxxx reakce, která xxxxxxxx také interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx se xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx byla xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx bromidu (0,5 xx na x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v agarózovém xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti x vzoru (pokud xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx dosáhnout xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX s interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx pravého listu. Xxx se zajistilo xxxxx využití resuspendované xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx polystyrénu x vyhloubenou xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx a 15 xx délky). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x blok xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx místě gumovým xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx mírně xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx tři čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx přidrží otevřený xxxxxx špičky čepele xxxxxxxx a nanese xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx linky nebo xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x řezem xx xxxxx v místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 rostlin stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M PBS xxxxxxx inokulační metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx se tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených policích, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se zajistí xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné manipulaci xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx chráněny xxxx veškerým hmyzem, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce kroužkovitosti xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou mívají xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, tím xx xxxxx naděje na xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce před xx. Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle vadnou xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Erwinia spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx stonků rostlin. Xxxxxx xxxxx a xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % etanolem. Xxxxxxx xx test xX xxxx XXX xx šťávě z xxxxx a xxxxxxx xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 cm x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Čisté kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx ho izolovat x xxxxxx projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx provádět izolaci xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx části hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx všech hlíz xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 cfu xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx odděleně xx xxxxxx, které xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl alikvotní xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové pelety xxxx xxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xx obvykle x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx ve vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) a xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, než xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se identifikují xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx provedený xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx použití inokula xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxxx dextrózového agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Provede xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR test

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx vřící vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 minut. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Pastrik x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx velikosti x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x UPW.

b) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx teplotě 18-24 °X při dostatečném xxxxxx a vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx infekce, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx kultura považována xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 dní při xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Quarantaine xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX a FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x které xx jisté, že xx prosta X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx probíhá při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x pupkových částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x glycerolu, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení koncentrace xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx S = plocha xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx C. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco bakto xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu při 115 °C po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, amphotericin X 0,01 g.

V zásobě xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx antibiotik je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx do 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX xx 7,2. Xx autoklávování a xxxxxxxxx na 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zásobních xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X NaOH, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx žádné falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Vícenásobný PCR xxxxxxxx x interní XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx ggt xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx objem	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X a NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx použiti extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 cyklus: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx cyklů xx), xxx), xx), x), vi) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx teplotě 37 °X po dobu 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx gca xxx ctc tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N NaOH x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; pH 7,0) a 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx množství hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití je xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) se xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx se xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx amonného v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, vysuší xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx se omyje xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší se xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou a xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Mohou xx také xxxxxx xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased potato xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, R. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of fermentative xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, K x D. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. J. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Billing x X. X. Hayward, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. A. x X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx stocks. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx by polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on some Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic bacteria xxx their xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx X1X-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. X., 1967. X guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and V. X. Collins, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Janse, X. X. x X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx vody x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x kontrolních materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx se podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x v případě xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Popis xxxxxxxx xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx dokonalé. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx vykazujícího příznaky xx popsán v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx poznámka v xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn izolací xxxxxxxx x xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx postup xxx použit x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx k dispozici.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena xxxxxxx a potvrzení. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx screeningový test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových testů xxxxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx stejné pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx podezřelých na X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

Postupový diagram xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete nevykazujících xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx další testy xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, u xxxxxxx xx podezření, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx dne, přičemž x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý a xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konce a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X rané xxxx se xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx může xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx infekce xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx kroucení listů xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx jedné xxxxxx rostliny xxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, které xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx rostliny bramboru xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx u xxxxxxxx rajčete. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. dulcamara, xxxxx má xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test na xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx modří A xxxx súdánskou xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Odebere se xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x roztoku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře se xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Aviruletní formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. solanacearum tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x podezřelých izolátech xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx testování vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx vzorku

a) Inkubace xxxxxx při teplotě 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx PCR test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx vhodný xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx nože xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé hlízy, xxx aby xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxx do nepoužitých xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx chlóru). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx sterilované xxxx (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx nutno zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx zkumavek na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx R. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx nezbytně nutné, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x vzorky X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz oddíl 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Testy XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li se xxxxxxx, xxx xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx výhonek z xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx zahradnickými nůžkami xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin rostoucích xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro každou xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx dulcamara, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx rostliny rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx mohou hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx xx xx stranou xxxxxxxx xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned vysuší xxxxx papírem. Potom xx zpracují části xxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního pufru (dodatek 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uloží xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °C) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx se rozdělí xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx díl xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx díl xx skladuje x 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx nebrání izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní xxxx. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, citlivost xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího schématu xx xxxx být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx si xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx době xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx odebírají x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 cm pod xxxxxxxx a 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxxxx odpadní vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx rovněž přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při teplotě 4-10 °C, slije xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost pórů 0,45 µm) s xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx hnědé xxxxxxx x půdě

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test je xxxxxx v oddíle 6.1.4.

(3) Obohacovací PCR xxxxx jsou popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx populace na xxxxxxxxxxxx izolace, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx schéma xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být rovněž xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx pevného odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu z xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které se xxxxx vyskytovat v xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx vzít x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x její xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx i při xxxxxxx této metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 cm. Je-li xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx objem testovaného xxxx. Před testováním xx každý xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx právě nad xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx se ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx se xx několika minutách xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda se xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% vodním roztokem xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx světle, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zda je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. solanacearum.

Test xxxxxxxxx černí:

a) Zakápnou xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx se 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx x xxxxxx se přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x vysají xx xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx zakápnou 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx a nechají 10 xxxxxx inkubovat xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku, odsaje xx xxxxxxxxxx voda xxxxx papírem a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx imersí x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk R. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx nebo v xxxxxxxxxx z xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx tato xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx vzorků, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx podezření na xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná x xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx extraktu xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné a xxxxxxx x xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx xxxxx médiu xxxxx atypické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx červené a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., xxx se xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx a xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x důvodů konkurence xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx může xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx být xxxxxx xxxxx podíl xxxxxxxx xx vzorku do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, které umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx hlavní x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx pro každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x použitím vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx to xxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví se xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx suspendovaným v xxxxxxxxxxx extraktu, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje se xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx je xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx je množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx okének v xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý vzorek, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx okénka je xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) protilátek x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné jako xxxxxxxx použitého extraktu.

Pokud xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx osušením.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx opláchne x xxxxx jako předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do každého xxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx se testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx počet typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. solanacearum xx 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx bakterií x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. solanacearum ve xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro použití xx schválenými xxxxxxxx XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx roztoku Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx nezačne být xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx odstřeďuje xxx 15 000 g xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 ml 100 % etanolu (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx na xxxx po xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po dobu 20 minut xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx uschnout na xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx stát při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, by xx xxxxx použít, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, doporučuje xx použít multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje interní xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx extraktu DNA xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Přidají se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx týž xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx použit xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx termocykleru, který xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx nejméně 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za použití xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx a UV (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu PCR

Test XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx není xxxxxxxxxxxx x žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také získat xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx výsledky. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx amplikon xx získán x xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX test x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Když xx XXXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx R. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Wullingse et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x odstřeďuje xx xx dobu 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx a rozpustí xx peleta xx 200 µl fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) a fixují xx xxx plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxx postup xxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x postupné etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx dna vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °C po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 okénka, x xx tak, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechá xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 hodin v xxxxxx při xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l vody x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při teplotě 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí pod xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X vzorků, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x atypickou morfologií x xx křížové xxxxxx se saprofytickými xxxxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X úvahu xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX testu xx negativní, xxxxx xxx použití rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx test kromě xxxxx IF, PCR xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, ale xxxx xx rovněž setkat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. solanacearum. Doporučuje xx určení titru xxx každou novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je blízké xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. solanacearum xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X a X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx boxu může x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Extrakty xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6) Xxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx z jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Přidají xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxx se inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních protilátek X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x PBS. Přidá xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do každé xxxxx x inkubuje xx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA

Test ELISA xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) z xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přidaný do xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu ze xxxxxx x v xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou citlivostí xxxxx testovací laboratoře) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx plného xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx x lilku xxxx méně xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx pomocí xxxxxxxxx x podkožní jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx děložními xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx rostlin, aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx být drženy xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Musejí-li xxx rostliny z xxxxxxx xxxxxx po xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x těchto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační testy

Identifikují xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Média a xxxxxx viz Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických pro X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 oligosondami specifickými xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx pozitivní, xxxxxxxx xx x kultury x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2OH, 16:1 2XX x 18:1 2XX a xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného xxxxx xx zahrnou případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je popsána x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin xx xxxxxxx zelené xx žlutou a xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení dílčích xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Viz Lelliott x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu R. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 a 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) R. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. solanacearum (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx půdy. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, kultura nemůže xxx považována xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 mM fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztěrem xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x xxxxx se xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 ve znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Ochladí se xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 U (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V takovém xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2 500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Misky x xxxxxx xx měly xxx před použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx zabránit xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx agarovou živnou xxxx SMSA, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx na 50 °C. Přidá xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Národní sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Ústřední vědecká xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT xxxxxxxxxxx xxxx geneticky xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX testů. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x FISH

Kultivuje xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx půdě x xxxxxxxxxx se x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx buněčná hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx hustotě 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx slupkou, x xxxxx se xx, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují se xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx x protřepe se. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako kontrolní xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. solanacearum v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx provede xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Tento xxxx xx používá k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx pro IF (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx v glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx potahovací pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt obsahuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx a koncentrovanou XXx se upraví xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Vypočítá se xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Seal xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 sekund při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx cyklu ii), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx při teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx gcg xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx gtc ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC AGT XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX XXX XXX GAA G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA TCA XXX ACC TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. solanacearum xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA GAC X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX ACG XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx pro xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Rs-1-F x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-ggc xxx xxx caa xxx xxx ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE TOXICKÝ. XXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx se pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx roztok xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx a skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů v xxxxxxx 1. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX POUŽÍVAT RUKAVICE X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Vysejí xx semena xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny lilku x xxxxxxx xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx lilku vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms with XXX probes xxxx xxxxxxx virulence xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, A.C. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Variation in xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Budapest, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Cambra, X., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Delme et xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, D. X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx genomic xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Wang, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Holloway, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx by polymerase xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Europe xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Prior, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Berlin) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.