Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx jejich xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx se rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen bramboru, x xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž byla xxxxxxxxx možnost infekce xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx území xxxx x určité partii,

e) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x určení xxxxxxx x původu xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx infekce x k xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, stroji, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx - výskyt xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx rodičovské xxxxxx, v případě xxxxxxx rostliny, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx osiva,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx podle §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x vývozu do xxxxxxx xxxx.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x dalšímu pěstování,

b) xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin a xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlízy xxxxxxxx, popřípadě také xxxxx xxxxxx z xxxxxx podniků.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x b), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx vzorků hlíz xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona Xxxxx xx základě uznávaných xxxxxxxxx x statistických xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx zavlečení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 lze xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu této xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx na trh xxxx xx xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 zákona xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi, a xx v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro výsadbu xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření z xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x to způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona

a) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx zásilek, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, s výjimkou xxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx opatření xxxxxxxx xx stupni odhadovaného xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin na xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x xxxxxx členského xxxxx nebo x xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti týkající xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, které xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx partii, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady nebo xxxxxx části a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl vzorek xxxxxxx, x místo xxxx xxxxx produkce xxxxxx těch, xxx xx možná úplná xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny z xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx při xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx vod x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx x cílem xxxxx rozsah zamoření,

b) xxxxxx x xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx podle písmene x) a bezpečnostní xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x sdělí podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem z Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x ustanovením odstavců 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného šetření xxxxx odstavce 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx testování podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx potřeby xxxxxx další předměty x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) a x).

§7

Opatření proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. a) xxxxx být xxxxxx x xxx dohledem Xxxxxx xx x xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, stanovené v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo xxxxxxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx buď zničí xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx po xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s registračním xxxxxx dotčených xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xx x souladu x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací materiál²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx České republiky x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx laboratornímu testování, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx žádná klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx všech partií xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx za vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 odst. 1 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový test, xxxxxxx patogenu x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX test (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx komplikovaná, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx typické, xxxx být izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x každé xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx lze použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx pozitivní, xx pro ověření xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se validovaná xxxxxxx x protokoly (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto může xxx v xxxxx xxxxxxxxx vhodná metoda xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX média nebo XXX-88 xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro úplné xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z blízkosti xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx provede test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx provedení druhého xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx se izolační xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, listy x xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x cév sloupky xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx podobné příznakům xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit od xxxxxxx korové xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx se xxxxxxxx xx povrchu hlízy xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx xxxx se x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce může xxxxxxxx maskovat x xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné jsou x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede k xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x případě, xx xx ve xxxxxx příliš xxxxxx x jestliže xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxxx či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx odstraní slupka xx pupkovém xxxxx xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx vyříznou konické xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Na minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí být xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx po xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 xxx xxx pokojové teplotě x xxxxxxxxxx se x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx všech xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nádobách xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu používány, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx se x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx po dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z pupkového xxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po dobu 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx homogenizují x dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx během extrakce. Xxx každý vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx má být xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavky xx jedno použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí se xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce se xxxxxxx odstřeďováním při 7000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X x xxxxxxxx xx supernatant, aniž xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije xx 500 µl xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µl pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné části x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx při teplotě -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolami x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění latentních xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx čistého dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x velikosti 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx zpracují jedním x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí v xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx podle popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx polovina xx xxxxxxxx s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test jako xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx schopnost dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx test XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX xxxx používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly mít XX xxxx alespoň 1:2000. Během xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx může být xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z brambor xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx části vzorkových xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x průměru nejméně 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) do zbývajících xxxxxx v xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), nad xxxxxxxx nebo pomocí 95 % etanolu xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxx po xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx na xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v IF xxxxx. X první xxxxx xx měl xxx titr 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x tato xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx nebo vodní xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x žádnými xxxx malým počtem xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Berou xx v xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií x xxxxx nebo pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF test. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl být xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx s extraktem, xxxxx byl uchován x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7 000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx xxxx použití xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx se 16 µl fixované xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen při xxxxxxx -20 °C xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze skladovat, xxx xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří sklíčka xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx jamky a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje v xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 55 °X xx xxxx alespoň 10 minut.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx teplotě 45 °X x do xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / sklíčcích xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °C x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 ml UPW). Xxxxx z nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx krycí xxxxxxx x podložní xxxxxxx xx umístí xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x kádince x 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. S xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx lepší xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se neberou x úvahu.

5.3.3. Při xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx xxx u XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx se berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou přítomné xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. XXX xxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx by xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných pelet, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x xxxxxxxxxxxx izolátu (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx PCR, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCl, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µl xxxxxxxx xx vzorku a xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo vodní xxxxx o xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x inkubuje xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx DNAR xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx sníží a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 g po xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx se xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované vzorky x xxxxxxxx xxx XXX podle validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx PCR je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx sterilní voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX namísto vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx na x) xx dobu 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) prosvíceném gelu xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx zdokumentuje.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledku XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx vzorku, ale xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným vzorkem).

PCR xxxx je pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx inhibici PCR, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxx, ale z xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx kolonie na 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx použít i xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx být vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku jednou x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx xx zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené postupy xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Každý xxxxxxxx xx horizontálně xxxxxxx (xxx květináče x průměru 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx x blok xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu se xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx tři čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Zářez xx přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx a xxxxxx xx do xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx překryje xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxxx pravý xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx pozitivní x negativní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx oddělených policích, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí být xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx inkubovány xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x růstové xxxxxx byly chráněny xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá místa xxxx žilnatinou mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická pletiva xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx trvá období xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Patří x xxx Xxxxxxx carotovora xxxxx. carotovora x X. carotovora subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx listů x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx se patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, provede xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx podle oddílu 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx potvrzena pouze xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují příznaky xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, které xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx desetinásobné ředění x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx saprofytů. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x infikovaných pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx měly pěstovat xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx z následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- kvasničný xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx provede xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx okraji x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fenotypícké xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx měla xxxxxxxxx při 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx růstu, inkubuje xx xx dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x fyziologické testy xx xxxx xxxxxxxx xx použití inokula xx subkultur živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx provádět x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo slabá

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, jestliže xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx se 100 µx suspenze buněk x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx teplotě 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx uložit xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx a xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x UPW.

b) Xxxxxxx xx postup XXXX (oddíl 5)

c) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx vhodný xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X je xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx patogenity.

10.1. Připraví xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxx během 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, avšak rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky infekce, xx se měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx se po 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace se xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozdrtí x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, inkubuje xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °C x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Protection Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Quarantaine xx la Pomme xx Terre	Le Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX x xxxxxxxxxx xx v 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx schopných tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, že xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se zpracují xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx alikvotní xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce DNA x pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX musí xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve fyziologickém xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx dextrózový agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktem x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí,upraví se xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx přípravu zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx také nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg pa xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- tcc xxx ggt tca xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x TP (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μM)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 cyklus: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx optimalizován pro xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx charakteristickou xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x enzymem Bgl XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X NaOH x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle výpočtů x tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití je xxxxx xx ochraňovat xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a sterilizuje xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °C.

Vhodné odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení v Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový roztok

Jód 1 g

Jodid draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx tloučku v xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší xx xx xxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx omyje xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx se Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx ring xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx plants. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Washington, 21-23.

5. Xxxx, R. x Leifson, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx using xxxxx xxxx fattyacid analysis. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas pyocyanea xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx for specific xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Hanus, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA sequences xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. a X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx host XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic bacteria xxx their relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx potato xxxxxx xx X1X-XXX and xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx to xxx identification xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive sequence-derived XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogen Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. a X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx of potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové diagramy xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé hniloby x hlízách bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx vody x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je podezření xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx živné půdě x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx extraktů x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v oddíle 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx, xxx izolační test xx negativní, xxxx xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx screeningových xxxxx (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), z xxxxx každý je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx doplněn izolací xxxxxxxx x dále, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x jednoho screeningového xxxxx není dostačující x tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx použit x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx jeden xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx stejného xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x dalšími vzorky.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete nevykazujících xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků.

2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X případě, xx xx test xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní izolační xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx listů xxxxxx x vrcholu rostliny xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x končí xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx možné xxxx vymáčknout. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xx x cévních xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx několika minutách xxxxx prýštit bledý xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx rozšíří xxx xx pupkového xxxxx hlízy x x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo dní xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) rostlina tolik xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx může xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě zbarvená xxxxxx pletiva bílý xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx rostliny bramboru xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x xx x při absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A xxxx súdánskou xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, viz dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx buněčnou suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- U Kelmanova xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství hlíz xx vzorku xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx při teplotě 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Použijí se xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx vhodný xxxxxxx x případě, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden test XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx na xxxx xxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 dnů při xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny a xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat výkrojky x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, uchovávají xx x nádobě bez xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Zalijí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Thurax) nebo xxxxxxx v utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx nutno zabránit xxxxxxx DNA na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µl pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a zpracovány xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, měl by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx možné zjistit xx celý xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx rostliny rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odděleně (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx nejdéle xx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx dekantuje xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Xxxxx xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx díl xx xxxxxxxx x 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx v oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx testy po xxxxxxx vzorku sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. solarcacearum xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody a xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Citlivost testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx než v xxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, léta x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx době xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx a xxx x zastření výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx na xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se přepravují x chladu a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10 000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 minut), pokud xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, xxxxx xx kapalina nad xxxxxxxxxx x resuspenduje xx peleta x 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, které obsahují xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx populace xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx selektivní xxxxxxx po dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x tomto oddíle xx použitelné pro xxxxxxx patogenu ve xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx rovněž xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx zpracování xxxxxxx xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné poznamenat, xx xxxx metody xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx výsledků a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x půdě xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx v polní xxxx je vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx není xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx a popis xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: uřízne se xxxxxx xxxxx nad xxxxxx země. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx půdě XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x známém XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout x spodní xxxxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle níže xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx zakápnou 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx na PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx světle, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx všechna xxxxxxx 0,3% roztokem súdánské xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xxxxxx x vysají se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x procházejícím světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx z xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx značkovači, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném míchání xx dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije xxxx xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na živné xxxx růst vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje jejich xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 dnech xxxxxxxx xx rozvine růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx středu x vnitřními pruhy xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy se xx xxxxx xxxxx xxxxx atypické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx červené x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx fluidní, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx způsobem dojde x ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx současně také xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx sterilních zkumavek xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx v 1,0 xx obohacené živné xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °C v xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se vzorky xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx hlavního screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx X. solanacearum x použitím vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx lF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx proveden xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx být úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 ml pufru (dodatek 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx nebo jiným xxxxxxxxxxx kmenem R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno v dodatku 3 B, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) by xx mělo xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x testování xxxxxx x následujících postupů:

i) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx se napipetuje xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx do řady xxxxxx. Druhá řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % etanolem xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

4. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx stejné xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Zkoumají se xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk se xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. To xx může xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx povinné další xxxxxxxxx.

xx) Výsledek IF xxxxx xx negativní xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx test XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx a je xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx vzorků extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) by xx mělo xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test by xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x virulentního xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx DNA extrahovanou x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace DNA

Používají xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (viz dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx enzymových reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku xxxx vodní xxxxx x teplotou 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx nové Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx se xxxxxx x pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo v XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx teplotě nejméně 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, by se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR v xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX jako xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx umístí do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx se xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX obarvením x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové délky xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx a výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx u zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, ale xx zjištěn u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx není amplifikován x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx obsahujícího R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze vzorku xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx první xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x glycerolu xxx teplotě - 16 až - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (PB) xx 3-5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xx xxxxxxx x tomto xxxxx, je xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x Wullingse et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Zbývající roztok xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx x sušičce sklíček xxx teplotě 37 °X) a fixují xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx přerušit x pokračovat v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx tkaninou nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 okénka, x to tak, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x vody x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx vody x xxxxxxxxxxx kvalitou) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 ml xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Sejmou se xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při teplotě 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Odstraní xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka se xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma průměry x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu XXXX x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx častěji xxx u xxxxx XX.

5. V úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx obsahují méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA lze xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx IF, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Při použití XXX ELISA xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx určení xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx otestován xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx použijí jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx může x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx vylijí x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx vymyji pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum x blokačním pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Přidá xx 100 µx xx xxxxx jamky x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °C 4 až 5 xxxxx nebo 4 ° X xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních protilátek X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µl do xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x PBS. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x nechá se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 mg p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xx x temnu xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přípravu xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Nebo se xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto použít xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx stonky rostlin xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky x podkožní xxxxxx (xx méně xxx 23X). Xxxxxx se xxxxxxx mezi testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx xxxxxx řez xxx 1 cm xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx se zabránilo xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx izolovány. Musejí-li xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, aby nedošlo x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx nebo vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx čisté kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, provedou xx xxxxxxxxx roztěry (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kultury x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x těchto rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích rostlin.

Biotest xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% NaCl +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Test ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx v porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví se xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X do xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx postupy XXX k amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (např. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) s nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx pozitivní, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx pozitivní kontroly. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x absence 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx disacharidů x xxx hexosových xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Hayward et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně provést xxxxxxxxx xx živné xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Cook et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S rDNA (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx patogenity)

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a k xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx 1 ml xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 g

Bacto-Pepton (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné půdy

Živná xxxx SMSA (Englebrecht 1994 ve znění Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, xxx xxxx to xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx při použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx na 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x temnu x musí se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx by xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx šarže živné xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda se xx 2 xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone et xx., 1996)

Provede xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx a xxxxxxx se xx 50 °C. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx optimalizace testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x xxx xx xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx pocházejí x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x optimalizaci xxxxxxxxxx testů

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x testech xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava pozitivních x negativních kontrol xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x FISH

Kultivuje se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx SMSA xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx slupkou, x xxxxx se ví, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx se při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx testem XX.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX testy xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (bezvodý) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx resuspenzi a xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx používá k xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx sodného pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx se xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 ml

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Vypočítá xx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX GCC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX po xxxxxxxx při teplotě 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx gca xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx ttc xxx xxx xxx ttg xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx AmpliTaq a xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace primerů x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 cyklus: v) 5 minut při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x enzymem Xxx X xx inkubační xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají velikost 457 xx a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx et al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX AAC GAA XXX XXX XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC AGT XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX XXX XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. solanacearum = 718 xx (xxxx primerů RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: i) 5 xxxxx při 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 58 °C (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací z XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX ACG XXX XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx specifické xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx byl optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-ggc xxx xxx caa xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx se 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo NaOH. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (pH 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je třeba 90 µl hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx semena rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Sazeničky s xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymorphisms xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Tn: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, H.M., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ofYseudomonas solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx symptomless xxxxxx xxxxxx and some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx analysis. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K and X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Llop, X., Xxxxxx, J., Vicedo, X., Cambra, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, D.W., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains generated xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Holloway, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx xxx PCR xxxxxxx for identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx cham reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Pastrik, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X ribosomal intergenic xxxxxx region with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, A.C., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16S xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Feuillade, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Detection xx X. solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.