Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 zákona x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx uplatňují xx xxxxx České republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx jejich šíření x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, x ostatní xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) kromě xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx anebo x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 1 zákona z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxxxxxx sesterským klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Evropské unie (xxxx jen "členský xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Zjišťování xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx do třetích xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx partie rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ a xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx včetně doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody ze xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x b), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx ze skládek, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin bramboru x xxxx dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných odpadů xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) a v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie a xxxxx, xxxxx, složení x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Ústav xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x dalších hostitelských xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx na míře xxxxxx zavlečení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Věstníku Xxxxxxxxxx kontrolního x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. září, x xxxxxxxxx případech xx 1. června. Xxxxx oznámení o xxxxxxxxxxxxx a výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Opatření při xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx se v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních příznaků xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x rámci odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x souladu x §11 xxxx. 1 zákona

a) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx i xxxx xxxx pozemky a xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude x xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx při potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 odst. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části a xxxxxxx jiné objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, a xxxxx přišly do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x pozemek, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x zalévání nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx písmene a),

c) xxxxxx karanténní území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x možného xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx vod x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) a bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a jeho xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x v souladu x ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx odstavce 1 xxxx. c), odstavce 2 písm. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx předměty x objekty xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxxx být sázena x xxx dohledem Xxxxxx se x xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx v bodě 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a že xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx partie, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x) nebo xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. b), xx xxx xxxxx xxxx podrobí očistě x dezinfekci pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, že xx xxxxxxxxx očisty a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty xx zamořené ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) v karanténním xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu s §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx prostým xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxx x posledním xxxxxxxxx sklizňovém roce x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx hnědé hniloby, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ bramboru x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k množení x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a x rostlinách bramboru xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx xxxxxxxxxxxxx médiu x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx příznaků je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- XX test (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx rostou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické morfologie xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x nichž každý xx xxxxxxx na xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx vždy použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx nebo XXX-88 média x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x pupkové xxxxx, aby se xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky stanovené xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo biotesty xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx použitím xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz oddíl 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky skryté xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x zpočátku xxxxxxx xx okraje xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx často i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx často xxxx chlorotické, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované děložní xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x okolí cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence cévních xxxxxx a stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx obsahuje miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na hlízách xxxx x tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Zpočátku xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx části. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx hnije x prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vnitřních xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx xx 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx lze vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx PCR xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx nožem či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Opatrně xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx omezí nadbytečná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx x podezřelými xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx kroužkovitosti, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx po xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx pokojové teplotě x uchovávají se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno použití, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx při pokojové xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx vzorků za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx každý vzorek xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxx xxxx mlecí xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, pročistí se xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx supernatant, aniž xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl pro xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Pokud xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně nutné, xxx se se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx xxxxxxx xx XX testy a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx založeny na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší savým xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxx xx části xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 až -86 °X (měsíce), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud xx xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky proti xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx každou xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx stanoven jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx použití vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Glycerol xxx ze vzorku xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x průměru nejméně 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx test xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx nebo pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v IF xxxxx. X první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x tato xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka se xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxx vhodnými pro xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené v xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk s xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx resuspendované pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx screeningový xxxx x xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl uchován x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) v 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) z 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x odstřeďujte xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X PB x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x to xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx uložen při xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x zamíchá se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx den. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x x xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg lyzozymu (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x nechat xxxxxx. Každý xxxxxx xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx ponoří sklíčka xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 mM Tris-HCl, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx se při xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu alespoň 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se umístí xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx přikryje 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx při xxxxxxx 55 °C x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx water = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 ml XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 ml UPW). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx se nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xx XXX a položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx podobný) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x pravých xxxxxx a xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Buňky, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se neberou x xxxxx.

5.3.3. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x XX testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou velikostí x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutné xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test proveden XX xxxx. Xxxxx xx XXX test xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx cílovou XXX. XXX test by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x konečnými xxxxxx, xxx bylo xxxxx, jestli došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lýzového xxxxx (100 xX NaCl, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 ml x 10 mM Xxxx XXx, pH 8,0) x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy DNAR xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, až usazenina xxxx poteče do xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx fáze xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx resuspendujte v 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx směs PCR x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx byla xxxxxxx xx směsi XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx do stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx bromidu (0,5 xx xx x) xx dobu 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (krátké vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx se zkontroluje xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx ve zbývajícím xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx ethidiumbromidem a xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx interními xxxxxxxxxxx xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován x daným vzorkem).

PCR xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze dosáhnout xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 ml přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx lilku jednou x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx ve xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Každý xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je vhodný xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky x 15 xx xxxxx). Xxx každý testovaný xxxxxx xx mezi xxxxxx a blok xxxxxx proužek sterilní xxxxxxxxx fólie. Rostlinu xx xxxxx fixovat xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx bloku.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx podélný xxxx mírně úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se překryje xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx xxxxx xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x řezem xx xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx zakryje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 rostlin stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx tak, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx teplota xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x xxxx manipulaci xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx neodumírají; čím xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Mladé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx ve fázi xxx listů a xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx mohou xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla by xxx provedena izolace xx použití xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx stonků rostlin. Xxxxxx listů a xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx z xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury podezřelé x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou po 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, provede xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x xxxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho xxxxxxxx x pletiv projevujících xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx části hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale u xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Aby xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx odděleně xx xxxxxx, které xxxx být testovány.

Pro xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx se xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µl alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx šťávy z xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným růstovým xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vysokých xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) a xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx po xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx x identifikace xx xx xxxx xxxxxxx dříve, než xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx maximálně 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle xxxx x průměru 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx xxxxx xx xxxx být vyhodnocena. Xxxxx nedošlo k xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus. Nutriční x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (O/F) xxxxxxx nebo slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx v xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Připraví se xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx lF postup (xxxxx 4).

d) Pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx xx dosaženo, jestliže xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Xxxxx a xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x UPW.

b) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

c) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx z těchto xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se hodnota xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x 3-denních xxxxxx testované izolované xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx xxxxxxx 18-24 °X při dostatečném xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplynutí xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx po 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x YPGA, inkubuje xx xx xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °C x sleduje xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z pupkových xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml.

Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx s 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx suspenze C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se protřepat. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx části x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá při xxxxxxx -16 až-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX testy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x nejméně v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v žádné x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů PCR	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po dobu 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx na okénka xxxxxxx na IF xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x kultivaci C. x xxxxx. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x autoklávu při 115 °C xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, pH xx xxxxxx na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx se xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ až 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx ctt xxx xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx PSA-R 5'- xxx xxx xxx gtt tca xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx ggt xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx tca xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový objem	25,0 μx

(¹) Xxxxxx byly xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta při xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován pro xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx modelů xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx kroků cyklů xx), xxx), xx), x), vi) x xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu x enzymem Bgl XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) a 5 xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx pomocí XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do dalšího xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Pro xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx přepichují do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Lilek xx se měl xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x krystalové violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx a xxxxxxx se v xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx O 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xx dobu jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx safraninovým roztokem x xxxxx se xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Publ XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx diseased potato xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx light microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, K x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. A. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Russell, X., X. a X., X. Hanus, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -H. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx differentiation xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Laboratory guide xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX profiling xxxxx xxx BOX-A1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Collins, 1974. X study xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid profiles. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx hybridization xxxx 23x rRNA-targeted probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x bakteriálního vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový diagram xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup testování xx určen pro xxxxx x rostliny xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx testy usnadňují xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx extraktů x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (viz x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Kultivace xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx provede xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ale doporučuje xx xxx každý xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx k dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx stejné xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx stejného xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x potvrzení. Provede xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V případě, xx xx test xxxxxxxxx, vyžaduje se xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná fáze xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx se rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx dne, přičemž x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává nevratným x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx bakteriální xxxx xxxx xx možné xxxx vymáčknout. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx infekce xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterého xx několika minutách xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx se cévní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx pupkového xxxxx xxxxx x x oček xxxx xxxxxxx bakteriální sliz, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx se může xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx půdy nepřevyšují 25 °C nebo xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx xxxxx xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx modří A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými screeningovými xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°C.

- Na xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Detekce x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx testů xx xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx až 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx podporu množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden xxxx XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nože na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Množství xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx hniloby xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx na xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě, aby xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx uchovávají x xxxxxx (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx zpracovat výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx v mixéru (xxxx. Waring nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx zabránit xxxxxxx DNA na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. X xxxxx PCR xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích na xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální frakce xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx resuspenduje x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx a zpracovány xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx pro xxxxxxx IF x xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx odebere kousek xxxxxx 1 cm x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx země.

Rostliny x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx se nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx země. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx přirozenou infekci xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální sliz). Xxxxxxxx xxx stonku x příznaky xx xx stranou atestuje xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při teplotě xx 24 °C xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher nebo Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) pomocí gumového xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží se xxxxx stonků x xxxxxx nejdéle xx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx dekantuje supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se rozdělí xx dva stejné xxxx. Xxxxx díl xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x druhý xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 až -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy a xxxxxx testů a xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Testy PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Selektivní xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují se xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Spolehlivá identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní vody. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Citlivost testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx než x xxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx odpadní vodu xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxx hodnocení spolehlivosti x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx je nejspolehlivější x období pozdního xxxx, léta x xxxxxxx, xxx teplota xxxx překračuje 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a tím x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx odeberou xxxxxx x místa xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na každé 3 km xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx rovněž přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx obsahují xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x vzorků xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou popsány x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx po dalším xxxxxxx vzorku.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx patogenu ve xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx zpracování brambor xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx tyto xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které se xxxxx vyskytovat v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx při sestavování xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx x půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx není xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx půdy xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 cm. Je-li xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx sběrných xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x známém PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx nechají uschnout x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje savým xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x až 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, zda xx xxxxxx na PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx všechna sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se ponoří xxxxxx do xylolu x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x digestoři.

d) Xxxxxxx xx zakápnou 0,5% (x/x) vodným roztokem xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx se opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím světlem xxx olejovou xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) označených příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Při xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný test x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx připraví jako xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků nejdříve xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií byly xxxxxxxxx. Nanese se 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx inkubovat při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx středu x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx fluidní, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) a test xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní média xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup lze xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx vzorků x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx zředění xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Z tohoto xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji populací xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

1. X obohacovacího xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx být použit xxxxx podíl xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX se obsah xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx týmž způsobem xxxx xx vzorky xx výše uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního screeningového xxxxx xx doporučuje xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx izolace, XXX nebo FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx lF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx ředěních blízkých xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 B, a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní díly xxxxxxxx ze vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx v ředění 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Druhá xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.ii) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Setřesou xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové teplotě (18-25 °X).

6. Setřesou xx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace výsledků xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x typickou xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x celém xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx se xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx extrakce DNA x XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX test by xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx následující pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx PCR xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, připravují xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty ze xxxxxx by měly xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx výše popsané xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx odstraňující xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymových xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx metodami XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Tris-HCI (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x promíchá, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g xx dobu 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a promíchá xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX se xxxxxxx xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA, např. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx se xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx se xxx xxxxx XX xxxx xxx ten, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí do xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx nejméně 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx s 3 µx nanášecího pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx se proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx se charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x porovnává xx x neštěpenou a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX je negativní, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, za předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také získat xxxxxxxxxx testu s xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx na inhibici XXX, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x interními xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 až - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (PB) ze 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Wullingse xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx neředěný x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě - 20 °X po xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx skladována chráněna xxxx xxxxxxx a x suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Připraví se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 okénka, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix x 958 ml vody x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány žádné xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x případě, xxx všechna sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese xxxxxxx problémů. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx stonkových partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx méně xxxxxxx xxx u testu XX.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX testu jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, pokud xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx IF, XXX xxxx FISH pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX ELISA xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x nezdarem kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. solanacearum. Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx vzájemného působeni x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X a X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na každé xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 minuty xx xxxxx xxxxx nebo xxxxxx boxu xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx vylijí z xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx vymyji pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví xx xxxxxx ředění protilátek xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx se vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx xxxxx jamky x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Nechá xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5 xxxxx nebo 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou jamek xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx do xxxxx xxxxx a xxxxx stát 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µl xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx dobře vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg p-NPP/ml xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx v temnu xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx při 405 xx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA

Test XXXXX xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx menší xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo nespecifickému xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx listů u xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx v dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací rostliny.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx pomocí stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace zářezem

Rostlina xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 cm xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx xxx xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se nainokulujte 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxxx vzorek, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx se xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx zabránilo kontaminaci, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, oddělí xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxxx přenést bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují se xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx chybí x R. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Použije xx IF metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx pozitivní, jestliže xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx jiný xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho výsledku xxxxxxx x této xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní vody (XXX = ultra xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Vzorky xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx velikost x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx FISH (6.1.7) s nejméně 2 oligosondami specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx s xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční PCR x xxxxxxxx primerů XXX, BOX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx do skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx kultur by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx považována xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx roztěrem xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx výskyt typických xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx bude xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a rozptýlenější xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda se xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx typické kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx agarovou živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Caruso et xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 minut x xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Komerční standardizovaný xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx kultury se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx optimalizace xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně dostupné x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Ústřední xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx pocházejí x původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx geneticky xxxxxxxxxx xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX testů. Protože xxxxxxxxxxxxxxx buňky je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx na 1 xx x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrol xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x FISH

Kultivuje xx 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. solanacearum xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk tvořících xxxxxxx na 1 xx. Xxxxxxx xx xx dosáhne jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx konců 200 hlíz x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, o xxxxx se xx, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx testem IF.

Pro XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx provede test xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt obsahuje xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je možné xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx a xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí se xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný pufr (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx hodnota pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = c x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx s xxxx okénky a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = tubusový xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované pelety x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx testování by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx optimalizován pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx xxx xxx xx -3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace. Perkin Xxxxx XxxxxXxx a xxxx mohou být xxxxxx použity ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx x 96 bp.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX AAC XXX XXX GAG XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-CCC AGT XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX TGC CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx při teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x enzymem Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po inkubační xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX GAA GCA XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx primer Rs-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx primer Rs-3-R: 5'-XXX ACG GCA XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), iii) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. solanacearum pomocí xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx caa xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALEDHYDEM NEPOUŽÍVAT XXXXX PH!]

iii) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µl hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX POUŽÍVAT RUKAVICE X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x sterilizuje autoklávováním xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x rajčete xx xx měly pěstovat xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka dne: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka dne, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Le Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European isolates. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx tuber extracts. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Lindo, L. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx and some xxxx on its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1987. Methods xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Delme xx xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx repetitive sequences xxx PCR. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Stephens, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly classify Xxxxxxxxxxx campestris pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx for identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. J. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Pastrik, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx region xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 pp.

24. Seal, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx by partial 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Pseudomonas xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16S xXXX xxxx sequences. International Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Feuillade, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. and Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.