Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "zákon") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx unie¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx a

c) při xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx šíření x xxxxxxxxx se xxxxxxxx opatření x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx jedlé (Solanum xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx lilkovitých (Solanaceae), x xxxxx byla xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, k určení xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) karanténním xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Xxxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která vznikla xxxxxxxxxxxx množením x xxxxx původní partie; xxxxxx se za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx podle §8 xxxx. 2,

b) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx určené x xxxxxx do xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx určených x dalšímu pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze hostitelských xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x), odstavci 3 x v xxxxxxxx 4 písm. x) x porostů xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním testováním xxxxxx vody, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, složení x dobu odběru xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x statistických xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx jen "Věstník"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx osobě, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx xx xxx xxxx ji pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují vždy x xxxxxxxx předchozího xxxx. Podrobnosti tohoto xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx Ústav x rámci odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxx zásilek, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx ostatních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx hnědé hniloby, xxxxxxxxxxx vod původem x xxxxxx členského xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, sdělí Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude s xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx mít xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx které xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Opatření při xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby, Xxxxx v souladu x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxx pěstování, uvádění xx trh a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx partii, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx vzorek xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx produkce xxxxxx xxxx, xxx xx možná úplná xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx byl vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx předmětem xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx písmene a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a x ohledem xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx s cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx písmene a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle xxxxxxxx 1 písm. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx původem x Xxxxx republiky v xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx karanténní xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx odstavce 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, které xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx možného xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx předměty x objekty za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxx karanténní xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), b) x x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxx x souladu x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx sázena x xxx dohledem Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx x bodě 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Ústav xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny požadavky xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx na xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) nebo xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x dezinfekci xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, xx po xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 písm. b) xxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 zákona, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x souladu x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x výrobě předstupňů x reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx uplynulém sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen výskyt xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x následujícím xxxx, xxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx ani původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vzorcích hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Protože protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx odpadů a xx podmínek příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, jak je xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový test. Xxxxx je x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém médiu x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx komplikovaná, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které rostou xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx doporučuje používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx použití testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, další xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média a xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Pokud xx kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x rostlin xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx biotesty xxxxx selhat x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogena xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx a typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 8.

(5) IF test xx popsán x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx xx podezření, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x často xxx xx na konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx skryté xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, x když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky mohou xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx než obvykle. Xxxxxx dobře identifikovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx povrchu xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx maskovat a xxxx být obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Standardní xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz na 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx založená xx testování vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx, Ralstonia solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Na minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Po xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx všech xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nádobách xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to není xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx bez xxxxxxx pufru, v xxxxxx po dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx pokojové xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx saprofytů x xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po dobu 16-24 hodin chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx homogenizují x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx v mixéru xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xx xxxxx zamezit xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx mlecí xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavky xx jedno použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) při teplotě 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x ke zbývající xxxxx xxxxxx, promíchá xx vířením x xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně nutné, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx sklíčka na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x shromažďují x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx jedním x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx rozdrtí v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx lze ji xxxxxxxxx filtrací a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li se xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx analýzy nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud je xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu x polyklonální protilátkou xxxx být xxxxx xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na titru. Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných při - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), opětovným odstředěním xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. To xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se použijí xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx test se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx o xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší se xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % etanolu xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx boxu xx xx xxxxx nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x IF xxxxx. V xxxxx xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x ostatních xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX pufru. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud nejsou x dispozici konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se kapky xx xxxxx podložních xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v pufru XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, x pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx a xxxx xx opláchnou a xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. U xxxxxx x žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se zkoumá xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx obarvené v xxxxxxx titru protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopickém poli x vypočítá počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx přidané xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) z 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďujte xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 hodin předem. Xxxxxxxx se a xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % etanol. Pro xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µl 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx roztok vzorku (49 µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx lyzozymu (Xxxxx X-6876) v 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx dobře pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx po dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří sklíčka xx demineralizované vody, xxxxx xxxxxx, a xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají uschnout xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx na 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx dobu 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / sklíčcích se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 krycími sklíčky (24 x 24 xx) xxx, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx komory a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx a 833 xx XXX). Xxxxx x nich xx přeinkubuje ve xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se krycí xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x hybmixem při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx do XXX x xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x xxxxxxxxxxx vhodným xxx epifluorescenční mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH testu. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx a vypočítá xxxxx typických xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Pokud xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx používá xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX a XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x konečnými xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- reakční xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x nimž byl xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx popsané pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

K xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lýzového xxxxx (100 xX NaCl, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se vloží xx 5 minut xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) a inkubuje xx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx xxx teplotě 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx fáze do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x po xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx zachová x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx xxxx nejméně 20 minut při xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µl supernatantu xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX by xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, která xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx extraktu DNA xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx směs PCR x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx směsi XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium bromidu (0,5 xx na x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx pro zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx zjištěn x xxxxx vzorku, ale xxx zjištěn ve xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx byly negativní. Xx vícenásobných protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 ml přidaný x extraktům xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, které xxxx uchovávány x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx také vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx být vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x pěstování xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx postupy xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou částí x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky a 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx xxxxx fixovat xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx mírně xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 cm x xxxxxxx přibližně xxxx tři čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a nanese xx xx něj xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx xxxxx nebo xxxxxx malířským štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx lilku den xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a kde xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx se inokuluje 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 M PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo k xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx musí být xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, aby xxxxxxxx x růstové xxxxxx byly chráněny xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (ztráta xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Rostliny xxxx neodumírají; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx, tím xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx kroužkovitosti než xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx k xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx a X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Může xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx stonků xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx test xX nebo XXX xx xxxxx z xxxxx x izoluje xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (viz xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Pokud xx test pozitivní, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx xxxxx oddílu 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx identifikován. Ačkoliv xx původce kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou jej xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x proto se xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx a z xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX složených vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xx obvykle x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 na XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) a xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx počítáním po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou na xxxxx z následujících xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- živný xxxxxxxxxx agar (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- kvasničný xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce kroužkovitosti xxxxx xxxxxx a xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro zaručení xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, konvexně xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx provedený xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá média xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x fyziologické xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí provádět x xxxxxx z xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst v 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk/ml v xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF testu xx dosaženo, jestliže xX xxxx kultury xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx potom uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Mills a xxx., 1997; Pastrik x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (oddíl 5)

c) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A je xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx patogenity

Pro xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx infekce, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °C x sleduje xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrol pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x FISH

Vypěstuje xx 72 hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a suspenduje xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x které xx xxxxx, xx xx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx zpracují xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx použijí jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx alikvotní části x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 až-24 °X xx do xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX test xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH testy xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze skladovat xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx extrakci

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 mM fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se používá x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí roztoky xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx rozpustí x xxxxxxx se sterilizace x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x autoklávu xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, pH xx xxxxxx na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí,upraví xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% etanolu, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx roztoky se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx ctt gtg xxx tgg xx xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx tga xxx gtt xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. subsp. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx byly xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X a NS-8-R xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 minuta při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund při xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných modelů xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx), iv), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová modř (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx tcc xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x případě potřeby xx upraví xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx před prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx ochraňovat xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a sterilizuje xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Semenáčky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx a xxxxxxx xx v xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xx vzduchu a xxxxxx se zahřátím.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx violeti x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx xx působit xx dobu jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx detection xxx diagnosis of xxx ring xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx bacteria xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. EPPO Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Leifson, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Pseudomonas solanacearum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fattyacid analysis. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Van Xxxxxxxxxxx. The interpretation xx xxx EC xxxxxx for xxx xxxxxxxxx of latent xxxx rot infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx development xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic coryneform xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Billing x X. X. Hayward, 1966. X determinative xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Kotth.) Skapt. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. a X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. a X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx coamplification xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx potato xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, DE., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogen Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X study in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx fatty-acid profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. x X. D. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx causes brown xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx hybridization xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Environ. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, DETEKCE A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx hnědé hniloby x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx pracovat za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x případě xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Popis příznaků xx nachází v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx výtok slizu xx svazků cévních xxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx v oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx izolace opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx živných xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx nebo další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx izolační xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx stejného xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x dalšími xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx testů založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx za negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x objevují se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x končí xxxxxxxx x uhynutím xxxxxxxx. X cévních svazků xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx vymáčknout. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx rozšíří xxx xx pupkového xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx pruhy od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx zřídkakdy pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x rostliny S. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx rostliny bramboru xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx rajčete. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx má stonky x kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx stonku xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx řez stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx modří X xxxx súdánskou černí (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence hlízy xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 il xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. SMSA, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°C.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Aviruletní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Detekce x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu výsledků. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže může xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °C po xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x obsahem chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR test, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento postup xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx na pupkovém xxxxx. Všechny naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) a xxxxx xx uchovávají x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx včetně xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle přílohy XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx části xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky s xxxxxxx chlóru). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx testu XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx xxxx v xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavek xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx resuspenduje x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením a xxxxx xx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx smíšené vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na smíšené xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx rostlinné populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx nad spojením x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahradnickými xxxxxxx xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx stonku xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx o počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější v xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné zjistit xx xxxx rok x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Silene alba. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální sliz). Xxxxxxxx díl stonku x příznaky xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx na 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx provést xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozdělí xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx díl xx skladuje x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 až -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxx

4.1 Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx vody a xxxxxx xxxx být xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Citlivost xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Z tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní vodu xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, že xx xxxx schéma xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx výskytu nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx toku xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx na xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx kapalina xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Provede xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx promytím filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x vzorků xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx a identifikace xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx v oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu z xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx tyto metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx při sestavování xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx x půdě xxxx kalu je xxxxx vzít v xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx hostitelské rostliny x její xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x kanalizace xx navzorkuje shromážděním xxxxxx 1 xx x míst reprezentujících xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx napomoci disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxx jsou v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne se xxxxxx právě nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx půdě YPGA xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx zakápnou 1 % vodným roztokem xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx zakápne 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx octové x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x až 1000x x použitím objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx X x 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x vysají xx xxxxx papírem. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným roztokem xxxxxxxxx x nechají 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin je xxxxxx škodlivý, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx v digestoři.

e) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx papírem x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx výrobce. Jinak xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x bakteriálního slizu (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný test x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek tvořících xxxxxxx R. solanacearum xx 1 ml xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx selektivní živné xxxx xx měla xxx před jejím xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx inkubovat při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě SMSA xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a po 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx tomto xxxxx xxxxx atypické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx nebo jen xxxxxxxx fluidní, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx v xxxxx xxxx dlouhodobě ve xxxxxxx ochranném médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx identifikace podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. solanacearum x obohacené kultury xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx vzorku xx 10 ml xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 hodin při xxxxxxx 27 až 30 °C x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX se xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx X. solanacearum x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx hlavní x výsledek XX xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxx test izolace, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky v xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx proveden xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °X) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje obr. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx pufru. Napipetuje xx odměřené standardní xxxxxxxx (15 µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být použita xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíře xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v pufru XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx umístí xx xxxxx papír. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °C).

6. Setřesou xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx opláchne x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do každého xxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním mikroskopem x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x určeném xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního testu. X peletách z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x úvahu pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x vzorků, xxx je počet xxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Výsledek IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x DNA ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx výše popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx schválenými metodami XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx na 5 xxx. do ledu.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx roztoku Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx viskozita xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení fází x vytvoření xxxxxxxx xx xxxx odstřeďuje xxx 15 000 g xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx nové Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 ml 100 % etanolu (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx dobu 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx se xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, zachová se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx do xxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx sraženina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx PCR místo xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx použit xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx s 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx se xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, za předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé xxxxxxxxx pozitivního výsledku xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, jestliže xx xxxxxx očekávaný amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX test. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, je x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ buněk R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx možné jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (PB) ze 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x odstřeďuje xx xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01M XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx použijí 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx být uložen xxx teplotě - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu opakovat, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem a x xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx se buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx v držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx dna vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Použije se 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě středová xxxxxx (3 a 8) se nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 okénka, x to xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x vody x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix x 958 xx xxxx x molekulární kvalitou). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Sejmou xx xxxxx sklíčka a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 minut.

9. Xxxxxxx xx krátce ponoří xx UPW (např. Xxxxx Q water) x položí na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x celé xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx buněk, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx neberou x xxxxx.

3. Xxx podezření xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx várce ukazují xxxxxxxxx buňky x xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx buňky zjištěny (xxx okénka xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že u xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx se saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X úvahu xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x velikostí x morfologií typickou xxx X. solanacearum, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx test kromě xxxxx XX, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx každou novou xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných druhotných xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x suspenze xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx použijí jako xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 A x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, které se xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx do každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Xxxxxxxx xx vylijí x xxxxx. Jamky xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací roztok xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx se vylije x jamek a xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát xx xxxxxx z jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví xx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxx jamek xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních protilátek X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx při teplotě 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx se xxxxxxx x pravidelných intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, jestliže xxxxxxxx hodnota xxxxxxx xxxxxxx (OH) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx hodnoty OH xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx než dvojnásobek xxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (přípravu xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx x teplotě - 68 až - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů xx xx plného rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx rostlin xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace zářezem

Rostlina xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx zabránilo xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny ve xxxxx oddělených místech xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx vhodnými zástěnami. Xxx hnojení, zalévání, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je udržovat xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx čisté kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace na xxxxxxxx vzorku ze xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx roztěry (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx izolovány a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační testy

Identifikují xx čisté kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový test xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Média x xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx jiný xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx pozitivní, jestliže xxxxxxx jeho výsledku xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx příslušné postupy XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Opina xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky fragmentů xxxx pozitivní kontrolní xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx pozitivní, jestliže xx x xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx stejných reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx profil podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx pozitivní kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2XX x 18:1 2XX a absence 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jedné x následujících metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx s xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 jamku), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx a xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx primerů XXX, XXX x XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 a 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se inokulum x xxxxxxx přibližně 10⁶ buněk na 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx lilku ve xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x suspenduje x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx suspense xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx získala xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa X-0125) 1&xxxx;250 U (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx bude xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 dny xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik se xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx zabránit přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 až 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx na 50 °X. Přidá xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x lze xx xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx SMT xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx vhodné jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx půdě x xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx se xxxxxxx buněčná hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx slupkou, x xxxxx se xx, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují se xxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x protřepe se. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být nejprve xxxxxxxxx testem IF.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx pro IF.

Fosfátový xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x koncentrovanou XXx se xxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím poli (x).

2. Vypočítá se xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = c x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v rozmezí 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx nemělo vykazovat xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX CGT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: i) 2 minuty při 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 20 sekund při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx směs PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou xxx xxxxxx použity ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX GAG XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX GAA XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx při teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx biovar X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Protokol XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx byl optimalizován xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Bsm I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x XXX X. solanacearum pomocí xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X PARAFORMALEDHYDEM NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx chráněný před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx hybridizačního roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole xxxxx xxx determinative, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Communities L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx sensitive Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, E. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx virulence xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx tuber extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, U. and Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x PCR technique. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx some xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Lelliott, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx PCR. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Fulbright, D. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, N., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Wang, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Hayward, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of species xxx strain-specific DNA xxxxxx xxx PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. J. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification of 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Disease Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Analysiss of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the xxxxx disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16S xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, C. and Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.