Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 zákona č. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx uplatňují na xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Davis xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx výskytu a xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx jejich šíření x prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter michiganensis (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, x xxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a plodů, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx anebo v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx vymezené Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx se za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x České xxxxxxxxx x xxxxxxx podle §8 xxxx. 2,

b) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx vymezeném xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) všechny xxxxxxxx partie rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx odpady x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx vodní xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x b), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx ze skládek, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. c) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, původ, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x testovaných vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx Ústav xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx a statistických xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a v xxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Věstníku Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona a xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx bude xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx v souladu x §10 xxxx. 5 zákona xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx členským státům x Xxxxxx, x xx v případě xxxxxxxx v rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx x výsledcích xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x produkci předchozího xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Opatření při xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Ústavem xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní výsledek xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx Xxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření předejít xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného členského xxxxx podrobnosti týkající xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx které může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ke xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx, zásilku, xxxxx partii, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x místo xxxx xxxxx produkce xxxxxx těch, xxx xx možná úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx s ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a možného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx xx zpracování a xxxxxx xxxxxxx a x ohledem xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by při xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxxxxx vod a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 ve vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx rozsah xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx a bezpečnostní xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Podrobnosti x tomto oznámení xxxx důvěrné.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxx karanténní xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx sdělením ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. b) x xxx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií hostitelských xxxxxxx klonově příbuzných x partiím, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), v xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx příbuzné partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx v xxxxxxx xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x objekty xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx sázena x pod xxxxxxxx Xxxxxx xx s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, sklady xxxx xxxxxx části x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx zničí xxxx podrobí očistě x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, že xx xxxxxxxxx očisty a xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx opatření xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi xxxxx s registračním xxxxxx dotčených xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 písm. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 xx xxxxxx splnění x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x jejich xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým účelům, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x uváděný xx xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se zaměřením xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x vyhlášce x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů a xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx administrativním a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 odst. 1 definován jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci čisté xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x rostliny bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace patogena x xxxxxxxxxxx materiálu x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx přerůst nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Pokud xx izolační zkouška xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx xxxx typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čisté kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx se vhodná xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx a xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vyčistit x xxxxxxxxxxxxx. Pro úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx tuto metodu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých kultur xxxxxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud je xxxxx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x typická xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX test je xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx xx izolační xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě toho xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, x když xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx příznaků xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx bez měknutí x okolí cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx a stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx obsahuje miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx době xx x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být obtížné, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx jsou na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx vede k xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže se xx xxxxxxxx PCR xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx odstraní slupka xx pupkovém konci xxxxx xxxxx. Opatrně xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx po xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx se shromáždí x nepoužitých xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx saprofytů v xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Je xxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx vzorek xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx xx být xxxxxx PCR test, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx jedno použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut při xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx supernatant, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µl pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx sterilní glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x chladícím xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx jedním x následujících postupů:

a) xxxxx se zalijí xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx FISH. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud xx xX xxxx používán xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx citlivé.

Používají xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx proveden na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 mm.

Test kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Sklíčka xx test xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Pro xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxx xx xx xxxxx nejkratší xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx IF xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx na test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných roztoků xxxxxxxxxx v IF xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní sklíčka xx uspořádají na xxxxxxxxx papír. Každé xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx každém okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře přikrytá xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech podložních xxxxxxx x tato xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu kapiček, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx a tato xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx do každého xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující a xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx být při xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx fluoreskující buňky x typickou velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX testu xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x je xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml přidané xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx jej úspěšně xxxxxxx x extraktem, xxxxx byl xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 M fosfátového xxxxx (XX) z 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx vzorku.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx přes xxx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx protřepáním a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje obrázek 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x zamíchá se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a v xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx lyzozymu obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) v 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX EDTA, xX 8,0). Tento xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 mM CaCl₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká inkubační xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x xxxx při xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x 833 xx UPW). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx se xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx fluoreskující a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x velikostí a xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx než u XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx se berou xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX test. Xxxxx xx PCR test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx metody x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Přednostně xx používá xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx by xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x nimž xxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °C na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) a xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx a vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µl chloroformu x xxxxx xx xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx při 4°C, xxxxxx se xxxxxxx x odstraní etanol.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (UPW) x xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX se xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se prokázalo, xx jsou při xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované vzorky x xxxxxxxx xxx XXX podle validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, kde nehrozí xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxxxxx sterilní voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při počátečním xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1. Xxxxxxx se amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx na x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) prosvíceném gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx ve zbývajícím xxxxxx amplifikované DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x době x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace výsledku XXX xxxxx:

XXX test xx negativní, xxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, ale xxx zjištěn ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx xxx dosáhnout xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx inhibici XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxx, xxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl získán xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie na 1 ml přidaný x xxxxxxxxx ze xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx příznaků a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x níže uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx uvedené postupy xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx délky). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx mezi xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx tři čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xx něj xxxxxxxx štětečkem xx xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx překryje xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx prsty xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx inokulací nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako pozitivní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x optimální xxxxxxx xx 21 °C. Xxx se zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx pro pozitivní x negativní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx ke kontaminaci. Xx nezbytné, aby xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorku na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx dnech xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce kroužkovitosti xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (ztráta xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx období xx xxxxxxxx se xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Vadnutí mohou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx přítomných v xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx k xxx Xxxxxxx carotovora xxxxx. carotovora a X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. xxxxxxx, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx listů a xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx se xxxx xX xxxx PCR xx šťávě z xxxxx x xxxxxxx xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx identifikují a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx test xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx kultury xxxxxxxxx z přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí se xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x pelety xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety z xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx byl pozitivní xxxxxxxx v testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění suspenze 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly odděleně xx vzorků, které xxxx xxx testovány.

Pro xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx testuje xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µl xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx saprofytů. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 na XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx miskami x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx po xxxxx dnech, x xxxxxx počítáním po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci by xx xxxx xxxxxxxx xx YGM médiu; xxxxxxxxx x identifikace xx se měly xxxxxxx xxxxx, než xxxx média příliš xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový agar,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými okraji x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx pomoci vybrat xxxxxxx pro další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx se zahrne xxx každý xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx použití inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Xxxx x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na lF (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Provede xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx buněk x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 minut. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Li x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx pozitivní, pokud xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti a xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Kultura se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X je xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Provede xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx z 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx teplotě 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx kultur xx xxxx během 2 xxxxx nastat typické xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx z xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx rozdrtí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se ze xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx xx MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Protection Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Quarantaine xx xx Pomme xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, že xx xxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx protřepat. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx kontroly. Mikrozkumavky xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx x žádné x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 g

Destilovaná voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a provede xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný počet xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované pelety x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 min.

Médium x kvasnicovým extraktem x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °C po xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx na 7,2. Po autoklávování (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx acid 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% etanolu, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky se xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx ctt xxx xxx xxx pa xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx tca xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx acg ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost amplikonu x DNA X. xx. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontroly 18X rRNA 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové části xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) a 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA matrice)

iii) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Research XXX 200. Při xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii), xx), x), vi) a xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z fragmentu xxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití je xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 g

Destilovaná voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Nasypou se xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xx dobu jedné xxxxxx.

5. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx safraninovým xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx použít xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx diagnosis of xxx ring rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Determinative methods xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Leifson, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of fermentative xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. D. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx for the xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx development of x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the oxidase xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Klement X.; Rudolph, K x D. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Lelliott, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x X. X. Hayward, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx B1O-PCR xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive sequence-derived XXX xxxxxxxxx using xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and V. X. Collins, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup testování xx xxxxx xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx nachází v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je popsán x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx vodě nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx ve vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz v xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, xxxx xx izolace opakovat, xxxxxxx kultivací na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx screeningových xxxxx (xxx poznámka v xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx čistá kultura xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Screeningové xxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx použit x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce a xxxxxxxxxxx patogenu jsou xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx test negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX je popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x dalšími vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx podezřelých xx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících příznaky, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje se xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx popsán x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx dne, přičemž x xxxx dochází x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x cévních xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx minutách xxxxx prýštit bledý xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx infekce xxxxxxx xxx xx pupkového xxxxx hlízy a x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx důsledek vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rostliny, které xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Za méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx může xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Příznaky u xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx jako u xxxxxxxx rajčete. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx má xxxxxx x xxxxxx ve xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle hnědé xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jsou zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx bakteriálního slizu x infikovaného xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx modří X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (viz oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva z xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx z xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, YPGA nebo XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx selektivní médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky s xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum perlově xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. solanacearum tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx popsány v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž použit xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X po xxxx až 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem chlóru, xxxxxxxx má být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento postup xxxx xx vhodný xxxxxxx x případě, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx proveden xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx se xxxx stranou x xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) a xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxx do nepoužitých xxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx vyčištěny a xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °C) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Zalijí xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx nutné zamezit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Pro každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx testu XXX xx nutno zabránit xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx zkumavek xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10 000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 ml peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné části x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx všechny pozitivní xxxxxxxx a xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí pro xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a popisy xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

IF xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx se nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 vzorkovací xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, zahrnují Atriplex xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Silene alba. X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx díl xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned vysuší xxxxx papírem. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx části dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx drcením x xxxxxx maceračním sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx zařízení (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx se xxxxx stonků x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx provést xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx koncentrovaný vzorkový xxxxxxx xx rozdělí xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (v/v) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (měsíce) pro xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx popsán x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx liší x závislosti xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo být xxxxx x úvahu xxx hodnocení spolehlivosti x případě získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx výše uvedených xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx se odeberou xxxxxx z xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx pro každé xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý bude xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x po xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C, xxxxx xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost pórů 0,45 µm) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x vzorků vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x vzorků xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x popis testů x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx v oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx podezřelých čistých xxxxxx R. solanacearum xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx schéma popsané x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být rovněž xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx xx xxxxx vzít x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx v polní xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx sledování, xxx xxxx infikována, xxx i xxx xxxxxxx této metody xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx půdy xx 60 míst xx ploše 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 cm. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx sběrných míst xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx reprezentujících xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Před xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx na výtok xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat následující xxxxxxxxxx test pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx x spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx se mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx vodou x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x přiloží se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Také se xxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Zakápnou xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná xxxx savým papírem.

c) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx do xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je třeba xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx roztěr mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx zbarvenými xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx nebo x xxxxxxxxxx z xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx postupuje xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Připraví se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky použitím xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Očkování xx živnou půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx tato xxxxxx poprvé, provede xx xxxxxxxxx test x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná xxxxxxxxxx živná půda, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx růst vyžaduje xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, že xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Nanese xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje xxxxxx xxxx x pak xx provádí xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné a xxxxxxx x xx 3 dnech xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx fluidní, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální živnou xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (viz xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. solanacearum však xxxx být neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně také xxxxxxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené kultury xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X obohacovacího xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 ul xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx podíl xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 až 30 °C x xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX se xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu vysoké xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx xxx každou xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém dojde x optimální xxxxxx xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx stejných jako xxxx.

Xxxx by xxx xxx proveden xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při teplotě - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx být ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 až 24 °C) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx použít jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, pokud xxxxx s 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx v xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx být použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje obr. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx okénka je xxxxxxxx větší v xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx xxx teplotě 60 °C), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx IF. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryje kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx stejné jako xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem IF. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x následně v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx zakrytá na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx xx každého xxxxxx x xxxxxxx xx krycí sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumají xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx test IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx může stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx podstatných pro xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u vzorků, xxx je počet xxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně proveden xxxxx screeningový xxxx, x xxxx izolace xxxx IF. Jestliže xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Použijí xx schválená činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) by xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci bakterií x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx z virulentního xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx PCR použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by xxxx xxx xxxxx možno xxx zeminy. X xxxxxxx použití PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x dispozici xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx enzymových xxxxxx x koncentrující cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 ml 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Easy XXX® A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se viskozita xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 min.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 minut xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx použije xxx xxxx PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční směs xxx PCR v xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxx xxxxx XX jako xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx s 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se proužky XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx vlnové délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx zdokumentuje.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za předpokladu, xx xxxx amplifikován x žádného xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný amplikon xx získán x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX test a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, je x dokončení diagnózy xxxxx další testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, které xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx provést s xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 denní kultury. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno v dodatku 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který se xxxxxxx v xxxxx xxxxx, je xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu (nebo x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) a fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi je xxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při teplotě 45 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 kádinky obsahující 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx vody s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Odstraní xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx každého xxxxxx a xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení FISH xxxxx

1. Sklíčka se xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) musí xxx zopakován, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x bramborových xxxx x xxxxx xx stonkových partií xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx morfologií x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x nejsou xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA lze xxxxxx pouze jako xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx FISH pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx rovněž xxxxxx x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx titru xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by měly xxx použity xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx stejné jakou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného působeni x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X a X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx být xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Jamky xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a xxxxx se vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µl xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x jamky xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítá xx xxxxxxxxxx při 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µl do xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 hodin při xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového albuminu (XXX), přidá xx 190 µl xx xxxxx jamky a xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x PBS. Xxxxx xx 190 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx se xxxxxxx x pravidelných intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx hodnota optické xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je menší xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxx než dvojnásobek xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přidaný xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx u lilku xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky rostlin xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23X). Vzorek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx mezi děložními xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °C a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny ve xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx nebo jinak xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx sebe, oddělí xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx čisté kultury x xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x xxxxxx xxxxxxx xxxxx izolovány x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Média a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Použije xx IF metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx k X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní xxxx (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách v xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických pro X. solanacearum (např. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Opina et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx délky fragmentů xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) s xxxxxxx 2 oligosondami specifickými xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Test FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx pozitivní kontroly. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně provést xxxxxxxxx xx živné xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově zelené xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx technikami, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx primerů XXX, BOX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1 (biovary 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx test patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx půdy. U xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se rozmělní x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx výskyt typických xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí xx xxxxxx a sterilují x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx se xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) může být xxxxxx Oxoid Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx to xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx může být xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx při použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx na 2 500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v temnu x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx před použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda se xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Provede xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx agarovou živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut x xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx antibiotický zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx působení (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x lze xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Ústřední xxxxxxx xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, že pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx sušené pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx vhodné jako xxxxxxxxx v testech xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ buňkami xx 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x negativních xxxxxxx xxx screeningové testy xxxxxxxx pletiv XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx konců 200 hlíz x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují se xxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx první xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx provede xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. solanacearum xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx používá k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový pufr (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx používá x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx xx upraví xX xx 9,8.

Xxxxxx xx do 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí se xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx s xxxx okénky a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (N).

N =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované pelety x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Seal xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 sekund xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx gtc xxx xx -3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 cyklus: v) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx mají velikost 457 bp a 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX ATG XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX XXX TTG XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 cyklus: i) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití termocykleru XX Research XXX 200. Použití jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační době 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná (redestilovaná) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx se zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx proužkem x x případě potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 nebo XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x sterilizuje autoklávováním xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx do pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x rajčete xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka dne, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., L. Xxxxxxxx and D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 Xxxx 1998 xx the control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Roux, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x semi-selective xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Delme xx xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Pseudomonas pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Hong, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. J. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Pastrik, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. and Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, P.J.M., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Prior, X., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx using xx xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.