Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné předpisy Xxxxxxxx unie¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) zjistilo místo xxxxxxx a rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro účely této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx rostlinami -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx semen bramboru, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, k xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k určení xxxxxx území, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x veškerých jiných xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx pozemku, x xxxxxxx anebo x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx z důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx v témže xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx republiky x xxxxxxx podle §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx v karanténním xxxxx vymezeném podle §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx určených x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin a xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, které xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx odpady x xxxxxx podniků.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxx podezřelých z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v odstavci 2 písm. x) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx při průzkumu, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x testovaných vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx a biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx produkce xxxxxxx x dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx bude xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx trh xxxx xx pěstuje xxxx pěstovala.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 předkládá Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx v rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx státy. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, x xx v případě xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx pozemcích množitele, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x v xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ zajistí provedení xxxxxxxx laboratorního testování, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 odst. 1 zákona

a) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce hnědé xxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxx předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx nad přesunem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx původem x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx xxxxxx podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx původ x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx které může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx testování odebraných xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx v souladu x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx původce kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, zásilku, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx části a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx do xxxxx s uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x místo xxxx xxxxx produkce xxxxxx těch, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx odborné xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx v xxxxxxx s ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným předmětem xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx podle xxxxxxx x) a možného xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny z xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx při xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx písmene x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x vymezení karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x tomto oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx členský xxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx však všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x xxxxxxx možného xxxxxxxx s cílem xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x případě xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Opatření proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být xxxxxx x pod dohledem Xxxxxx xx x xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx v bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud Ústav xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx rozpoznatelné riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x), xx xxx zničí xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod uvedených x příloze č. 6 x xxx, že po xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx pravděpodobně zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, vymezených xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 písm. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxx opatření xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř karanténního xxxxx x x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 písm. b) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x uváděný xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx s §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x České republiky xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx byl v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru v xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx republiky.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx je x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx původcem kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci x identifikaci čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový test, xxxxxxx patogenu z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx médiu x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se dosáhne xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Zkouška patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových testů, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx lze použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, další xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx přesnost (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx a xxxxxx resuspendované pelety 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx vyčistit a xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx sekundární bakterie, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxx bramborových extraktů xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx MTNA nebo XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx biotesty xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů pozitivní, xxx izolační testy xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx použitím xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx biologických principech. Xxxxx je xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a typická xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x v xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx skryté xxxx xx zamění x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole na xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, i xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx na spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména blízko xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév sloupky xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx obsahuje miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx době se x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je k xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také pro xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš xxxxxx x jestliže xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx nadbytečná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Po xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po xxxx xxxxxxx dvou týdnů.

Všechny xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 dnů xxx pokojové xxxxxxx x uchovávají xx x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx vzorku se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno použití, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx není xxxxx, uchovávají se x xxxxxx bez xxxxxxx pufru, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx učinit bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x nádoby. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx nebo mlecí xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx jedno xxxxxxx x použití zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx supernatant, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Použije xx 500 µl xxx xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx i xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx nebo zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40 ml) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx maceračním xxxxx x přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxx xx části xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx při teplotě -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test xxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud je xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx suspenze obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x blízkosti xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx skladovaných při - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx vzorku xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx sklíčka s xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 okénky x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx je xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °C), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x IF xxxxx. X první xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx ponořením xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx vlhký xxxxx. Testovací okénka xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka se xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx na 1 xx resuspendované pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl být xxxxx xxxxx proveden x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx přes xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 75 µl 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx fixované xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V této xxxx je možnost xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a v xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví se xxxxxx lyzozymu obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 mM Tris-HCI, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx skladovat, xxx měl by xx xxxxx jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx po xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx na sklíčku / sklíčcích se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx a 833 ml XXX). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x nechá se xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX a xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Cy3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx zbarveny. Test XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x kolem xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Při xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x velikostí x xxxxxxxxxx podobnou Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx další testování. Xxxxxx, které obsahují xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx PCR činidla x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX test xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a XXX) by se xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x odděleném xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx lýzového xxxxx (100 mM NaCl, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx xxxxxx a xxxxxx se xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při teplotě 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °C), krátce xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x odstraní se x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx se zachová x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Peleta xx resuspendujte v 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) a xxxxx stát nejméně 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X až xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX se xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX by xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx vzorku DNA (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, podle zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx byla xxxxxxx do xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx amplikony XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx DNA xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx na x) xx dobu 30-45 xxxxx, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x době x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou sadou XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale z xxxxxxxxx kontroly s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx negativní. Xx vícenásobných protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx získán xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx také vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx růstové podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx pěnového polystyrénu x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx délky). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx se xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 xx x hluboký přibližně xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx pelety se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx stonek rostliny xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx zářez (x xxxx xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x řezem xx xxxxx v xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx zakryje xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Pro xxxxxxx vnitřního napětí xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a kde xx xx možné x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx vhodných podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx tak, xxx nedošlo k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx se zamezilo xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx pro pozitivní x negativní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx musí být xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, kontrole x jiné manipulaci xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx vzorku na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx dnech xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx mívají xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; čím xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Patří x xxx Erwinia carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma exigua xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku vejcoplodého xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx z xxxxx a xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx test IF/PCR xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx původce kroužkovitosti xxxxxxxx organismem, je xxxxx xx izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx možná za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx vzorků (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx testuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx vejcoplodého se xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x infikovaných pletivech xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x každého vzorku, x ředění 1/100 xx 1/10 000 na XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx v xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x kontrolními miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx pěstovat xx XXX médiu; xxxxxxxxx a identifikace xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce kroužkovitosti xxxxx xxxxxx x xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx provede xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx bílé xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx mají x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx se měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx po dobu xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutriční x fyziologické testy xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx musí xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst v 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx slabá

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Provede xx xX postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu xx dosaženo, jestliže xX titr kultury xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx ve xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx xxx teplotě 100 °C xx xxxx 4 minut. X případě xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx uložit xxx teplotě -16 xx -24 °X xx do použití.

c) Xxx amplifikaci Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Pastrik x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony PCR xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx reakce kultury x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx FAP je xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxx. x rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx patogenity

Pro xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx doby nevykazují xxxxx příznaky xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx po 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx kultura považována xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Pletiva xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx se xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Quarantaine xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx xxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, že xx prosta C. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx zpracují xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml.

Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze C. x. subsp. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X následujících pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx použijí jako xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR musí xxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 mM fosfátový xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

Užitečné mohou xxx následující složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) xxx použití xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x pupkových částí xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. IF-pufr-Tween

Tento xxxx se xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx jako krycí xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx IF xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco bakto xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °C xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx upraví xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí,upraví xx xX na 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx x 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x destilované vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc při xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx žádné falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx xx xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx tca xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx xxx xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx acg ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx použití Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X x NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx koncentraci činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (prodlužování xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně čisté xxxx (xxxx. Ultra xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Roztok se xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx podle xxxxxxx x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a sterilizuje xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx xxxxxxx v xxxxx. Nasypou se xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx zahřátím.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx se omyje xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx působit xx dobu jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx po xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově modře, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the detection xxx diagnosis of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. EPPO Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Manual xx xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Washington, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx infections (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxx development of x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, R. X., 1966. The xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. A., X. Billing a X. C. Hayward, 1966. X determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx latent xxxx rot (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Selection xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Schaad, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx identification of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx fluorescent in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, rostlin rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových diagramech. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a musí xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Pokud xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx kultury R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx bramboru a xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy usnadňují xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx výtok slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx extraktů x xxxxxxx vykazujícího příznaky xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx vodě nebo xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx v oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

12) Kultivace xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx růstu saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx izolace opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx charakteristika xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), z xxxxx každý je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho screeningového xxxxx není xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k dispozici.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx test negativní, xx vzorek považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx pozitivní, je xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech. Je-li xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX je popsán x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx FISH xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

11) Kultivace nebo xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů konkurence xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx stejného vzorku, xxxxxxxx provést test x dalšími xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V případě, xx je test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li druhý xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX je popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx se izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x R. solanacearum, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx se rozpozná xxxxxxxx xxxxx směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později žloutnou x objevují se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx se xxxxxx stává nevratným x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím rostliny. X cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xx z xxxxxxx xxxxxx táhnou vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč u xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V xxxx xxxx xx infekce xxxxx xxxxx láhvově xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika minutách xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává výrazněji xxxxxx a xxxxxxxx xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od xxxxxxxxx xxxxx hlízy x x oček může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °X, xxx nasycené vzdušné xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx na jedné xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx rostliny, xxxxx xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx než 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx se může xxxxxx větší počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu stonkem xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx stonku xxxx částí stonku xxx xxxxx. X xxxx cévních xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx modří A xxxx súdánskou xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup při xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxx xx x malém xxxxxxxx sterilní destilované xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese se 50-100 xx suspenze x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, YPGA xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx selektivní médium (xxxx. SMSA, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x) inkubuje xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- U Kelmanova xxxxxxxxxxxxx média x xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Aviruletní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx R. solanacearum x podezřelých xxxxxxxxx xxxx popsány v xxxx 6.2.

3. Detekce x identifikace původce xxxxx hniloby ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x zpomalení nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x pro xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž použit xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má být xxxxxxxx XXX test, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx se odstraní xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny příznaky xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx uchovávají x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx nepoužitých xxxxx na jedno xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, uchovávají se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx nutné zamezit xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx sterilované xxxx (xxxxx) x nádoby. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx zabránit xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx PCR se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx dekantuje. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx buď pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °C a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad spojením x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx díl x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx stonku xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné druhy, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx stranou xxxxxxxx xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx zpracují části xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) zalijí xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx drcením v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx dekantuje supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Jeden xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx díl xx skladuje v 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx další testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, opakují se xxxxxxxx testy xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a xxxxxx může být xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx však xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx izolace je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx obecně xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx mělo být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx toku xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx a vzorkují xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li xxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx následujících metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií inhibuje xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx v oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx schéma popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx pevného odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Je xxxx nutné poznamenat, xx xxxx metody xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo nepravidelně xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x půdě xxxx kalu je xxxxx vzít x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx by xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 kg půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvýší se xxxxx sběrných xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x detekční testy

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx se xx několika xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx černí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx zakápnou 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx se zakápne 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 minutu při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 nm xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx se zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zda xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Zakápnou xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx B v 70% xxxxxxx a xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je zdraví xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a nechají 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Hledá se xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx v xxxxxxx X. solanacearum s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bakteriálního slizu (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. solanacearum a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx nebo inhibici, xxx by xxx xxxxxx otestován znovu xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Xxxxxx je xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxx xxxx by xxxx xxx před jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Nanese se 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx středu x vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx nebo jen xxxxxxxx fluidní, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx v temnu xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °C xxxx lyofilizované.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx 6.2.) x test xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. solanacearum.

Test očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Wilbrink (viz dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které bývají xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může být xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 ul xxxxxxxx xx vzorku xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx při xxxxxxx 27 až 30 °C v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX se xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx vzorky xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx výsledků xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx jinými postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané spolehlivosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se test XX jako hlavní x výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx test XX použit xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají všechna xxxx lF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx na xxxxxxx připravených extraktech xx xxxxxx. Jestliže xx to xxxxx, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě - 68 xx - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx x jsou xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x následujících xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx větší x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) a dvojnásobek xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.ii) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx testovací okénko xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Setřesou xx xxxxx ze všech xxxxxxxxxx sklíček x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxx XX Tween (dodatek 4) x následně x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx opláchne a xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x určeném titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X peletách z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx infikovaný a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx screeningový xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně proveden xxxxx screeningový xxxx, x sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, je-li xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx schválená xxxxxxx x protokoly PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (v xxxxxxx extrakce XXX x PCR) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci bakterií x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x virulentního xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x koncentrující cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx v dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x mikrozkumavka xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. do ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx roztoku Xxxx XXX® A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje se xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x směs xx xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po dobu 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x xx xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx se xxxxxx z pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx XX a xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx - 20 °X xx do xxxxxxx xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX se použije xxx test PCR.

b) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, pokud xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX reakce podle xxxxxxxxx PCR (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX jako xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx nejméně 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x každého xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx vhodný XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx a výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané velikosti xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za předpokladu, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu s xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, jestliže je xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx amplikonů.

V případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx negativních kontrol, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxxx izolace xxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového diagramu.

Poznámka:

Používají xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, který xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se etanol xxxxxxxxxxx a xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x fixují xx nad xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx postup přerušit x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, pokaždé xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) se nechají xxxxxxx.

4. Přiloží xx xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx UPW (např. Xxxxx X water) x xxxxxx na xxxxxxxxx papír. Odstraní xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx papírem. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x morfologií pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum x xxxxxxxx testovacích sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které nejsou xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při podezření xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx várce ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx méně častěji xxx x xxxxx XX.

5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x nejsou xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx IF, XXX xxxx FISH xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx zvýšit xxxxxxxxx xxxxx, ale může xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx vzorku.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx použity protilátky x pracovním xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx odděleny od xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C na 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx boxu může x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá se xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Jamky xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx se vylije x xxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx pufru. Přidá xx 100 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x jamky xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx absorbance xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Nechá xx inkubovat při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° X po xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx se inkubovat 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx monoklonálních protilátek X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx do xxxxx jamky x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5) Jamky xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx protimyšího imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx alkalickou fosfatázou x PBS. Přidá xx 190 µl xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se roztok 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx hodnoty OH x xxxxx se xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx než dvojnásobek XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx test xxxxx xxxxxxxx správně nebo xx byl xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx citlivostí), ale xxx rostliny xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx méně výrazné x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx rostlin xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx přidrží xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx příčný xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx začne v xxxxx kapky resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx nechají růst x xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx relativní vlhkosti x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx izolovány. Musejí-li xxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorků xx xxxx inkubace drženy xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést bakterie xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx izolovány a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého organismu X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické identifikační xxxxx

Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Růst x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Média a xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Test IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF kultury xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx jiný xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x porovnání x hodnotou x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx suspense v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx bloku nebo xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx postupy XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx velikost x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Použije xx metoda XXXX (6.1.7) s nejméně 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx u xxxxxxx x pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx stejný xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX a xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Ralstonia sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum tvoří xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Živná xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Test xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx diagnózy R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx pozitivní xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vadnutí xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx této době xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx považována jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x suspenduje x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 až 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x přidá xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx bude xxxx X. solanacearum pomalejší, xxx může xx xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2 500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x musí se xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx by xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx obohacené živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 minut x xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Komerční standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x lze je xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxx může být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx všech testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických a XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx pletiv PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) na SMSA xxxxx půdě x xxxxxxxxxx xx x 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují se xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx postupem a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx první mikrozkumavky x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx x dalších xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 X1 xx sterilních zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx se při xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx dobu xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (bezvodý) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 ml

Polyvinylpyrrolidon-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x koncentrovanou XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí se xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx okénky a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = tubusový xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

X = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-CCC XXX XXX GCC XXX CGT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 sekund při 68 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx syntéza)

vi) ponechá xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx gcg xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx gtc ttg xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx mohou xxx xxxxxx použity xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TTG XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA TCA XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: i) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

3.4. Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X.

4. Protokol PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX AGT XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

b) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX R. solanacearum xxxxxx primerů Rs-1-F x Rs-1-R vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM NEPOUŽÍVAT XXXXX PH!]

iii) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a skladuje xx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX POUŽÍVAT XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje pH x sterilizuje autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx pasterizovaného výsevního xxxxxxxxx. Sazeničky s xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx of xxxxx xxxxx xxx determinative, xxxxxxxxxxxx and enviromnental xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Roux, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X xxx Lopez, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx restriction fragment xxxxxx polymorphisms xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx virulence and xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. and Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X detection method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx and xxxx xxxx xx its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, J., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains generated xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx and PCR xxxxxxx for identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. J. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx for identification xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Blood Disease Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Xxxxx, X. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx based xx 16S rRNA xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Europe xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Prior, P., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.